RU2027994C1

RU2027994C1 - Method of diagnosis of bacterial sepsis in children

Info

Publication number: RU2027994C1
Authority: RU
Inventors: Валерий Леонидович Морозов; Марина Александровна Сабодаха; Энна Ивановна Федотова; Алым Ашимович Мырзаев
Original assignee: Киргизский государственный медицинский институт
Priority date: 1991-03-19
Filing date: 1991-03-19
Publication date: 1995-01-27

Abstract

FIELD: medicine, microbiology, surgery. SUBSTANCE: venous blood samples were taken in children. Isotonic sodium chloride solution is added to sample at the ratio 1:3, and a mixture is placed into two tubes following by incubation of mixture at 37 C for 4 h in the first tube, and for 18 h in the second one. Then samples were centrifuged, supernatant is diluted with distilled water at the ratio 1:4, and potassium ions content is determined in solution prepared. Ratio of this index in the second tube to the first one is calculated. Sepsis is diagnosed at value of this ratio 4 or above. EFFECT: improved method of diagnosis. 1 tbl

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии, и может быть использовано в хирургической и терапевтической практике при диагностике бактериального сепсиса. The invention relates to medicine, namely to microbiology, and can be used in surgical and therapeutic practice in the diagnosis of bacterial sepsis.

Известен способ диагностики сепсиса путем взятия крови, культивирования ее в жидкой питательной среде, затем пересева на плотную питательную среду, выделения чистой культуры и последующей идентификации культуры. Однако этот метод длительный, занимает около надели, что не позволяет своевременно поставить диагноз, требует приготовления питательных сред. Кроме того, посев исследуемого материала не всегда гарантирует положительный результат, так как в 18-40% случаев получают "стерильный" посев. A known method for the diagnosis of sepsis by taking blood, cultivating it in a liquid nutrient medium, then reseeding on a solid nutrient medium, isolation of pure culture and subsequent identification of the culture. However, this method is lengthy, takes about allotted, which does not allow timely diagnosis, requires the preparation of culture media. In addition, the inoculation of the test material does not always guarantee a positive result, since in 18-40% of cases receive "sterile" inoculation.

Известен также способ диагностики сепсиса у детей раннего возраста путем определения в нейтрофилах содержания основных белков с последующим расчетом значения гистохимического показателя этих белков. Однако, этот метод сложен для выполнения из-за трудоемкости процессов обработки мазка и подсчета нейтрофилов. Метод не всегда точен из-за возможного субъективного разделения нейтрофилов на 4 степени содержания основных белков. There is also a known method for the diagnosis of sepsis in young children by determining the content of basic proteins in neutrophils and then calculating the histochemical index of these proteins. However, this method is difficult to perform due to the complexity of the smear processing and neutrophil counting processes. The method is not always accurate due to the possible subjective separation of neutrophils into 4 degrees of the content of basic proteins.

Целью изобретения является повышение точности и упрощение способа. The aim of the invention is to improve the accuracy and simplification of the method.

Сущность изобретения заключается в том, что у детей берут кровь из вены, инкубируют в изотоническом растворе хлорида натрия при 37^оС. Через 4 ч (1 проба) и далее еще через 14 ч инкубации (общее время инкубации 18 ч) - (2 проба) смесь центрифугируют и в надосадочной жидкости, определяют содержание ионов калия, затем рассчитывают соотношение показателя во второй пробе к первой, и по степени нарастания содержания калия определяют наличие бактериального сепсиса.The invention consists in the fact that the children taking blood from a vein are incubated in isotonic sodium chloride solution at 37 ° ^C. After 4 hours (sample 1) and then after another 14 h of incubation (total incubation time 18 h) - (sample 2 ) the mixture is centrifuged and in the supernatant, the content of potassium ions is determined, then the ratio of the indicator in the second sample to the first is calculated, and the presence of bacterial sepsis is determined by the degree of increase in potassium content.

Изобретение в отличие от аналога основано на выявлении косвенных признаков размножения бактерий - выделении ионов калия из клеток крови, лизирующихся при размножении бактерий. Это позволяет поставить диагноз уже на следующие сутки и своевременно начать лечение. The invention, in contrast to the analogue, is based on the identification of indirect signs of bacterial reproduction - the release of potassium ions from blood cells that are lysed during the reproduction of bacteria. This allows you to make a diagnosis on the next day and timely start treatment.

Способ осуществляют следующим образом. The method is as follows.

В пробирку с 3 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия помещают 1 мл крови из вены. Использование физиологического раствора позволяет сохранить клетки крови, так как он изотоничен, уменьшить бактерицидные свойства крови. Кроме того, физиологический раствор, в отличие от питательных сред, не содержит калия. Пробирку закрывают стерильной резиновой пробкой и помещают в термостат при 37^оС. Через 4 ч (1 проба) инкубации и 14 ч (2 проба) с общей суммой 18 ч пробирку встряхивают, центрифугируют при 1000 об/ми в течение 10 мин, из надосадка стерильной пипеткой забирают 0,5 мл жидкости и смешивают с 2 мл дистиллированной воды. Пpобирку со смесью вновь помещают в термостат на 14 ч. Затем повторно встряхивают, центрифугируют, 0,5 мл надосадка смешивают с 2 мл дистиллированной воды (2 проба). После этого в обеих пробах определяют содержание ионов калия методом пламенной фотометрии в соответствии с инструкцией к прибору. При возрастании показаний фотометра во второй пробе по отношению к первой в 4 и более раз констатируют наличие бактериального сепсиса. Другие интервалы времени недостаточно информативны. Например, соотношение 1 пробы к неинкубированной пробе не выявляет различий в группах. Это связано, по-видимому с тем, что в течение первых 4-х часов идет разрушение клеток, связанное со степенью их физиологической устойчивости и лишь позже, когда размножаются микробы, они вызывают разрушение клеток. При соотношении показаний 2 пробы к неинкубированной пробе различия между больными сепсисом и гнойно-воспалительными заболеваниями недостоверны.In a test tube with 3 ml of sterile isotonic sodium chloride solution, 1 ml of blood from a vein is placed. The use of saline allows you to save blood cells, since it is isotonic, to reduce the bactericidal properties of blood. In addition, saline, unlike nutrient media, does not contain potassium. The tube was sealed with sterile rubber stopper and placed in an incubator at 37 ° ^C. After 4 hours (trial 1) and 14 h of incubation (sample 2) with a total of 18 hours the tube was shaken, centrifuged at 1000 rev / mi for 10 min, the supernatant from 0.5 ml of liquid is taken with a sterile pipette and mixed with 2 ml of distilled water. The test tube with the mixture is again placed in the thermostat for 14 hours. Then it is shaken again, centrifuged, 0.5 ml of the supernatant is mixed with 2 ml of distilled water (2 samples). After that, in both samples, the content of potassium ions is determined by flame photometry in accordance with the instructions for the device. With an increase in the readings of the photometer in the second sample relative to the first 4 or more times, the presence of bacterial sepsis is observed. Other time intervals are not informative enough. For example, the ratio of 1 sample to unincubated sample does not reveal differences in the groups. This is apparently due to the fact that during the first 4 hours there is a destruction of cells, associated with the degree of their physiological stability and only later, when microbes multiply, they cause destruction of cells. With a ratio of indications of 2 samples to an unincubated sample, the differences between patients with sepsis and purulent-inflammatory diseases are unreliable.

Способ испытан при диагностике сепсиса у детей. Диагноз сепсиса был верифицирован последующим обнаружением бактерий в крови классическим методом посева на питательную среду. В качестве контроля обследована группа детей с острыми гнойно-воспалительными процессами (флегмоны, абсцессы, остеомиелиты) и группа здоровых детей. При испытании данного способа были получены следующие результаты (см.таблицу). The method was tested in the diagnosis of sepsis in children. The diagnosis of sepsis was verified by subsequent detection of bacteria in the blood by the classical method of culture on culture media. As a control, a group of children with acute purulent-inflammatory processes (phlegmon, abscesses, osteomyelitis) and a group of healthy children were examined. When testing this method, the following results were obtained (see table).

Как видно из представленных данных у больных сепсисом уровень показателя оказался значительно выше по сравнению с больными гнойно-воспалительными процессами (p < 0,001). As can be seen from the data presented, in patients with sepsis, the level of the indicator was significantly higher compared with patients with purulent-inflammatory processes (p <0.001).

П р и м е р 1. Больная Б., 10 дней. Поступила в детскую больницу N 5 г. Фрунзе с диагнозом: "Бактериальный сепсис". Из вены больной было получено 1 мл крови и помещено в пробирку с 3 мл изотонического раствора хлорида натрия. Пробирку поместили в термостат при 37^оС. Через 4 и 18 ч инкубации пробирку встряхнули, отцентрифугировали 10 мин при 1000 об/мин и из надосадочной жидкости получили 0,5 мл, смешали с 2 мл дистиллированной воды и определили содержание калия на пламенном фотометре.PRI me R 1. Patient B., 10 days. Was admitted to the children's hospital No. 5 of Frunze with a diagnosis of "Bacterial sepsis." 1 ml of blood was obtained from the patient’s vein and placed in a test tube with 3 ml of isotonic sodium chloride solution. The tube was placed in a thermostat at 37 ° ^C. After 4 and 18 hours incubation tube was shaken, centrifuged 10 min at 1000 rev / min, and the supernatant obtained 0.5 ml, was mixed with 2 ml of distilled water, and determined the content of potassium in flame photometer.

Показания фотометрии: 1 проба - 52; 2 проба - 290. При делении 290 на 52 получили величину 5,58 и диагностировали сепсис. Этот диагноз позже был подтвержден высевом эпидермального стафилококка и синегнойной палочки из крови. Indications of photometry: 1 sample - 52; 2 samples - 290. When dividing 290 by 52, a value of 5.58 was obtained and sepsis was diagnosed. This diagnosis was later confirmed by seeding epidermal staphylococcus and Pseudomonas aeruginosa from the blood.

П р и м е р 2. Больной Б., 14 лет. Поступил в детскую больницу N 3 г. Фрунзе с диагнозом: "Острый гематогенный остеомиелит". У больного аналогичным образом была получена кровь и инкубирована в термостате. При определении содержания ионов калия получены следующие показания фотометрии: 1 проба - 29; 2 проба - 83,5. При делении получена цифра 2,88, что не свидетельствует о наличии сепсиса. Из крови, взятой на подъеме температуры, был высеян эпидермальный стафилококк. PRI me R 2. Patient B., 14 years old. He was admitted to the children's hospital No. 3 of Frunze with a diagnosis of acute hematogenous osteomyelitis. The patient received blood in a similar way and incubated in a thermostat. When determining the content of potassium ions, the following photometry readings were obtained: 1 sample - 29; 2 samples - 83.5. When dividing, the figure is 2.88, which does not indicate the presence of sepsis. From blood taken at a rise in temperature, epidermal staphylococcus was seeded.

У всех больных сепсисом были получены положительные результаты (чувствительность способа - 100% ). Ложно-положительные результаты были обнаружены у 2 больных с локальными процессами (специфичность способа - 81% ). Диагностическая эффективность - 86%. У всех здоровых лиц результаты были значительно ниже диагностических (p < 0,05). In all patients with sepsis, positive results were obtained (the sensitivity of the method is 100%). False-positive results were found in 2 patients with local processes (method specificity - 81%). Diagnostic efficiency - 86%. All healthy individuals had significantly lower diagnostic results (p <0.05).

Таким образом, предлагаемый способ прост в выполнении, не требует сложных расчетов, обладает высокой диагностической эффективностью, может выполняться в любой лаборатории. Thus, the proposed method is simple to perform, does not require complex calculations, has high diagnostic efficiency, can be performed in any laboratory.

Claims

A METHOD FOR DIAGNOSTIC OF BACTERIAL SEPSIS IN CHILDREN, including a blood test, characterized in that, in order to increase the accuracy and simplify the method, venous blood samples are taken from children, an isotopic sodium chloride solution is added to it in a ratio of 1: 3, the mixture is placed in two test tubes with subsequent incubation at 37 ^o With the mixture in the first tube for 4 hours, and in the second for 18 hours, then the samples are centrifuged and in the supernatant, previously diluted with distilled water in a ratio of 1: 4, determine the ion content to Aliya, the ratio of this indicator in the second sample to the first is calculated and, with its value of 4 or more, sepsis is diagnosed.