RU2078817C1

RU2078817C1 - Attenuated cold-adapted influenza virus strain used for preparing live intranasal influenza vaccine

Info

Publication number: RU2078817C1
Application number: RU92006181A
Authority: RU
Inventors: Г.И. Александрова
Original assignee: Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН
Priority date: 1992-11-27
Filing date: 1992-11-27
Publication date: 1997-05-10

Abstract

FIELD: medicinal virology. SUBSTANCE: vaccine strain GKV N 2309 is obtained after 60 passages of virus B/USSR/69 at 25 C. Strain shows the enhanced reproductivity in developing chicken embryos at 25 C in 1 l ЭИД 50/0.2 ml, 4.0 lg, i. e. its is cold-adapted. Hemagglutinating activity of strain: 1:64-1:256; infectious activity: 6.0-7.5 lg ЭИД 50/0.2 ml (infectious embryonal doses). Strain does not change properties after 5 passages in chicken embryos at optimal temperature, strain is reactive and immunogenic for adult and children. Strain can be used for live influenza vaccine production for influenza prophylaxis in adult and children. EFFECT: improved method of vaccine preparing, strain indicated above.

Description

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано для производства живой гриппозной вакцины и получения производственных штаммов живой гриппозной вакцины для профилактики гриппа у детей и взрослых. The invention relates to medical virology and can be used for the production of live influenza vaccine and production strains of live influenza vaccine for the prevention of influenza in children and adults.

Известно, что живая вакцина против гриппа производится из аттенуированных (ослабленных) штаммов вируса, безвредных для людей и обладающих способностью стимулировать противогриппозный иммунитет, т.е. защищать людей от гриппа. It is known that live influenza vaccine is made from attenuated (attenuated) virus strains that are harmless to humans and have the ability to stimulate influenza immunity, i.e. protect people from the flu.

Учитывая изменчивость возбудителя гриппа, вакцинные штаммы приходится заменять в период появления новых возбудителей гриппа. Ранее для получения вакцинных штаммов отбирали новый эпидемический вирус и проводили ряд пассажей его на развивающихся куриных эмбрионах, которые культивировали при оптимальной (32^oC) температуре. Варианты, полученные через 10, 15, 20 и т.д. пассажей изучали по ряду лабораторных тестов (маркеров) для выявления отличий от исходного эпидемического вируса, а затем проверяли на людях в отношении безвредности и иммуногенности для людей. Вирусы, удовлетворяющие требованиям фармакопейных статей на живую гриппозную вакцину для взрослых или детей использовали в производстве указанных вакцин. Эти штаммы, как правило, не отличались по биологическим свойствам от исходных эпидемических вирусов, что затрудняло отбор аттенуированных вариантов перед их испытанием на людях и обусловливало необходимость повторных проверок вариантов, полученных после проведения ряда дополнительных пассажей в развивающихся куриных эмбрионах.Given the variability of the influenza pathogen, vaccine strains have to be replaced during the emergence of new influenza pathogens. Previously, to obtain vaccine strains, a new epidemic virus was selected and a number of passages were carried out on developing chicken embryos, which were cultured at the optimum (32 ^o C) temperature. Options received after 10, 15, 20, etc. passages were studied by a number of laboratory tests (markers) to identify differences from the original epidemic virus, and then tested in humans with respect to safety and immunogenicity in humans. Viruses that meet the requirements of the pharmacopoeial articles for live influenza vaccine for adults or children have been used in the production of these vaccines. These strains, as a rule, did not differ in biological properties from the original epidemic viruses, which made it difficult to select attenuated variants before testing them in humans and necessitated repeated checks of the variants obtained after a series of additional passages in developing chicken embryos.

Известен эпидемический вирус B/СССР/69 [1] прототип, вызвавший эпидемию в 1969 г. Для профилактики гриппа необходимо было создать аттенуированный штамм вируса гриппа, который, наряду с ареактогенностью, имел бы холодоадаптированность (xa маркер). The known epidemic virus B / USSR / 69 [1] is the prototype that caused the epidemic in 1969. For the prevention of influenza, it was necessary to create an attenuated strain of the influenza virus, which, along with areactogenicity, would have cold adaptation (xa marker).

Получение аттенуированного штамма вируса гриппа B/СССР/60/69 достигается проведением пассажей вируса B/СССР/69 не при оптимальной (32 33^oC), а при температуре, пониженной до 25^oC. Эта процедура позволила изменить свойства вируса, придав ему характер, и сделать его безвредным для взрослых и для детей 1 15 лет, сохранив способность к стимуляции иммунитета.Obtaining an attenuated strain of the influenza virus B / USSR / 60/69 is achieved by passage of the virus B / USSR / 69 not at the optimum (32 33 ^o C), but at a temperature lowered to 25 ^o C. This procedure allowed to change the properties of the virus, giving it character, and make it harmless for adults and for children 11-15 years old, while maintaining the ability to stimulate immunity.

Для этого эпидемический вирус был подвергнут 60 пассажам в развивающихся куриных эмбрионах при 25^oC.For this, the epidemic virus was subjected to 60 passages in developing chicken embryos at 25 ^o C.

Предметом изобретения является вариант штамм B/СССР/60/69. The subject of the invention is a variant strain B / USSR / 60/69.

Характеристика штамма
Гемагглютинирующая активность: 1 64 1 256.Strain characteristics
Hemagglutinating activity: 1 64 1 256.

Инфекционная активность: 6,0 7,5 lg ЭИД 50/0,2 мл (инфекционных эмбриональных доз). Infectious activity: 6.0 7.5 lg EID 50 / 0.2 ml (infectious embryonic doses).

Xa маркер (маркер холодоадаптированности), т.е. повышенной способности к репродукции в куриных эмбрионах при 25^oC в lg ЭИД 50/0,2 мл, 4,0 lg, т.е. штамм является холодоадаптированным (xa₊).Xa marker (cold adaptation marker), i.e. increased ability to reproduce in chicken embryos at 25 ^o C in lg EID 50 / 0.2 ml, 4.0 lg, i.e. the strain is cold adapted (xa ₊ ).

Штамм проявляет генетическую стабильность биологических признаков, т.е. не меняет свойств (маркеров) после 5 пассажей в куриных эмбрионах при оптимальной температуре. The strain exhibits genetic stability of biological traits, i.e. does not change properties (markers) after 5 passages in chicken embryos at optimal temperature.

Штамм обладает ареактогенностью и иммуногенностью для взрослых и детей. The strain has areactogenicity and immunogenicity for adults and children.

Пример 1. Группе из 20 серонегативных детей 3 15 лет был введен интраназально в объеме 0,5 мл вакцинный штамм B/СССР/60/69 с инфекционным титром 7 lg ЭИД 50/0,2 мл. В группе привитых детей не регистрируется ни одной температурной реакции выше 37,5^oC (показатель реактогенности 0).Example 1. A group of 20 seronegative children 3-15 years old was injected intranasally in a volume of 0.5 ml vaccine strain B / USSR / 60/69 with an infectious titer of 7 lg EID 50 / 0.2 ml. In the group of vaccinated children, not a single temperature reaction is recorded above 37.5 ^o C (indicator of reactogenicity 0).

Процент четырех и более кратных сероконверсий: иммуногенность составила по группе 80%
Пример 2. Была организована интраназальная вакцинация детей 3 6 лет (637 детей) вакциной из штамма B/СССР/60/69. Реактогенность, рассчитанная по числу температурных реакций (температурные реакции более 37,6^oC) составила 1,2% Показатели иммуногенности (т.е. процент прироста антител в крови) превышали 68%
Пример 3. Была организована интраназальная вакцинация 120 взрослых серонегативных добровольцев вакциной на основе вируса B/СССР/60/69. Реактогенность, рассчитанная по числу температурных реакций (температура более 37,6^oC) составила менее 1% что соответствовало требованиям на живую гриппозную вакцину для взрослых. Иммуногенность (т.е. процент четырех и более кратных сероконверсий, прироста антител в крови) была 66,5%The percentage of four or more multiple seroconversions: immunogenicity in the group was 80%
Example 2. Intranasal vaccination of children of 3 to 6 years old (637 children) with the vaccine from strain B / USSR / 60/69 was organized. Reactogenicity, calculated by the number of temperature reactions (temperature reactions of more than 37.6 ^o C) was 1.2%. The immunogenicity (i.e., the percentage of antibody growth in the blood) exceeded 68%.
Example 3. Intranasal vaccination of 120 adult seronegative volunteers with a vaccine based on the virus B / USSR / 60/69 was organized. Reactogenicity, calculated by the number of temperature reactions (temperature more than 37.6 ^o C) was less than 1%, which corresponded to the requirements for a live influenza vaccine for adults. Immunogenicity (i.e., the percentage of four or more multiple seroconversions, antibody growth in the blood) was 66.5%

Claims

Attenuated cold-adapted strain of influenza virus ST-Bills N 2309, used to obtain live intranasal influenza vaccine.