RU2117295C1

RU2117295C1 - Method of diagnosis of septic states

Info

Publication number: RU2117295C1
Application number: RU93034195A
Authority: RU
Inventors: Маргарита Яковлевна Малахова; Станислав Валерианович Оболенский
Original assignee: Маргарита Яковлевна Малахова; Станислав Валерианович Оболенский
Priority date: 1993-07-01
Filing date: 1993-07-01
Publication date: 1998-08-10

Abstract

FIELD: medicine. SUBSTANCE: method involves supernatant analysis obtained from biological fluids by precipitation of high-molecular proteins. Supernatant is studied in weak acid medium at ultraviolet range of spectrum at wavelength 238-300 nm. The presence of septic state is diagnosed in the case of detection of crenulation in spectrogram. EFFECT: improved method of diagnosis. 3 ex

Description

Изобретение относится к медицине, в частности к биохимической верификации септического состояния, и может быть использовано для быстрой и точной диагностики септических состояний в клинической практике. The invention relates to medicine, in particular to the biochemical verification of a septic state, and can be used for quick and accurate diagnosis of septic conditions in clinical practice.

Существует несколько способов диагностики септических состояний. Первый, наиболее широко используемый способ заключается в посеве различных сред организма (крови, мочи, серозных выпотов и других жидкостей) на плотные питательные среды с последующей верификацией возбудителей. Второй способ заключается в посеве материала на жидкие среды с последующей регистрацией в них продуктов жизнедеятельности микробной флоры. Третий способ - проведение скринингового теста с использованием сложных и дорогостоящих диагностикумов. There are several ways to diagnose septic conditions. The first, most widely used method is to sow various body fluids (blood, urine, serous effusions and other fluids) on solid nutrient media, followed by verification of pathogens. The second method consists in sowing the material on liquid media with subsequent registration of microbial flora waste products. The third method is a screening test using complex and expensive diagnostic kits.

Недостаток известных способов состоит в большом 30 - 35% ложноотрицательных результатов, подборе специальных питательных сред для выращивания бактерии, длительности проведения анализов (от нескольких часов до 3 - 5 суток) и дороговизны исследований. A disadvantage of the known methods consists in a large 30 - 35% false-negative results, the selection of special nutrient media for growing bacteria, the duration of the analysis (from several hours to 3-5 days) and the high cost of research.

Недостаточная надежность, дороговизна и длительность проведения анализа микробиологических методов диагностики септических состояний заставляют исследователей искать другие способы регистрации в крови и других биологических жидкостях бактерий или продуктов их жизнедеятельности. The lack of reliability, high cost and duration of the analysis of microbiological methods for the diagnosis of septic conditions compels researchers to look for other ways to register in the blood and other biological fluids of bacteria or their metabolic products.

При классическом микробиологическом способе обнаружения сепсиса у больного берут анализируемую жидкость, например кровь, и сразу у постели больного производят посев на питательную среду в чашку Петри. Чашку Петри помещают в термостат при 37^oC и ждут появления роста бактериальной флоры, которая появляется спустя значительное время - через 3 - 5 дней. При некоторых видах возбудителей посев на обычные питательные среды неэффективен, требуется добавление эритроцитов барана или других пищевых добавок. Эти манипуляции увеличивают время исследования, а работа с бактериальными культурами требует специального режима. Подтверждение этим методом обеспечивается в 60 - 75% случаев сепсиса.In the classical microbiological method for the detection of sepsis, a test fluid, such as blood, is taken from a patient, and immediately at the patient’s bed they are inoculated onto a nutrient medium in a Petri dish. A Petri dish is placed in a thermostat at 37 ^o C and wait for the growth of the bacterial flora, which appears after a considerable time - after 3 - 5 days. In some types of pathogens, sowing on ordinary nutrient media is ineffective; the addition of sheep erythrocytes or other food additives is required. These manipulations increase the research time, and working with bacterial cultures requires a special regimen. Confirmation by this method is provided in 60 - 75% of cases of sepsis.

Целью изобретения является разработка быстрого и надежного биохимического способа диагностики септических состояний независимо от вида возбудителя, без использования сред для посева культуры и контакта с возбудителем инфекции. The aim of the invention is the development of a quick and reliable biochemical method for the diagnosis of septic conditions, regardless of the type of pathogen, without using media for culture and contact with the pathogen.

С этой целью авторы применили биохимический скрининговый тест, не имеющий аналогов. To this end, the authors applied a biochemical screening test that has no analogues.

Указанная цель достигается тем, что после осаждения крупномолекулярных белков биологических жидкостей проводят спектрофотометрирование супернатанта в зоне ультрафиолета и в случае выявления эффекта "зазубренности" на спектрограмме судят о наличии септического состояния. This goal is achieved by the fact that after the precipitation of large-molecular proteins of biological fluids, spectrophotometry of the supernatant is carried out in the ultraviolet zone, and in the case of the detection of the "jagged" effect on the spectrogram, the presence of a septic state is judged.

Сопоставительный анализ с другими способами при отсутствии аналога показывает, что заявляемый способ имеет существенные различия, выраженные в следующих критериях:
1. быстрота определения - анализ занимает 30 - 35 мин с момента взятия пробы;
2. дешевизна способа - для анализа требуются распространенные в клинико-диагностических лабораториях реактивы. Определение ведется непосредственно из исследуемых биологических сред организма без этапа обогатительных сред и инкубации;
3. высокая чувствительность способа - незначительные воспалительные процессы, такие как зубные гранулемы, геммороидальные воспаления и др. могут быть выявлены путем исследования эритроцитарной взвеси. Известно, что любая микрофлора или продукты ее жизнедеятельности фиксируются вначале на эритроцитарную поверхность (на гликокаликсе) и этот эффект можно наблюдать предлагаемым способом, что и свидетельствует о высокой чувствительности метода;
4. надежность способа - обеспечивается подтверждением предъявленного способа регистрации септического состояния классическими способами (высевание микрофлоры).Comparative analysis with other methods in the absence of an analogue shows that the inventive method has significant differences, expressed in the following criteria:
1. rapid determination - analysis takes 30 - 35 minutes from the moment of sampling;
2. the cheapness of the method - for analysis requires reagents common in clinical diagnostic laboratories. The determination is carried out directly from the studied biological environments of the body without the stage of enrichment media and incubation;
3. high sensitivity of the method - minor inflammatory processes, such as dental granulomas, hemorrhoidal inflammation, etc. can be detected by examining the erythrocyte suspension. It is known that any microflora or products of its vital activity are first recorded on the erythrocyte surface (on the glycocalyx) and this effect can be observed by the proposed method, which indicates a high sensitivity of the method;
4. reliability of the method - is provided by confirmation of the presented method for recording the septic state by classical methods (sowing microflora).

Таким образом, заявляемый способ диагностики септического состояния отличается от известных тем, что он позволяет оптимизировать качество диагностики сепсиса, сделать эту процедуру доступной для клинико-диагностических лабораторий и быстрее поставить диагноз. Thus, the claimed method for diagnosing a septic state differs from the known ones in that it allows you to optimize the quality of the diagnosis of sepsis, make this procedure available for clinical diagnostic laboratories and make a diagnosis faster.

Тест исследован в лабораторных условиях при воспроизведении сепсиса in vitro при добавлении живых культур в кровь или другие биологические жидкости с последующей инкубацией при 37^oC и исследованием предлагаемым способом с положительными результатами.The test was studied in laboratory conditions when reproducing sepsis in vitro with the addition of live cultures to blood or other biological fluids, followed by incubation at 37 ^o C and the study of the proposed method with positive results.

Способ испытан при верификации сепсиса у больных in vivo с параллельным исследованием классическим микробиологическим способом. The method was tested in the verification of sepsis in patients in vivo with a parallel study of the classical microbiological method.

Пример 1. В больницу им. С.Перовской поступила М-ва, 78 лет с ожогом кипятком 2 - 3-ей степени в нижней трети голени. Через 2 дня на месте ожога, который был на месте привычного рожистого воспаления, развилась инфекция, состояние больной ухудшилось, через 1 день поднялась температура. Взята кровь на посев и для предлагаемого способа регистрации септического состояния. Как в плазме крови, так и эритроцитах был зарегистрирован эффект зазубренности, что свидетельствовало о развитии септического состояния. Через 1 день после подъема температуры у больной стали отмечаться клинические признаки сепсиса. Только на 6-й день поступил положительный ответ из микробиологической лаборатории. Лечение больной начато сразу после установления диагноза предлагаемым способом и было успешным. При дальнейших исследованиях крови эффект зазубренности постепенно исчез и при полном выздоровлении не наблюдался. Example 1. In the hospital to them. S. Perovskoy entered M-va, 78 years old with a burn of boiling water of the 2nd - 3rd degree in the lower third of the leg. After 2 days, the infection developed at the site of the burn, which was at the site of the usual erysipelas, the patient's condition worsened, after 1 day the temperature rose. Blood was taken for sowing and for the proposed method for registering a septic state. In both blood plasma and erythrocytes, a serration effect was recorded, which indicated the development of a septic state. 1 day after the temperature rises, the patient began to show clinical signs of sepsis. Only on the 6th day a positive response was received from the microbiological laboratory. Treatment of the patient began immediately after establishing the diagnosis of the proposed method and was successful. With further blood tests, the notch effect gradually disappeared and was not observed with full recovery.

Пример 2. Произведено сопоставление результатов анализов по бацилловыделению у больных туберкулезом, которые затем были прооперированы, и у некоторых очаг туберкулеза был удален полностью. Перед операцией больным предлагаемым методом исследована кровь и у всех тех больных, у которых отмечалось бацилловыделение, отмечался эффект зазубренности. У двух больных, не имевших бацилловыделения, этот эффект не наблюдался. Example 2. A comparison was made of the results of tests on bacillus excretion in patients with tuberculosis, who were then operated on, and in some, the focus of tuberculosis was completely removed. Before the operation, the patient with the proposed method examined the blood and in all those patients in whom bacillus was observed, the effect of serration was noted. In two patients who did not have bacillus excretion, this effect was not observed.

В одном случае отрицательных эффект был при наличии положительного заключения о бацилловыделении. Как обнаружилось при гистологическом исследовании, произведенном после оперативного вмешательства, у данного больного была хроническая локальная пневмония, а не туберкулез, не было специфической морфологической картины туберкулеза, следовательно, предлагаемым способом мы не могли обнаружить бацилловыделение, так как не было туберкулеза. In one case, the negative effect was in the presence of a positive conclusion about bacillus excretion. As revealed by a histological examination after surgery, this patient had chronic local pneumonia, and not tuberculosis, there was no specific morphological picture of tuberculosis, therefore, using the proposed method, we could not detect bacillus excretion, since there was no tuberculosis.

Пример 3. Проведены исследования in vitro с добавлением бактериальных культур в кровь человека и последующей инкубацией при 37^oC. Эффект регистрировался более стабильно при использовании крови от больных людей или хранении в течение нескольких дней крови здорового человека в холодильнике (ослабление антимикробных свойств крови).Example 3. In vitro studies with the addition of bacterial cultures in human blood and subsequent incubation at 37 ^o C. The effect was recorded more stably when using blood from sick people or keeping the blood of a healthy person in a refrigerator for several days (weakening of the antimicrobial properties of blood).

Claims

A method for diagnosing septic conditions by studying biological fluids, characterized in that, in order to increase the sensitivity and reliability of the method and accelerating the diagnosis of septic conditions, a supernatant is obtained from biological fluids that does not contain large molecular weight proteins, and then spectrophotometrized in a slightly acidic medium in the wavelength zone 238 - 300 nm, and in the case of detecting the effect of serration on the spectrogram, noise judges the presence of a septic state.