RU2021136264A - Способы выделения, культивирования и генетической инженерии популяций клеток иммунной системы для адоптивной терапии - Google Patents
Способы выделения, культивирования и генетической инженерии популяций клеток иммунной системы для адоптивной терапии Download PDFInfo
- Publication number
- RU2021136264A RU2021136264A RU2021136264A RU2021136264A RU2021136264A RU 2021136264 A RU2021136264 A RU 2021136264A RU 2021136264 A RU2021136264 A RU 2021136264A RU 2021136264 A RU2021136264 A RU 2021136264A RU 2021136264 A RU2021136264 A RU 2021136264A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- paragraphs
- enrichment
- selection
- population
- Prior art date
Links
- 210000000987 Immune System Anatomy 0.000 title 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 title 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 title 1
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 claims 88
- 102100008191 CD8A Human genes 0.000 claims 21
- 210000003071 memory T lymphocyte Anatomy 0.000 claims 20
- 102100013077 CD4 Human genes 0.000 claims 17
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 claims 17
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 claims 17
- 210000001744 T-Lymphocytes Anatomy 0.000 claims 12
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims 12
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims 8
- 239000012504 chromatography matrix Substances 0.000 claims 8
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 claims 7
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 claims 6
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 claims 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 6
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 claims 5
- 102100008254 SELL Human genes 0.000 claims 4
- 101710038663 SELL Proteins 0.000 claims 4
- 108091008153 T cell receptors Proteins 0.000 claims 4
- 230000004936 stimulating Effects 0.000 claims 4
- 102100008151 CCR7 Human genes 0.000 claims 3
- 102100019459 CD27 Human genes 0.000 claims 3
- 101700056583 CD27 Proteins 0.000 claims 3
- 210000001266 CD8-Positive T-Lymphocytes Anatomy 0.000 claims 3
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 claims 3
- 102100014194 IL7R Human genes 0.000 claims 3
- 101710025228 IL7R Proteins 0.000 claims 3
- 101700036258 MECOM Proteins 0.000 claims 3
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 claims 3
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 claims 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims 3
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 claims 2
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 claims 2
- 102100019461 CD28 Human genes 0.000 claims 2
- 101700033362 CD28 Proteins 0.000 claims 2
- 210000003819 Peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims 2
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 claims 2
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 claims 2
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims 2
- 150000001615 biotins Chemical class 0.000 claims 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims 2
- 230000002441 reversible Effects 0.000 claims 2
- 102100003268 CD14 Human genes 0.000 claims 1
- 101700027514 CD14 Proteins 0.000 claims 1
- 102100003735 CD44 Human genes 0.000 claims 1
- 101700078950 CD44 Proteins 0.000 claims 1
- 230000035687 Dissociation Rate Constant Effects 0.000 claims 1
- 230000036947 Dissociation constant Effects 0.000 claims 1
- 230000035693 Fab Effects 0.000 claims 1
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 claims 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 claims 1
- 206010024324 Leukaemias Diseases 0.000 claims 1
- 210000000265 Leukocytes Anatomy 0.000 claims 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims 1
- 206010025310 Other lymphomas Diseases 0.000 claims 1
- 102100003519 SELP Human genes 0.000 claims 1
- 101700009186 SELP Proteins 0.000 claims 1
- 230000003213 activating Effects 0.000 claims 1
- 238000002617 apheresis Methods 0.000 claims 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 claims 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 230000000139 costimulatory Effects 0.000 claims 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims 1
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 claims 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 claims 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims 1
Claims (88)
1. Способ обогащения CD4+- и CD8+-T-клеток, где способ включает:
(a) проведение в замкнутой системе первого отбора, где указанный первый отбор включает обогащение одного типа из (i) CD4+-клеток и (ii) CD8+-клеток из образца, содержащего первичные T-клетки человека, где обогащение, таким образом, позволяет получать первую популяцию отобранных клеток и популяцию неотобранных клеток; и
(b) проведение в замкнутой системе второго отбора, где указанный второй отбор включает обогащение другого типа из (i) CD4+-клеток и (ii) CD8+-клеток из популяции неотобранных клеток, где обогащение, таким образом, позволяет получать вторую популяцию отобранных клеток.
2. Способ по п. 1, дополнительно включающий инкубацию клеток первой и второй популяции отобранных клеток в стимулирующих условиях.
3. Способ по п. 1 или 2, дополнительно включающий инкубацию генетически сконструированного антигенного рецептора в клетках первой и второй популяции отобранных клеток.
4. Способ по п. 3, где инкубацию клеток первой и второй популяции отобранных клеток проводят до, в течение или после введения генетически сконструированного антигенного рецептора.
5. Способ получения генетически сконструированных T-клеток, где способ включает:
(a) проведение в замкнутой системе первого отбора, где указанный первый отбор включает обогащение одного типа из (i) CD4+-клеток и (ii) CD8+-клеток из образца, содержащего первичные T-клетки человека, где обогащение, таким образом, позволяет получать первую популяцию отобранных клеток и популяцию неотобранных клеток; и
(b) проведение в замкнутой системе второго отбора, где указанный второй отбор включает обогащение другого типа из (i) CD4+-клеток и (ii) CD8+-клеток из популяции неотобранных клеток, где обогащение, таким образом, позволяет получать вторую популяцию отобранных клеток;
(c) инкубацию первой и второй популяции отобранных клеток в емкости для культивирования в стимулирующих условиях, получая, таким образом, стимулированные клетки; и
(d) введение в стимулированные клетки генетически сконструированного антигенного рецептора,
где способ, таким образом, позволяет получать результирующую композицию, содержащую CD4+-T-клетки и CD8+-T-клетки, экспрессирующие генетически сконструированный антигенный рецептор.
6. Способ по любому из пп. 1-5, где одну или более стадий проводят в автоматизированном режиме, или где закрытая система является автоматизированной.
7. Способ по любому из пп. 1-6, где обогащение клеток в первом и/или втором отборах включает проведение положительного отбора или отрицательного отбора на основе экспрессии поверхностного клеточного маркера.
8. Способ по п. 7, где обогащение клеток в первом и/или втором отборах включает отрицательный отбор, который включает обеднение клеток, экспрессирующих не принадлежащий T-клеткам поверхностный маркер.
9. Способ по п. 8, где не принадлежащий T-клеткам маркер включает CD14.
10. Способ по любому из пп. 1-9, где обогащение клеток в первом или втором отборах включает проведение ряда этапов положительного или отрицательного отбора на основе экспрессии поверхностного клеточного маркера или маркеров с обогащением CD4+- или CD8+-клеток.
11. Способ по п. 10, где обогащение клеток включает основанный на аффинности отбор.
12. Способ по п. 11, где основанный на аффинности отбор включает контакт клеток с антителом, способным к специфическому связыванию с поверхностным клеточным маркером, и:
(i) выделения клеток, связанных с антителом, таким образом, проводя положительный отбор, или
(ii) выделение клеток, не связанных с антителом, таким образом, проводя отрицательный отбор, где выделенные клетки обогащены CD4+-клетками или CD8+-клетками.
13. Способ по п. 12, где антитело иммобилизовано на магнитной частице.
14. Способ по п. 12, где антитело иммобилизовано на или прикреплено к аффинному хроматографическому матриксу.
15. Способ по любому из пп. 1-14, где первый отбор и второй отбор проводят в раздельных емкостях для разделения, которые функционально связаны.
16. Способ по п. 15, где емкости для разделения функционально связаны посредством трубок.
17. Способ по любому из пп. 12-16, где антитело представляет собой Fab.
18. Способ по любому из пп. 12-17, где:
антитело дополнительно содержит одного или нескольких партнеров по связыванию, способных к формированию обратимой связи со связывающим реагентом, иммобилизованном на аффинном хроматографическом матриксе, в соответствии с чем антитело в течение указанного контакта обратимо связывается с указанным аффинным хроматографическим матриксом; и
клетки, экспрессирующие поверхностный клеточный маркер, специфически связанные антителом на указанном аффинном хроматографическом матриксе, можно выделять из аффинного хроматографического матрикса посредством разрушения обратимого связывания между связывающим реагентом и партнером по связыванию.
19. Способ по п. 18, где:
партнер по связыванию выбран из числа биотина, аналога биотина и пептида, способного к связыванию со связывающим реагентом; и
связывающий реагент выбран из числа стрептавидина, аналога или мутеина стрептавидина, авидина и аналога или мутеина авидина.
20. Способ по п. 19, где партнер по связыванию содержит последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO:6.
21. Способ по п. 19 или п. 20, где связывающий реагент представляет собой мутеин стрептавидина, содержащий последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15 или SEQ ID NO:16.
22. Способ по любому из пп. 14-21, дополнительно включающий после контакта клеток с антителом, иммобилизованном на или прикрепленному к аффинному хроматографическому матриксу, применение конкурирующего реагента для разрушения связи между партнером по связыванию и связывающим реагентом, таким образом, выделяя выбранные клетки из матрикса.
23. Способ по п. 22, где конкурирующий реагент представляет собой биотин или аналог биотина.
24. Способ по любому из пп. 12-23, где константа скорости диссоциации (koff) антитела для связывания к поверхностному клеточному маркеру составляет более или приблизительно более 3×10-5 сек-1.
25. Способ по любому из пп. 12-24, где антитело обладает аффинностью к поверхностному клеточному маркеру с константой диссоциации (K d ) в диапазоне приблизительно от 10-3 до 10-7 или в диапазоне приблизительно от 10-7 до приблизительно 10-10.
26. Способ по любому из пп. 14-25, где аффинный хроматографический матрикс упакован в емкости для разделения, которая представляет собой колонку.
27. Способ по любому из пп. 14-26, где аффинный хроматографический матрикс адсорбирует или способен к отбору по меньшей мере или по меньшей мере приблизительно 50×106 клеток/мл, 100×106 клеток/мл, 200×106 клеток/мл или 400×106 клеток/мл.
28. Способ по любому из пп. 1-27, где обогащение CD4+-клеток включает положительный отбор на основе поверхностной экспрессии CD4.
29. Способ по любому из пп. 1-28, где обогащение CD8+-клеток включает положительный отбор на основе поверхностной экспрессии CD8.
30. Способ по любому из пп. 1-29, где отбор, который включает обогащение CD8+-клеток, дополнительно включает обогащение центральных T-клеток памяти (TCM).
31. Способ по любому из пп. 1-30, где отбор, который включает обогащение CD8+-клеток, дополнительно включает обогащение клеток, экспрессирующих маркер, выбранных из числа CD28, CD62L, CCR7, CD127 и CD27.
32. Способ по любому из пп. 1-31, где первый отбор включает обогащение CD8+-клеток, а второй отбор включает обогащение CD4+-клеток.
33. Способ по любому из пп. 30-32, где обогащение центральных T-клеток памяти (TCM) или обогащение клеток, экспрессирующих маркер, включает:
отбор из популяции выбранных клеток, которая обогащена CD8+-клетками, клеток, экспрессирующих CD62L;
отбор из популяции выбранных клеток, которая обогащена CD8+-клетками, клеток, экспрессирующих CD27;
отбор из популяции выбранных клеток, которая обогащена CD8+-клетками, клеток, экспрессирующих CCR7;
отбор из популяции выбранных клеток, которая обогащена CD8+-клетками, клеток, экспрессирующих CD28; или
отбор из популяции выбранных клеток, которая обогащена CD8+-клетками, клеток, экспрессирующих CD127.
34. Способ по любому из пп.1-31 и 33, где первый отбор включает обогащение CD4+-клеток, а второй отбор включает обогащение CD8+-клеток.
35. Способ по п. 34, где:
(i) первый отбор включает обогащение CD4+-клеток посредством положительного отбора на основе поверхностной экспрессии CD4, получая, таким образом, первую отобранную популяцию, которая обогащена первичными CD4+-T-клетками человека, и образец с неотобранными клетками;
(ii) второй отбор включает обогащение CD8+-клеток и дополнительно включает обогащение второго выбранного образца центральными T-клетками памяти (TCM), где обогащение центральных T-клеток памяти (TCM) включает:
отрицательный отбор для обеднения клеток, экспрессирующих поверхностный маркер, присутствующий на наивных T-клетках, и положительный отбор клеток, экспрессирующих поверхностный маркер, присутствующий на центральных T-клетках памяти (TCM) и не присутствующий в другой субпопуляции T-клеток памяти; или
положительный отбор клеток, экспрессирующих поверхностный маркер, присутствующий на центральных T-клетках памяти и не присутствующий на наивных T-клетках, и положительный отбор клеток, экспрессирующих поверхностный маркер, присутствующий на центральных T-клетках памяти (TCM) и не присутствующий в другой субпопуляции T-клеток памяти;
получая, таким образом, первичные CD8+-T-клетки человека, обогащенные клетками TCM.
36. Способ по п. 35, где:
маркер, присутствующий на наивных T-клетках, включает CD45RA; и
обогащение центральных T-клеток памяти (TCM) включает отрицательный отбор с обеднением клеток, экспрессирующих CD45RA, и положительный отбор клеток, экспрессирующих поверхностный маркер, присутствующий на центральных T-клетках памяти (TCM) и не присутствующий в другой субпопуляции T-клеток памяти.
37. Способ по п. 36, где:
поверхностный маркер, присутствующий на центральных T-клетках памяти и не присутствующий на наивных T-клетках, включает CD45RO;
обогащение центральных T-клеток памяти (TCM) включает положительный отбор клеток, экспрессирующих CD45RO и положительный отбор клеток, экспрессирующих поверхностный маркер, присутствующий на центральных T-клетках памяти (TCM) и не присутствующий в другой субпопуляции T-клеток памяти.
38. Способ по любому из пп. 35-37, где поверхностный маркер, присутствующий на центральных T-клетках памяти (TCM) и не присутствующий в другой субпопуляции T-клеток памяти, выбран из группы, состоящей из CD62L, CCR7, CD27, CD127 и CD44.
39. Способ по п. 38, где поверхностный маркер, присутствующий на центральных T-клетках памяти (TCM) и не присутствующий в другой субпопуляции T-клеток памяти, представляет собой CD62L.
40. Способ по любому из пп. 30-39, где популяция CD8+-клеток в обогащенной композиции содержит по меньшей мере 50% центральных T-клеток памяти (TCM) или содержит менее 20% наивных T-клеток (TN) или содержит по меньшей мере 80% CD62+-клеток.
41. Способ по любому из пп. 1-40, где способ приводит к результирующей композиции, содержащей соотношение CD4+- и CD8+-клеток, которое составляет от или приблизительно от 2:1 до или приблизительно до 1:5.
42. Способ по п. 41, где соотношение CD4+- и CD8+-клеток в результирующей композиции составляет 1:1 или приблизительно составляет 1:1.
43. Способ по любому из пп. 1-42, где образец получают у индивидуума.
44. Способ по п. 43, где индивидуум страдает злокачественную опухоль.
45. Способ по п. 44, где злокачественная опухоль представляет собой лейкоз или лимфому.
46. Способ по любому из пп. 43-45, где индивидуум представляет собой индивидуума, которому вводят подвергнутые генетической инженерии клетки.
47. Способ по п. 43, где индивидуум представляет собой индивидуума, отличного от индивидуума, которому введут.
48. Способ по любому из пп. 1-47, где образец представляет собой кровь или получаемый из крови образец.
49. Способ по любому из пп. 1-48, где образец представляет собой образец лейкоцитов.
50. Способ по любому из пп. 1-49, где образец представляет собой образец после афереза, образец мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) или образец после лейкафереза.
51. Способ по любому из пп. 1-50, где образец представляет собой образец после лейкафереза.
52. Способ по любому из пп. 2-51, где стимулирующие условия включают условия, в которых пролиферируют T-клетки.
53. Способ по любому из пп. 2-52, где стимулирующие условия включают средство, способное к активации одного или нескольких доменов внутриклеточной сигнализации одного или нескольких компонентов комплекса TCR.
54. Способ по п. 53, где один или несколько компонентов комплекса TCR содержат дзета-цепь CD3.
55. Способ по любому из пп. 2-54, где стимулирующие условия включают присутствие антитела к CD3 и антитела к CD28, антитела к 4-1BB, цитокина или их комбинации.
56. Способ по п. 55, где антитело к CD3 или антитело к CD28 находятся на поверхности твердой подложки.
57. Способ по п. 55 или 56, где цитокин включает IL-2, IL-15, IL-7, IL-21 или их комбинацию.
58. Способ по любому из пп. 3-57, где генетически сконструированный антигенный рецептор включает T-клеточный рецептор (TCR) или функциональный не являющийся TCR антигенный рецептор.
59. Способ по п. 58, где рецептор специфически связывается с антигеном, экспрессируемым клетками подлежащего лечению заболевания или состояния.
60. Способ по любому из пп. 58 или 59, где генетически сконструированный антигенный рецептор представляет собой химерный антигенный рецептор (CAR).
61. Способ по п. 60, где CAR содержит внеклеточный антигенраспознающий домен и домен внутриклеточной сигнализации, содержащий содержащую ITAM последовательность и домен внутриклеточной сигнализации T-клеточной костимулирующей молекулы.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US61/983,415 | 2014-04-23 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016145424A Division RU2763795C2 (ru) | 2014-04-23 | 2015-04-23 | Способы выделения, культивирования и генетической инженерии популяций клеток иммунной системы для адоптивной терапии |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2021136264A true RU2021136264A (ru) | 2022-08-02 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2016145424A (ru) | Способы выделения, культивирования и генетической инженерии популяций клеток иммунной системы для адоптивной терапии | |
| US20230295567A1 (en) | Methods for culturing cells and kits and apparatus for same | |
| US20240191188A1 (en) | Methods for culturing cells and kits and apparatus for same | |
| US20240101613A1 (en) | Oligomeric particle reagents and methods of use thereof | |
| JP2017514517A5 (ru) | ||
| JP2018531035A6 (ja) | 細胞を培養するための方法ならびにそのためのキットおよび装置 | |
| KR20210057730A (ko) | 조작 세포 및 이의 조성물 생성 방법 | |
| US20210393691A1 (en) | Process for producing genetically engineered t cells | |
| KR20200108278A (ko) | 조작된 ｔ 세포의 조성물을 제조하는 방법 | |
| KR20200046045A (ko) | 유전자 조작된 세포를 제조하기 위한 방법 및 조성물 | |
| RU2021136264A (ru) | Способы выделения, культивирования и генетической инженерии популяций клеток иммунной системы для адоптивной терапии | |
| KR20230022868A (ko) | 재조합 수용체를 발현하는 공여자-배치 세포의 제조 방법 | |
| RU2795454C2 (ru) | Способы и композиции для получения генно-инженерных клеток | |
| Lee et al. | Nk-cell immunotherapy for aml |