RU2021134380A - Car-t-клетки, специфически нацеленные на антиген cd19 - Google Patents

Claims (70)

1. Полипептид химерного антигенного рецептора (CAR), содержащий В-лимфоцитарный антиген-связывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен.

2. Полипептид CAR по п. 1, где B-лимфоцитарный антиген представляет собой антиген CD19, антиген CD20 или антиген CD22.

3. Полипептид CAR по п. 1 или 2, где В-лимфоцитарный антиген-связывающий домен представляет собой анти-CD19 функциональный фрагмент антитела.

4. Полипептид CAR по любому из пп. 1-3, где В-лимфоцитарный антиген-связывающий домен представляет собой анти-CD19 одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv).

5. Полипептид CAR по любому из пп. 1-4, где В-лимфоцитарный антиген-связывающий домен содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 9.

6. Полипептид CAR по любому из пп. 1-5, где трансмембранный домен получен из трансмембранного или мембраносвязанного полипептида.

7. Полипептид CAR по любому из пп. 1-6, где трансмембранный домен включает по меньшей мере один трансмембранный домен любого из полипептидов CD28, NKp30, CDS, DAP10, 41BB, DAP12, CD3C, CD3ε, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, KIRDS2, OX40, CD2, CD27, LFA-1, ICOS(CD278), 4-1BB(CD137), GITR, CD40, BAFFR, HVEM (LIGHTR), SLAMF7, NKp80 (KLRF1), CD160, CD19, IL2R β, IL2Rγ, IL7Rα, ITGA1, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, TNFR2, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Tactile), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, PAG/Cbp, их мутанты и любую их комбинацию.

8. Полипептид CAR по любому из пп. 1-7, где трансмембранный домен включает трансмембранный домен CD28 и/или 41BB.

9. Полипептид CAR по любому из пп. 1-8, где сигнальный домен включает, по меньшей мере, один сигнальный домен любого из полипептидов CD8, CD3ζ, CD3δ, CD3γ, CD3ε, FcγRI-γ, FcγRIII-γ, FcεRIβ, FcεRIγ, DAP10, DAP12, CD32, CD79a, CD79b, CD28, CD3C, CD4, b2c, CD137 (41BB), ICOS, CD27, CD28δ, CD80, NKp30, OX40, их мутанты или любую их комбинацию.

10. Полипептид CAR по любому из пп. 1-9, дополнительно содержащий меньшей мере одну костимулирующую сигнальную область.

11. Полипептид CAR по п. 10, где костимулирующая сигнальная область содержит сигнальный домен любого из полипептидов CD8, CD3ζ, CD3δ, CD3γ, CD3ε, FcγRI-γ, FcγRIII-γ, FcεRIβ, FcεRIγ, DAP10, DAP12, CD32, CD79a, CD79b, CD28, CD3C, CD4, b2c, CD137 (41BB), ICOS, CD27, CD28δ, CD80, NKp30, OX40, их мутанты или любую их комбинацию.

12. Полипептид CAR по п. 10, где костимулирующая сигнальная область содержит сигнальный домен CD28 или его мутант.

13. Полипептид CAR по п. 12, где сигнальный домен CD28 содержит по меньшей мере одну или более мутаций в любом из субдоменов YMNM, PRRP, PYAP или любую их комбинацию.

14. Полипептид CAR по п. 12 или 13, где в сигнальном домене CD28 отсутствует один из субдоменов YMNM, PRRP, PYAP.

15. Полипептид CAR по любому из пп. 12-14, где в сигнальном домене CD28 отсутствуют любые два субдомена, выбранные из YMNM, PRRP или PYAP.

16. Полипептид CAR по п. 10 или 11, где костимулирующая сигнальная область включает сигнальный домен CD137 (41BB) или его мутант.

17. Полипептид CAR по любому из пп. 1-16, где, по меньшей мере, один, сигнальный домен содержит нативный CD3ζ или его мутант.

18. Полипептид CAR по п. 17, где в мутантном CD3ζ отсутствует С-концевой иммунорецепторный мотив активации на основе тирозина (ITAM).

19. Полипептид CAR по п. 17, где в мутантном CD3ζ отсутствует два С-концевых иммунорецепторных мотивов активации на основе тирозина (ITAM).

20. Полипептид CAR по п. 17, где мутантный CD3ζ содержит только один иммунорецепторный мотив активации на основе тирозина (ITAM).

21. Полипептид CAR по любому из пп. 17-20, где мутантный CD3ζ содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 11.

22. Полипептид CAR по любому из пп. 1-21, дополнительно содержащий шарнирную последовательность.

23. Полипептид CAR по п. 22, где шарнирная последовательность получена из молекулы CD3α или молекулы CD28.

24. Полипептид CAR по любому из пп. 1-23, дополнительно содержащий сигнальный пептид.

25. Полипептид CAR по п. 24, где сигнальный пептид получен из лидерной последовательности CD3α.

26. Полипептид CAR по любому из пп. 1-25, содержащий любую из аминокислотных последовательностей, показанных в SEQ ID NO: 6-11, любой их фрагмент или любую их комбинацию.

27. Полипептид CAR по любому из пп. 1-25, содержащий аминокислотные последовательности, показанные в SEQ ID NO: 7.

28. Нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид CAR по любому из пп. 1-27.

29. Нуклеиновая кислота по п. 28, содержащая любую из нуклеотидных последовательностей, показанных в SEQ ID NO: 1-5, их фрагмент или любую их комбинацию.

30. Нуклеиновая кислота по п. 28, содержащая нуклеотидную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 1.

31. Вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по любому из пп. 28-30.

32. Иммунная клетка, содержащая нуклеиновую кислоту по любому из пп. 28-30.

33. Иммунная клетка, содержащая вектор по п. 32.

34. Иммунная клетка, экспрессирующая полипептид CAR по любому из пп. 1-27.

35. Иммунная клетка по любому из пп. 32-34, где иммунная клетка представляет собой лейкоцит.

36. Иммунная клетка по любому из пп. 32-35, где иммунная клетка представляет собой лимфоцит, моноцит, макрофаг, дендритную клетку, тучную клетку, нейтрофил, базофил или эозинофил.

37. Иммунная клетка по любому из пп. 32-36, где иммунная клетка представляет собой лимфоцит, выбранный из αβT-клетки, γδT-клетки, естественного киллера (NK), естественной Т-клетки-киллера (NKT), B-клетки, врожденной лимфоидной клетки (ILC), цитокин-индуцированной клетки-киллера (CIK), цитотоксического Т-лимфоцита (CTL), лимфокин-активированной клетки-киллера (LAK) или регуляторной Т-клетки или любой их комбинации.

38. Иммунная клетка по п. 37, где иммунная клетка представляет собой цитотоксический Т-лимфоцит (CTL).

39. Иммунная клетка по п. 37 или 38, где иммунная клетка представляет собой сенсибилизированный вирусным антигеном CTL.

40. Иммунная клетка по любому из пп. 37-39, где иммунная клетка представляет собой CTL, сенсибилизированный к вирусному антигену любого из вируса Эпштейна-Барра (EBV), цитомегаловируса (CMV), вируса B.K. (BKV), вируса Джона Каннингема (JCV), пикорнавируса (например, вируса гепатита А), гепаднавируса (например, вируса гепатита В), гепацивируса (например, вируса гепатита С), дельтавируса (например, вируса гепатита D), гепевируса (например, вируса гепатита Е) или любой их комбинации.

41. Иммунная клетка по любому из пп. 37-40, где иммунная клетка представляет собой EBV-сенсибилизированный CTL.

42. Биспецифический химерный антигенный рецептор (CAR)-Т-клетка, экспрессирующая:

(а) полипептид CAR, который избирательно связывается с В-лимфоцитарным антигеном, и

(b) полипептид CAR, который избирательно связывается с опухоль-ассоциированным антигеном.

43. Биспецифический химерный антигенный рецептор (CAR)-Т-клетка по п. 42, где В-лимфоцитарный антиген представляет собой антиген CD19, антиген CD20 или антиген CD22.

44. Биспецифический CAR-Т-клетка по п. 39 или 40, где опухоль-ассоциированный антиген представляет собой GPC3, MAGE-A1, MAGE-A2, MAGE-C2, SSX-2, Ny-ESO-1, hTERT или антиген вируса гепатита.

45. Биспецифический CAR-Т-клетка по любому из пп. 42-44, где каждый антигенсвязывающий домен химерных антигенных рецепторов содержит функциональный фрагмент антитела.

46. Биспецифический CAR-Т-клетка по любому из пп. 42-45, где каждый антигенсвязывающий домен химерных антигенных рецепторов содержит одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv).

47. Биспецифический CAR-Т-клетка по любому из пп.42-46, где трансмембранный домен химерных антигенных рецепторов содержит по меньшей мере один трансмембранный домен любого из CD28, 41BB, их мутантов или любой их комбинации.

48. Биспецифический CAR-Т-клетка по любому из пп. 42-47, где сигнальный домен по меньшей мере одного из химерных антигенных рецепторов содержит по меньшей мере один сигнальный домен CD3ζ, его мутанты или любую их комбинацию.

49. Биспецифический CAR-Т-клетка по любому из пп. 42-47, где каждый сигнальный домен химерных антигенных рецепторов содержит по меньшей мере один сигнальный домен CD3ζ, его мутанты или любую их комбинацию.

50. Биспецифический CAR-Т-клетка по п. 48 или 49, где в мутантном CD3ζ отсутствует С-концевой иммунорецепторный мотив активации на основе тирозина (ITAM).

51. Биспецифический CAR-Т-клетка по п. 48 или 49, где в мутантном CD3ζ отсутствует два С-концевых иммунорецепторных мотивов активации на основе тирозина (ITAM).

52. Биспецифический CAR-Т-клетка по п. 48 или 49, где мутантный CD3ζ содержит только один иммунорецепторный мотив активации на основе тирозина (ITAM).

53. Биспецифический CAR-Т-клетка по любому из пп. 42-52, где, по меньшей мере, один из химерных антигенных рецепторов содержит, по меньшей мере, одну костимулирующую сигнальную область.

54. Биспецифический CAR-Т-клетка по любому из пп. 42-52, где каждый химерный антигенный рецептор содержит, по меньшей мере, одну костимулирующую сигнальную область.

55. Биспецифический CAR-Т-клетка по п. 53 или 54, где костимулирующая сигнальная область включает сигнальный домен любого из CD28 или его мутанта, CD137 (41BB) или его мутанта, или любой их комбинации.

56. Биспецифический CAR-Т-клетка CAR по п. 55, где сигнальный домен CD28 содержит, по меньшей мере, одну или более мутаций в любом из субдоменов YMNM, PRRP, PYAP или любую их комбинацию.

57. Биспецифический CAR-Т-клетка CAR по п. 55 или 56, где в сигнальном домене CD28 отсутствует функция, по меньшей мере, одного субдомена, выбранного из YMNM, PRRP или PYAP.

58. Биспецифический CAR-Т-клетка по любому из пп. 55-57, где в сигнальном домене CD28 отсутствует функция любых двух субдоменов, выбранных из YMNM, PRRP или PYAP.

59. Биспецифический CAR-Т-клетка по любому из пп. 42-58, дополнительно содержащий шарнирную последовательность, полученную из CD8a или CD28.

60. Способ лечения рака, ассоциированного с В-лимфоцитарным антигеном, у субъекта, включающий введение эффективного количества композиции для адоптивной иммунотерапии, содержащей CAR-экспрессирующие клетки по любому из пп. 32-59.

61. Способ по п. 60, где рак, ассоциированный с В-лимфоцитарным антигеном, представляет собой гематологическое злокачественное заболевание, выбранное из: острого лейкоза, хронического лейкоза, лимфоцитарного лейкоза, миелоидного лейкоза, предлейкозного состояния, лимфомы Ходжкина, неходжкинской лимфомы, EBV-ассоциированного лимфопролиферативного заболевания, новообразования из зрелых В-клеток, новообразования из зрелых Т-клеток и/или естественных киллеров (NK), новообразования из лимфоидных предшественников и лимфопролиферативного расстройства, ассоциированного с иммунодефицитом.

62. Способ по п. 60 или 61, где рак, ассоциированный с В-лимфоцитарным антигеном, представляет собой EBV-ассоциированное лимфопролиферативное заболевание.

63. Способ по любому из пп. 60-62, где субъект получил, получает или будет получать дополнительное противоопухолевое лечение.

64. Способ по п. 63, где дополнительное противоопухолевое лечение включает хирургическое вмешательство, лучевую терапию, химиотерапию, иммунотерапию или гормональную терапию.

65. Способ по любому из пп. 60-64, где композицию для адоптивной иммунотерапии вводят внутриплеврально, внутривенно, подкожно, интранодально, интратуморально, интратекально, внутрибрюшинно, интракраниально или прямым введением в орган.

66. Способ по любому из пп. 60-65, где субъектом является человек.

67. Способ по п. 66, где CAR-экспрессирующие клетки в композиции для адоптивной иммунотерапии получены от субъекта.

68. Способ по п. 67, где CAR-экспрессирующие клетки в композиции для адоптивной иммунотерапии получены из донорского образца или из банка или библиотеки донорских образцов.