RU2021130990A - КОДОН-ОПТИМИЗИРОВАННЫЕ СИНТЕТИЧЕСКИЕ НУКЛЕОТИДНЫЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ, КОДИРУЮЩИЕ БЕЛОК CRY2Ai, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ - Google Patents

Claims (28)

1. Кодон-оптимизированная синтетическая нуклеотидная последовательность, кодирующая белок, имеющий аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 1, где указанная нуклеотидная последовательность представляет собой

a. последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 2, или комплементарную ей нуклеотидную последовательность, или

b. нуклеотидную последовательность, которая специфически гибридизуется с по меньшей мере 10 нуклеотидами нуклеотидной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 2, в положениях нуклеотидов от 251 до 402 и/или от 1456 до 1628, или комплементарную ей последовательность.

2. Кодон-оптимизированная синтетическая нуклеотидная последовательность по п. 1, где нуклеотидная последовательность, которая специфически гибридизуется с нуклеотидной последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 2, выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 7.

3. Рекомбинантная ДНК, содержащая кодон-оптимизированную синтетическую нуклеотидную последовательность по п. 1, где нуклеотидная последовательность функционально связана с гетерологичным регуляторным элементом.

4. Рекомбинантная ДНК по п. 3, где указанная кодон-оптимизированная синтетическая нуклеотидная последовательность, необязательно, содержит ген селективного маркера, ген репортера или их сочетание.

5. Рекомбинантная ДНК по п. 3, где указанная кодон-оптимизированная синтетическая нуклеотидная последовательность, необязательно, содержит последовательность ДНК, кодирующую направляющий или транзитный пептид для направления к вакуоли, митохондрии, хлоропласту, пластиде, или для секреции.

6. Конструкция ДНК для экспрессии интересующего инсектицидного белка, содержащая 5'-нетранслируемую последовательность, кодирующую последовательность, кодирующую инсектицидный белок Cry2Ai, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, или его инсектицидный фрагмент, и 3’-нетранслируемую область, где указанная 5’-нетранслируемая последовательность содержит промотор, функциональный в растительной клетке, где указанная кодирующая последовательность представляет собой кодон-оптимизированную синтетическую нуклеотидную последовательность по п. 1, и где указанная 3’-нетранслируемая последовательность содержит последовательность терминации транскрипции и сигнал полиаденилирования.

7. Плазмидный вектор, содержащий рекомбинантную ДНК по п. 3 или конструкцию ДНК по п. 6.

8. Клетка-хозяин, содержащая кодон-оптимизированную синтетическую нуклеотидную последовательность по п. 1.

9. Клетка-хозяин по п. 8, которая представляет собой клетку растения, бактериальную клетку, вирус, клетку грибов или дрожжей.

10. Клетка-хозяин по п. 9, где указанная бактериальная клетка представляет собой клетку Agrobacterium или E. coli.

11. Способ придания растению устойчивости к насекомым, включающий

a. введение в растительную клетку кодон-оптимизированной синтетической нуклеотидной последовательности по п. 1, где нуклеотидная последовательность функционально связана с (i) промотором, функциональным в растительной клетке, и (ii) терминатором;

b. получение трансформированной растительной клетки из растительной клетки этапа (a), где указанная трансформированная растительная клетка содержит указанную кодон-оптимизированную синтетическую нуклеотидную последовательность по п. 1; и

c. получение трансгенного растения из указанной трансформированной растительной клетки этапа (b), где указанное трансгенное растение содержит указанную кодон-оптимизированную синтетическую нуклеотидную последовательность по п. 1.

12. Трансгенное растение, полученное способом по п. 11.

13. Трансгенное растение, содержащее кодон-оптимизированную синтетическую нуклеотидную последовательность по п. 1.

14. Трансгенное растение по п. 12 или 13, выбранное из группы, состоящей из риса, пшеницы, кукурузы, сорго, овса, проса, бобовых растений, хлопчатника, томата, баклажана, капусты, цветной капусты, брокколи, видов Brassica, фасоли, гороха, голубиного гороха, картофеля, перца, тыквенных, салата, сладкого картофеля, канолы, сои, люцерны, арахиса, подсолнечника, сафлора, табака, сахарного тростника, маниоки, кофе, ананаса, цитрусовых, какао, чая, банана и дыни.

15. Ткань, семя или потомок от трансгенного растения по п. 12 или 13, где указанное семя или потомок содержит кодон-оптимизированную синтетическую нуклеотидную последовательность по п. 1.

16. Биологический образец, полученный из тканей или семян, или потомков по п. 15, который содержит поддающееся обнаружению количество указанной кодон-оптимизированной синтетической нуклеотидной последовательности по п. 1.

17. Товарный продукт, полученный из трансгенного растения по п. 12 или 13, который содержит поддающееся обнаружению количество указанной кодон-оптимизированной синтетической нуклеотидной последовательности по п. 1.

18. Композиция, содержащая Bacillus thuringiensis, содержащую кодон-оптимизированную синтетическую нуклеотидную последовательность по п. 1, кодирующую белок Cry2Ai, имеющий аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 1.

19. Композиция по п. 18, которая, необязательно, содержит дополнительное инсектицидное средство, токсичное для того же насекомого-вредителя, но имеющее механизм его инсектицидного действия, отличный от механизма действия указанного инсектицидного белка.

20. Композиция по п. 19, где указанное инсектицидное средство выбрано из группы, состоящей из токсина Bacillus, токсина Xenorhabdus, токсина Photorhabdus и дцРНК, специфически подавляющей один или более важных генов у указанного насекомого-вредителя.

21. Способ борьбы с насекомыми, поражающими сельскохозяйственные растения, и обеспечения устойчивости к насекомым, включающий создание контакта указанного сельскохозяйственного растения с эффективным для инсектицидного действия количеством композиции по п. 18.

22. Применение кодон-оптимизированной синтетической нуклеотидной последовательности по п. 1, конструкции ДНК по п. 6 или плазмиды по п. 7 для производства устойчивых к насекомым трансгенных растений.

23. Применение кодон-оптимизированной синтетической нуклеотидной последовательности по п. 1 для производства инсектицидной композиции, которая содержит клетки Bacillus thuringiensis, содержащие указанные нуклеотидные последовательности.