RU2054283C1

RU2054283C1 - Method for obtaining biomaterial for using in ophthalmology

Info

Publication number: RU2054283C1
Application number: RU95104577A
Authority: RU
Inventors: С.Н. Федоров; С.Н. Багров; Е.В. Ларионов
Original assignee: Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза"
Priority date: 1995-04-06
Filing date: 1995-04-06
Publication date: 1996-02-20
Also published as: RU95104577A

Abstract

FIELD: medicine. SUBSTANCE: method involves using pericardium as animal raw material which is mechanically purified, cut, frozen five times and defrosted in sodium chloride solution in distilled water in 1:1 proportion during time duration from 48 to 72 h. EFFECT: enhanced effectiveness of the method.

Description

Изобретение относится к медицине, а более конкретно к офтальмологии и может быть использовано для приготовления материалов при оперативном лечении миопии средней и высокой степени для получения склеропластического материала, при оперативном лечении глаукомы для получения антиглаукоматозных дренажей, а также как источник получения растворов коллагена при лечении миопии легкой степени и изготовления наружных лекарственных форм. The invention relates to medicine, and more specifically to ophthalmology, and can be used for the preparation of materials in the surgical treatment of medium and high degree myopia to obtain scleroplastic material, in the surgical treatment of glaucoma to obtain anti-glaucomatous drains, and also as a source of collagen solutions in the treatment of lung myopia degree and manufacture of external dosage forms.

Известен способ для лечения близорукости, который осуществлен благодаря получению и использованию материала из ткани перикарда. Материал заливают физраствором с антибиотиком на 1-2 ч, затем обрабатывают водным раствором бриллиантовой зелени, помещают в 70%-ный этиловый спирт и высушивают (авт. св. СССР N 1621921). A known method for the treatment of myopia, which is carried out by obtaining and using material from pericardial tissue. The material is poured with saline with an antibiotic for 1-2 hours, then treated with an aqueous solution of brilliant green, placed in 70% ethyl alcohol and dried (ed. St. USSR N 1621921).

Недостатками данного способа является то, что обработка материала не приводит к разрушению клеток стромы перикарда, кровеносных сосудов, не выводятся другие несвязанные высокомоллекулярные биологические вещества, а водный раствор бриллиантовой зелени обладает сравнительно слабыми антисептическими свойствами. The disadvantages of this method is that the processing of the material does not lead to the destruction of pericardial stromal cells, blood vessels, other unbound high-molecular biological substances are not excreted, and an aqueous solution of brilliant green has relatively weak antiseptic properties.

Целью изобретения является получение биоматериала для использования в офтальмологии, где в качестве источника животного сырья используют перикард быка, который соответствующим образом очищен и обработан растворами. The aim of the invention is to obtain biomaterial for use in ophthalmology, where the pericardium of a bull, which is properly cleaned and treated with solutions, is used as a source of animal raw materials.

Техническим результатом, достигаемым при использовании изобретения, является получение универсального биоматериала, который может широко использоваться для получения ряда изделий, таких, как материал для склеропластики, антиглаукоматозные дренажи, материал для лечения макулярных дистрофий и для получения жидких лекарственных форм. The technical result achieved by using the invention is to obtain a universal biomaterial, which can be widely used to obtain a number of products, such as material for scleroplasty, anti-glaucomatous drainage, material for the treatment of macular degeneration and for the preparation of liquid dosage forms.

Технический результат достигается тем, что в качестве сырья используют перикард быка, который механически очищают, нарезают, пятикратно замораживают и размораживают в 0,9%-ном растворе хлорида натрия и дистиллированной воды в соотношении 1:1, дважды помещают в 1%-ный раствор аммиака и этилового спирта в соотношении 1: 1 от 48 до 72 ч, после чего пять раз отмывают по 15-30 мин в дистиллированной воде, помещают в раствор 70%-ного этилового спирта и стерилизуют γ-облучением дозой 2,5 Мград. The technical result is achieved by using bull pericardium as a raw material, which is mechanically cleaned, cut, frozen five times and thawed in a 0.9% solution of sodium chloride and distilled water in a ratio of 1: 1, placed twice in a 1% solution ammonia and ethyl alcohol in a 1: 1 ratio from 48 to 72 hours, after which they are washed five times for 15-30 minutes in distilled water, placed in a solution of 70% ethyl alcohol and sterilized with γ-radiation at a dose of 2.5 Mg.

Перикард является соединительной оболочкой сердца, содержит мало сосудов, клеток, строма его состоит в основном из коллагена, который слабо растворим, обладает высокой механической прочностью и является низкоантигенным. Кроме того, раствор такого коллагена обладает высокой ферментативной устойчивостью, что очень важно при изготовлении коллагенопластичных материалов. The pericardium is the connective membrane of the heart, contains few vessels, cells, its stroma consists mainly of collagen, which is slightly soluble, has high mechanical strength and is low antigen. In addition, a solution of such collagen has a high enzymatic stability, which is very important in the manufacture of collagen plastic materials.

Механически очищенный перикард нарезают до необходимых размеров, подвергают пятикратному замораживанию и оттаиванию в растворе хлорида натрия и дистиллированной воды с целью выхода из ткани высокомоллекулярных белков и гликопротеинов, которые, как известно, являются основными антигенами этой ткани. Эксперимент показал, что для их полного выхода из данной ткани достаточно пятикратного замораживания и оттаивания. The mechanically purified pericardium is cut to the required size, subjected to five-fold freezing and thawing in a solution of sodium chloride and distilled water in order to exit high-molecular proteins and glycoproteins, which are known to be the main antigens of this tissue. The experiment showed that five times freezing and thawing is enough to completely exit this tissue.

Для освобождения ткани от липидов, липопротеинов ткань обрабатывают 1% -ным раствором спирта и аммиака от 48 до 72 ч. Эту процедуру повторяют дважды. Экспериментально установлено, что инкубация кусочков перикарда должна проводиться в таком растворе не менее 48 ч, поскольку при меньшем времени достаточного выхода липидов не происходит. Инкубация в течение 72 ч является достаточной, так как при большем времени инкубации может наступать деструкция коллагена. To release tissue from lipids, lipoproteins, the tissue is treated with a 1% solution of alcohol and ammonia for 48 to 72 hours. This procedure is repeated twice. It was experimentally established that incubation of pericardial slices should be carried out in such a solution for at least 48 hours, since with a shorter time, a sufficient yield of lipids does not occur. Incubation for 72 hours is sufficient, since collagen destruction may occur with a longer incubation time.

Для полного вымывания раствора аммиака и спирта кусочки ткани помещают в дистиллированную воду. Установлено, что время выхода аммиака и спирта (в основном аммиака) происходит после 5 раз по 15 мин, при меньшем времени отмывки отмечали следы аммиака и кислые значения рН. 30-минутная отмывка полностью удаляет аммиак из ткани и поэтому большего времени для отмывки не требуется. To completely wash out the ammonia and alcohol solution, pieces of tissue are placed in distilled water. It was found that the release time of ammonia and alcohol (mainly ammonia) occurs after 5 times 15 minutes, with shorter washing times traces of ammonia and acidic pH values were noted. A 30-minute wash completely removes ammonia from the fabric and therefore no longer is required for washing.

Консервирующей и одновременно стерилизующей средой для кусочков является 70%-ный этиловый спирт, а стандартной стерилизацией γ-облучение. The preserving and at the same time sterilizing medium for the pieces is 70% ethanol, and γ-radiation is the standard sterilization.

Способ осуществляется следующим образом. The method is as follows.

Перикард механически очищают от жира, сосудов и прочих загрязнений. The pericardium is mechanically cleaned of fat, blood vessels and other contaminants.

Нарезают на кусочки необходимых размеров и конфигураций. Ополаскивают в водопроводной воде. Cut into pieces of the required sizes and configurations. Rinse in tap water.

Готовят раствор хлорида натрия (0,9% ) и дистиллированной воды 1:1 и заливают им кусочки ткани, помещают их в морозильную камеру и после заморозки оттаивают. Процедуру повторяют 5 раз. A solution of sodium chloride (0.9%) and distilled water 1: 1 is prepared and pieces of tissue are poured onto them, placed in a freezer and thawed after freezing. The procedure is repeated 5 times.

Готовят 1%-ный раствор аммиака и 1%-ный раствор этилового спирта, смешивают их в соотношении 1:1 и заливают этим раствором кусочки. Prepare a 1% solution of ammonia and a 1% solution of ethyl alcohol, mix them in a ratio of 1: 1 and pour pieces into this solution.

Через 48-72 ч раствор сливают и заменяют на свежий. After 48-72 hours, the solution is drained and replaced with fresh.

После повторной инкубации раствор сливают, а кусочки пять раз отмывают по 15-30 мин в дистиллированной воде, меняя каждый раз воду на свежую. Контроль рН и реакция Видаля на аммиак. After repeated incubation, the solution is drained, and the pieces are washed five times for 15-30 minutes in distilled water, each time changing the water to fresh. PH control and Vidal's reaction to ammonia.

Отмытые кусочки расфасовывают по флаконам с 70%-ным этиловым спиртом и стерилизуют γ-облучением дозой 2,5 Мград. The washed pieces are packaged in vials with 70% ethanol and sterilized by γ-irradiation with a dose of 2.5 Mgrad.

Примеры конкретного выполнения способа. Examples of specific performance of the method.

П р и м е р 1. Получение антиглаукоматозных дренажей. PRI me R 1. Obtaining anti-glaucomatous drains.

Хорошо очищенную строму перикарда нарезали на полоски шириной 0,2 см и пятикратно замораживали и оттаивали в 0,9%-ном растворе хлорида натрия и дистиллированной воды, после чего отмывали и помещали полоски в раствор аммиака (1%) и этилового спирта (1%), инкубировали в этом растворе 48 ч дважды, после чего пять раз отмывали в дистиллированной воде по 15 мин при рН 6,7-7,0 отмывание прекращали и закатывали полоски в пузырьки с 70%-ным этиловым спиртом. Стерилизовали γ-облучением и отдавали после бактериологического контроля в клинику. A well-purified pericardial stroma was cut into strips 0.2 cm wide and frozen five times and thawed in a 0.9% solution of sodium chloride and distilled water, after which they were washed and placed in a solution of ammonia (1%) and ethyl alcohol (1% ), were incubated in this solution for 48 hours twice, after which they were washed five times in distilled water for 15 minutes at pH 6.7–7.0, washing was stopped and the strips were rolled into vials with 70% ethyl alcohol. They were sterilized by γ-irradiation and given after bacteriological control to the clinic.

П р и м е р 2. Приготовление склеропластического материала. PRI me R 2. Preparation of scleroplastic material.

Хорошо очищенную строму перикарда вырубали на стандартной вырубке, пятикратно замораживали и оттаивали в 0,9% -ном растворе хлорида натрия и дистиллированной воды, дважды инкубировали кусочки по 50 ч в растворе аммиака и спирта (1%), после чего отмывали кусочки в дистиллированной воде пять раз по 20 мин при рН 6,5-7,0 и при отрицательной реакции на аммиак отмывку прекращали, фасовали кусочки во флаконы с 70%-ным этанолом, стерилизовали γ-облучением и передавали в клинику. A well-purified stroma of the pericardium was cut down on a standard cutting, frozen five times and thawed in a 0.9% solution of sodium chloride and distilled water, 50 h pieces were incubated twice in a solution of ammonia and alcohol (1%), after which the pieces were washed in distilled water five times for 20 min at a pH of 6.5-7.0 and with a negative reaction to ammonia, the washing was stopped, the pieces were packed in bottles with 70% ethanol, sterilized by γ-radiation and transferred to the clinic.

П р и м е р 3. Приготовление материала для лечения макулярных дистрофий. PRI me R 3. The preparation of material for the treatment of macular degeneration.

Очищенный перикард нарезали на кружочки необходимого размера, пятикратно замораживали и оттаивали как и в предыдущем случае, отмывали и 72 ч инкубировали кружочки в растворе аммиака и этилового спирта (1%), отмывали пять раз по 30 мин и при рН 6,5-7,0 отмывание прекращали. Фасовали во флаконы с 70% -ным этанолом, стерилизовали γ-облучением и передавали в клинику. The purified pericardium was cut into circles of the required size, frozen five times and thawed as in the previous case, washed and the circles were incubated for 72 hours in a solution of ammonia and ethyl alcohol (1%), washed five times for 30 minutes and at pH 6.5-7. 0 washing was stopped. Packed in bottles with 70% ethanol, sterilized by γ-radiation and transferred to the clinic.

Claims

METHOD FOR PRODUCING BIOMATERIAL FOR OPHTHALMOLOGY USE, including treating farm animal pericardium with solutions, characterized in that the bull’s pericardium is used as raw material, which is mechanically cleaned, cut, frozen five times and thawed in a 0.9% solution of sodium chloride and distilled water 1: 1 ratio, placed twice in a 1% solution of ammonia and ethyl alcohol in a ratio of 1: 1 from 48 to 72 hours, after which they are washed five times for 15-30 minutes in distilled water, placed in a solution of 70% of these ovogo alcohol and sterilized by irradiation dose of 2.5 Mgrad.