RU2021122332A

RU2021122332A - Последовательность нуклеиновой кислоты для выявления растения кукурузы dbn9501 и способ его выявления

Info

Publication number: RU2021122332A
Application number: RU2021122332A
Authority: RU
Inventors: Хайли Лю; Юецзин КАН; Чэн Ван; Лицзюнь Ван; Фэн Ли; Лянцзюнь ЧЖАН; Дэжун ДИН; Сяомин Бао
Original assignee: Бэйджин Дабэйнун Биотекнолоджи Ко., Лтд.
Priority date: 2019-04-09
Filing date: 2020-02-21
Publication date: 2023-05-10

Claims

1. Последовательность нуклеиновой кислоты, отличающаяся тем, что она содержит по меньшей мере 11 последовательных нуклеотидов в положениях 1-384 SEQ ID NO: 3 или ее комплементарной последовательности и по меньшей мере 11 последовательных нуклеотидов в положениях 385-768 SEQ ID NO: 3 или ее комплементарной последовательности; и/или по меньшей мере 11 последовательных нуклеотидов в положениях 1-564 SEQ ID NO: 4 или ее комплементарной последовательности и по меньшей мере 11 последовательных нуклеотидов в положениях 565-1339 SEQ ID NO: 4 или ее комплементарной последовательности;

предпочтительно, указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит 22-25 последовательных нуклеотидов в положениях 1-384 SEQ ID NO: 3 или ее комплементарной последовательности и 22-25 последовательных нуклеотидов в положениях 385-768 SEQ ID NO: 3 или ее комплементарной последовательности; и/или 22-25 последовательных нуклеотидов в положениях 1-564 SEQ ID NO: 4 или ее комплементарной последовательности и 22-25 последовательных нуклеотидов в положениях 565-1339 SEQ ID NO: 4 или ее комплементарной последовательности;

предпочтительно, указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит SEQ ID NO: 1 или ее комплементарную последовательность и/или SEQ ID NO: 2 или ее комплементарную последовательность;

предпочтительно, указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит SEQ ID NO: 3 или ее комплементарную последовательность и/или SEQ ID NO: 4 или ее комплементарную последовательность.

2. Последовательность нуклеиновой кислоты по п. 1, отличающаяся тем, что указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит SEQ ID NO: 5 или ее комплементарную последовательность.

3. Способ выявления наличия ДНК трансгенного объекта - кукурузы DBN9501 в образце, отличающийся тем, что он включает:

приведение образца, подлежащего выявлению, в контакт с по меньшей мере двумя праймерами для амплификации целевого продукта амплификации в реакции амплификации нуклеиновой кислоты;

проведение реакции амплификации нуклеиновой кислоты;

выявление наличия целевого продукта амплификации;

где указанный целевой продукт амплификации содержит последовательность нуклеиновой кислоты по п. 1 или п. 2;

предпочтительно, указанный целевой продукт амплификации содержит SEQ ID NO: 1 или ее комплементарную последовательность, SEQ ID NO: 2 или ее комплементарную последовательность, SEQ ID NO: 6 или ее комплементарную последовательность и/или SEQ ID NO: 7 или ее комплементарную последовательность.

4. Способ выявления наличия ДНК трансгенного объекта - кукурузы DBN9501 в образце по п. 3, отличающийся тем, что праймеры включают первый праймер и второй праймер, где первый праймер выбран из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 10; и второй праймер выбран из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 11.

5. Способ выявления наличия ДНК трансгенного объекта - кукурузы DBN9501 в образце, отличающийся тем, что он включает

приведение образца, подлежащего выявлению, в контакт с зондом, где зонд содержит последовательность нуклеиновой кислоты по п. 1; предпочтительно зонд содержит SEQ ID NO: 1 или ее комплементарную последовательность, SEQ ID NO: 2 или ее комплементарную последовательность, SEQ ID NO: 6 или ее комплементарную последовательность и/или SEQ ID NO: 7 или ее комплементарную последовательность;

гибридизацию образца, подлежащего выявлению, с зондом в жестких условиях гибридизации; и

выявление гибридизации образца, подлежащего выявлению, с зондом.

6. Способ выявления наличия ДНК трансгенного объекта - кукурузы DBN9501 в образце по п. 5, отличающийся тем, что по меньшей мере один зонд мечен по меньшей мере одним флуорофором.

7. Способ выявления наличия ДНК трансгенного объекта-кукурузы DBN9501 в образце, отличающийся тем, что он включает

приведение образца, подлежащего выявлению, в контакт с маркерной молекулой нуклеиновой кислоты, где указанная маркерная молекула нуклеиновой кислоты содержит последовательность нуклеиновой кислоты по п. 1; предпочтительно указанная маркерная молекула нуклеиновой кислоты содержит по меньшей мере одну последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 или ее комплементарной последовательности, SEQ ID NO: 2 или ее комплементарной последовательности и/или SEQ ID NO: 6-11 или их комплементарных последовательностей;

гибридизацию образца, подлежащего выявлению, с маркерной молекулой нуклеиновой кислоты в жестких условиях гибридизации;

выявление гибридизации образца, подлежащего выявлению, с маркерной молекулой нуклеиновой кислоты и дополнительно проведение анализа скрещивания с помощью маркера для определения того, связана ли генетически устойчивость к насекомым и/или устойчивость к гербициду с маркерной молекулой нуклеиновой кислоты.

8. Набор для выявления ДНК, отличающийся тем, что он содержит по меньшей мере одну молекулу ДНК, где указанная молекула ДНК содержит последовательность нуклеиновой кислоты по п. 1, при этом указанная молекула ДНК может действовать в качестве ДНК праймера или зонда, специфичного в отношении трансгенного объекта - кукурузы DBN9501 или его потомства; предпочтительно, указанная молекула ДНК содержит SEQ ID NO: 1 или ее комплементарную последовательность, SEQ ID NO: 2 или ее комплементарную последовательность, SEQ ID NO: 6 или ее комплементарную последовательность и/или SEQ ID NO: 7 или ее комплементарную последовательность.

9. Способ защиты растения кукурузы от нашествия насекомых, отличающийся тем, что он включает предоставление по меньшей мере одной трансгенной растительной клетки кукурузы в рацион целевого насекомого, где указанная трансгенная растительная клетка кукурузы содержит в своем геноме последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 1, и/или SEQ ID NO: 2; причем поглощение указанной трансгенной растительной клетки кукурузы ингибирует дальнейшее питание целевого насекомого указанным трансгенным растением кукурузы;

предпочтительно, указанная трансгенная растительная клетка кукурузы сдержит в своем геноме последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 3 и/или SEQ ID NO: 4;

предпочтительно, указанная трансгенная растительная клетка кукурузы последовательно содержит в своем геноме SEQ ID NO: 1, последовательность нуклеиновой кислоты в положениях 553-7491 SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 2 или содержит последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 5.

10. Способ защиты растения кукурузы от повреждения, вызываемого гербицидом, или борьбы с сорняками в поле возделывания растения кукурузы, отличающийся тем, что он включает внесение эффективного количества гербицида глюфосинат в поле возделывания по меньшей мере одного трансгенного растения кукурузы, где указанное трансгенное растение кукурузы содержит в своем геноме последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 1 и/или SEQ ID NO: 2, при этом указанное трансгенное растение кукурузы обладает устойчивостью к гербициду глюфосинат;

предпочтительно, указанное трансгенное растение кукурузы содержит в своем геноме последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 3 и/или SEQ ID NO: 4;

предпочтительно, указанное трансгенное растение кукурузы последовательно содержит в своем геноме SEQ ID NO: 1, последовательность нуклеиновой кислоты в положениях 553-7491 SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 2 или содержит последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 5.

11. Способ скрещивания растения кукурузы, устойчивого к насекомым и/или устойчивого к гербициду глюфосинат, отличающийся тем, что он включает:

посадку по меньшей мере одного семени кукурузы, где указанное семя кукурузы содержит в своем геноме последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок устойчивости к насекомым Vip3Aa, и/или последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок устойчивости к гербициду глюфосинат PAT, и последовательность нуклеиновой кислоты специфичной области, или указанное семя кукурузы содержит в своем геноме последовательность нуклеиновой кислоты, как изложено в SEQ ID NO: 5;

выращивание семени кукурузы в растение кукурузы; и

поражение растения кукурузы целевым насекомым и/или опрыскивание растения кукурузы эффективным количеством гербицида глюфосинат и затем сбор урожая растения со сниженным повреждением растения по сравнению с другими растениями, которые не содержат последовательность нуклеиновой кислоты специфичной области;

где последовательность нуклеиновой кислоты специфичной области представляет собой последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 1 и/или SEQ ID NO: 2; предпочтительно, последовательность нуклеиновой кислоты специфичной области представляет собой последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 3 и/или SEQ ID NO: 4.

12. Способ получения растения кукурузы, устойчивого к насекомым и/или устойчивого к гербициду глюфосинат, отличающийся тем, что он включает:

введение последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок устойчивости к насекомым Vip3Aa, и/или последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок устойчивости к гербициду глюфосинат PAT, и последовательности нуклеиновой кислоты специфичной области в геноме первого растения кукурузы или последовательности нуклеиновой кислоты, как изложено в SEQ ID NO: 5, в геноме первого растения кукурузы во второе растение кукурузы, получая, таким образом, множество растений потомства; и

отбор растений потомства, содержащих последовательность нуклеиновой кислоты специфичной области, которые также устойчивы к насекомым и/или устойчивы к гербициду глюфосинат;

где последовательность нуклеиновой кислоты специфичной области представляет собой последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 1 и/или SEQ ID NO: 2; предпочтительно, последовательность нуклеиновой кислоты специфичной области представляет собой последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 3 и/или SEQ ID NO: 4;

предпочтительно, указанный способ включает:

половое скрещивание трансгенного объекта - кукурузы DBN9501 с растением кукурузы, которое не обладает признаком устойчивости к насекомым и/или устойчивости к гербициду глюфосинат, с получением, таким образом, множества растений потомства; и отбор растений потомства, содержащих последовательность нуклеиновой кислоты специфичной области;

поражение растений потомства целевым насекомым и/или обработку растений потомства гербицидом глюфосинат; и

отбор растений потомства, которые обладают устойчивостью к насекомым и/или устойчивостью к гербициду глюфосинат.

13. Сельскохозяйственный продукт или товар, происходящий из трансгенного объекта - кукурузы DBN9501, отличающийся тем, что сельскохозяйственный продукт или товар представляет собой кукурузную крупу, кукурузную муку, кукурузное масло, кукурузные столбики с рыльцами, кукурузный крахмал, кукурузный глютен, кукурузную лепешку, косметическое средство или агент-наполнитель.