RU2109288C1 - Method to determine natural killer activity of human lymphocytes under hyperbaric conditions - Google Patents
Method to determine natural killer activity of human lymphocytes under hyperbaric conditions Download PDFInfo
- Publication number
- RU2109288C1 RU2109288C1 RU94033496A RU94033496A RU2109288C1 RU 2109288 C1 RU2109288 C1 RU 2109288C1 RU 94033496 A RU94033496 A RU 94033496A RU 94033496 A RU94033496 A RU 94033496A RU 2109288 C1 RU2109288 C1 RU 2109288C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- oxygen
- lymphocytes
- natural killer
- conditions
- killer activity
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области водолазной медицины и физиологии подводных погружений и может быть использовано для определения влияния факторов гипербарии (величины общего давления, вида используемой газовой смеси, типа водолазного спуска, параметров микроклимата в гипербарических комплексах и т.д.) на естественную киллерную активность лимфоцитов крови водолазов. The invention relates to the field of diving medicine and the physiology of diving and can be used to determine the influence of hyperbaric factors (total pressure, type of gas mixture used, type of diving descent, microclimate parameters in hyperbaric complexes, etc.) on the natural killer activity of blood lymphocytes divers.
Большинство существующих аналогов изучения феномена естественной киллерной активности лимфоцитов построены по принципу регистрации повышения проницаемости мембраны клетки-мишени. Регистрация эффекта проницаемости и последующего выхода части продуктов белкового или нуклеинового обмена с использованием радиоактивных меток способствовало внедрению целой серии цитотоксических тестов. Из существующих прототипов, основанных на использовании радиоактивной метки, был применен способ оценки функциональной активности естественных киллеров в 3H-уридиновом цитотоксическом тесте (Рыкова М.П. и др. Новая высокочувствительная техника тестирования нормальных киллеров. Иммунология, 1981, т. 1, с. 88-90). В отличие от данного прототипа, использующего и "быстрый", и "медленный" варианты указанного теста, в предложении используется только тест с длительной инкубацией смеси клетки-эффекторы : клетки-мишени. Обусловлено это существенной вариацией данных при различных соотношениях эффекторы:мишени (Э:М) в тесте с 4-часовой длительностью периода инкубации.Most of the existing analogues of the study of the phenomenon of natural killer activity of lymphocytes are built on the principle of recording an increase in the permeability of the membrane of the target cell. The registration of the effect of permeability and the subsequent release of a portion of the products of protein or nucleic acid metabolism using radioactive labels contributed to the introduction of a series of cytotoxic tests. Of the existing prototypes based on the use of a radioactive label, a method was used to assess the functional activity of natural killers in a 3 H-uridine cytotoxic test (Rykova M.P. et al. New highly sensitive technique for testing normal killers. Immunology, 1981, v. 1, p. . 88-90). In contrast to this prototype, which uses both the “fast” and “slow” versions of this test, the proposal uses only a test with a long incubation of a mixture of effector cells: target cells. This is due to a significant variation in the data at different ratios of effectors: targets (E: M) in the test with a 4-hour incubation period.
С целью повышения точности интерпретации и оценки функциональной активности естественных киллеров при пребывании организма в условиях гипербарии изобретение включает цитофлоуриметрический прототип цитотоксического теста (Shi et al. The application of flow cytometry in the study of natural killer cell cytotoxicity. Clinical Immunology and Immunopathology. - 1987, vol. 45, p. 356-365. ), отличающийся тем, что используется "ламповый" тип проточного цитометра. Ввиду установления на подобном типе оборудования 100 Вт ртутной лампы, работа которой характеризуется большей нестабильностью определенных величин по сравнению с лазерными источниками светового возбуждения, дополнительно в обязательном порядке включает этап оптимизации параметров прибора. In order to improve the accuracy of interpretation and assessment of the functional activity of natural killers when the organism is in a hyperbaric environment, the invention includes a cytofluorimetric prototype of a cytotoxic test (Shi et al. The application of flow cytometry in the study of natural killer cell cytotoxicity. Clinical Immunology and Immunopathology. - 1987, vol. 45, p. 356-365.), characterized in that a "tube" type flow cytometer is used. Due to the installation of a 100 W mercury lamp on this type of equipment, the operation of which is characterized by greater instability of certain values in comparison with laser light sources, additionally without fail includes the stage of optimization of the device parameters.
Сущностью цитофлуориметрического анализа является последовательный подсчет смеси Э: М в контрольных и опытных пробах с применением флуорохромов, которые соответственно окрашивают инкубируемые клетки с интактной мембраной (т.е. "живые" клетки) или с поврежденной мембраной ("погибшие" клетки). Разницу в количестве последних рассчитывают и определяют как цитотоксический эффект. В существующих цитофлуориметрических аналогах исследования киллерной функции лимфоцитов период инкубации смеси клеток в различных соотношениях Э: М составляет 4 ч. The essence of cytofluorimetric analysis is the sequential counting of the E: M mixture in control and experimental samples using fluorochromes, which respectively stain incubated cells with an intact membrane (ie, “living” cells) or with a damaged membrane (“dead” cells). The difference in the number of the latter is calculated and determined as a cytotoxic effect. In the existing cytofluorimetric analogues of the study of the killer function of lymphocytes, the incubation period of the mixture of cells in various ratios of E: M is 4 hours.
Предлагаемый способ анализа естественной киллерной активности лимфоцитов человека при пребывании в условиях гипербарии в отличие от прототипов, используемых для нормальных условий, основан на том, что для исследования данного компонента иммунного статуса организма в указанных условиях пробы крови декомпрессируют по режиму, исключающему влияние данного этапа на анализируемый показатель. The proposed method for the analysis of the natural killer activity of human lymphocytes during their stay in hyperbaric conditions, in contrast to the prototypes used for normal conditions, is based on the fact that to study this component of the body's immune status under these conditions, blood samples are decompressed according to a regime that excludes the effect of this stage on the analyzed index.
Таким образом, прототипом и базовым объектом предлагаемого изобретения является способ определения естественной киллерной активности лимфоцитов человека, пребывающего в условиях повышенного давления газовой среды. Сущность предлагаемого способа состоит в проведении параллельных цитотоксических тестов, различающихся по методу проведения анализа и периода инкубации, после соответствующего режима декомпрессии проб периферической крови, полученных в условиях гипербарии. Thus, the prototype and the basic object of the invention is a method for determining the natural killer activity of human lymphocytes, which is in conditions of high pressure of the gas environment. The essence of the proposed method consists in conducting parallel cytotoxic tests, differing by the method of analysis and the incubation period, after the appropriate decompression mode of peripheral blood samples obtained under hyperbaric conditions.
Последовательность этапов осуществляют следующим образом. The sequence of steps is as follows.
I. Забор и получение проб крови организма человека из условий повышенного давления. I. Sampling and obtaining blood samples of the human body from high blood pressure.
Забор крови испытуемых, находящихся в гипербарических условиях в барокамере, производят утром натощак из кубитальной вены пункцией в стерильные стеклянные пробирки с гепарином в качестве антикоагулянта, после чего помещают в специальный контейнер в лед на период времени декомпресии. Blood sampling of subjects under hyperbaric conditions in a pressure chamber is performed in the morning on an empty stomach from a cubital vein by puncture in sterile glass tubes with heparin as an anticoagulant, and then placed in a special container in ice for a period of decompression.
Режим декомпрессии составляют следующим образом:
1. Декомпрессию проводят линейно с постоянной скоростью 4 м в 1 мин;
2. С целью поддержания выбранного оптимального диапазона величины pО2 от 0,3 до 0,4 атм в период декомпрессии подают расчетное количество кислорода в соответствии с предлагаемым графиком:
в диапазоне глубин от 400 м (41 ата) до 150 м (16 ата) - подача O2 через каждые 50 м;
в диапазоне от 150 м (16 ата) до 100 м (11 ата) - подача O2 через каждые 25 м;
в диапазоне от 100 м (11 ата) до 20 м (3 ата) - подача O2 через каждые 10 м;
в диапазоне от 20 м (3 ата) до 0 м (1 ата) - подача O2 через каждые 5 м.The decompression mode is as follows:
1. Decompression is carried out linearly at a constant speed of 4 m in 1 min;
2. In order to maintain the selected optimal range of pО 2 values from 0.3 to 0.4 atm during the decompression period, the calculated amount of oxygen is supplied in accordance with the proposed schedule:
in the depth range from 400 m (41 ata) to 150 m (16 ata) - supply of O 2 every 50 m;
in the range from 150 m (16 ata) to 100 m (11 ata) - supply of O 2 every 25 m;
in the range from 100 m (11 ata) to 20 m (3 ata) - supply of O 2 every 10 m;
in the range from 20 m (3 ata) to 0 m (1 ata) - supply of O 2 every 5 m.
Расчет потребного количества кислорода на всех этапах его подачи производят по следующей формуле:
Q = (P1-P2)•C•V/100
где
P1 - давление в барокамере на предшествующем этапе подачи кислорода (ата);
P2 - давление в барокамере на последующем этапе подачи кислорода (ата);
C - содержание кислорода в газовой смеси (получают на основании результатов газового контроля или расчетным путем из суммирования объема кислорода воздуха в исходных условиях и кислорода в поданной газовой смеси на компрессии по отношению ко всему объему полученной газовой смеси на "грунте" и в дальнейшем на этапах декомпрессии).The calculation of the required amount of oxygen at all stages of its supply is carried out according to the following formula:
Q = (P 1 -P 2 ) • C • V / 100
Where
P 1 - pressure in the pressure chamber at the previous stage of oxygen supply (ata);
P 2 - pressure in the pressure chamber at the next stage of oxygen supply (ata);
C is the oxygen content in the gas mixture (obtained on the basis of gas control results or by calculation from the summation of the amount of air oxygen in the initial conditions and the oxygen in the supplied gas mixture under compression with respect to the entire volume of the obtained gas mixture on the “ground” and later on in the steps decompression).
V - объем гипербарокамеры, л. V is the volume of the hyperbaric chamber, l.
По окончании декомпрессии пробы периферической крови подвергают процедуре выделения лимфоидных клеток, проведения параллельных радиометрического и цитофлуориметрического тестов исследования естественной киллерной активности. At the end of decompression, peripheral blood samples are subjected to the procedure for isolating lymphoid cells, conducting parallel radiometric and cytofluorimetric tests to study natural killer activity.
II. Получение взвеси лимфоцитов периферической крови человека. II. Obtaining a suspension of lymphocytes in human peripheral blood.
Лимфоциты получали из проб крови путем центрифугирования в градиенте плотности Histopaque-1077 (Sigma, США) при 700g в течение 30 мин. Клетки дважды отмывали в среде RPMI-1640 (Flow, Англия) при 400g в течение 25 мин. Для удаления прилипающих клеток используют инкубацию клеток при 37oC в течение 1 ч. на пластиковых чашках Петри диаметром 40 мм ("Медполимер", Россия) в полной среде RPMI-1640 с 10%-ной эмбриональной телячьей сывороткой (ЭТС), 20 мМ HEPES (Sigma, США), 80 мкг/мл гентамицина (Pharmachim, Болгария), 5 мкг/мл PHK-азы (Reanal, Венгрия). Взвесь полученных лимфоцитов после подсчета в гемоцитометрической камере разделяют для радиометрического и цитофлуорометрического тестов.Lymphocytes were obtained from blood samples by centrifugation in a density gradient of Histopaque-1077 (Sigma, USA) at 700g for 30 minutes. Cells were washed twice in RPMI-1640 medium (Flow, England) at 400 g for 25 minutes. To remove adherent cells, cells were incubated at 37 ° C for 1 hour on plastic Petri dishes with a diameter of 40 mm (Medpolymer, Russia) in complete RPMI-1640 medium with 10% fetal calf serum (ETF), 20 mM HEPES (Sigma, USA), 80 μg / ml gentamicin (Pharmachim, Bulgaria), 5 μg / ml PHK-basics (Reanal, Hungary). A suspension of the obtained lymphocytes after counting in a hemocytometric chamber is separated for radiometric and cytofluorometric tests.
III. Радиометрическое определение цитотоксической активности лимфоцитов крови (3H-уридновый цитотоксический тест)
Для определения цитотоксической активности естественных киллеров (ЕК) крови человека применяют прототип Рыковой и соавт. (1981). В качестве клеток-мишеней используют культуру клеток K-562 эритробластоза человека, меченных 3H-уридином (35-40 БК на 106 клеток). Цитотоксический тест проводят в полной среде RPMI-1640. Соотношение эффекторов-лимфоцитов и клеток-мишеней (Э:М) устанавливают в следующем отношении: 50:1, 25:1, 10:1 и 5:1. После 18 ч инкубации при 37oC в атмосфере с 5% CO2 учитывают уровень активности ЕК радиометрическим методом с помощью сцинтилляционного счетчика Beckman (США). Цитотоксическую активность ЕК характеризуют цитотоксическим индексом (ЦИ), рассчитываемым по формуле: ЦИ=100(XO-XK)/XK, где XO и XK - радиоактивность опытной и контрольной проб соответственно. Для каждого соотношения в каждой пробе делают триплетное измерение, после чего вычисляют среднюю и среднеквадратическое отклонение.III. Radiometric determination of the cytotoxic activity of blood lymphocytes ( 3 H-uridine cytotoxic test)
To determine the cytotoxic activity of natural killers (EC) of human blood, a prototype of Rykova et al. Is used. (1981). As target cells, a K-562 cell culture of human erythroblastosis labeled with 3 H-uridine (35-40 Bq per 10 6 cells) is used. A cytotoxic test is carried out in complete RPMI-1640 medium. The ratio of effector lymphocytes and target cells (E: M) is established in the following ratio: 50: 1, 25: 1, 10: 1 and 5: 1. After 18 h of incubation at 37 ° C in an atmosphere with 5% CO 2, the EC activity level is taken into account by radiometric method using a Beckman scintillation counter (USA). The cytotoxic activity of EC is characterized by a cytotoxic index (CI) calculated by the formula: CI = 100 (X O -X K ) / X K , where X O and X K are the radioactivity of the experimental and control samples, respectively. A triplet measurement is made for each ratio in each sample, after which the mean and standard deviation are calculated.
IV. Цитофлуориметрический тест (ЦФТ) определения естественной киллерной активности лимфоцитов крови. IV. Cytofluorimetric test (CFT) to determine the natural killer activity of blood lymphocytes.
Для анализа используют цитометр ACR-1500 (Bruker Spectrospin, Франция) в стандартной комплектации блоков оптических фильтров, чем устанавливается спектр возбуждающего света в диапазоне 470-490 нм. Регистрацию флуоресценции производят в диапазоне 540 ± 20 нм при логарифмическом усилении. Оптическую калибровку прибора достигают использованием микрочастиц диаметром 96 μm (Bruker). Для анализа берут объем 200 мкл взвеси лимфоидных клеток, причем соотношение Э: М достигают изменением вносимой концентрацией лимфоцитов. Объем вносимой взвеси клеток K-562 во всех пробах составляет 200 мкл при постоянной концентрации. Инкубацию проводят в микропробирках объемом 1,5 мл. Пробу тщательно перемешивают и разделяют пополам для соблюдения установленного стандартизованного соотношения Э:М. В первую пробирку сразу добавляют флуоресцеиндиацетат (ФДА) (Sigma) в растворе PBS в количестве 200 мкл до конечной концентрации 500 нг/мл. Первую пробу оставляют на 20 мин при комнатной температуре, после чего помещают на лед до проведения контрольного исследования. Вторую пробу инкубируют в течение 4 ч при температуре 37oC в атмосфере с 5% CO2. Процедуру окрашивания после окончания проводят аналогично контрольной.For analysis, an ACR-1500 cytometer (Bruker Spectrospin, France) is used as a standard for optical filter blocks, which sets the spectrum of exciting light in the range 470-490 nm. Registration of fluorescence is carried out in the range of 540 ± 20 nm with logarithmic amplification. The optical calibration of the device is achieved using microparticles with a diameter of 96 μm (Bruker). For analysis, a volume of 200 μl of a suspension of lymphoid cells is taken, and the E: M ratio is achieved by changing the introduced concentration of lymphocytes. The volume of the introduced suspension of K-562 cells in all samples is 200 μl at a constant concentration. Incubation is carried out in 1.5 ml microtubes. The sample is thoroughly mixed and divided in half to comply with the established standardized ratio of E: M. Fluorescein diacetate (PDA) (Sigma) in PBS in an amount of 200 μl was immediately added to the first tube to a final concentration of 500 ng / ml. The first sample is left for 20 min at room temperature, after which it is placed on ice until a control study. The second sample is incubated for 4 hours at a temperature of 37 o C in an atmosphere with 5% CO 2 . The staining procedure after completion is carried out similarly to the control.
С целью оптимизации дискриминантных окон на цитограмме соотношения переднего светорассеяния и интенсивности флуоресценции перед каждой серией исследований отдельно анализируют пробы окрашенных ФДА клеток K-562 и лимфоцитов при установлении стробирующего ("управляющего") сигнала на величину интенсивности флуоресценции. Одновременно опытным путем по каналу наименьшего значения размеров клеток по углу переднего светорассеяния определяют порог этой величины, который затем устанавливают при анализе киллерной активности. В дальнейшем при проведении ЦФТ естественной киллерной активности используют уже как "основной" или "управляющий" сигнал - сигнал переднего светорассеяния. Величиной перекрестной регистрации лимфоцитов в окне подсчета клеток K-562 пренебрегают из-за ее низкого значения (меньше 0,1%) в отличие от большинства известных прототипов с использованием метода проточной цитометрии. In order to optimize the discriminant windows on the cytogram of the ratio of forward light scattering and fluorescence intensity, samples of stained PDA K-562 cells and lymphocytes are separately analyzed before each series of studies when a gating (“control”) signal is established by the value of the fluorescence intensity. At the same time, the threshold of this value is determined by the channel of the smallest cell size from the angle of forward light scattering, which is then set in the analysis of killer activity. Subsequently, during the CFT process, natural killer activity is used as the “main” or “control” signal — the signal of forward light scattering. The value of the cross-registration of lymphocytes in the K-562 cell counting window is neglected due to its low value (less than 0.1%), unlike most known prototypes using flow cytometry.
Величину естественной киллерной активности определяют как разницу между числом клеток K-562, зарегистрированных в контрольной и инкубированной пробах в соответствующем окне цитограммы. Подсчет заканчивают после прохождения 100 мкл взвеси клеток дважды, после чего вычисляют среднюю. The value of natural killer activity is defined as the difference between the number of K-562 cells registered in the control and incubated samples in the corresponding window of the cytogram. Counting is completed after passing 100 μl of cell suspension twice, and then calculate the average.
По полученным данным в обоих тестах рассчитывают индивидуальные кривые EK-активности с использованием статистико-графической обработки полученных данных на ПЭВМ типа IBM в зависимости от величины соотношения Э:М. According to the data obtained in both tests, individual EK-activity curves are calculated using statistical-graphical processing of the obtained data on an IBM-type PC depending on the value of the E: M ratio.
С целью получения положительного результата по применению предлагаемого изобретения предварительно было проведено обоснование отсутствия значимого влияния на естественную киллерную активность лимфоцитов этапа декомпрессии, которому подвергаются пробы периферической крови испытуемых. Минимально необходимое количество проб для этого составило восемь. In order to obtain a positive result on the application of the invention, a substantiation of the absence of a significant effect on the natural killer activity of lymphocytes of the decompression stage, to which the test subjects' peripheral blood samples are subjected, was previously carried out. The minimum required number of samples for this was eight.
Процедура проводилась следующим образом:
забор проб периферической крови объемом примерно 20 мл у каждого из 4 испытуемых производился по общей вышеуказанной схеме, после чего пробы разделялись по 5 мл в отдельные пробирки. Таким образом составлялась контрольная и опытная серии проб по восемь в каждой, причем обе помещались на лед в небольшие контейнеры. Опытная серия подвергалась испытанию по схеме, которая состояла из периодов компрессии, изопрессии и декомпрессии;
компрессия опытной серии проб периферической крови проводилась линейно (исходные условия: давление 0,1 МПа, воздух; pN2-0,8 МПа, pO2-0,2 МПа) со скоростью 10 м в мин в гипербарокамере подачей кислородно-гелиевой смеси с содержанием кислорода 0,5% до величины общего давления в 4,1 МПа;
изопрессия под максимальным давлением 4,1 МПа, равном имитационной глубине пребывания группы водолазов, по времени составляла 10 мин, чем устанавливался достаточный уровень насыщения тканей данного типа индифферентными газами;
декомпрессия опытных проб крови с соответствующим обогащением искусственной газовой среды кислородом на этом этапе проводилась по вышеприведенному графику;
в дальнейшем контрольные и опытные серии проб подвергались процедуре выделения лимфоидных клеток и определению цитотоксической активности EK крови в параллельных тестах.The procedure was carried out as follows:
peripheral blood samples of approximately 20 ml in each of the 4 subjects were sampled according to the general scheme described above, after which the samples were separated by 5 ml in separate tubes. Thus, a control and experimental series of samples of eight in each was compiled, both of which were placed on ice in small containers. The experimental series was tested according to the scheme, which consisted of periods of compression, isopression and decompression;
the compression of the experimental series of peripheral blood samples was carried out linearly (initial conditions: pressure 0.1 MPa, air; pN 2 -0.8 MPa, pO 2 -0.2 MPa) at a speed of 10 m per minute in a hyperbaric chamber by supplying an oxygen-helium mixture with the oxygen content of 0.5% to a total pressure of 4.1 MPa;
isopression at a maximum pressure of 4.1 MPa, equal to the imitation depth of the group of divers, was 10 minutes in time, which established a saturation level of tissues of this type with indifferent gases;
decompression of experimental blood samples with the corresponding enrichment of the artificial gas environment with oxygen at this stage was carried out according to the above schedule;
subsequently, the control and experimental series of samples were subjected to the procedure for isolating lymphoid cells and determining the cytotoxic activity of blood EK in parallel tests.
В ходе данного исследования значимого влияния всех перечисленных этапов с использованием указанных процедур по данным статистического анализа не отмечено (p≤0,01), что подтверждает возможность получения результатов при исследовании данного компонента системы иммунитета после предлагаемого способа доставки и декомпрессии проб крови организма при его пребывании в гипербарических условиях в установленных пределах общего давления газовой среды. In the course of this study, there was no significant effect of all these stages using the indicated procedures according to the statistical analysis (p≤0.01), which confirms the possibility of obtaining results in the study of this component of the immune system after the proposed method of delivery and decompression of blood samples of the body during its stay in hyperbaric conditions within the established limits of the total pressure of the gaseous medium.
положительный эффект от использования изобретения состоял в медикофизиологическом обеспечении пребывания водолазов под заданным давлением, разработке и внедрении способов профилактики и лечения инфекционно-воспалительной патологии водолазов при пребывании под давлением, а также в обосновании реабилитационных мероприятий в послеспусковой период с целью снижения доли "иммунозависимых" заболеваний у лиц данной профессиональной категории. the positive effect of the use of the invention consisted in the medical and physiological support of divers staying at a given pressure, the development and implementation of methods for the prevention and treatment of infectious and inflammatory pathologies of divers while staying under pressure, and also in substantiating rehabilitation measures in the post-launch period in order to reduce the proportion of "immunodependent" diseases in persons of this professional category.
Claims (1)
Q = (P1 - P2) • L • V / 100,
где Q - количество кислорода, л;
P1 - давление в барокамере на предшествующем этапе подачи кислорода, ата;
P2 - давление в барокамере на последующем этапе подачи кислорода, ата;
L - содержание кислорода в газовой смеси (получалась расчетным путем из суммирования объема кислорода воздуха в исходных условиях и кислорода в поданной газовой смеси на компрессии по отношению ко всему объему полученной газовой смеси на "грунте" и в дальнейшем на этапах декомпрессии);
V - объем гипербарокамеры, л,
а с лимфоцитами пробы крови проводят радиометрический и цитофлоурометрический тесты, по результатам которых определяют киллерную активность лимфоцитарных клеток.A method for determining the natural killer activity of human lymphocytes in hyperbaric conditions, including the isolation of lymphocytes from the blood of the test person and a study using cytofluorometric and radiometric tests, characterized in that the blood samples are pre-decompressed according to a regime that excludes the influence of hyperbaria, while decompression is carried out linearly at a constant speed 4 m / min with a pO 2 value of 0.3 - 0.4 atm with the supply of the calculated amount of oxygen, which is calculated by the formula
Q = (P 1 - P 2 ) • L • V / 100,
where Q is the amount of oxygen, l;
P 1 - pressure in the pressure chamber at the previous stage of oxygen supply, ata;
P 2 - pressure in the pressure chamber at the next stage of oxygen supply, ata;
L is the oxygen content in the gas mixture (obtained by calculation from the summation of the volume of oxygen in the initial conditions and the oxygen in the supplied gas mixture under compression with respect to the entire volume of the obtained gas mixture on the “ground” and later on at the decompression stages);
V is the volume of the hyperbaric chamber, l,
and with blood lymphocytes, radiometric and cytofluorometric tests are carried out, according to the results of which the killer activity of lymphocytic cells is determined.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU94033496A RU2109288C1 (en) | 1994-09-13 | 1994-09-13 | Method to determine natural killer activity of human lymphocytes under hyperbaric conditions |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU94033496A RU2109288C1 (en) | 1994-09-13 | 1994-09-13 | Method to determine natural killer activity of human lymphocytes under hyperbaric conditions |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU94033496A RU94033496A (en) | 1996-11-10 |
| RU2109288C1 true RU2109288C1 (en) | 1998-04-20 |
Family
ID=20160439
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU94033496A RU2109288C1 (en) | 1994-09-13 | 1994-09-13 | Method to determine natural killer activity of human lymphocytes under hyperbaric conditions |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2109288C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2514019C2 (en) * | 2012-06-06 | 2014-04-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр психического здоровья" Российской академии медицинских наук | Method of evaluating cytotoxic activity of lymphocytes of natural killers |
| RU185152U1 (en) * | 2018-05-28 | 2018-11-22 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт природно-технических систем" (ИПТС) | DEVICE FOR RESEARCH OF INFLUENCE OF HYPERBARIA ON WATER MICROORGANISMS |
-
1994
- 1994-09-13 RU RU94033496A patent/RU2109288C1/en active
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Schiatal. The application of flow cytometry in the stady of natural Killer cell cytotoxicity. Clin. Immunol. Immunopath. - 1987, v.45, p.356-365. * |
| WO, 90/06758 (F Cell Sciences, Inc.) 28.06.90, A 61 K 35/16. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2514019C2 (en) * | 2012-06-06 | 2014-04-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр психического здоровья" Российской академии медицинских наук | Method of evaluating cytotoxic activity of lymphocytes of natural killers |
| RU185152U1 (en) * | 2018-05-28 | 2018-11-22 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт природно-технических систем" (ИПТС) | DEVICE FOR RESEARCH OF INFLUENCE OF HYPERBARIA ON WATER MICROORGANISMS |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU94033496A (en) | 1996-11-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Tepperman et al. | Erythropoietic colonies in cultures of human marrow | |
| Balin et al. | The effect of oxygen and vitamin E on the lifespan of human diploid cells in vitro. | |
| Silverman et al. | The reactivity and staining of tissue proteins with phosphotungstic acid | |
| US4734372A (en) | Cell culturing methods and apparatus | |
| Topilsky et al. | Lymphocyte response in sarcoidosis | |
| Pelikan et al. | Cytologic changes in the nasal secretions during the late nasal response | |
| Zoschke et al. | Specificity of antigen recognition by human lymphocytes in vitro | |
| EP0266196A2 (en) | Cell growth rate determination | |
| Chen et al. | Recovery of proliferative capacity of agar colonyforming cells and spleen colony‐forming cells following ionizing radiation or vinblastine | |
| Chittur et al. | Shear stress effects on human T cell function | |
| Pauly et al. | Whole blood microculture assay of human lymphocyte function | |
| RU2109288C1 (en) | Method to determine natural killer activity of human lymphocytes under hyperbaric conditions | |
| Young et al. | Suppressive effect of alcoholic liver disease sera on lymphocyte transformation | |
| CN116590144A (en) | Lung chip, lung model, construction method of lung model and compound detection method | |
| Woolf et al. | Tm-limited renal tubular reabsorption and the genetics of renal glucosuria | |
| Marc et al. | Use of the megathrombocyte to demonstrate thrombopoietin | |
| CN101570739A (en) | Method for building psoriasis basic research models, and gas-liquid level transmembrane device | |
| Eliasson | Oxygen consumption of human semen | |
| CN112300992B (en) | NK cell culture solution and multistage activated NK cell culture method | |
| Kalthoff et al. | Mitochondria and polarity in the egg of Smittia spec.(Diptera, Chironomidae): UV irradiation, respiration measurements, ATP determination and application of inhibitors | |
| Adrian et al. | A micromethod for the assay of cellular secretory physiology: application to rabbit parietal cells | |
| Stevenson et al. | Simultaneous measurements of macrophage-induced cytostasis and cytotoxicity of EMT6 cells by flow cytometry | |
| RU2140081C1 (en) | Method of selection of medicinal preparations for correction of disturbances of immunological status in tumor disease | |
| Cassidy et al. | Automated analysis of antigen-stimulated lymphocytes. | |
| Willoughby et al. | The indirect assay for leukocyte migration inhibitory factor (LIF)—Standardization and the effect of pH |