RU2140081C1 - Method of selection of medicinal preparations for correction of disturbances of immunological status in tumor disease - Google Patents
Method of selection of medicinal preparations for correction of disturbances of immunological status in tumor disease Download PDFInfo
- Publication number
- RU2140081C1 RU2140081C1 SU5063047A RU2140081C1 RU 2140081 C1 RU2140081 C1 RU 2140081C1 SU 5063047 A SU5063047 A SU 5063047A RU 2140081 C1 RU2140081 C1 RU 2140081C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- tissue
- autologous
- tumor
- immunoconflict
- Prior art date
Links
Abstract
Description
Изобретение относится к биологии и медицине, и его результаты могут быть использованы для диагностики и коррекции различных типов взаимоотношений между целостным макроорганизмом и какой-либо его структурой, на территории которой сложилась иммуноконфликтная ситуация. Предлагаемый способ может быть успешно использован при диагностике и индивидуальном подборе лекарственных средств для общего и местного лечения широкого спектра заболеваний современного человека, характеризующихся выраженным иммунопатогенезом (среди которых особое место занимают опухолевые процессы различной локализации и генеза, аутоиммунные заболевания, хронические и персистентные формы инфекций, в том числе и иммунного бесплодия, а также в процессе пре- и посттрансплантационного мониторинга). The invention relates to biology and medicine, and its results can be used to diagnose and correct various types of relationships between a holistic macroorganism and any of its structure in the territory of which an immunoconflict situation has developed. The proposed method can be successfully used in the diagnosis and individual selection of drugs for general and local treatment of a wide range of diseases of modern man, characterized by pronounced immunopathogenesis (among which a special place is occupied by tumor processes of various localization and genesis, autoimmune diseases, chronic and persistent infections, including immune infertility, as well as in the process of pre- and post-transplant monitoring).
Следует особо подчеркнуть, что ключевым моментом исследования является одновременное тестирование явления иммунного воспаления как одного из аспектов реализации общего состояния макроорганизма, учитываемого по иммунологическим параметрам периферической крови, и функционирования на его фоне собственно иммуноконфликтной структуры. О состоянии последней можно судить либо непосредственно при аналитическом исследовании соответствующих клеточных образований, либо опосредованно по наличию и определению функциональной активности иммуноцитов, присутствующих in situ. При этом особый случай представляет опухолевая болезнь, когда исследуют влияние широкого спектра фармакологических препаратов и других лечебных воздействий на аутологичную опухолевую ткань с целью исключения веществ и влияний, способных стимулировать ее пролиферацию in vivo. Решение этой задачи позволит по данным лабораторного исследования прогнозировать возможность возникновения отрицательных реакций со стороны иммуноконфликтной ткани на различные компоненты предполагаемого общего лечения. It should be emphasized that the key point of the study is the simultaneous testing of the phenomenon of immune inflammation as one of the aspects of the realization of the general state of a macroorganism, taken into account by the immunological parameters of peripheral blood, and the functioning of the actual immunoconflict structure against its background. The state of the latter can be judged either directly during the analytical study of the corresponding cell formations, or indirectly by the presence and determination of the functional activity of immunocytes present in situ. In this case, a special case is a tumor disease, when they study the effect of a wide range of pharmacological preparations and other therapeutic effects on autologous tumor tissue in order to exclude substances and influences that can stimulate its proliferation in vivo. The solution to this problem will allow, according to laboratory research, to predict the possibility of negative reactions from immunoconflict tissue to various components of the proposed general treatment.
В доступной литературе авторам не удалось обнаружить аналога/ов предлагаемого способа. Необходимо отметить, что в специализированных изданиях имеются описания некоторых подходов, используемых для прогнозирования реакции собственно опухоли либо иммуннокомпетентных клеток на лекарственные и другие воздействия. По нашим данным, в литературе отсутствуют сведения о способах интегральной одновременной оценки вышеуказанных явлений у конкретного больного, которые могли бы служить основой для назначения индивидуально обоснованного лечения. In the available literature, the authors were unable to find an analogue / s of the proposed method. It should be noted that in specialized publications there are descriptions of some approaches used to predict the response of the tumor itself or of immunocompetent cells to drug and other effects. According to our data, there is no information in the literature on methods for the integral simultaneous assessment of the above phenomena in a particular patient, which could serve as the basis for the appointment of individually based treatment.
Что касается известных методов диагностики и прогнозирования поведения аутологичной опухоли, то большинство из них базируются на изучении синтеза (репликации) ДНК, ибо гибель клеток, вызываемая большинством химиотерапевтических препаратов, обусловлена нарушением структуры ДНК. При этом независимо от механизма действия повреждающего агента, если клетки чувствительны к нему (! ), это проявляется в виде подавления репликации ДНК. Метод состоит в том, что через 4 суток инкубации тестируемые с интересующим цитостатическим препаратом опухолевые клетки (различные саркомы) и контрольные нормальные фибробласты метили 3H-тимидином и по уровню его включения в ДНК судили об интенсивности ее репликации по сравнению с исходным уровнем и уровнем контрольной культуры. В суспензии клеток 18 из 23 разных опухолей включение не превышало 300 импульсов/мин/чашку, когда включение в нормальные фибробласты составило всего 97 имп/мин/чашку. Чувствительность к адриамицину, 5-фторурацилу, цисплатине, винкристину и др., измеренная радиометрически, в 54 из 61 случая совпадала с результатами определения чувствительности по выживаемости (снижение включения на 60% и более и уменьшение числа выросших колоний на 70% и более). При сравнении кривых доза-эффект совпадение было еще больше - 95%. As for the known methods for diagnosing and predicting the behavior of an autologous tumor, most of them are based on the study of DNA synthesis (replication), because cell death caused by most chemotherapeutic drugs is caused by a violation of the DNA structure. Moreover, regardless of the mechanism of action of the damaging agent, if the cells are sensitive to it (!), This manifests itself in the form of suppression of DNA replication. The method consists in the fact that after 4 days of incubation, tumor cells (various sarcomas) and control normal fibroblasts, tested with the cytostatic drug of interest, were labeled with 3H-thymidine and the level of its replication in DNA was judged on the intensity of its replication compared to the initial level and the level of the control culture . In a cell suspension of 18 of 23 different tumors, the inclusion did not exceed 300 pulses / min / cup, when the inclusion in normal fibroblasts was only 97 imp / min / cup. Sensitivity to adriamycin, 5-fluorouracil, cisplatin, vincristine, etc., measured radiometrically, in 54 of 61 cases coincided with the results of determining the sensitivity by survival (reduction in inclusion by 60% or more and a decrease in the number of grown colonies by 70% or more). When comparing the dose-response curves, the coincidence was even greater - 95%.
Принципиальным недостатком приводимого способа является отсутствие одновременного исследования влияния исследуемых in vitro препаратов на клеточное звено иммунного ответа. Что лишает возможности выбора тех из них, которые, наряду с выраженным цитотоксическим влиянием на аутологичную опухолевую ткань, обладают наименьшим иммунотоксическим эффектом. Этот способ также не предусматривает испытание иммунотропных веществ, используемых у опухолевых больных для коррекции опухольассоциированного иммунодефицита (интерферонов и других медиаторов иммунного ответа), необходимого для исключения их возможного опухольстимулирующего действия. The principal disadvantage of this method is the lack of a simultaneous study of the effect of the studied in vitro preparations on the cellular component of the immune response. Which makes it impossible to choose those that, along with a pronounced cytotoxic effect on autologous tumor tissue, have the least immunotoxic effect. This method also does not include testing of immunotropic substances used in tumor patients to correct tumor-associated immunodeficiency (interferons and other mediators of the immune response), necessary to exclude their possible tumor-stimulating effect.
Следует отметить, что предлагаемая технология лабораторного определения чувствительности перерожденных клеток к различным цитостатикам не пригодна для массового скрининга ввиду дороговизны и длительности воспроизведения. It should be noted that the proposed laboratory technology for determining the sensitivity of degenerated cells to various cytostatics is not suitable for mass screening due to the high cost and duration of reproduction.
Наиболее близким по технической сущности является способ определения состояния макроорганизма, включающий исследование иммунокомпетентных клеток из периферической крови, вначале изолированных, а затем в естественных (в присутствии белокассоциированной и безбелковой фракции нативной аутологичной плазмы, а также других клеток лейкоконцентрата) и искусственных (в присутствии гормональных, противовоспалительных, иммуномодулирующих препаратов) микроокружений с последующей совместной компьютерной и программной оценкой всех регистрируемых показателей, что позволяет формулировать индивидуальные показания и противопоказания к различным компонентам предполагаемого комплексного лечения. Использование этого способа позволяет по параметрам изолированных иммунокомпетентных клеток (эффекторов специфического иммунитета: T- и B-лимфоцитов, иммунорегуляторных клеток и эффекторов системы естественной резистентности: гранулоцитарных лейкоцитов и моноцитов/макрофагов), получаемых из периферической крови, и изменению их поведения в моделируемых in vitro естественных и искусственных микроокружениях диагностировать наличие, выраженность и пути реализации иммунного воспаления, с вычленением иммунных реакций, направленных против собственных клеточных образований, и определять способы их купирования. The closest in technical essence is a method for determining the state of a macroorganism, including the study of immunocompetent cells from peripheral blood, first isolated, and then in natural (in the presence of a protein-associated and protein-free fraction of native autologous plasma, as well as other leukoconcentrate cells) and artificial (in the presence of hormonal, anti-inflammatory, immunomodulatory drugs) microenvironments with subsequent joint computer and program evaluation of all registries indicators, which allows us to formulate individual indications and contraindications to various components of the proposed comprehensive treatment. Using this method allows for the parameters of isolated immunocompetent cells (effectors of specific immunity: T- and B-lymphocytes, immunoregulatory cells and effectors of the system of natural resistance: granulocyte leukocytes and monocytes / macrophages) obtained from peripheral blood and change their behavior in simulated in vitro natural and artificial microenvironments to diagnose the presence, severity and ways of realization of immune inflammation, with the isolation of immune responses directed against intrinsic cell formations, and determine the ways of stopping them.
Но цитируемый способ не позволяет прогнозировать поведение клеточных элементов, реализующих выраженное иммунное воспаление в иммуноконфликтной области, и тем более прогнозировать изменение жизнедеятельности опухолевой ткани, так как он не предполагает лабораторные манипуляции с ними в in vitro условиях. То есть цитируемый способ не позволяет прогнозировать возможность возникновения отрицательных реакций со стороны иммуноконфликтной ткани на те или иные компоненты общего комплексного лечения. В связи с вышеуказанными обстоятельствами анализируемый способ недостаточен для решения задачи совместной оценки многоплановых взаимоотношений, имеющих место между макроорганизмом пациента и его иммуноконфликной тканью, определяющих особенности патогенеза заболевания либо конкретного состояния. But the cited method does not allow to predict the behavior of cellular elements that realize pronounced immune inflammation in the immunoconflict region, and even more so to predict changes in the activity of tumor tissue, since it does not involve laboratory manipulations with them in vitro. That is, the cited method does not allow to predict the possibility of the occurrence of negative reactions from immunoconflict tissue to certain components of the general complex treatment. In connection with the above circumstances, the analyzed method is insufficient to solve the problem of joint assessment of the multifaceted relationships that occur between the patient’s macroorganism and its immunoconflict tissue, which determine the particular pathogenesis of the disease or a specific condition.
В доступной литературе, к сожалению, нам не удалось найти описания способа, который бы ставил цель, близкую к сформулированной нами. In the available literature, unfortunately, we were not able to find descriptions of a method that would set a goal close to that formulated by us.
Настоящее изобретение направлено на создание способа тестирования и индивидуализации коррекции состояния макроорганизма, содержащего иммуноконфликтную ткань, для тех случаев, когда функционирование иммуноконфликтной ткани является определяющим фактором иммунопатогенеза. The present invention is directed to a method for testing and individualizing the correction of the state of a macroorganism containing immunoconflict tissue for those cases where the functioning of immunoconflict tissue is a determining factor in immunopathogenesis.
Задача состоит в том, чтобы в процесс диагностики, наряду с общими показателями иммунного воспаления, вовлечь сущностные для нее параметры иммуноконфликтной ткани, совместная оценка которых позволила бы оценить характер динамического взаимодействия целостного макроорганизма с его иммуноконфликтной областью. Следует подчеркнуть, что в роли последней может выступать любое образование, включенное в структуру макроорганизма и образующее с ним целостность более высокого уровня организации. В качестве примера можно привести развивающееся новообразование и организм-опухоленоситель, взаимодействующие посредством онкологического статуса - характерных и индуцированных присутствием опухоли многоплановых изменений в метаболизме, иммунном и гормональном гомеостазе и т.д. Как пример иммуноконфликтной микросистемы, лишенной признаков злокачественного перерождения, можно привести заселение аутоагрессивными лимфоцитами пространства ликвора, ассоциированное с поражениями центральной нервной системы различной этиологии (туберкулезным менингитом, вирусным арахно-энцефалитом и т.д.). В перечне такого рода примеров следует также упомянуть аутоиммунные процессы в репродуктивных органах, особенно в яичках, являющихся, как и мозг, забарьерной тканью. В этом случае в роли клеточных реализаторов иммунного воспаления, приводящего к иммунному бесплодию, выступают иммуноциты и различные индуцируемые ними медиаторы, которые и формируют необходимое для их функционирования микроокружение. В соответствии с этой логикой можно оценивать и посттрансплантационные локальные и общие реакции на аллотрансплантат. The task is to include in the diagnostic process, along with general indicators of immune inflammation, the parameters of immunoconflict tissue essential for it, a joint assessment of which would allow us to evaluate the nature of the dynamic interaction of the whole macroorganism with its immunoconflict region. It should be emphasized that the latter can be played by any entity included in the structure of a macroorganism and forming with it the integrity of a higher level of organization. An example is a developing neoplasm and a tumor-bearing organism interacting through oncological status - characteristic and induced by the presence of a tumor multifaceted changes in metabolism, immune and hormonal homeostasis, etc. As an example of an immunoconflict microsystem devoid of signs of malignant degeneration, one can cite the settlement of cerebrospinal fluid by autoaggressive lymphocytes associated with lesions of the central nervous system of various etiologies (tuberculous meningitis, viral arachno-encephalitis, etc.). In the list of such examples, one should also mention autoimmune processes in the reproductive organs, especially in the testes, which, like the brain, are barrier tissue. In this case, the role of cellular realizers of immune inflammation leading to immune infertility is played by immunocytes and various mediators induced by them, which form the microenvironment necessary for their functioning. In accordance with this logic, local and general responses to allograft can also be evaluated.
Выполнение этой задачи при современном уровне техники в данном вопросе возможно при воспроизведении в in vitro условиях на клеточном уровне физической модели иммунокомпетентной сферы и иммуноконфликтной области макроорганизма, расшифровать их взаимные влияния, определив носителей иммунного воспаления (клетки, компоненты биологических сред), и путем in vitro апробации эффекта различных фармакологических препаратов и других лечебных манипуляций на иммуноциты периферической крови и иммуноциты либо клетки иммуноконфликтной ткани, смоделировать именно те искусственные микроокружения, которые позволят снизить и в конечном итоге полностью блокировать реакции макроорганизма, поддерживающие иммуноконфликтную локальную ситуацию in vivo. The fulfillment of this task with the current level of technology in this matter is possible when reproducing in vitro conditions at the cellular level a physical model of the immunocompetent sphere and the immunoconflict region of a macroorganism, to decipher their mutual influences by identifying carriers of immune inflammation (cells, components of biological media), and by in vitro testing the effect of various pharmacological preparations and other therapeutic manipulations on peripheral blood immunocytes and immunocytes or cells of immunoconflict tissue, simulated It is precisely those artificial microenvironments that will allow us to reduce and ultimately completely block the reactions of the macroorganism that support the immunoconflict local situation in vivo.
Реализация данного изобретения позволит получить лабораторную диагностику взаимоотношений, сложившихся между макроорганизмом и иммуноконфликтной тканью, посредством иммунологических и показателей пролиферации испытуемой иммуноконфликтной ткани при широком спектре заболеваний и состояний человека, в патогенезе которых значительно увеличен удельный вес аутоиммунных реакций, при этом особое место занимает опухолевая болезнь. The implementation of this invention will allow to obtain laboratory diagnosis of the relationship between the macroorganism and the immunoconflict tissue, through immunological and proliferation indicators of the tested immunoconflict tissue in a wide range of human diseases and conditions, in the pathogenesis of which the specific gravity of autoimmune reactions is significantly increased, with a special place being occupied by tumor disease.
Для решения поставленной задачи предложен способ диагностики и индивидуальной корреции состояния макроорганизма, содержащего иммуноконфликтную ткань, включающий исследование иммунокомпетентных клеток из периферической крови, вначале изолированных, а затем в естественных (белокассоциированная и безбелковая фракции нативной аутологичной плазмы и другие клетки лейкоконцентрата) и искусственных в присутствии гормональных, противовоспалительных, иммуномодулирующих препаратов) микроокружений, в котором, согласно изобретению, одновременно с исследованием периферической крови определяют параметры иммуноконфликтной ткани, или иммуноцитов, получаемых in situ, а именно: 1) в случае опухолевой болезни - уровень синтеза ДНК в изолированных клетках новообразования, а затем при внесении факторов естественных (белокассоциированная и безбелковая фракции нативной аутологичной плазмы) и искусственных микроокружений (различных доз гормональных, противовоспалительных, иммуномодулирующих и цитостатических препаратов); 2) в случае иммуноконфликтной ткани, лишенной признаков злокачественного перерождения - способность изолированных иммуноцитов, инфильтрировавших эту ткань, взаимодействовать с мембранассоциированными структурами аутологичных тканей, например, представленных на поверхности собственных эритроцитов, сперматозоидов и т. д., а затем при внесении факторов естественных (например, белокассоциированная и безбелковая фракция аутологичного ликвора, части собственного эякулята и т. д.) и искусственных (различных доз гормональных, противовоспалительных, иммуномодулирующих и цитостатических препаратов) микроокружений. При этом все полученные параметры оцениваются совместно с полученными иммунологическими показателями периферической крови при помощи компьютерной обработки и программного обеспечения, и по результатам интегральной оценки всех вышеуказанных параметров' назначается индивидуально обоснованное комплексное лечение, в котором, кроме гормональных, противовоспалительных и иммуномодулирующих препаратов, используются цитостатики. To solve this problem, a method for the diagnosis and individual correction of the state of a macroorganism containing immunoconflict tissue, including the study of immunocompetent cells from peripheral blood, first isolated and then natural (protein-associated and protein-free fractions of native autologous plasma and other leukoconcentrate cells) and artificial cells in the presence of hormonal , anti-inflammatory, immunomodulating drugs) microenvironments in which, according to the invention, simultaneously The parameters of immunoconflict tissue, or immunocytes obtained in situ, are determined along with the study of peripheral blood, namely: 1) in the case of a tumor, the level of DNA synthesis in isolated neoplasm cells, and then when natural factors are introduced (protein-associated and protein-free fractions of native autologous plasma) and artificial microenvironments (various doses of hormonal, anti-inflammatory, immunomodulating and cytostatic drugs); 2) in the case of immunoconflict tissue devoid of signs of malignant degeneration, the ability of isolated immunocytes to infiltrate this tissue to interact with membrane-associated structures of autologous tissues, for example, presented on the surface of their own red blood cells, spermatozoa, etc., and then when natural factors are introduced (for example , protein-associated and protein-free fraction of autologous cerebrospinal fluid, parts of their own ejaculate, etc.) and artificial (various doses of hormonal, anti-inflammatory immunity, immunomodulatory and cytostatic drugs) microenvironments. Moreover, all the obtained parameters are evaluated together with the obtained immunological parameters of the peripheral blood using computer processing and software, and according to the results of the integrated assessment of all the above parameters, individually-based comprehensive treatment is prescribed, in which, in addition to hormonal, anti-inflammatory and immunomodulating drugs, cytostatics are used.
Благодаря отличительным признакам, а именно включению информации о взаимоотношениях иммуноконфликтной ткани с макроорганизмом в процесс диагностики, предлагаемый способ позволяет оценивать не только общую реакцию на проводимое лечение, но и назначать индивидуально обоснованную и поэтому оптимизированную терапию, адекватную конкретному состоянию макроорганизма и его иммуноконфликтной ткани. Due to the distinguishing features, namely, the inclusion of information on the relationship of immunoconflict tissue with a macroorganism in the diagnostic process, the proposed method allows us to evaluate not only the general reaction to the treatment, but also to prescribe individually based and therefore optimized therapy that is adequate to the specific state of the macroorganism and its immunoconflict tissue.
Насколько известно авторам, пока не существует литературного источника, где бы параметры иммуноконфликтной ткани вообще использовались в контексте оценки состояния пациента, поскольку взаимоотношения макроорганизма и включенной в него иммуноконфликтной ткани еще недостаточно изучены и не применяются в практике клинического ведения больных. As far as the authors know, there is as yet no literary source where the parameters of immunoconflict tissue are generally used in the context of assessing the patient’s condition, since the relationships between the macroorganism and the immunoconflict tissue included in it are still not well understood and are not used in clinical practice.
Способ осуществляется следующим образом. The method is as follows.
У пациента забирают:
1) 15 мл венозной периферической крови, которую стабилизируют 2,7% раствором NaЭДТА (трилон Б) в соотношении 1:10;
2) материал иммуноконфликтной области макроорганизма:
- биоптат опухолевой ткани либо любой другой интересующей ткани/органа;
- аспирационный биоптат трансплантированного органа;
- ликвор в количестве, как минимум, 1-2 мл;
- эякулят в количестве, как минимум, 1-2 мл.The patient is taken:
1) 15 ml of venous peripheral blood, which is stabilized with a 2.7% solution of NaEDTA (Trilon B) in a ratio of 1:10;
2) material of the immunoconflict region of a macroorganism:
- biopsy of tumor tissue or any other tissue / organ of interest;
- aspiration biopsy of the transplanted organ;
- cerebrospinal fluid in an amount of at least 1-2 ml;
- ejaculate in an amount of at least 1-2 ml.
Обработка периферической крови. Из 10 мл крови в стандартном градиенте плотности фиколл-верографина (1.076-1078) выделяют пул мононуклеарных клеток, из которых инкубацией на пластиковых поверхностях удаляют прилипающие клетки (моноциты/макрофаги). Из оставшейся крови (5 мл) отбирают максимально освобожденный от эритроцитов и плазмы лейкоконценрат (около 2 мл), клетки которого отмывают от жидкой части плазмы трехкратным центрифугированием с физиологическим растворим. Половину отобранной жидкой части плазмы пропускают через фильтры с диаметром пор 0,17 ммк (нарезанных из диализных колонок аппарата "искусственной почки") и таким образом отделяют безбелковую фракцию от белокассоциированной. Peripheral blood processing. A pool of mononuclear cells is isolated from 10 ml of blood in a standard density gradient of ficoll-verographin (1.076-1078), from which adherent cells (monocytes / macrophages) are removed by incubation on plastic surfaces. From the remaining blood (5 ml), the maximum leukoconcentrate freed from red blood cells and plasma (about 2 ml) is taken, the cells of which are washed from the liquid part of the plasma by three centrifugation with physiological soluble. Half of the selected liquid part of the plasma is passed through filters with a pore diameter of 0.17 mmk (cut from dialysis columns of the “artificial kidney” apparatus) and thus the protein-free fraction is separated from the protein-associated fraction.
In vitro традиционными методами определяют способность выделенных лимфоцитов участвовать в феномене Е- и ЕАС-розеткообразования, розеткообразовании с аутологичными эритроцитами и Е-розеткообразовании лимфоцитов, после прединкубации с теофиллином; показатели НСТ-спонтанного и индуцированного LPS ("Sigma") теста нейтрофилов и моноцитов; активность естественных киллерных клеток и способность трансформироваться в бласты при внесении различных митогенов. Все указанные реакции проводят в соответствии с рекомендациями, описанными в способе-прототипе. In vitro, traditional methods determine the ability of isolated lymphocytes to participate in the phenomenon of E- and EAC-rosette formation, rosette formation with autologous red blood cells and E-rosette formation of lymphocytes, after preincubation with theophylline; indicators of HCT-spontaneous and induced LPS ("Sigma") test of neutrophils and monocytes; the activity of natural killer cells and the ability to transform into blasts when various mitogens are introduced. All these reactions are carried out in accordance with the recommendations described in the prototype method.
I. - НСТ-спонтанный и индуцированный тетст нейтрофилов и моноцитов, учитываемый в лейкоконцентрате (естественном клеточном, гуморальном и пространственном микроокружениях). I. - HCT-spontaneous and induced tetst of neutrophils and monocytes, taken into account in leukoconcentrate (natural cellular, humoral and spatial microenvironment).
II. - Е-розеткообразование (экспрессия характерных Т-клеточных маркеров):
а) изолированных лимфоцитов (процентное и абсолютное содержание Е-розеткообразующих клеток);
б) прединкубированных с теофиллином лимфоцитов лейкоконцентрата Т-хелперные и Т-супрессорные клетки (процентное и абсолютное содержание и их соотношение);
в) в присутствии других клеток лейкоконцентрата (определяют отклонение от а);
г) в присутствии безбелковой фракции нативной аутологичной плазмы (в качестве эффекторных клеток используют изолированные лимфоциты и клетки лейконконцентрата) определяют отклонение от а и в);
д) в присутствии белокассоциированной фракции аутоплазмы (в качестве эффекторных клеток используют изолированные лимфоциты и клетки лейкоконцентрата, определяют отклонение от а и в).II. - E-rosette formation (expression of characteristic T-cell markers):
a) isolated lymphocytes (percentage and absolute content of E-rosette-forming cells);
b) T-helper and T-suppressor cells of the leukoconcentrate lymphocytes preincubated with theophylline (percentage and absolute content and their ratio);
c) in the presence of other cells of the leukoconcentrate (determine the deviation from a);
d) in the presence of a protein-free fraction of native autologous plasma (isolated lymphocytes and leukon concentrate cells are used as effector cells), the deviation from a and b is determined);
d) in the presence of a protein-associated autoplasmic fraction (isolated lymphocytes and leukoconcentrate cells are used as effector cells, the deviation from a and b is determined).
III. - ЕАС-розеткообразование (экспрессия характерных В-клеточных маркеров):
а) изолированных лимфоцитов (определяют процентное и абсолютное содержание ЕАС-розеткообразующих клеток);
б) в присутствии других клеток лейконконцентрата (определяют отклонение от а);
в) в присутствии безбелковой фракции нативной аутоплазмы определяют отклонение от а и б (в качестве эффекторных клеток используют изолированные лимфоциты и клетки лейкоконцентрата);
г) в присутствии белокассоциированной фракции нативной аутоплазмы (определяют отклонение от а и б, эффекторные клетки - изолированные лимфоциты и лейкоконцентрат).III. - EAC-rosette formation (expression of characteristic B-cell markers):
a) isolated lymphocytes (determine the percentage and absolute content of EAC-rosette cells);
b) in the presence of other leukon concentrate cells (determine the deviation from a);
c) in the presence of a protein-free fraction of native autoplasma, the deviation from a and b is determined (isolated lymphocytes and leukoconcentrate cells are used as effector cells);
d) in the presence of a protein-associated fraction of native autoplasma (deviation from a and b is determined, effector cells - isolated lymphocytes and leukoconcentrate).
IV. - Розеткообразование с аутологичными эритроцитами (АуГемРОК):
а) изолированных лимфоцитов (определяют процентное и абсолютное содержание АуГем-розеткообразующих клеток);
б) в присутствии других клеток лейкоконцентрата (определяют отклонение от а);
в) в присутствии безбелковой фракции нативной аутоплазмы (определяют отклонение от а и б, эффекторные клетки - изолированные лимфоциты и клетки лейкоконцентрата);
г) в присутствии белокассоциированной фракции нативной аутоплазмы (определяют отклонение от а и б, эффекторные клетки - изолированные лимфоциты и клетки лейкоконцентрата).IV. - Rosette formation with autologous red blood cells (AuGemROK):
a) isolated lymphocytes (determine the percentage and absolute content of AuGem-rosette-forming cells);
b) in the presence of other leukoconcentrate cells (determine the deviation from a);
c) in the presence of a protein-free fraction of native autoplasma (deviation from a and b is determined, effector cells — isolated lymphocytes and leukoconcentrate cells);
d) in the presence of a protein-associated fraction of native autoplasma (the deviation from a and b is determined, effector cells — isolated lymphocytes and leukoconcentrate cells).
V. - Определение Е-розеткообразования лимфоцитов лейкоконцентрата в с присутствии иммунотропных препаратов * (прединкубация с препаратом длится в течении 30 минут при 36,7oC):
- терапевтическая доза индометацина;
- терапевтическая доза дексазона;
- субтерапевтическая (0,1 терапевтической) и терапевтическая дозы интерферона.V. - Determination of the E-rosette formation of leukoconcentrate lymphocytes in the presence of immunotropic drugs * (preincubation with the drug lasts for 30 minutes at 36.7 o C):
- therapeutic dose of indomethacin;
- therapeutic dose of dexazone;
- subtherapeutic (0.1 therapeutic) and therapeutic doses of interferon.
VI. - Определение розеткообразования лимфоцитов с аутологичными эритроцитами согласно условий этапа V. VI. - Determination of rosette formation of lymphocytes with autologous red blood cells according to the conditions of stage V.
VII. - Определение естественной киллерной активности (против аутологичных опухолевых клеток, при отсутствии последних в качестве мишеневых можно использовать клетки перевиваемой линии человеческого миелолейкоза - К-562):
а) изолированных лимфоцитов;
б) в присутствии белокассоциированной фракции нативной аутоплазмы (определяют отклонение от а);
в) в присутствии безбелковой фракции нативной аутоплазмы (определяют отклонение от а).VII. - Determination of natural killer activity (against autologous tumor cells, in the absence of the latter, cells of the transplantable line of human myeloid leukemia - K-562 can be used as target cells):
a) isolated lymphocytes;
b) in the presence of a protein-associated fraction of native autoplasma (determine the deviation from a);
c) in the presence of a protein-free fraction of native autoplasma (determine the deviation from a).
VIII. - Реакция бласттрансформации лимфоцитов на Т-клеточный митоген (например, фитогемагглютинин, ФГА, SERVA, 30 мкг/мл) и преимущественно В-клеточный митоген (например, липополисахарид, LPS, SIGMA, 100 мкг/мл):
а) изолированных лимфоцитов (учет уровня синтеза ДНК в лимфоцитах по включению 3H-тимидина);
б) в присутствии безбелковой фракции нативной аутоплазмы (определяют отклонение от а);
в) в присутствии белокассоциированной фракции нативной аутоплазмы (определяют отклонение от а);
г) внесение в тест-системы кроме фитогемагглютинина различных иммунотропных препаратов* (согласно этапу V).Viii. - The reaction of blast transformation of lymphocytes to a T-cell mitogen (e.g. phytohemagglutinin, PHA, SERVA, 30 μg / ml) and predominantly B-cell mitogen (e.g. lipopolysaccharide, LPS, SIGMA, 100 μg / ml):
a) isolated lymphocytes (taking into account the level of DNA synthesis in lymphocytes by the inclusion of 3H-thymidine);
b) in the presence of a protein-free fraction of native autoplasma (determine the deviation from a);
c) in the presence of a protein-associated fraction of native autoplasma (deviation from a is determined);
d) the addition of various immunotropic drugs * to the test systems, in addition to phytohemagglutinin * (according to stage V).
* В зависимости от заказа лечащих врачей в схему тестирования вносятся и другие препараты - различные гормоны, например инсулин, глюкагон, кортизол; традиционные иммуномодуляторы - лимфо- и монокины, например интерлейкин-2, гранулоцитарный и макрофагальный колониестимулирующие факторы роста, опухоленекротический фактор и т.д.; антибиотики; цитостатики, внесение которых обязательно при диагностике опухолей болезни и т.д. * Depending on the order of the attending physicians, other drugs are introduced into the testing scheme - various hormones, for example, insulin, glucagon, cortisol; traditional immunomodulators - lympho- and monokines, for example interleukin-2, granulocytic and macrophage colony-stimulating growth factors, tumor necrotic factor, etc .; antibiotics cytostatics, the introduction of which is mandatory in the diagnosis of tumors of the disease, etc.
Исследование иммунологических параметров периферической крови может быть проведено по двум схемам:
1) короткой, занимающей 4-6 часов рабочего времени, для воспроизведения которой необходимы условия стандартной клинической лаборатории и персональный компьютер для программного построения текста заключения;
2) расширенной, требующей для полного цикла исследования 3-е суток, специальные помещения для работы в стерильных условия и с источниками ионизирующих излучений (стерильный радиоблок) и персональный компьютер для программного построения текста заключения.The study of immunological parameters of peripheral blood can be carried out according to two schemes:
1) a short one, which takes 4-6 hours of working time, for the reproduction of which the conditions of a standard clinical laboratory and a personal computer are necessary for constructing the conclusion text;
2) extended, requiring 3 days for the full study cycle, special rooms for working in sterile conditions and with sources of ionizing radiation (sterile radio unit) and a personal computer for programmatically constructing the conclusion text.
Обработка иммуноконфликтной ткани. Processing of immunoconflict tissue.
Материал для исследования из области иммуноконфликтной ткани может быть получен в следующих видах:
1) собственно материала иммуноконфликтной ткани, например биоптата аутологичной опухоли или опухолевого выпота, обнаруживаемого в полости плевры, брюшины, в ликворе и т.д.; клеточного содержимого эякулята, желчи, мочи;
2) пула иммунокомпетентных клеток, реализующих иммунное воспаление in situ, например лимфоцитов и других клеток крови, реализующих иммунное воспаление в центральной нервной системе и обнаруживаемых в ликворе; тех же клеток, получаемых методом аспирационной биопсии из аллотрансплантированной почки или другого органа и т.д.Material for research from the field of immunoconflict tissue can be obtained in the following forms:
1) the actual material of immunoconflict tissue, for example, an autologous tumor biopsy or tumor effusion found in the pleural cavity, peritoneum, cerebrospinal fluid, etc .; cellular contents of ejaculate, bile, urine;
2) a pool of immunocompetent cells that realize immune inflammation in situ, such as lymphocytes and other blood cells that realize immune inflammation in the central nervous system and are found in the cerebrospinal fluid; the same cells obtained by aspiration biopsy from an allotransplanted kidney or other organ, etc.
Исследование аутологичной опухолевой ткани. The study of autologous tumor tissue.
Исследование проводится с целью выяснения биологических особенностей аутологичной опухолевой ткани по определению уровня синтеза ДНК (интенсивности репликации), о котором судят, учитывая скорость включения 3H-тимидина в ДНК культивируемых на протяжении 20 часов аутологичных опухолевых клеток. The study is carried out in order to clarify the biological characteristics of autologous tumor tissue by determining the level of DNA synthesis (replication intensity), which is judged taking into account the rate of incorporation of 3H-thymidine into the DNA of autologous tumor cells cultured for 20 hours.
Для культивирования использовали 96-луночные плоскодонные планшеты ("LIMBRO") с объемом лунки 0,3 мл. В каждой лунке культивировали 0,033 х 10 клеток в 0,1 мл культуральной среды, состоящей из фирменной среды RPM1 1640 и 0,01 М фирменного буфера HEPES. Удельная активность 3H-тимидина составила 10-мки/мл. Каждую пробу разливали в триплет. По истечениb срока культивирования содержимое лунок переносили на фильтры для бета-счета.For cultivation, 96-well flat-bottom plates ("LIMBRO") with a well volume of 0.3 ml were used. In each well, 0.033 x 10 cells were cultured in 0.1 ml of culture medium consisting of proprietary RPM1 1640 medium and 0.01 M proprietary HEPES buffer. The specific activity of 3 H-thymidine was 10 μm / ml. Each sample was poured into a triplet. At the end of the cultivation period, the contents of the wells were transferred to filters for beta counting.
Учитывали:
а) исходную интенсивность синтеза ДНК в суспензионной культуре выделенных опухолевых клеток;
б) этот же параметр при внесении белокассоциированной фракции нативной аутологичной плазмы (определяли отклонение от а);
в) этот же параметр при внесении безбелковой фракции нативной аутологичной плазмы (определяли отклонение от а);
г) при наличии жидкой части среды обитания опухолевых клеток (например, жидкой части асцита, плеврита, ликвора и т.д.) ее разделяли на фильтрах на белокассоциированную и безбелковую фракции, аналогично тому, как это делали для жидкой части плазмы, и определяли влияние полученных фракций на исходную интенсивность синтеза ДНК в аутологичных опухолевых клетках по отклонению от а);
д) одновременно в параллельных пробах учитывали уровень репликации ДНК тестируемых клеток в присутствии вышеуказанных иммунотропных и цитостатических препаратов, действующих на все фазы клеточного цикла, например на G1 - митомицин, G1 - S - 5-фторурацил, S - G2 - метатрексат, G2 - циклофосфамид, M - винкристин и т.д.Considered:
a) the initial intensity of DNA synthesis in a suspension culture of isolated tumor cells;
b) the same parameter when introducing a protein-associated fraction of native autologous plasma (deviation from a was determined);
c) the same parameter when introducing a protein-free fraction of native autologous plasma (the deviation from a was determined);
d) in the presence of the liquid part of the tumor cell habitat (for example, the liquid part of ascites, pleurisy, cerebrospinal fluid, etc.), it was separated on the filters into protein-associated and protein-free fractions, similar to how it was done for the liquid part of the plasma, and the effect was determined fractions obtained at the initial intensity of DNA synthesis in autologous tumor cells by deviation from a);
e) simultaneously in parallel samples, the level of DNA replication of the tested cells was taken into account in the presence of the above immunotropic and cytostatic drugs acting on all phases of the cell cycle, for example, G1 - mitomycin, G1 - S - 5-fluorouracil, S - G2 - metatrexate, G2 - cyclophosphamide , M - vincristine, etc.
Исследование пула иммунокомпетентных клеток, полученных из области иммуноконфликтной ткани. Study of a pool of immunocompetent cells obtained from the field of immunoconflict tissue.
Исследование проводили с целью выяснения способности и интенсивности взаимодействия иммуноцитов с мембранассоциированными структурами тестовых аутологичных клеток, в роли которых в подавляющем большинстве случаев использовались аутологичные эритроциты, но при возможности получения других мишеневых клеток, например сперматозоидов эякулята при обследовании пациентов с аутоиммунным мужским бесплодием, использовались именно эти клетки в качестве тестовых. The study was conducted to determine the ability and intensity of the interaction of immunocytes with membrane-associated structures of test autologous cells, in which the vast majority of cases used autologous red blood cells, but if other target cells, for example, ejaculate spermatozoa, could be used to examine patients with autoimmune male infertility cells as test cells.
Учитывали:
а) способность выделенных из области иммуноконфликтной ткани иммуноцитов участвовать в розеткообразовании с аутологичными тестовыми клетками (например, с аутологичными эритроцитами, сперматозоидами), определяли процентное содержание розеткообразующих клеток;
б) изменение этого показателя в присутствии белокассоциированной фракции нативной аутологичной плазмы (определяли отклонение от а);
в) изменение этого показателя в присутствии безбелковой фракции нативной аутологичной плазмы (определяли отклонение от а);
г) при наличии жидкой части среды обитания иммуноцитов иммуноконфликтной ткани (например, жидкой части ликвора, эякулята и т.д.) ее разделяли на фильтрах на белокассоциированную и безбелковую фракции, аналогично тому, как это делали для жидкой части плазмы, и определяли влияние полученных фракций на исходную способность участвовать в розеткообразовании с аутологичными тестовыми клетками (и определяли отклонение зарегистрированных показателей от а).Considered:
a) the ability of immunocytes isolated from the region of immunoconflict tissue to participate in rosette formation with autologous test cells (for example, autologous red blood cells, sperm cells), the percentage of rosette-forming cells was determined;
b) a change in this indicator in the presence of a protein-associated fraction of native autologous plasma (deviation from a was determined);
c) a change in this indicator in the presence of a protein-free fraction of native autologous plasma (the deviation from a was determined);
d) in the presence of the liquid part of the habitat of immunocytes of immunoconflict tissue (for example, the liquid part of the cerebrospinal fluid, ejaculate, etc.), it was separated on the filters into protein-associated and protein-free fractions, similar to how it was done for the liquid part of the plasma, and the effect of the obtained fractions of the initial ability to participate in rosette formation with autologous test cells (and the deviation of the recorded parameters from a was determined).
Способ испытан на культурах клеток больных с опухолями прямой кишки, мозга, мочевого пузыря, легких, а также больных с различными поражениями центральной нервной системы, с аутоиммунным бесплодием. The method was tested on cell cultures of patients with tumors of the rectum, brain, bladder, lungs, as well as patients with various lesions of the central nervous system, with autoimmune infertility.
Диагностированные состояния макроорганизма, содержащего иммуноконфликтную ткань, и рекомендации по их коррекции, полученные после компьютерной обработки, подтверждаются клиническими наблюдениями и контрольными лабораторными исследованиями. Diagnosed conditions of a macroorganism containing immunoconflict tissue, and recommendations for their correction, obtained after computer processing, are confirmed by clinical observations and control laboratory studies.
Источники информации, принятые во внимание при составлении заявки:
1. Friedman H.M., Glaubiger D.L. Assessment of in drugs sensitivity of human tumor cells ising 3H-thymidine incorporation in a modified human tumor stem cell assay. Cancer Res. 1982. v. 42. N 11. p. 4683 - 4689.Sources of information taken into account when preparing the application:
1. Friedman HM, Glaubiger DL Assessment of in drugs sensitivity of human tumor cells ising 3 H-thymidine incorporation in a modified human tumor stem cell assay. Cancer Res. 1982. v. 42. N 11. p. 4683 - 4689.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU5063047 RU2140081C1 (en) | 1992-06-30 | 1992-06-30 | Method of selection of medicinal preparations for correction of disturbances of immunological status in tumor disease |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU5063047 RU2140081C1 (en) | 1992-06-30 | 1992-06-30 | Method of selection of medicinal preparations for correction of disturbances of immunological status in tumor disease |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2140081C1 true RU2140081C1 (en) | 1999-10-20 |
Family
ID=21613695
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU5063047 RU2140081C1 (en) | 1992-06-30 | 1992-06-30 | Method of selection of medicinal preparations for correction of disturbances of immunological status in tumor disease |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2140081C1 (en) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002057847A1 (en) * | 2001-01-19 | 2002-07-25 | Oleksandr Obodnikov | Method for individual selection of remedies for a specific patient |
| EA013400B1 (en) * | 2006-01-23 | 2010-04-30 | Закрытое Акционерное Общество "Скай Лтд." | Method for treating tumor diseases |
| RU2504771C2 (en) * | 2011-06-29 | 2014-01-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Пермская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО ПГФА Росздрава) | Method for extraction of analgetic agents |
| RU2564077C2 (en) * | 2009-03-27 | 2015-09-27 | Конинклейке Филипс Электроникс Н.В. | Probability of injury to normal tissues, adapted with account of markers |
-
1992
- 1992-06-30 RU SU5063047 patent/RU2140081C1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Cancer Res., 1982, v.42, No 11, p.p. 4683 - 4689. * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002057847A1 (en) * | 2001-01-19 | 2002-07-25 | Oleksandr Obodnikov | Method for individual selection of remedies for a specific patient |
| EA013400B1 (en) * | 2006-01-23 | 2010-04-30 | Закрытое Акционерное Общество "Скай Лтд." | Method for treating tumor diseases |
| RU2564077C2 (en) * | 2009-03-27 | 2015-09-27 | Конинклейке Филипс Электроникс Н.В. | Probability of injury to normal tissues, adapted with account of markers |
| US9248313B2 (en) | 2009-03-27 | 2016-02-02 | Koninklijke Philips N.V. | Marker adapted normal tissue complication probability |
| RU2504771C2 (en) * | 2011-06-29 | 2014-01-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Пермская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО ПГФА Росздрава) | Method for extraction of analgetic agents |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Joynson et al. | Defect of cell-mediated immunity in patients with iron-deficiency anaemia | |
| Oldham et al. | Cellular microcytotoxicity in human tumor systems: Analysis of results | |
| JPH11513490A (en) | Biologically active polymer | |
| Fauci et al. | Mechanisms of corticosteroid action on lymphocyte subpopulations: VI. Lack of correlation between glucocorticosteroid receptors and the differential effects of glucocorticosteroids on T-cell subpopulations | |
| CN109563486A (en) | For making the diagnostic method of the specific Treatment decsion of patient in cancer is nursed | |
| Hazleman et al. | Lymphocyte proliferation to artery antigen as a positive diagnostic test in polymyalgia rheumatica. | |
| Broderick et al. | IL-12 reverses anergy to T cell receptor triggering in human lung tumor-associated memory T cells | |
| Weisenthal et al. | Characterization of human leukemia and Burkitt lymphoma cells by their acidic nuclear protein profiles | |
| WO2004059319A1 (en) | Individual methods for measurement of specific lymphocyte function | |
| RU2140081C1 (en) | Method of selection of medicinal preparations for correction of disturbances of immunological status in tumor disease | |
| Newcombe et al. | Chylous synovial effusion in rheumatoid arthritis: clinical and pathogenetic significance | |
| Hanna et al. | TRIC Agents Isolated in the United States. X. Immunofluorescence in the Diagnosis of TRIC Agent Infection in Man. | |
| Young et al. | Suppressive effect of alcoholic liver disease sera on lymphocyte transformation | |
| Bookwalter et al. | Brain-tumor cell kinetics correlated with survival | |
| Tormey et al. | Quantitative studies of phytohemagglutinin-induced DNA and RNA synthesis in normal and agammaglobulinemic leukocytes | |
| Metcalf | Formation in agar of fibroblast‐like colonies by cells from the mouse pleural cavity and other sources | |
| US20080279835A1 (en) | Method of Stem Cell Therapy for Cardiovascular Repair | |
| US20100196327A1 (en) | Methods for diagnosing biological samples containing stem cells | |
| Ristic et al. | Detection of an Anaplasma marginale Antibody Complex Formed in vivo | |
| O'BOYLE et al. | Evaluation of immunological reactivity in bladder cancer | |
| CN116440131B (en) | New application of pefetinib or pharmaceutically acceptable salt thereof | |
| RU2502998C1 (en) | Method for detecting t-lymphocyte hyperactivity | |
| Walinga | The interaction between polarized macrophages and fibroblasts in giant cell arteritis | |
| Taussig et al. | Effects of saliva and plasma from cystic fibrosis patients on membrane transport | |
| CN114134116A (en) | Kit for predicting curative effect of chemotherapy drugs of colorectal cancer patient and application thereof |