RU2099094C1 - Средство для лечения ожогов - Google Patents

Abstract

Использование: в медицине, при лечении ожогов. Сущность изобретения: средство для лечения ожогов содержит, мас.%: в качестве биологически активной добавки - натриевую соль дезоксирибонуклеиновой кислоты, выделенную из молок осетровых рыб 0,3 - 20,0, и коллаген - остальное. Натриевая соль дезоксирибонуклеиновой кислоты имеет следующую характеристику: молекулярная масса /3 - 120/ • 10⁵ Дальтон, содержание белка - не более 1,5%, содержание РНК - не более 6%, содержание полисахаридов - не более 2%, гиперхромный эффект 37 - 46%. Новое средство не дает осложнений, обладает высокой ранозаживляющей активностью при ожоге, не вызывает грубого рубцевания раны. 3 табл.

Description

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии, и касается средств для лечения ожогов.

Лечение ожоговой болезни, как правило, комплексное и включает лечение ожоговой токсемии и местное воздействие, направленное на ускорение заживления ожоговой раны и предотвращение инфицирования [5, 6]
Для борьбы с инфицированием ожоговой раны используют антисептики, антибиотики, сульфаниламидные препараты; для ускорения заживления - метилурацил, солкосерил, ферментные препараты [7] Недостатком указанных средств является слабая ранозаживляющая активность, необходимость смены повязок с лечебным препаратом, ведущая к дополнительной травматизации раны, глубокое грубое рубцевание, вызывающее нарушение фиксации органа [9]
Использование перспективной лекарственной формы коллагеновых пленок и губок дает возможность защитить рану от вторичной инфекции, предотвратить плазморрагию, уменьшить боль, стимулировать заживление раны [3, 8, 14] Для усиления лечебной эффективности в состав коллагеновых пленок вводят фармакологически активные ингредиенты антисептики, антибиотики, биостимуляторы, гормоны [1, 2, 16 19]
Известна коллагеновая пленка для лечения ожоговой раны, содержащая фурациллин и борную кислоту. Однако при ее спользовании наблюдалось дополнительное некротизирование дна и краев раны [15] Известна коллагеновая пленка, содержащая тетрациклин, стрептомицин и хондроитинсульфат. Такая пленка предотвращает инфицирование в ране, однако обладает слабой ранозаживляющей активностью [13]
Сущность изобретения состоит в том, что впервые предложено средство для лечения ожогов, содержащее коллаген и в качестве фармакологически активной добавки натриевую соль ДНК, полученную из молок осетровых рыб, при следующих соотношениях компонентов (масс%):
Натриевая соль ДНК, полученная из молок осетровых рыб 0,3 20,0
Коллаген до 100,0
Существенными признаками предложения следует считать качественный и количественный состав заявленного средства и использование в качестве фармакологической добавки натриевой соли ДНК, ранее по данным показаниям и в составе данной лекарственной формы не применявшейся.

Ниже приводится характеристика компонентов, входящих в состав заявленного средства:
натриевая соль ДНК получена из молок осетровых рыб. Она представляет собой порошок низкополимерной ДНК, имеющая следующие характеристики:
Молекулярная масса 0,3 12,0 МД
Гиперхромный эффект (G) 37 46%
Содержание белка не более 1,5%
РНК не более 6%
Полисахариды не более 2%
Коммерческое название препарата "Полидан". (Защищенный товарный знак).

В составе коллагеновых пленок ДНК ранее не использовалась.

Для создания средства использовали 2%-ный раствор (гель) фармакопейного коллагена (ФС-42-26-7089), полученного с Лужского завода "Белкозин" (pH 3,6, вязкость 4,0).

Получение коллагеновой пленки с ДНК осуществляют следующим образом:
выдерживают смесь 1 2% раствора коллагена и раствора ДНК (pH 4,0 6,0) при комнатных условиях в течение 24 72 ч. Указанные условия оказались оптимальными для получения коллагеновых препаратов, содержащих от 0,3 до 20,0 г активной ДНК. В этом интервале концентраций препарат обладает оптимальной фармакологической активностью. Дальнейшее увеличение концентрации активного вещества (более 20,0%) не приводит к усилению лечебного эффекта.

Коллагеновая пленка представляет собой светлые полупрозрачные пластины со слабым запахом уксусной кислоты.

Толщина пленки и ее размер соответствуют ГОСТ 6507-78 и ГОСТ 427-75.

Пленка практически нерастворима в холодной воде, ацетоне, эфире, спирте.

Упаковка и маркировка согласно ГОСТ 10354-82 и ГОСТ 17768-80.

Выдерживает срок хранения без изменения фармакологических и органолептических свойства более 1 года.

Для раскрытия сущности изобретения ниже приведены результаты экспериментальных наблюдений по исследованию лечебных свойств заявленного средства.

Эксперименты проведены на крысах-самцах F (AMCY x Wistar), массой 250 - 270 г. Каждая группа насчитывала 10 животных. Каждая группа насчитывала 10 животных. Крыс наркотизировали внутрибрюшинным введением тиопентала в дозе 60 мг/кг однократно.

Для получения ожога на предварительно эпилированный участок кожи лопаточной области размерами 3 х 3 см накладывали четырехслойную медицинскую марлю размером 1 см² предварительно смоченную дистиллированной водой, и прижимали нагретый термоэлектрод площадью 1 см² с температурой нагрева 200^oC.

Степень ожога дозировали временем экспозиции электрода, которое составляло от 3 до 15 с.

Подопытных животных наблюдали в течение 1 недели. У забитых животных гистологически исследовали место нанесения ожога с подлежащими тканями. Оценку проводили с помощью световой микроскопии.

Показано, что при данной постановке эксперимента площадь получаемого ожога составляет примерно 1,5 см². Вокруг эпицентра ожога формируется отек, который ограничивает некротизированные ткани от нормальных. Общая площадь поражения нормальных тканей составляет около 4,5 см².

Патоморфологические исследования показали, что при экспозиции, равной 10 с, возникает поражение классифицируемое как ожог ШБ IV степени, так как некроз захватывает всю толщину дермы и прилежащий к ней слой поперечно-полосатых мышц. При более короткой экспозиции глубина поражения не достигает мышечного слоя или он недостаточно травмирован (ожог II III степени). При более длительном экспонировании глубина поражения остается неизменной, а площадь ожоговой поверхности увеличивается.

После нанесения ожога животные были разделены на три группы. На первой группе контрольной прослеживали процессы естественного заживления ожога. Животным второй группы на место ожога накладывали коллагеновую пленку, не содержащую лекарственных веществ. Животным третьей группы накладывали пленку, содержащую натриевую соль ДНК в различных концентрациях.

Крыс забивали на 3, 7, 14, 23, 30 и 60 сутки после нанесения ожога и осуществляли гистологическое исследование ожоговых тканей.

Результаты исследований представлены в табл. 1 и 2.

Из представленных таблиц видно, что наличие ДНК в пленке качественно меняет течение регенеративных процессов, на месте поражения образуется не рубцовая ткань с параллельным поверхности кожи расположением пучков коллагеновых волокон, а полноценная дерма с разделением ее на сосочковый и сетчатый слой, с характерным переплетением пучков коллагеновых волокон, полностью повторяющимся структурные особенности нормальной кожи. Из табл. 2 видно, что пленки с Na-ДНК вызывают также ускорение заживления по сравнению с контролем и коллагеновыми пленками, не содержащими активного препарата.

При применении коллагеновых пленок, содержащих ДНК, никаких признаков проявления токсичности препарата у животных не наблюдалось.

В целом анализ экспериментальных исследований позволяет сделать следующие выводы:
1) заявленное противоожоговое средство ускоряет заживление ожоговой раны;
2) при использовании заявленного средства заживление ожоговой раны осуществляется без образования грубой рубцовой ткани;
3) заявленное средство нетоксично, не вызывает аллергических или иных осложнений;
4) оптимальной концентрацией ДНК в составе коллагеновой пленки является 0,3 20,0 г на 100 г пленки.

Сущность изобретения поясняется следующими примерами.

Пример 1.

Коллагеновую пленку для лечения ожогов получили путем выдерживания смеси 1% коллагена и раствора ДНК при pH4,0 при комнатной температуре. Полученную пленку, содержащую 5 г активной добавки натриевой соли ДНК, исследовали на специфическую активность.

10 крыс линии F₁ (AMCY x Wistar), массой тела 250 270 г, наркотизировали внутрибрюшинным введением тиопентала в дозе 60 мг/кг.

Для получения ожога на эпилированный участок кожи лопаточной области, размерами 3х3 см, накладывали четырехслойную медицинскую марлю, размером 1 см² предварительно смоченную дистиллированной водой, и прижимали нагретый термоэлектрод площадью 1 см² с температурой нагрева 200^oC.

Степень ожога дозировали временем экспозиции электрода, которое составляло от 3 до 15 с.

Крыс забивали на 3, 7, 14, 23, 30 и 60 сутки после нанесения ожога и осуществляли гистологическое исследование ожоговых тканей.

Макроскопическое наблюдение показало, что сразу после нанесения ожога на коже образуется сухой, плотный, беловато-серый, местами багрово-синюшный струп с четко определяющими границами.

Кожа вокруг зоны термического воздействия становится пастозной. По краю струпа образуется розовый венчик.

На третьи сутки после нанесения ожога появляется выраженная клеточная реакция на повреждение в виде лимфомоноцитарной инфильтрации по границе поврежденных и неповрежденных тканей.

На 7 сутки под струпом определяется грануляционная ткань, умеренно инфильтрованная моноцитами и лимфоцитами, но отличающаяся от обычной грануляционной ткани, возникающей на месте повреждения, тем, что регенерирующие коллагеновые волокна, еще тонкие и нежные, уже располагаются в соответствии с гистроархитектоникой сетчатого слоя дермы.

Поврежденные ткани подкожной клетчатки и мышечного слоя замещались рыхлой волокнистой соединительной тканью с небольшим избытком фибробластов.

С краем под струп врастал эпидермис, под которым структура всех слоев кожи не отличалась от нормы. Капилляры субэпидермального слоя были расширены и полнокровны.

К 14 суткам за тонким плотным струпом и следующей за ним узкой зоной клеточного детрита располагалась молодая соединительная ткань, пучки коллагеновых волокон которой, тонкие и слабо фуксинофильные, четко воспроизводили структуру и архитектонику коллагеновых пучков сетчатого слоя дермы. За регенерирующей дермой располагается ткань, состоящая из нежной сети ретикулиновых волокон, между которыми встречаются жировые клетки.

Это позволяет говорить о восстановлении структуры подкожной жировой клетчатки. На 23 сутки поверхность поражения полностью эпителизирована. Эпидермис, несколько утолщенной с правильно расположенных краев, давал в подлежащие ткани выросты в виде гребней. Сосочковый слой дермы отличался от нормы более плотным расположением волокон и повышенной клеточностью.

На 30 сутки опыта отмечали дальнейшее созревание коллагеновых волокон дермы. Эпидермис утолщен.

На 60 сутки при осмотре область термического ожога визуально не отличается от окружающей ткани.

По морфологическому строению никаких качественных отличий от нормы не обнаружено.

Пример 2.

Коллагеновую пленку получали как описано в примере 1. Полученную пленку, содержащую 20 г натриевой соли ДНК на 100 г коллагена, изучали на специфическую противоожоговую активность. В эксперименте использовали 10 крыс линии F₁ (AMCY x Wistar).

Нанесение ожога и постановка эксперимента, как в примере 1.

При увеличении концентрации Na-ДНК в коллагеновой пленке до 20% отмечается некоторое увеличение противоожоговой активности.

Динамика заживления ожоговой раны была следующей.

На 3 сутки: выраженная лимфо-моноцитарная инфильтрация по границе поврежденных и неповрежденных тканей.

На 7 сутки: выраженная регенерация коллагеновых волокон с гистоархитектоникой сетчатого слоя дермы, замещение подкожной жировой клетчатки волокнами соединительной ткани с избытком фибробластов. Врастание эпидермиса под струп.

На 14 сутки: формирование ретикулиновых волокон и молодой соединительной ткани под струпом.

На 23 сутки: полная эпителизация поверхности. Врастание эпителия в подлежащие ткани.

На 30 сутки: дальнейшее созревание коллагеновых волокон дерма. Утолщение эпителия.

На 60 сутки: область визуально и морфологически не отличается от окружающей ткани.

Таким образом, представленные примеры иллюстрируют высокую противоожоговую активность заявленного средства и существенность его качественного и количественного состава.

В специальных экспериментах было показано, что выход за заявленные количества ингредиентов композиции в сторону уменьшения (менее 0,3%) приводит к снижению противоожоговой активности, а увеличения (более 20%) к ухудшению физико-химических свойств пленки.

Сравнение результатов собственных исследований с литературными данными приведено в табл. 3.

В целом следует отметить, что заявленное средство по сравнению с известными по уровню техники обладает следующими преимуществами:
1. Обладает выраженной заживляющей активностью при ожогах различной степени.

2. Заживление ожоговой раны происходит без образования грубой рубцовой ткани.

3. Заявленное средство нетоксично, не вызывает осложнений в ране, аллергических или иных осложнений.

Таким образом, заявленное средство значительно расширяет арсенал противоожоговых средств и, по-видимому, найдет широкое использование в практике лечения ожогов.

Список литературы
1. Е.В.Баташева, Р.Р.Шифрина. Изучение возможного взаимодействия коллагена с метилурацилом. Хим. фарм. ис. 1976, т 10, N 12, с.46 49.

2. Л.А.Иванова, Е.А.Филькин. О некоторых новых лекарственных формах витамина Y на основе коллагена. В. кн. "Всероссийский съезд фармацевтов IY-й". Воронеж, 1981, с. 206 207.

3. Л. А.Иванова. Коллаген в технологии лекарственных форм. М. Медицина, 1984, 112 с.

4. Н.П.Иванова, Е.А.Евдокимова. Применение коллагеновой губки для лечения ожогов. Труды 1 Моск. мед. ин-та. 1971, т 74, с. 51 52.

5. Н.Д.Казанцева, О.М.Яковлева, Т.И.Гайворонский. Применение антимикробных биологических покрытий для лечения ожоговых ран и раневых дефектов кожи. В. кн: Организация и лечение детей с ортопедическими заболеваниями и травмами. Сборник тез. докл. Л. 1990, с. 87 88.

6. Б.Ф.Кантемирова, А.Б.Шехтер. Применение коллагеновых покрытий при лечении глубоких ожоговых ран кожи. Вестник Акад. мед. наук СССР, 1975, N 7, с 82 85.

7. Машковский М. Д. Лекарственные средства. М. Медицина, 1988, в 2-х томах.

8. Ф.М.Мамедова. Применение коллагеносодержащих препаратов в стоматологии. 2-1 Съезд стоматологов Узбекистана. Ташкент, 1986, с. 49 52.

9. Регистр лекарственных средств России. М. ИНфармхим, 1993.

10. Т.Г.Руденко, И.А.Сыченков. Комплексообразование тетрациклина гидрохлорида с коллагеном. Антибиотики, 1978, т. 23, N 3, с. 250 253.

11. Т.Г.Руденко, А.Ф.Дронов, О свойствах комплекса коллагена с мономицином. Антибиотики, 1977, т. 22, N 3, с. 239 242.

12. И. А.Сысенков, Т.М.Ильина. Влияние облепихового масла на физико-механические и медико-биологические свойства коллагеновых пленок. Фармация, 1084, 33, N 6, с. 20 23.

13. А.М.Хилькин. Лечение скальпированных ран и ожогов кожи коллагеновыми пленками в эксперименте. Труды 1-го Моск. мед. ин-та, 1966, т 49, вып. 2, с. 318 323.

14. А. М. Хилькин, А.Б.Шехтер. Коллаген и его применение в медицине. М. Медицина, 1976, 256 с.

15. А.Б.Шехтер. Особенности заживления ран при применении препаратов из коллагена. Современная косметология. М. 1974, с. 208 215.

16. Заявка ФРГ N 3315678, кл. A 61 K 9/70, 1983.

17. Заявка ФРГ N 3334595, кл. A 61 K 9/70, 1983.

18. Патент США N 4131650, кл. A 61 K 9/70, 1978.

19. Заявка Франции N 2628634, кл. F 61 Z 31/00, 1988.

Claims (1)

1. Средство для лечения ожогов, содержащее коллаген и биологически активную добавку, отличающееся тем, что в качестве биологически активной добавки оно содержит натриевую соль дезоксирибонуклеиновой кислоты, выделенную из молок осетровых рыб, с характеристикой: мол. м. (3 120) • 10⁵ Дальтон; содержание белка не более 1,5% cодержание РНК не более 6% cодержание полисахаридов не более 2% гиперхромный эффект 37 46% при следующем соотношении компонентов, мас.

   Указанная натриевая соль дезоксирибонуклеиновой кислоты из молок осетровых рыб 0,3 20,0
   Коллаген Остальное до 100

Images