RU2063437C1 - Способ стимуляции образования асцитных форм гибридом и увеличения выхода моноклональных антител - Google Patents
Способ стимуляции образования асцитных форм гибридом и увеличения выхода моноклональных антител Download PDFInfo
- Publication number
- RU2063437C1 RU2063437C1 SU5036333A RU2063437C1 RU 2063437 C1 RU2063437 C1 RU 2063437C1 SU 5036333 A SU5036333 A SU 5036333A RU 2063437 C1 RU2063437 C1 RU 2063437C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hybridomas
- adjuvant
- monoclonal antibodies
- stimulation
- yield increase
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Использование: биотехнология, получение моноклональных антител /МКА/. Сущность изобретения: использование адъюванта, состоящего из липополисахарида сине-зеленых водорослей, вазелина, холестерина, твина и спана, в качестве стимулятора образования асцитных опухолей гибридных клеток, продуцирующих МКА. Адъювант вводят за 7-8 дней до инокуляции гибридных клеток в количестве 0,5 мл на мышь. 2 табл.
Description
Изобретение относится к области биотехнологии, технологии получения препарата моноклональных антител (МКА).
Адъюванты это реактивные смеси, используемые в иммунологии для получения гипериммунных сывороток. С развитием гибридомной технологии они начали использоваться для получения асцитных форм гибридом. Адъюванты оказывают стимулирующее действие на процесс образования асцитных опухолей, вызывая раздражение брюшной стенки и наработку асцитного выпота в брюшную полость. Введение стимуляторов предотвращает врастание гибридомных клеток в стенку брюшной полости и образование солидных опухолей. В лабораторной практике наиболее часто используются такие стимуляторы, как пристан (Hoogenraad N. et al. J. of Immunol. Meth. 1983 v.61, p. 317). и неполный адъювант Фрейнда (Трофимова М. Н. с соавт. Биотехнология 1987. Т.3. N 6. - C.735-737). Пристан, или 2, 6, 10, 12-тетраметилпентадекан, представляет собой один из компонентов легкой фракции минерального масла и является препаратом, закупаемым по импорту. Он наиболее часто используется для получения асцитных форм гибридом, однако он не является адъювантом. Наиболее близким к изобретению аналогом является неполный адъювант Фрейнда. Неполный адъювант Фрейнда (НАФ) представляет собой смесь вазелинового масла с ланолином и твином-80, но введение его животным не всегда позволяет получить достаточно высокий титр моноклональных антител в асцитах. Стимуляторы вводятся внутрибрюшинно по 0,5 мл мышам линии BАLB/с за 7-14 дней до инокулирования гибридомных клеток. Пристан и НАФ высокоэффективные препараты при получении асцитных, а не солидных форм гибридом, однако из-за их токсического воздействия на клетки выход конечного продукта МКА невысок.
Для повышения выхода МКА предлагается стимуляция образования асцитных форм гибридом с помощью адъюванта ЦБА-A01, состоящего из липополисахарида сине-зеленых водорослей, вазелина, холестерина, твина и спана. Данный адъювант, так же как пристан и НАФ, является высокоэффективным препаратом при получении асцитных форм гибридом, но, кроме этого, он обеспечивает высокую концентрацию клеток и МКА в асцитической жидкости по сравнению с пристаном и НАФ. От наиболее близкого аналога НАФ адъювант ЦБA-A01 отличается по составу, дополнительно в него входят липополисахариды сине-зеленых водорослей и холестерин, которые оказывают ростостимулирующее действие на клетки гибридом.
Для подтверждения эффекта действия адъюванта ЦБА-A01 приводятся следующие примеры (табл. 1, 2).
Пример 1. Используют гибридому АР-FС-2В4, продуцирующую МКА к пероксидазе хрена. Клетки гибридомы, ресуспендированные в 3 мл раствора Хэнкса, вводят внутрибрюшинно мышам линии BALB/c в дозе 2х10 клеток на мышь. В качестве стимулятора роста асцитной формы опухоли применяют адъювант ЦБA-A01, используемый для получения гипериммунных сывороток. Срок преинъекции стимулятора 7 8 дней до инокулирования гибридомных клеток. Адъювант вводят внутрибрюшинно по 0,5 мл на мышь. Продолжительность культивирования составляет 6 пассажей.
Все исследованные сенсибилизирующие агенты вызывают образование асцитической жидкости, содержащей МКА в 100% случаев. В результате введения индукторов гибели животных не происходит, что свидетельствует о малой токсичности адъювантов для мышей. Сравнение стимулирующего эффекта пристана и НАФ показало, что они обеспечивают сходную прививаемость гибридомных клеток, стимулируют образование асцита в одинаковые сроки и в одних и тех же объемах. Клетки нарастают до сходных концентраций, что отражается и на титре продуцируемых антител. Пассирование гибридомы на мышах с предварительным введением адъюванта ЦБА-A01 сопровождается значительным увеличением концентрации клеток в асцитической жидкости и соответственно более высоким титром МКА в асците.
Пример 2. Используют гибридому ИКО-20, продуцирующую МКА, выявляющие антиген Т10, экспрессированный на тимоцитах, небольшом проценте Т-клеток периферической крови, бластных клетках больных лейкозом. Гибридомные клетки ИКО-20 культивируют на мышах BALB/C с преинъекцией адъювантом ЦБА-A01 по примеру 1.
Предлагаемый способ стимуляции образования асцитных форм гибридом позволяет получить значительное увеличение концентрации гибридомных клеток в асцитической жидкости и соответственно более высокий титр МКА в асците при пассировании гибридом за счет преинъекции адъювантом ЦБА-A01, выпускаемым НПО "Биофармавтоматика" (Н. Новгород), которые используются для получения гипериммунных сывороток. ТТТ1 ТТТ2
Claims (1)
- Способ стимуляции образования асцитных форм гибридом и увеличения выхода моноклональных антител путем внутрибрюшинного введения адъюванта мышам линии Balbk, отличающийся тем, что используют адъювант, состоящий из липополисахарида сине-зеленых водорослей, вазелина, холестерина, твина и спана.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU5036333 RU2063437C1 (ru) | 1992-01-22 | 1992-01-22 | Способ стимуляции образования асцитных форм гибридом и увеличения выхода моноклональных антител |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU5036333 RU2063437C1 (ru) | 1992-01-22 | 1992-01-22 | Способ стимуляции образования асцитных форм гибридом и увеличения выхода моноклональных антител |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2063437C1 true RU2063437C1 (ru) | 1996-07-10 |
Family
ID=21601364
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU5036333 RU2063437C1 (ru) | 1992-01-22 | 1992-01-22 | Способ стимуляции образования асцитных форм гибридом и увеличения выхода моноклональных антител |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2063437C1 (ru) |
-
1992
- 1992-01-22 RU SU5036333 patent/RU2063437C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
"Биотехнология", т.3, N 6, 1987, c. 735 - 737. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Tung et al. | Production of large amounts of antibodies in individual mice | |
Finkelman et al. | IL-4 is required to generate and sustain in vivo IgE responses. | |
Daley et al. | Idiotype-specific transplantation resistance to MOPC-315: abrogation by post-immunization thymectomy | |
EP0286099A2 (en) | Monoclonal antibodies reactive with endotoxin core | |
EP0884329B1 (en) | Anti-idiotypic antibody which induces an immune response against a glycosphingolipid and use thereof | |
US4148885A (en) | Immunostimulant medicine | |
SU1069628A3 (ru) | Способ получени коньюгата | |
Kedar et al. | Histamine Receptor-Bearing Leukocytes (HRL) I. Detection of Histamine Receptor-Bearing Cells by Rosette Formation with Histamine-Coated Erythrocytes | |
JPH05246887A (ja) | グラム陰性菌トキソイド含有抗菌医薬組成物 | |
Kataoka et al. | Induction of resistance to L1210 leukemia in BALB/c× DBA/2Cr F1 mice, with L1210 cells treated with glutaraldehyde and concanavalin A | |
AU7461896A (en) | Low molecular weight cell, bone marrow and immune stimulants | |
CN110483640A (zh) | 白介素-6r的人源化单克隆抗体、其编码基因及应用 | |
RU2063437C1 (ru) | Способ стимуляции образования асцитных форм гибридом и увеличения выхода моноклональных антител | |
Schoental | Carcinogenic action of elaiomycin in rats | |
JP2003506034A (ja) | 糖鎖に基づく治療ワクチンのための新規ストラテジー | |
US5004694A (en) | Complement-dependent cytolytic anti-Trichomonas vaginalis monoclonal antibodies | |
WO2002009744A2 (en) | Modified sialic acid vaccines | |
US5643966A (en) | β-alethine as anti-tumor agent | |
Pasternak et al. | Demonstration of Graffi leukemia virus and virus-induced antigens in leukemic and nonleukemic tissues of mice | |
Cobbold et al. | Immunosuppression with monoclonal antibodies—rules for effective serotherapy | |
US20240148889A1 (en) | Stabilized trioxacarcin antibody drug conjugates and uses thereof | |
DE3689713T2 (de) | Schützende Antikörper gegen serotypische Determinanten von flagellären Antigenen. | |
JPH0630786A (ja) | バイスペシフィック抗体 | |
SU1595902A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, используемый дл получени моноклональных антител к антигену СД38 кортикальных тимоцитов | |
TW200404566A (en) | Anti-white spot syndrome composition |