RU2076902C1 - Method of preparing the bacterial preparation from bacteria of bacillus genus - Google Patents
Method of preparing the bacterial preparation from bacteria of bacillus genus Download PDFInfo
- Publication number
- RU2076902C1 RU2076902C1 RU93029531A RU93029531A RU2076902C1 RU 2076902 C1 RU2076902 C1 RU 2076902C1 RU 93029531 A RU93029531 A RU 93029531A RU 93029531 A RU93029531 A RU 93029531A RU 2076902 C1 RU2076902 C1 RU 2076902C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- bacteria
- medium
- cultivation
- water
- bacterial
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к микробилогии и может быть использовано для производства бактерийных препаратов из бактерий рода Bacillus, применяющихся в ветеринарии и медицине для профилактики и лечения диарей, дисбактериозов, гнойно-воспалительных и аллергических процессов, а также иных целей, везде где применяются бактерии рода Bacillus. The invention relates to microbilogy and can be used for the production of bacterial preparations from bacteria of the genus Bacillus, which are used in veterinary medicine and medicine for the prevention and treatment of diarrhea, dysbiosis, purulent-inflammatory and allergic processes, as well as other purposes, wherever bacteria of the genus Bacillus are used.
Известен способ получения препаратов из бактерий рода Bacillus путем поверхностного культивирования их на агаризованных (твердых) питательных средах с последующим смывом и лиофильной сушкой выросшей бактериальной массы: А.с. СССР N 1723116 С 12 N 1/20, 30.03.92; А.с. СССР N 1723117 С12 N 1/20, 30.03.92; А. c. CCCP N 1710575 С12 N 1/20, 07.02.92. так, на основе этого способа "Препарат Бациллоспорин" готовят следующим образом. A known method of producing preparations from bacteria of the genus Bacillus by surface cultivation on agarized (solid) nutrient media, followed by washing and freeze drying of the grown bacterial mass: A. USSR N 1723116 C 12 N 1/20, 03/30/92; A.S. USSR N 1723117 C12 N 1/20, 03/30/92; A. c. CCCP N 1710575 C12 N 1/20, 02/07/92. so, on the basis of this method, the "Bacillosporin" is prepared as follows.
В бактериологические матрицы разливают по 250 см3 стерильного мясопептонного агара, добавляют по 10 см3 взвеси, содержащей 100 млн. клеток в 1 см3 0,9%-ного раствора натрия хлорида.250 cm 3 of sterile meat-peptone agar are poured into bacteriological matrices, 10 cm 3 of suspension containing 100 million cells in 1 cm 3 of a 0.9% sodium chloride solution are added.
Культивируют при 37oC. Через 24 ч выросшую культуру смывают 0,9%-ным раствором натрия хлорида из расчета 100 см3 на 1 матрац. Полученную взвесь разливают в 500 см3 стеклянные флаконы и лиофилизируют. В 1 мг полученного препарата содержится около 100 млн. живых клеток штамма "Bacillus sphaericus".Cultivate at 37 o C. After 24 hours the grown culture is washed off with 0.9% sodium chloride solution at the rate of 100 cm 3 per 1 mattress. The resulting suspension is poured into 500 cm 3 glass bottles and lyophilized. In 1 mg of the obtained preparation contains about 100 million living cells of the strain "Bacillus sphaericus".
Известна питательная среда для выращивания спорообразующих аэробных бактерий "Bacillus subtilis и Bacillus lichemiformis", А.с. СССР N 1708832 С12 N 1/20, 30.01.92. Поскольку среда предназначена для использования в производстве бактрина-СЛ и других технологических процессах, где применяются спорообразующие аэробные микроорганизмы рода Bacillus, то это изобретение принято за прототип к предлагаемому по достигаемому результату. Known nutrient medium for growing spore-forming aerobic bacteria "Bacillus subtilis and Bacillus lichemiformis", A.S. USSR N 1708832 C12 N 1/20, 01/30/92. Since the medium is intended for use in the production of bactrin-SL and other technological processes where spore-forming aerobic microorganisms of the genus Bacillus are used, this invention is taken as a prototype for the proposed achieved result.
Использование питательной среды, принятой за прототип, позволяет добиться повышения выхода биомассы, увеличения антагонистической активности бактерий и их устойчивости к лиофильной сушке. Среда дополнительно содержит хлоропластную фракцию зеленого сока, полученного из листостебельной биомассы люцерны при следующем соотношении компонентов, г/л:
Пивное сусло 500,0-600,0
Гидролизат мяса 50.0-60,0
Хлоропластная фракция зеленого сока, полученного из листостебельной биомассы люцерны 50,0-100,0
Агар-агар 25-30,0
Вода Остальное.Using the nutrient medium adopted as a prototype allows to increase the yield of biomass, increase the antagonistic activity of bacteria and their resistance to freeze drying. The medium additionally contains a chloroplast fraction of green juice obtained from leaf-stem alfalfa biomass in the following ratio of components, g / l:
Beer Wort 500.0-600.0
Meat hydrolyzate 50.0-60.0
Chloroplast fraction of green juice obtained from leaf-stem alfalfa biomass 50.0-100.0
Agar agar 25-30.0
Water The rest.
Технология получения бактерийных препаратов на этой среде аналогична вышеупомянутым: после приготовления среду разливают в 50 бактериологических матрацев по 0,25 л и стерилизуют текучим паром с избыточным давлением 0,5 атм в течение 30 мин. The technology for producing bacterial preparations on this medium is similar to the aforementioned: after preparation, the medium is poured into 50 bacteriological mattresses of 0.25 L each and sterilized by fluid steam with an overpressure of 0.5 atm for 30 minutes.
Посев питательных сред в матрацах производят одной и той же маточной культурой B. subtilis и отдельно B. licheniformis, содержащей в 1 мл 1 млрд. микробных тел (по оптическому стандарту мутности). В каждый матрац вносят 10 мл одной из указанных бактериальных взвесей, которую равномерно распределяют по всей поверхности питательной среды. Матрацы инкубируют в термостате. Выросшую бактериальную пленку на 2-5-12 день роста собирают с каждого матраца отдельно с помощью шпателя и 0,85%-ного раствора натрия хлорида. Cultivation of nutrient media in mattresses is carried out with the same uterine culture of B. subtilis and B. licheniformis separately, containing 1 ml of 1 billion microbial bodies in 1 ml (according to the optical turbidity standard). 10 ml of one of the indicated bacterial suspensions, which are evenly distributed over the entire surface of the nutrient medium, are added to each mattress. Mattresses are incubated in a thermostat. The grown bacterial film on 2-5-12 days of growth is collected from each mattress separately using a spatula and 0.85% sodium chloride solution.
Затем проводится лиофильная сушка. Для этого полученную взвесь бактерий разливают во флаконы, которые замораживают при минус 40oC в течение 24 ч и лиофилизируют в течение 36 ч до остаточной влажности 3-4%
Однако недостатками данного способа прототипа, как и аналогов, являются.Then freeze drying is carried out. To do this, the resulting suspension of bacteria is poured into vials, which are frozen at minus 40 o C for 24 hours and lyophilized for 36 hours to a residual moisture content of 3-4%
However, the disadvantages of this prototype method, as well as analogues, are.
1. Очень большая трудоемкость, обусловленная необходимостью индивидуальной, ручной работы с каждым матрицам в строго стерильных условиях: заливка среды, засев, смыв бактериальной массы. 1. Very high complexity, due to the need for individual, manual work with each matrix in strictly sterile conditions: filling the medium, sowing, washing off the bacterial mass.
2. Необходимость приобретения и обслуживания дорогостоящих аппаратов для лиофильной сушки. 2. The need to purchase and maintain expensive freeze drying machines.
3. Сложный состав твердых питательных сред для выращивания биомассы. Задача изобретения разработать способ получения бактерийных препаратов из бактерий рода Bacillus качественно менее трудоемкий, не требующий аппаратов для лиофильной сушки, многокомпонентных питательных сред с дефицитными субстратами. 3. The complex composition of solid nutrient media for growing biomass. The objective of the invention is to develop a method for producing bacterial preparations from bacteria of the genus Bacillus, which is qualitatively less laborious, not requiring apparatus for freeze drying, multicomponent nutrient media with deficient substrates.
Технический результат технология получения биопрепаратов из бактерий рода Bacillus, обеспечивающая повышение производительности труда и снижение материальных затрат на производство. The technical result is a technology for the production of biological products from bacteria of the genus Bacillus, which provides increased labor productivity and reduced material costs for production.
Технический результат достигается тем, что бактерии рода выращиваются в течение 14 суток методом глубинного культивирования (в одном резервуаре на жидкой среде). В качестве питательной основы среды используют 2-3%-ные растворы, либо пептона ферментативного либо сухого обрата. Лиофильная сушка не используется. The technical result is achieved by the fact that bacteria of the genus are grown for 14 days by the method of deep cultivation (in one tank on a liquid medium). As a nutrient base of the medium, 2-3% solutions are used, either of enzyme or dry peptone. Freeze drying is not used.
Таким образом, отпадает необходимость заливки среды, засева и смыва в стерильных условиях с каждого матраца, поскольку вместе многочисленных матрацев используется один резервуар, что качественно снижает трудоемкость. Использование в качестве бактерийного препарата непосредственно получаемой в результате выращивания культуральной жидкости, представляющей из себя взвесь спор бактерий рода Bacillus, которые хорошо сохраняются без лиофильной сушки, позволяет снизить производственные затраты и трудоемкость за счет экономии на лиофильной сушке. Кроме того, среда для выращивания не содержит дефицитных субстратов, что тоже способствует удешевлению и доступности производства. Thus, there is no need to fill the medium, seeding and flushing under sterile conditions from each mattress, since together with multiple mattresses one tank is used, which qualitatively reduces the complexity. The use of a culture fluid directly resulting from the cultivation, which is a suspension of spores of bacteria of the genus Bacillus, which are well preserved without freeze drying, can reduce production costs and labor costs by saving on freeze drying as a bacterial preparation. In addition, the growing medium does not contain scarce substrates, which also contributes to cheaper and more affordable production.
Выращивание бактерий на питательных средах является существенным признаком, сходным с прототипом. The cultivation of bacteria on nutrient media is an essential feature similar to the prototype.
Отличительные признаки, заявляемого способа от прототипа, следующие:
проведение глубинного культивирования бактерий в жидкой среде;
использование естественного свойства бактерий рода Bacillus переходить при длительном культивировании в споры, которые хорошо сохраняются, для непосредственного использования получающейся взвеси спор в "отработанной" среде в качестве бактерийного препарата, подлежащего хранению без лиофильной сушки.Distinctive features of the proposed method from the prototype, the following:
deep cultivation of bacteria in a liquid medium;
the use of the natural property of bacteria of the genus Bacillus to pass during prolonged cultivation into spores that are well preserved for direct use of the resulting suspension of spores in a "waste" medium as a bacterial preparation to be stored without freeze drying.
Способ осуществляется следующим образом. The method is as follows.
Бактерии рода Bacillus выращиваются методом глубинного культивирования на жидких питательных средах следующего состава, г/л:
Пептон ферментативный 20,0-30,0
Магний сернокислый 0,1-0,15
Вода Остальное рН7,3±0,2.Bacteria of the genus Bacillus are grown by the method of deep cultivation on liquid nutrient media of the following composition, g / l:
Peptone enzymatic 20.0-30.0
Magnesium sulfate 0.1-0.15
Water The rest is pH 7.3 ± 0.2.
либо
Обрат сухой 20,0-30,0
Натрия хлорид 0,4-0,5
Вода Остальное рН7,3±0,2.or
Dry back 20.0-30.0
Sodium chloride 0.4-0.5
Water The rest is pH 7.3 ± 0.2.
Выбор среды для культивирования не принципиален и зависит от доступности ингредиентов. Среды стерилизуются кипячением либо автоклавированием. The choice of medium for cultivation is not critical and depends on the availability of ingredients. The media are sterilized by boiling or autoclaving.
Концентрации питательных основ для сред пептона ферментативного или обрата установлены опытным путем и являются оптимальными. Снижение их уменьшает выход биомассы, а увеличение снижает скорость роста, очевидно, вследствие повышения осмолярности. Значение рН соответствует оптимуму роста для бактерий рода Bacillus, а магний сернокислый является стимулятором роста для них. Однако во второй среде он не применяется, поскольку способствует интенсивному закислению при росте культур на обрате, сворачиванию обрата и выходу за пределы оптимальных значений рН. В результате пептонизация обрата прекращается и рост бактерий тоже. The concentration of nutrient bases for enzyme peptone or skim milk was established experimentally and are optimal. A decrease in them decreases the biomass yield, and an increase decreases the growth rate, obviously, due to an increase in osmolarity. The pH value corresponds to the optimum growth for bacteria of the genus Bacillus, and magnesium sulfate is a growth promoter for them. However, it is not used in the second medium, because it promotes intense acidification during the growth of cultures on the back, folding of the back and going beyond the optimal pH values. As a result, the peptonization of the skimmer stops and the growth of bacteria also.
В присутствии указанной концентрации натрия хлорида бактерии рода Bacillus утрачивают способность сворачивать белки молока (обрата), в результате происходит полная пептонизация белков под влиянием протеолитических ферментов бактерий и интенсивный рост культур. In the presence of the indicated concentration of sodium chloride, bacteria of the genus Bacillus lose their ability to curdle milk proteins (skim milk), as a result, protein peptization occurs under the influence of proteolytic bacterial enzymes and intensive growth of cultures.
Такой состав сред для культивирования прост в приготовлении и дешев, выгодно отличается доступностью, не требуя дефицитных субстратов. This composition of the media for cultivation is easy to prepare and cheap, compares favorably with accessibility, without requiring scarce substrates.
Для засева сред используют часть культуральной жидкости, полученной на одной из предыдущих операций, а для получения первой партии препаратов посевной материал выращивают специально. Достаточно 1-2% от объема засеваемой среды. A part of the culture fluid obtained in one of the previous operations is used for inoculating media, and seed is specially grown to obtain the first batch of preparations. Enough 1-2% of the volume of sown medium.
Посевной материал перед внесением прогревают при температуре 80oC в течение 20 мин. Это упрощает правила асептики, поскольку такой режим выдерживают только споры и одновременно стимулирует их к последующему прорастанию в питательной среде.Seeds before application are heated at a temperature of 80 o C for 20 minutes This simplifies aseptic rules, since only spores can withstand such a regime and at the same time stimulate them to further germinate in a nutrient medium.
Культивирование проводят при температуре 35-37oC, что соответствует оптимуму роста для бактерий рода Bacillus, в течение 14 суток. Все это время идет накопление биомассы, дальнейшее культивирование нецелесообразно вследствие полного истощения питательной среды. Во время культивирования проводят постоянную аэрацию среды подачей стерильного воздуха или кислорода на дно резервуара с питательной средой. Интенсивность аэрации увеличивают по мере роста культуры, стараясь добиваться насыщения среды кислородом.Cultivation is carried out at a temperature of 35-37 o C, which corresponds to the optimum growth for bacteria of the genus Bacillus, within 14 days. All this time biomass has been accumulating; further cultivation is impractical due to complete depletion of the nutrient medium. During cultivation, continuous aeration of the medium is carried out by supplying sterile air or oxygen to the bottom of the reservoir with the nutrient medium. The aeration intensity is increased as the culture grows, trying to achieve oxygen saturation of the medium.
Соблюдение таких режимов культивирования обеспечивает максимально полную утилизацию питательных субстратов в средах, накопление максимальной биомассы, переход бактериальных клеток в споровые формы, что является физиологическим свойством и отличительной чертой бактерий рода Bacillus. Compliance with such cultivation regimes provides the most complete utilization of nutrient substrates in the media, the accumulation of maximum biomass, the transition of bacterial cells into spore forms, which is a physiological property and a hallmark of bacteria of the genus Bacillus.
Таким образом, в результате получается культуральная жидкость в виде взвеси спор с концентрацией 1,5 3 млрд. в 1 см3, которые хорошо сохраняются, в истощенной, насыщенной антибиотическими веществами среде. Эта культуральная жидкость непосредственно используется как бактерийный препарат, который может длительно сохраняться непосредственно в жидком виде, не подвергаясь лиофильной сушке. В данном случае используется природное свойство спорообразующих аэробных бактерий род Bacillus, переходить в споры и сохраняться долго.Thus, the result is a culture fluid in the form of a suspension of spores with a concentration of 1.5 3 billion in 1 cm 3 , which are well preserved in a depleted, saturated with antibiotic substances environment. This culture fluid is directly used as a bacterial preparation, which can be stored directly in liquid form for a long time without being subjected to freeze drying. In this case, the natural property of the spore-forming aerobic bacteria of the genus Bacillus is used, to pass into spores and persist for a long time.
Сравнение предлагаемого способа и прототипа для приготовления 100 л препарата представлено в таблице. A comparison of the proposed method and the prototype for the preparation of 100 l of the drug is presented in the table.
По сравнении с прототипом предлагаемый способ обеспечивает качественное снижение трудоемкости, производственных затрат; отсутствие необходимости иметь специальные аппараты для лиофильной сушки; доступность субстратов для питательных сред при производстве бактерийных препаратов из бактерий рода Bacillus. Compared with the prototype, the proposed method provides a qualitative reduction in the complexity, production costs; lack of need to have special devices for freeze drying; the availability of substrates for culture media in the production of bacterial preparations from bacteria of the genus Bacillus.
Производство предлагаемым способом может быть быстро налажено в любой бактериологической или ветеринарной лаборатории. Для реализации способа необходимо иметь следующее оборудование:
термостат любого образца или терморегулятор;
бачки пищевые варочные любого образца;
компрессоры любого образца;
фильтры бактериальные любого образца.The production of the proposed method can be quickly established in any bacteriological or veterinary laboratory. To implement the method, you must have the following equipment:
thermostat of any sample or thermostat;
food cooking tanks of any sample;
compressors of any sample;
bacterial filters of any sample.
При изучении патентно-технической и специальной литературы не выявлено источников, описывающих глубинное культивирование бактерий рода Bacillus с последующим использованием получаемой взвеси спор в культуральной жидкости непосредственно в качестве жидкой формы бактерийного препарата, сохраняющегося без лиофильной сушки для решения поставленной задачи и с обеспечением указанного результата. Следовательно, заявляемое решение соответствует критерию "cущественные отличия". When studying the patent technical and specialized literature, no sources were described that describe the deep cultivation of bacteria of the genus Bacillus with the subsequent use of the obtained suspension of spores in the culture fluid directly as a liquid form of the bacterial preparation, which is stored without freeze drying to solve the problem and ensuring the specified result. Therefore, the claimed solution meets the criterion of "significant differences".
Пример 1. В варочный бачок наливают 30 л водопроводной воды, растворяют 600 г пептона ферментативного и 30 г магния сернокислого. Получившуюся среду стерилизуют кипячением 45 м при плотно закрытой крышке. После остывания среды с соблюдением правил асептики вносят 500 мл культуры бактерий вида B. subtilis, полученной в результате одного из предыдущих культивирований либо специально выращенной для первого культивирования. Перед внесением посевной материал прогревают на водяной бане при 80oC в течение 20 мин.Example 1. In a cooking tank, 30 l of tap water is poured, 600 g of enzymatic peptone and 30 g of magnesium sulfate are dissolved. The resulting medium is sterilized by boiling 45 m with a tightly closed lid. After cooling the medium in compliance with aseptic rules, add 500 ml of a culture of bacteria of the B. subtilis species, obtained as a result of one of the previous cultivations or specially grown for the first cultivation. Before making the seed, it is heated in a water bath at 80 ° C for 20 minutes.
Культивирование проводят с плотно закрытой крышкой в течение 14 суток при температуре 37oC. Все это время микрокомпрессором через бактериальный фильтр в питательную среду подается стерильный воздух.The cultivation is carried out with a tightly closed lid for 14 days at a temperature of 37 o C. All this time the microcompressor through a bacterial filter into the nutrient medium is fed with sterile air.
На 14-е сутки в 1 см3 культуральной жидкости содержится 1,6 млрд. живых клеток в форме спор бактерий вида B. subtilis, посторонней микрофлоры нет. Препарат разливают в стерильные склянки емкостью по 200 мл закрывают резиновыми пробками, хранят в холодильнике при температуре +6oC и при комнатной температуре 18-25oC. По истечении 4 месяцев снижения концентрации живых спор не определяется как при хранении в холодильнике, так и при комнатной температуре.On the 14th day, 1 cm 3 of the culture fluid contains 1.6 billion living cells in the form of spores of bacteria of the species B. subtilis, there is no extraneous microflora. The drug is poured into sterile bottles with a capacity of 200 ml, closed with rubber stoppers, stored in the refrigerator at a temperature of +6 o C and at room temperature 18-25 o C. After 4 months, the concentration of live spores cannot be reduced, both when stored in the refrigerator and at room temperature.
Пример 2. В варочный бачок наливают 30 л водопроводной воды, растворяют 900 г обрата сухого и 120 г натрия хлорида. Получившуюся среду стерилизуют кипячением 45 мин при плотно закрытой крышке. После остывания среды с соблюдением правил асептики вносят 500 мл культуры бактерий вида B. subyilis, полученной в результате одного из предыдущих культивирований, либо специально выращенной для первого культивирования. Перед внесением посевной материал прогревают на водяной бане при температуре 80oC в течение 20 мин. Культивирование проводят при плотно закрытой крышке 14 суток при температуре 37oC. Все это время микрокомпрессором через бактериальный фильтр в питательную среду подается стерильный воздух.Example 2. In a cooking tank, 30 l of tap water is poured, 900 g of dry powder and 120 g of sodium chloride are dissolved. The resulting medium is sterilized by boiling for 45 min with a tightly closed lid. After the medium cools down, aseptic rules are applied, 500 ml of a bacterial culture of the species B. subyilis obtained as a result of one of the previous cultivations, or specially grown for the first cultivation, is added. Before making the seed, it is heated in a water bath at a temperature of 80 o C for 20 minutes The cultivation is carried out with a tightly closed lid for 14 days at a temperature of 37 o C. All this time, the microcompressor through a bacterial filter into the nutrient medium is fed with sterile air.
На 14-е сутки в 1 см3 культуральной жидкости содержится 3,О млрд. живых клеток в форме спор бактерий вида B. subtilis, посторонней микрофлоры нет. Препарат разливают в стерильные склянки емкостью по 200 мл, закрывают резиновыми пробками, хранят в холодильнике при температуре 6oС и при комнатной температуре (18 +25oC). После 3 месяцев хранения снижения концентрации живых спор не определяется как при хранении в холодильнике, так и при комнатной температуре.On the 14th day, 1 cm 3 of culture fluid contains 3, O billion living cells in the form of spores of bacteria of the species B. subtilis, there is no extraneous microflora. The drug is poured into sterile bottles with a capacity of 200 ml, closed with rubber stoppers, stored in a refrigerator at a temperature of 6 o C and at room temperature (18 +25 o C). After 3 months of storage, a decrease in the concentration of live spores is not determined both when stored in the refrigerator and at room temperature.
Пример 3. Культивирование бактерий вида B. licgeniformis осуществляют по варианту, описанному в примере 1. Получена взвесь спор бактерий B. lichemiformis, в 1 см3 1,4 млрд. живых спор. Посторонней микрофлоры препарат не содержит. Концентрация спор не меняется в течение 3 месяцев как при хранении в холодильнике, так и при комнатной температуре (на больший срок препарат не исследовался).Example 3. The cultivation of bacteria of the species B. licgeniformis is carried out according to the variant described in example 1. A suspension of the spores of bacteria B. lichemiformis was obtained in 1 cm 3 of 1.4 billion live spores. The drug does not contain extraneous microflora. The concentration of spores does not change for 3 months both when stored in the refrigerator and at room temperature (the drug has not been studied for a longer period).
Пример 4. Культивирование бактерий вида B. cereus осуществляют по варианту, описанному в примере 1. Получена взвесь спор бактерий B. cereus, в 1 см3 1,7 млрд. живых спор. Посторонней микрофлоры препарат не содержит. Концентрация спор не меняется в течение 3 месяцев как при хранении в холодильнике, так и при комнатной температуре.Example 4. The cultivation of bacteria of the species B. cereus is carried out according to the variant described in example 1. A suspension of B. cereus bacteria spores is obtained, in 1 cm 3 1.7 billion live spores. The drug does not contain extraneous microflora. The spore concentration does not change for 3 months both when stored in the refrigerator and at room temperature.
Claims (1)
Магний сернокислый 0,1 0,15
Вода Остальное
или
Обрат сухой 2,0 3,0
Натрий хлористый 0,4 0,5
Вода Остальное
засев производят прогретой при 80oС в течение 20 мин маточной культурой или культуральной жидкостью одной из предыдущих генераций в количестве 1 2 от объема засеваемой среды, культивирование проводят в течение 14 сут. при температуре 35 37oС и отделяют целевой продукт в виде спор.Peptone Enzymatic 2.0 3.0
Magnesium sulfate 0.1 0.15
Water Else
or
Reverse dry 2.0 3.0
Sodium chloride 0.4 0.5
Water Else
sowing is carried out by warming up at 80 ° C. for 20 minutes with a uterine culture or culture fluid of one of the previous generations in an amount of 1 2 of the volume of the sown medium, cultivation is carried out for 14 days. at a temperature of 35 37 o With and separate the target product in the form of spores.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU93029531A RU2076902C1 (en) | 1993-06-15 | 1993-06-15 | Method of preparing the bacterial preparation from bacteria of bacillus genus |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU93029531A RU2076902C1 (en) | 1993-06-15 | 1993-06-15 | Method of preparing the bacterial preparation from bacteria of bacillus genus |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU93029531A RU93029531A (en) | 1996-07-10 |
| RU2076902C1 true RU2076902C1 (en) | 1997-04-10 |
Family
ID=20142722
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU93029531A RU2076902C1 (en) | 1993-06-15 | 1993-06-15 | Method of preparing the bacterial preparation from bacteria of bacillus genus |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2076902C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2605543C1 (en) * | 2015-11-09 | 2016-12-20 | Федеральное Государственное Автономное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Дальневосточный Федеральный Университет" (Двфу) | METHOD FOR OBTAINING SPORE CULTURE ON BASIS OF BACTERIAL STRAIN Bacillus species 1839 |
| RU2761117C1 (en) * | 2020-12-09 | 2021-12-06 | Общество с ограниченной ответственностью "ЭКОС" | Technology for production of liquid form of combined biological product based on bacillus subtilis and bacillus megaterium var. phosphaticum |
-
1993
- 1993-06-15 RU RU93029531A patent/RU2076902C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Авторское свидетельство СССР N 1710575, кл. C 12N 1/20, 1992. Авторское свидетельство СССР N 1723116, кл. C 12N 1/20, 1992. Авторское свидетельство СССР N 1723117, кл. C 12N 1/20, 1992. Авторское свидетельство СССР N 1708832, кл. C 12N 1/20, 1992. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2605543C1 (en) * | 2015-11-09 | 2016-12-20 | Федеральное Государственное Автономное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Дальневосточный Федеральный Университет" (Двфу) | METHOD FOR OBTAINING SPORE CULTURE ON BASIS OF BACTERIAL STRAIN Bacillus species 1839 |
| RU2761117C1 (en) * | 2020-12-09 | 2021-12-06 | Общество с ограниченной ответственностью "ЭКОС" | Technology for production of liquid form of combined biological product based on bacillus subtilis and bacillus megaterium var. phosphaticum |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0226394B1 (en) | Production of microbial field crop inoculants | |
| CN113215016B (en) | Bacillus amyloliquefaciens and application thereof | |
| CN1224335C (en) | Method for preparing artificial bee bread | |
| CN111979220A (en) | Carrier molecular chaperone for activating microbial preparation | |
| CN109055264A (en) | A kind of microbial bacterial agent and preparation method thereof for holothruian cultures | |
| RU2076902C1 (en) | Method of preparing the bacterial preparation from bacteria of bacillus genus | |
| CN108641977A (en) | A method of mixing high density fermentation improves bifidobacterium cells density and metabolite | |
| Ramadhan et al. | Isolation and selection of proteolytic lactic acid bacteria from colostrum of dairy cattle | |
| RU2100029C1 (en) | Medium for culturing bacterium-symbiont bacillus pulvifaciens or bacillus subtilis - a producer of probiotic | |
| RU2213779C2 (en) | Nutrient medium for isolation of lactobacilli | |
| Parr et al. | A glass micro-bead system for the investigation of soil micro-organisms | |
| RU2366699C2 (en) | Method for making bifidus bacteria biomass | |
| RU2084233C1 (en) | Method of probiotic preparing for veterinary science | |
| CN106434384B (en) | One plant of high proteinase yield receives ground mould and its application | |
| RU2819883C1 (en) | Microbial composition containing lactic acid bacteria, yeast and microscopic fungi, used for processing organic wastes of plant and animal origin | |
| RU2112387C1 (en) | Method of production of dry bacterial concentrate for lactic acid dairy product | |
| RU2178646C2 (en) | Method to manufacture liquid or dry ferment for sour milk products | |
| RU2083665C1 (en) | Method of preparing the bacterial preparation for meat products making | |
| SU1708832A1 (en) | Nutrient medium for growing of spore-former aerobic bacteria bacillus subtilis and bacillus licheniforms | |
| RU2158302C2 (en) | Nutrient medium for bifidobacterium and lactobacterium culturing | |
| RU2239315C2 (en) | Process and line for production of biological preparations based on entomonopathogenic nematodes | |
| RU2126835C1 (en) | Method of protein biomass producing | |
| US5691191A (en) | Medium for the cultivation of lagenidium giganteum | |
| US2549465A (en) | Process for biochemical production of enzymes | |
| LV12672A (en) | Food product and method for producing |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090616 |