RU2116793C1 - Способ получения комплекса веществ, обладающих противовоспалительным, ранозаживляющим действием, ингибирующим перекисное окисление липидов, оптимизирующих функциональное состояние тимуса у старых животных - Google Patents
Способ получения комплекса веществ, обладающих противовоспалительным, ранозаживляющим действием, ингибирующим перекисное окисление липидов, оптимизирующих функциональное состояние тимуса у старых животных Download PDFInfo
- Publication number
- RU2116793C1 RU2116793C1 RU95107496A RU95107496A RU2116793C1 RU 2116793 C1 RU2116793 C1 RU 2116793C1 RU 95107496 A RU95107496 A RU 95107496A RU 95107496 A RU95107496 A RU 95107496A RU 2116793 C1 RU2116793 C1 RU 2116793C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- wound
- thymus
- effect
- functional state
- old animals
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Способ заключается в том, что органы и ткани организма, находящегося на стадиях эмбрионального или раннего постнатального развития, измельчают, гомогенизируют, проводят водную и кислотную экстракцию, балластные вещества отделяют центрифугированием и супернатант лиофилизируют. Способ позволяет получить комплекс веществ, который обладает более высокой ранозаживляющей активностью в сочетании с нормализующим действием на метаболизм при развитии патологических процессов и старении. 4 табл.
Description
Изобретение относится к способу получения биологически активных веществ, которые могут найти применение в медицине, косметологии, сельском хозяйстве в качестве средства, способного обеспечить профилактику и патогенетическую коррекцию процессов, вызванных нарушениями пролиферации, роста, дифференцировки, функциональной активности и апоптоза клеток.
Известно использование в качестве средства стимуляции регенерации тканей и оптимизации тканевого обмена солкосерила [1] и экстракта плаценты [2].
Недостатком этих известных средств является их сравнительно невысокая эффективность.
Технической задачей изобретения является способ получения веществ, обладающих более высокой ранозаживляющей активностью в сочетании с нормализующим действием на метаболизм при развитии патологических процессов и старении.
Эта задача решается способом, заключающимся в том, что органы и ткани организма, находящегося на стадиях эмбрионального или раннего постнатального развития, измельчают, гомогенизируют, проводят водную и кислотную экстракцию, балластные вещества осаждают центрифугированием, супернатант лиофилизируют.
Пример 1. Хранящиеся при -70oC печень, желудок, тонкий кишечник, головной мозг новорожденных поросят (возраст до 1 сут) гомогенизировали в ножевом гомогенизаторе Virtis в пятикратном объеме 10 мМ цитратного буфера pH 7,0 и центрифугировали в течение 1 ч при 100000 g. Супернатант стерилизовали с использованием ультрафильтров Millipore 0,22 мкм.
Пример 2. Хранящийся при -70oC фетальный головной мозг человека (стадия развития эмбриона - 18 нед) измельчали, помещали в десятикратный объем кипящей 0,25 М уксусной кислоты и гомогенизировали в системе стекло-тефлон. Гомогенат подвергали прогреванию в кипящей водяной бане в течение 10 мин, нейтрализовали ацетатом аммония и центрифугировали (100000 g 60 мин). Супернатант лиофилизировали.
Пример 3. Хранящиеся при -70oC печень, желудок, тонкий кишечник, головной мозг новорожденных поросят (возраст до 1 сут) измельчали, помещали в десятикратный объем кипящей 0,25 М уксусной кислоты и гомогенизировали в гомогенизаторе Virtis. Гомогенат подвергали прогреванию в кипящей водяной бане в течение 10 мин, нейтрализовали ацетатом аммония и центрифугировали (100000 g 60 мин). Супернатант стерилизовали с использованием ультрафильтров Millipore 0,22 мкм.
Пример 4. Хранящиеся при -70oC печень, желудок, тонкий кишечник, головной мозг новорожденных поросят (возраст до 1 сут), пуповину и плаценту человека гомогенизировали в забуференном физиологическом растворе (pH 7,0) и центрифугировали в течение 1 ч при 100000 g. Супернатант лиофилизировали.
Пример 5. Изучены противовоспалительный, ранозаживляющий и обезболивающий эффекты комплекса веществ, полученного в соответствии с методами, приведенными в примерах 1 и 3 (КВ). В качестве препаратов сравнения использовали аптечный препарат солкосерил ("Алкалоид-Скопье", Хорватия) - 1 и 4 ампулы на 75 кг массы, а также экстракт плаценты (аптечный препарат) - 1 ампула на 75 кг массы, что в пересчете на кг массы соответствует дозировкам, используемым в клинике (Машковский М.Д., 1986).
В исследовании использовано 140 беспородных крыс-самок массой 180 - 220 г, полученных из питомника РАМН "Столбовая" и содержавшихся в стандартных условиях вивария. Период акклиматизации, предшествовавший началу экспериментов, составлял не менее двух недель.
Противовоспалительный эффект КВ изучали на модели местного воспалительного процесса, вызванного подкожным введением 0,1 мл полного адъюванта Фрейнда в подушечку правой задней лапки. Адъювант вводили под легким эфирным наркозом.
КВ вводили в очаг воспаления в 0,1 мл физиологического раствора (ФР) через трое суток после инъекции адъюванта однократно в дозах 1, 25 и 100 мкг/кг. Контрольным животным вводили ФР.
Порог болевой чувствительности у животных определяли, измеряя длительность латентного периода реакции облизывания задних лап (ЛП РОЛ) через 45 мин после инъекции препаратов. Температура "горячей пластинки" 56oC.
Онкометрию осуществляли непосредственно перед введением исследуемых препаратов и через 1, 3, 6, 8, 10, 13, 16, 23 и 34 сут после введения.
При изучении эффекта КВ на заживление ран у крыс под легким эфирным наркозом вырезали на спине кожный лоскут диаметром 20 мм. Для устранения возможности взаимного вылизывания раневой поверхности крыс содержали в отдельных клетках.
В данной серии экспериментов произведено 7 инъекций препаратов: одновременно с нанесением раны и на 2, 4, 7, 9, 11 и 14 сут по окончании операции. КВ использовали в дозах 0,5, 10,0 и 50 мкг/кг и вводили внутримышечно в 0,1 мл ФР (внутренняя сторона бедра правой задней лапы). Контрольным животным вводили ФР.
Измерение площади раневой поверхности проводили по "весовому" методу (Стручков В. И. и др., 1975) на 11, 14, 18 и 22 сут после операции. Замеры производили не ранее, чем на 11 сут после операции, поскольку к этому дню практически у всех крыс произошло отторжение струпа. Это позволило измерять площадь ран с относительной высокой степенью точности. Скорость заживления раны (величину относительного заживления - Y) определяли по формуле Y = , где S0 - начальная площадь раны, S1 - ее площадь в день t (Кузин М. И. и др., 1990).
Местный эффект КВ на воспалительный процесс.
В результате онкометрии очага воспаления показано, что КВ обладает противовоспалительным эффектом. Действие КВ наиболее выражено при использовании его в дозах 1 и 25 мкг/кг массы, когда эффект наблюдается уже через сутки после однократной инъекции и остается достоверным на протяжении всего периода исследования. При использовании данной экспериментальной модели и режима введения КВ его противовоспалительный эффект более выражен, чем действие солкосерила и препарата плаценты (табл. 1), применяемых в клинической практике в качестве противовоспалительных средств.
Дополнительным подтверждением противовоспалительного эффекта КВ служат результаты, полученные при определении порога болевой чувствительности методом "горячей пластинки". Показано, что введение КВ в дозах 1 и 25 мкг/кг массы приводит к увеличению продолжительности ЛП РОЛ в 1,7 раза (P < 0,001). Эффект КВ отмечен на воспаленной, но не на интактной лапке. КВ в дозе 100 мкг/кг, солкосерил в обеих использованных дозах и препарат плаценты не изменяли величину ЛП РОЛ.
Эффект КВ заживление раны.
На 11 сут после операции у всех экспериментальных и контрольных животных грануляции разрослись и выполнили всю полость раны. Поверхность грануляций блестящая, розово-красного цвета, что свидетельствует о течении раневого процесса без осложнений. О нормальном ходе заживления свидетельствовала и ведущая роль механизма контракции в изучаемом раневом процессе (Кузин, 1990).
В результате введения КВ в дозах 0,5 и 10,0 мкг/кг отмечено ускорение процесса раневой контракции. Этот эффект отмечен также при введении солкосерила и препарата плаценты. Однако действие препаратов сравнения наблюдалось не на всех сроках исследования. Кроме того, эффект КВ был более выраженным и стабильным (табл. 2).
Во всех использованных моделях при введении КВ не отмечено местных реакций иммунной системы.
Пример 6. Антиоксидантную активность КВ, полученного в соответствии с описанием, приведенным в примерах 1 и 3, оценивали по его способности ингибировать Fe-аскорбат-индуцированное окисление липосом из яичного лецитина. Для получения суспензии липосом к 20 мл среды (PBS, pH 7,4) при постоянном перемешивании добавляли 500 мкл 9%-ого спиртового раствора лецитина (Харьков), раствор инкубировали 2 ч при комнатной температуре и постоянном перемешивании. Окисление липосом инициировали добавлением 50 мкл раствора PBS, содержащего FeSO4 и аскорбиновую кислоту, конечная концентрация которых в инкубационной среде составила 10-5 М и 2 • 10-4 М соответственно. Раствор исследуемого препарата также добавляли в объеме 50 мкл. Окисление липосом проводили в тефлоновых пробирках, помещенных в термостатируемую ячейку, при постоянном и равномерном перемешивании. Объем инкубационной среды 1 мл, продолжительность окисления 9 - 40 мин при 37oC. Процесс останавливали, перенося 200 мкл суспензии окисленных липосом в пробирку с 1,5 мл 30%-ной трихлоруксусной кислотой, затем туда же добавляли 1,5 мл 0,5% раствора 2-тиобарбитуровой кислоты и помещали на кипящую водяную баню на 30 мин с последующим фотометрированием окрашенного продукта при 532 нм. Результаты измерений выражали в процентах, принимая за 100% оптическую плотность раствора, соответствующего суспензии лецитина, в которой окисление липосом протекало в тех же условиях, но в отсутствие исследуемого вещества.
Эффект КВ на перекисное окисление липидов.
Изучено действие КВ in vitro на Fe-аскорбатиндуцированное окисление липосом из яичного лецитина. Препарат в концентрациях от 10 до 160 мкг-эквивалент белка/мл обладает выраженным антиоксидантным эффектом, вызывая заметное торможение процесса перекисного окисления липосом. Максимальный уровень торможения наблюдается при концентрациях КВ от 50 мкг-эквивалент белка/мл и составляет 35%. Необходимо отметить, что в аналогичных экспериментальных условиях - α -токоферол (Serva) в конечной концентрации 10-5 М тормозил окисление липосом на 48%. Для доказательства "специфичности" эффекта КВ в используемую систему in vitro вводили препарат плаценты в концентрациях 20 - 60 мкг-эквивалент белка/мл. При использовании препарата плаценты в данном диапазоне концентраций антиоксидантный эффект не отмечен.
Пример 7. Изучены эффекты комплекса веществ, полученного из фетальных тканей и органов в соответствии с описанием, приведенным в примерах 1 и 3 на состояние тимуса старых животных при адаптации к стрессорным воздействия.
В исследовании использовали 31 крысу-самку популяции Wistar массой 350 - 400 г (возраст 16 мес), полученных из питомника РАМН "Столбовая" и содержавшихся в стандартных условиях вивария. Период акклиматизации, предшествовавший началу экспериментов, составлял не менее двух недель.
КВ и карнозин (препарат сравнения) вводили внутрибрюшинно 5 раз с интервалом в одну неделю (последний раз за сутки до забоя). Однократная доза обоих препаратов - 20 мкг/кг. Контрольным животным вводили ФР в соответствующие сроки и в объеме 0,1 мл.
В качестве "стрессора" использовали раздражение конечностей животных электрическим током (I = 1 мА; продолжительность сеанса 300 с; четырежды через день по одному разу в сутки; последний раз за 24 ч до забоя) в специальных аппаратах производства НТК "Диагностика".
Две последние инъекции препаратов провели за 1 ч до начала двух последних сеансов foot-shock.
Непосредственно перед забоем крыс взвешивали. Кровь (3 мл) собирали в пробирки с 3%-ным раствором натриевой соли ЭДТА (в соотношении 1:10). Извлеченные органы (тимус и селезенку) взвешивали.
Затем тимус гомогенизировали вручную на слабо притертом гомогенизаторе (стекло/стекло) в 5 мл физиологического раствора, после чего гомогенат пропускали через нейлоновую сетку (Falkon, Германия) для отделения тимоцитов от стромы. Селезенку разрушали продавливанием между двумя предметными стеклами.
Количество клеток подсчитывали при окрашивании генцианвиолетом в 3%-ной уксусной кислоте. Жизнеспособность полученных клеток, определяемая по включению трипанового синего, составляла не менее 95%.
Математическую обработку полученных результатов проводили по критерию Стьюдента.
В результате проведенного исследования доказано, что введение КВ в значительной степени увеличивает содержание клеточных элементов в тимусе (табл. 3 и 4).
Источники информации:
1. Машковский М.Д. Лекарственные средства, часть 2 с. 185.
1. Машковский М.Д. Лекарственные средства, часть 2 с. 185.
2. Машковский М.Д. Лекарственные средства, часть 2 с. 177.
Claims (1)
- Способ получения комплекса веществ, обладающих противовоспалительным, ранозаживляющим, оптимизирующим функциональное состояние тимуса у старых животных, ингибирующим процессы перекисного окисления липидов действием, заключающийся в том, что органы и ткани организма, находящегося на стадиях эмбрионального или раннего постнатального развития, измельчают, гомогенизируют, проводят водную или кислотную экстракцию, балластные вещества отделяют центрифугированием и супернатант лиофилизируют.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95107496A RU2116793C1 (ru) | 1995-05-17 | 1995-05-17 | Способ получения комплекса веществ, обладающих противовоспалительным, ранозаживляющим действием, ингибирующим перекисное окисление липидов, оптимизирующих функциональное состояние тимуса у старых животных |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95107496A RU2116793C1 (ru) | 1995-05-17 | 1995-05-17 | Способ получения комплекса веществ, обладающих противовоспалительным, ранозаживляющим действием, ингибирующим перекисное окисление липидов, оптимизирующих функциональное состояние тимуса у старых животных |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU95107496A RU95107496A (ru) | 1997-02-27 |
RU2116793C1 true RU2116793C1 (ru) | 1998-08-10 |
Family
ID=20167605
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU95107496A RU2116793C1 (ru) | 1995-05-17 | 1995-05-17 | Способ получения комплекса веществ, обладающих противовоспалительным, ранозаживляющим действием, ингибирующим перекисное окисление липидов, оптимизирующих функциональное состояние тимуса у старых животных |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2116793C1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EA003301B1 (ru) * | 2000-04-28 | 2003-04-24 | Научно-Производственное Республиканское Унитарное Предприятие "Диалек" | Способ получения лекарственного средства из ткани мозга эмбрионов животного и фармакологическая композиция на его основе |
WO2012154016A1 (ru) * | 2011-05-11 | 2012-11-15 | Акционерное Общество "Национальный Научный Медицинский Центр" | Способ получения лиофилизата из гепатоцитов человека |
-
1995
- 1995-05-17 RU RU95107496A patent/RU2116793C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Прототип не обнаружен. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EA003301B1 (ru) * | 2000-04-28 | 2003-04-24 | Научно-Производственное Республиканское Унитарное Предприятие "Диалек" | Способ получения лекарственного средства из ткани мозга эмбрионов животного и фармакологическая композиция на его основе |
WO2012154016A1 (ru) * | 2011-05-11 | 2012-11-15 | Акционерное Общество "Национальный Научный Медицинский Центр" | Способ получения лиофилизата из гепатоцитов человека |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU95107496A (ru) | 1997-02-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU584914B2 (en) | Angiogenic factor and method for producing angiogenesis | |
Sharpey-Schäfer | The endocrine organs: An introduction to the study of internal secretion | |
Borgen et al. | Effects of prenatal Δ9-tetrahydrocannabinol on the development of rat offspring | |
Li et al. | Food reward depends on TLR4 activation in dopaminergic neurons | |
Nordlund et al. | Vitiligo and depigmentation | |
BR112020020318A2 (pt) | Composições para tratamento de pele | |
Tausk | The emergence of endocrinology | |
RU2116793C1 (ru) | Способ получения комплекса веществ, обладающих противовоспалительным, ранозаживляющим действием, ингибирующим перекисное окисление липидов, оптимизирующих функциональное состояние тимуса у старых животных | |
CN113768945A (zh) | 京尼平苷在制备治疗少弱精子症药物中的用途 | |
PETROVIC et al. | Promotion of bone calcification by sodium fluoride: short-term experiments on newborn rats using tetracycline labeling | |
JP2002302447A (ja) | 局所投与用癌治療剤 | |
Owen et al. | Chromosome marker studies in the graft-versus-host reaction in the chick embryo | |
Kristal | Effects of lateral hypothalamic lesions on placentophagia in virgin, primiparous, and multiparous rats. | |
Kelly et al. | In vivo induction of ovarian development in decapitated Aedes atropalpus by physiological levels of 20‐hydroxyecdysone | |
Tel et al. | Effect of surgery on BCNU chemotherapy in a rat brain tumor model | |
Vogel et al. | The action of miracil in Schistosoma japonicum infections in laboratory animals | |
Somoza | Effects of reserpine on cholesterol levels in cholesterol-fed rabbits. | |
RU2744919C1 (ru) | Средство для лечения эндометрита у коров | |
JP2788166B2 (ja) | 活性酸素消去用の組成物 | |
Strus et al. | Study of Anti–Inflammatory Activity of Creams with Sapropel Extract | |
RU2185835C2 (ru) | Способ стимуляции регенерации печеночной ткани | |
Koh et al. | A comparison of coumarin and levamisole on parameters of the inflammatory response | |
RU2136303C1 (ru) | Способ получения средства для лечения ларвального и стробилярного эхинококкозов "чеблин ск-1" | |
Dale | The effect of thymus extract on wistar rats | |
RU2133615C1 (ru) | Средство для лечения неврологических заболеваний |