RU2063437C1 - Способ стимуляции образования асцитных форм гибридом и увеличения выхода моноклональных антител - Google Patents

Способ стимуляции образования асцитных форм гибридом и увеличения выхода моноклональных антител Download PDF

Info

Publication number
RU2063437C1
RU2063437C1 SU5036333A RU2063437C1 RU 2063437 C1 RU2063437 C1 RU 2063437C1 SU 5036333 A SU5036333 A SU 5036333A RU 2063437 C1 RU2063437 C1 RU 2063437C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
hybridomas
adjuvant
monoclonal antibodies
stimulation
yield increase
Prior art date
Application number
Other languages
English (en)
Inventor
М.А. Крыжанов
Е.Р. Полосухина
Ю.Р. Полосухина
Original Assignee
Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии filed Critical Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии
Priority to SU5036333 priority Critical patent/RU2063437C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2063437C1 publication Critical patent/RU2063437C1/ru

Links

Images

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Использование: биотехнология, получение моноклональных антител /МКА/. Сущность изобретения: использование адъюванта, состоящего из липополисахарида сине-зеленых водорослей, вазелина, холестерина, твина и спана, в качестве стимулятора образования асцитных опухолей гибридных клеток, продуцирующих МКА. Адъювант вводят за 7-8 дней до инокуляции гибридных клеток в количестве 0,5 мл на мышь. 2 табл.

Description

Изобретение относится к области биотехнологии, технологии получения препарата моноклональных антител (МКА).
Адъюванты это реактивные смеси, используемые в иммунологии для получения гипериммунных сывороток. С развитием гибридомной технологии они начали использоваться для получения асцитных форм гибридом. Адъюванты оказывают стимулирующее действие на процесс образования асцитных опухолей, вызывая раздражение брюшной стенки и наработку асцитного выпота в брюшную полость. Введение стимуляторов предотвращает врастание гибридомных клеток в стенку брюшной полости и образование солидных опухолей. В лабораторной практике наиболее часто используются такие стимуляторы, как пристан (Hoogenraad N. et al. J. of Immunol. Meth. 1983 v.61, p. 317). и неполный адъювант Фрейнда (Трофимова М. Н. с соавт. Биотехнология 1987. Т.3. N 6. - C.735-737). Пристан, или 2, 6, 10, 12-тетраметилпентадекан, представляет собой один из компонентов легкой фракции минерального масла и является препаратом, закупаемым по импорту. Он наиболее часто используется для получения асцитных форм гибридом, однако он не является адъювантом. Наиболее близким к изобретению аналогом является неполный адъювант Фрейнда. Неполный адъювант Фрейнда (НАФ) представляет собой смесь вазелинового масла с ланолином и твином-80, но введение его животным не всегда позволяет получить достаточно высокий титр моноклональных антител в асцитах. Стимуляторы вводятся внутрибрюшинно по 0,5 мл мышам линии BАLB/с за 7-14 дней до инокулирования гибридомных клеток. Пристан и НАФ высокоэффективные препараты при получении асцитных, а не солидных форм гибридом, однако из-за их токсического воздействия на клетки выход конечного продукта МКА невысок.
Для повышения выхода МКА предлагается стимуляция образования асцитных форм гибридом с помощью адъюванта ЦБА-A01, состоящего из липополисахарида сине-зеленых водорослей, вазелина, холестерина, твина и спана. Данный адъювант, так же как пристан и НАФ, является высокоэффективным препаратом при получении асцитных форм гибридом, но, кроме этого, он обеспечивает высокую концентрацию клеток и МКА в асцитической жидкости по сравнению с пристаном и НАФ. От наиболее близкого аналога НАФ адъювант ЦБA-A01 отличается по составу, дополнительно в него входят липополисахариды сине-зеленых водорослей и холестерин, которые оказывают ростостимулирующее действие на клетки гибридом.
Для подтверждения эффекта действия адъюванта ЦБА-A01 приводятся следующие примеры (табл. 1, 2).
Пример 1. Используют гибридому АР-FС-2В4, продуцирующую МКА к пероксидазе хрена. Клетки гибридомы, ресуспендированные в 3 мл раствора Хэнкса, вводят внутрибрюшинно мышам линии BALB/c в дозе 2х10 клеток на мышь. В качестве стимулятора роста асцитной формы опухоли применяют адъювант ЦБA-A01, используемый для получения гипериммунных сывороток. Срок преинъекции стимулятора 7 8 дней до инокулирования гибридомных клеток. Адъювант вводят внутрибрюшинно по 0,5 мл на мышь. Продолжительность культивирования составляет 6 пассажей.
Все исследованные сенсибилизирующие агенты вызывают образование асцитической жидкости, содержащей МКА в 100% случаев. В результате введения индукторов гибели животных не происходит, что свидетельствует о малой токсичности адъювантов для мышей. Сравнение стимулирующего эффекта пристана и НАФ показало, что они обеспечивают сходную прививаемость гибридомных клеток, стимулируют образование асцита в одинаковые сроки и в одних и тех же объемах. Клетки нарастают до сходных концентраций, что отражается и на титре продуцируемых антител. Пассирование гибридомы на мышах с предварительным введением адъюванта ЦБА-A01 сопровождается значительным увеличением концентрации клеток в асцитической жидкости и соответственно более высоким титром МКА в асците.
Пример 2. Используют гибридому ИКО-20, продуцирующую МКА, выявляющие антиген Т10, экспрессированный на тимоцитах, небольшом проценте Т-клеток периферической крови, бластных клетках больных лейкозом. Гибридомные клетки ИКО-20 культивируют на мышах BALB/C с преинъекцией адъювантом ЦБА-A01 по примеру 1.
Предлагаемый способ стимуляции образования асцитных форм гибридом позволяет получить значительное увеличение концентрации гибридомных клеток в асцитической жидкости и соответственно более высокий титр МКА в асците при пассировании гибридом за счет преинъекции адъювантом ЦБА-A01, выпускаемым НПО "Биофармавтоматика" (Н. Новгород), которые используются для получения гипериммунных сывороток. ТТТ1 ТТТ2

Claims (1)

  1. Способ стимуляции образования асцитных форм гибридом и увеличения выхода моноклональных антител путем внутрибрюшинного введения адъюванта мышам линии Balbk, отличающийся тем, что используют адъювант, состоящий из липополисахарида сине-зеленых водорослей, вазелина, холестерина, твина и спана.
SU5036333 1992-01-22 1992-01-22 Способ стимуляции образования асцитных форм гибридом и увеличения выхода моноклональных антител RU2063437C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU5036333 RU2063437C1 (ru) 1992-01-22 1992-01-22 Способ стимуляции образования асцитных форм гибридом и увеличения выхода моноклональных антител

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU5036333 RU2063437C1 (ru) 1992-01-22 1992-01-22 Способ стимуляции образования асцитных форм гибридом и увеличения выхода моноклональных антител

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2063437C1 true RU2063437C1 (ru) 1996-07-10

Family

ID=21601364

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU5036333 RU2063437C1 (ru) 1992-01-22 1992-01-22 Способ стимуляции образования асцитных форм гибридом и увеличения выхода моноклональных антител

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2063437C1 (ru)

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Биотехнология", т.3, N 6, 1987, c. 735 - 737. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Tung et al. Production of large amounts of antibodies in individual mice
Finkelman et al. IL-4 is required to generate and sustain in vivo IgE responses.
Daley et al. Idiotype-specific transplantation resistance to MOPC-315: abrogation by post-immunization thymectomy
EP0286099A2 (en) Monoclonal antibodies reactive with endotoxin core
EP0884329B1 (en) Anti-idiotypic antibody which induces an immune response against a glycosphingolipid and use thereof
US4148885A (en) Immunostimulant medicine
SU1069628A3 (ru) Способ получени коньюгата
Kedar et al. Histamine Receptor-Bearing Leukocytes (HRL) I. Detection of Histamine Receptor-Bearing Cells by Rosette Formation with Histamine-Coated Erythrocytes
JPH05246887A (ja) グラム陰性菌トキソイド含有抗菌医薬組成物
Kataoka et al. Induction of resistance to L1210 leukemia in BALB/c× DBA/2Cr F1 mice, with L1210 cells treated with glutaraldehyde and concanavalin A
AU7461896A (en) Low molecular weight cell, bone marrow and immune stimulants
CN110483640A (zh) 白介素-6r的人源化单克隆抗体、其编码基因及应用
RU2063437C1 (ru) Способ стимуляции образования асцитных форм гибридом и увеличения выхода моноклональных антител
Schoental Carcinogenic action of elaiomycin in rats
JP2003506034A (ja) 糖鎖に基づく治療ワクチンのための新規ストラテジー
US5004694A (en) Complement-dependent cytolytic anti-Trichomonas vaginalis monoclonal antibodies
WO2002009744A2 (en) Modified sialic acid vaccines
US5643966A (en) β-alethine as anti-tumor agent
Pasternak et al. Demonstration of Graffi leukemia virus and virus-induced antigens in leukemic and nonleukemic tissues of mice
Cobbold et al. Immunosuppression with monoclonal antibodies—rules for effective serotherapy
US20240148889A1 (en) Stabilized trioxacarcin antibody drug conjugates and uses thereof
DE3689713T2 (de) Schützende Antikörper gegen serotypische Determinanten von flagellären Antigenen.
JPH0630786A (ja) バイスペシフィック抗体
SU1595902A1 (ru) Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, используемый дл получени моноклональных антител к антигену СД38 кортикальных тимоцитов
TW200404566A (en) Anti-white spot syndrome composition