RU2021121021A - Способы получения гетеродимерных антител - Google Patents
Способы получения гетеродимерных антител Download PDFInfo
- Publication number
- RU2021121021A RU2021121021A RU2021121021A RU2021121021A RU2021121021A RU 2021121021 A RU2021121021 A RU 2021121021A RU 2021121021 A RU2021121021 A RU 2021121021A RU 2021121021 A RU2021121021 A RU 2021121021A RU 2021121021 A RU2021121021 A RU 2021121021A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- region
- antibody
- mixture
- seq
- homodimeric
- Prior art date
Links
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 title claims 47
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 title claims 47
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 29
- 239000003638 reducing agent Substances 0.000 claims 15
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M buffer Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 10
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N Cysteamine Chemical group NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 8
- 102000018358 Immunoglobulins Human genes 0.000 claims 8
- 108060003951 Immunoglobulins Proteins 0.000 claims 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 8
- 229960003151 Mercaptamine Drugs 0.000 claims 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims 6
- 230000000051 modifying Effects 0.000 claims 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 5
- 102100014838 FCGRT Human genes 0.000 claims 4
- 101710003435 FCGRT Proteins 0.000 claims 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims 4
- 102000017256 epidermal growth factor-activated receptor activity proteins Human genes 0.000 claims 4
- 108040009258 epidermal growth factor-activated receptor activity proteins Proteins 0.000 claims 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims 3
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N oxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- BGFTWECWAICPDG-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(4-chlorophenyl)methyl]-4-N-[3-[bis(4-chlorophenyl)methyl]-4-(dimethylamino)phenyl]-1-N,1-N-dimethylbenzene-1,4-diamine Chemical compound C1=C(C(C=2C=CC(Cl)=CC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)C(N(C)C)=CC=C1NC(C=1)=CC=C(N(C)C)C=1C(C=1C=CC(Cl)=CC=1)C1=CC=C(Cl)C=C1 BGFTWECWAICPDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 102000006942 B-Cell Maturation Antigen Human genes 0.000 claims 2
- 108010008014 B-Cell Maturation Antigen Proteins 0.000 claims 2
- 210000003996 CFU-GM Anatomy 0.000 claims 2
- 229960002433 Cysteine Drugs 0.000 claims 2
- XUJNEKJLAYXESH-UWTATZPHSA-N D-cysteine Chemical compound SC[C@@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UWTATZPHSA-N 0.000 claims 2
- 102100015545 FCGR2A Human genes 0.000 claims 2
- 102100015543 FCGR2B Human genes 0.000 claims 2
- 102100015541 FCGR3A Human genes 0.000 claims 2
- 101710044656 FCGR3A Proteins 0.000 claims 2
- 101710044657 FCGR3B Proteins 0.000 claims 2
- 108010021468 Fc gamma receptor IIA Proteins 0.000 claims 2
- 108010021472 Fc gamma receptor IIB Proteins 0.000 claims 2
- 101700009480 Fcgr3 Proteins 0.000 claims 2
- RQFCJASXJCIDSX-UUOKFMHZSA-N Guanosine monophosphate Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O RQFCJASXJCIDSX-UUOKFMHZSA-N 0.000 claims 2
- 102100018760 IL3RA Human genes 0.000 claims 2
- 101700029869 IL3RA Proteins 0.000 claims 2
- 229940072221 IMMUNOGLOBULINS Drugs 0.000 claims 2
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 claims 2
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 claims 2
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 claims 2
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 claims 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 claims 2
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims 2
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims 2
- 235000013928 guanylic acid Nutrition 0.000 claims 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims 2
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 claims 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims 1
Claims (84)
1. Способ получения гетеродимерного антитела, включающий
a) обеспечение первого гомодимерного антитела, содержащего первую Fc-область иммуноглобулина, содержащую первую область CH3, и второго гомодимерного антитела, содержащего вторую Fc-область иммуноглобулина, содержащую вторую область CH3, где аминокислотные последовательности первой области CH3 и второй области CH3 различны и таковы, что гетеродимерное взаимодействие между первой областью CH3 и второй областью CH3 сильнее, чем гомодимерное взаимодействие между первой областью CH3 или гомодимерное взаимодействие между второй областью CH3;
b) объединение первого гомодимерного антитела и второго гомодимерного антитела в смесь;
c) инкубацию смеси в присутствии восстанавливающего агента и растворенного кислорода окружающей среды (DO2), с получением гетеродимерного антитела, где в способе отсутствует одна или более стадий измерения процентного содержания (%) DO2 в смеси, контроля процентного содержания DO2 в смеси или добавления кислорода в смесь во время получения гетеродимерного антитела.
2. Способ по п.1, где % DO2 в смеси составляет примерно 30% или более на стадии 1b).
3. Способ по п.1 или 2, где % DO2 составляет от примерно 10% до примерно 90% во время получения гетеродимерного антитела.
4. Способ по любому из пп.1-3, где первое гомодимерное антитело и второе гомодимерное антитело объединяют в смесь на стадии 1b) в молярном соотношении от примерно 1:1 до примерно 1:2.
5. Способ по любому из пп.1-3, где первое гомодимерное антитело и второе гомодимерное антитело объединяют в смесь на стадии 1b) в молярном соотношении примерно 1,05:1.
6. Способ по любому из пп.1-5, где общая концентрация иммуноглобулина в смеси составляет от примерно 8 г/л до примерно 13 г/л, как например примерно 10,5 г/л.
7. Способ по любому из пп.1-6, где смесь инкубируют в присутствии восстанавливающего агента в течение примерно 10 минут или дольше.
8. Способ по п.7, где смесь инкубируют в присутствии восстанавливающего агента от примерно 10 минут до примерно 24 часов.
9. Способ по любому из пп.1-8, где восстанавливающий агент представляет собой 2-меркаптоэтиламин (2-MEA), химическое производное 2-MEA, L-цистеин или D-цистеин.
10. Способ по п.9, где концентрация 2-MEA в смеси составляет примерно от 20 до 40 мМ, как например примерно 35 мМ.
11. Способ по любому из пп.1-10, где смесь содержит буфер.
12. Способ по п.11, где буфер включает натрий ацетатный буфер.
13. Способ по п.12, где буфер дополнительно содержит NaCl.
14. Способ по п.13, где буфер содержит примерно 100 мМ ацетата натрия и примерно 30 мМ NaCl.
15. Способ по п.14, где pH буфера составляет примерно 7,3.
16. Способ по любому из пп.1-15, включающий стадию удаления восстанавливающего агента из смеси.
17. Способ по п.16, где восстанавливающий агент удаляют фильтрацией.
18. Способ по п.17, где фильтрация представляет собой диафильтрацию.
19. Способ по любому из пп.1-18, где первое гомодимерное антитело и второе гомодимерное антитело представляют собой изотип IgG1, IgG2 или IgG4.
20. Способ по п.19, где первый домен CH3 и второй домен CH3 содержат следующие мутации по сравнению с IgG1 дикого типа SEQ ID NO: 1, IgG2 дикого типа SEQ ID NO: 2 или IgG4 дикого типа SEQ ID NO: 3: F405L/K409R, дикий тип/F405L_R409K,
T350I_K370T_F405L/K409R, K370W/K409R, D399AFGHILMNRSTVWY/K409R, T366ADEFGHILMQVY/K409R, L368ADEGHNRSTVQ/K409AGRH, D399FHKRQ/K409AGRH, F405IKLSTVW/K409AGRH, Y407LWQ/K409AGRH, T366Y/F405A, T366W/F405W, F405W/Y407A, T394W/Y407T, T394S/Y407A, T366W/T394S, F405W/T394S, T366W/T366S_L368A_Y407V, L351Y_F405A_Y407V/T394W, T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V, T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V, L351Y_Y407A/T366A_K409F, L351Y_Y407A/T366V_K409F, Y407A/T366A_K409F, T350V_L351Y_F405A_Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W, K409D/D399K, K409E/D399R, K409D_K360D/D399K_E356K, K409D_K360D/D399E_E356K, K409D_K370D/D399K_E357K, K409D_K370D/D399E_E357K, K409D_K392D/D399K_E356K_E357K или K409D_K392D/D399E_E356K_E357K.
21. Способ по п.20, где первая Fc-область и/или вторая Fc-область содержит одну или более мутаций по сравнению с IgG1 дикого типа SEQ ID NO: 1, IgG2 дикого типа SEQ ID NO: 2 или IgG4 дикого типа SEQ ID NO: 3, которые модулируют связывание первой Fc-области и/или второй Fc-области с рецептором Fcγ (FcγR), FcRn или с протеином A.
22. Способ по п.21, где FcγR представляет собой FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb или FcγRIII.
23. Способ по п.21, где одна или более замен, которые модулируют связывание первой Fc-области и/или второй Fc-области с Fcγ, представляют собой L234A_L235A, F234A_L235A,
S228P_F234A_L235A, S228P_L234A_L235A, V234A_G237A_P238S_H268A_V309L_A330S_P331S, V234A_G237A, H268Q_V309L_A330S_P331S, S267E_L328F, L234F_L235E_D265A, L234A_L235A_G237A_P238S_H268A_A330S_P331S или S228P_F234A_L235A_G237A_P238S.
24. Способ по п.21, где одна или более замен, которые модулируют связывание первой Fc-области и/или второй Fc-области с FcRn, представляют собой M428L_N434S, M252Y_S254T_T256E, T250Q_M428L, N434A и T307A_E380A_N434A, H435A, P257I_N434H, D376V_N434H, M252Y_S254T_T256E_H433K_N434F, T308P_N434A или H435R.
25. Способ по п.21, где одна или более замен, которые модулируют связывание первой Fc-области и/или второй Fc-области с протеином А, представляют собой Q311R, Q311K, T307P_L309Q, T307P_V309Q, T307P_L309Q_Q311R, T307P_V309Q_Q311R или HR435Y.
26. Способ по любому из пп.1-25, где стадии получения гетеродимерного антитела проводят в условиях соответствия GMP.
27. Способ по п.26, где стадии получения гетеродимерного антитела проводят во время производства лекарственного вещества, содержащего гетеродимерное антитело.
28. Способ по любому из пп.1-27, где гетеродимерное антитело представляет собой биспецифическое антитело.
29. Способ по п.28, где биспецифическое антитело связывается с CD3, CD123, BCMA, EGFR или c-Met или любой их комбинацией.
30. Способ по любому из пп.1-29, где массовое соотношение восстанавливающего агента к суммарным иммуноглобулинам в смеси составляет от примерно 1 до примерно 5.
31. Способ по п.30, где массовое соотношение составляет от примерно 1,4 до примерно 3,8.
32. Способ по п.30, где массовое соотношение составляет от примерно 3,3 до примерно 4,4.
33. Способ получения гетеродимерного антитела, включающий
a) обеспечение первого гомодимерного антитела, содержащего первую Fc-область иммуноглобулина, содержащую первую область CH3, и второго гомодимерного антитела, содержащего вторую Fc-область иммуноглобулина, содержащую вторую область CH3, где аминокислотные последовательности первой области CH3 и второй области CH3 различны и таковы, что гетеродимерное взаимодействие между первой областью CH3 и второй областью CH3 сильнее, чем гомодимерное взаимодействие между первой областью CH3 или гомодимерное взаимодействие между второй областью CH3;
b) объединение первого гомодимерного антитела и второго гомодимерного антитела в смесь;
c) инкубацию смеси в присутствии восстанавливающего агента;
d) удаление восстанавливающего агента с получением гетеродимерного антитела, где
процентное содержание (%) растворенного кислорода (DO2) регулируется на уровне примерно 30% или ниже на стадии c), стадии d) или на обеих стадиях c) и d).
34. Способ по п.33, где % DO2 в смеси составляет примерно 25% или меньше, 20% или меньше, примерно 15% или меньше, примерно 10% или меньше, примерно 9% или меньше, примерно 8% или меньше, примерно 7% или меньше, примерно 6% или меньше, примерно 5% или меньше, примерно 4% или меньше, примерно 3% или меньше, примерно 2% или меньше или примерно 1% или меньше.
35. Способ по п.34, где % DO2 регулируется верхним слоем азота.
36. Способ по п.34 или 35, где первое гомодимерное антитело и второе гомодимерное антитело объединяют в смесь на стадии b) в молярном соотношении от примерно 1:1 до примерно 1:2.
37. Способ по п.34 или 35, где первое гомодимерное антитело и второе гомодимерное антитело объединяют в смесь на стадии b) в молярном соотношении примерно 1,05:1.
38. Способ по любому из пп.33-37, где суммарная концентрация иммуноглобулина в смеси составляет примерно 10,5 г/л.
39. Способ по любому из пп.33-38, где смесь инкубируют в присутствии восстанавливающего агента в течение примерно 10 минут или дольше.
40. Способ по любому из пп.33-39, где смесь инкубируют в присутствии восстанавливающего агента от примерно 10 минут до примерно 24 часов.
41. Способ по любому из пп.33-40, где восстанавливающий агент представляет собой 2-меркаптоэтиламин (2-MEA), химическое производное 2-MEA, L-цистеин или D-цистеин.
42. Способ по п.41, где концентрация 2-MEA в смеси составляет примерно 35 мМ.
43. Способ по любому из пп.33-42, где смесь содержит буфер.
44. Способ по п.43, где буфер включает натрий ацетатный буфер.
45. Способ по п.44, где буфер дополнительно содержит NaCl.
46. Способ по п.45, где буфер содержит примерно 100 мМ ацетата натрия и примерно 30 мМ NaCl.
47. Способ по п.46, где pH буфера составляет примерно 7,3.
48. Способ по любому из пп.33-47, включающий стадию удаления восстанавливающего агента из смеси.
49. Способ по п.48, где восстанавливающий агент удаляют фильтрацией.
50. Способ по п.49, где фильтрация представляет собой диафильтрацию.
51. Способ по любому из пп.33-50, где первое гомодимерное антитело и второе гомодимерное антитело представляют собой изотип IgG1, IgG2 или IgG4.
52. Способ по п.51, где первый домен CH3 и второй домен CH3 содержат следующие мутации по сравнению с IgG1 дикого типа SEQ ID NO: 1, IgG2 дикого типа SEQ ID NO: 2 или IgG4 дикого типа SEQ ID NO: 3: F405L/K409R, дикий тип/F405L_R409K, T350I_K370T_F405L/K409R, K370W/K409R, D399AFGHILMNRSTVWY/K409R,
T366ADEFGHILMQVY/K409R, L368ADEGHNRSTVQ/K409AGRH, D399FHKRQ/K409AGRH, F405IKLSTVW/K409AGRH, Y407LWQ/K409AGRH, T366Y/F405A, T366W/F405W, F405W/Y407A, T394W/Y407T, T394S/Y407A, T366W/T394S, F405W/T394S, T366W/T366S_L368A_Y407V, L351Y_F405A_Y407V/T394W, T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V, T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V, L351Y_Y407A/T366A_K409F, L351Y_Y407A/T366V_K409F, Y407A/T366A_K409F, T350V_L351Y_F405A_Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W, K409D/D399K, K409E/D399R, K409D_K360D/D399K_E356K, K409D_K360D/D399E_E356K, K409D_K370D/D399K_E357K, K409D_K370D/D399E_E357K, K409D_K392D/D399K_E356K_E357K или K409D_K392D/D399E_E356K_E357K.
53. Способ по п.52, где первая Fc-область и/или вторая Fc-область содержит одну или более мутаций по сравнению с IgG1 дикого типа SEQ ID NO: 1, IgG2 дикого типа SEQ ID NO: 2 или IgG4 дикого типа SEQ ID NO: 3, которые модулируют связывание первой Fc-области и/или второй Fc-области с рецептором Fcγ (FcγR), FcRn или с протеином A.
54. Способ по п.53, где FcγR представляет собой FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb или FcγRIII.
55. Способ по п.53, где одна или более замен, которые модулируют связывание первой Fc-области и/или второй Fc-области с Fcγ, представляют собой L234A_L235A, F234A_L235A,
S228P_F234A_L235A, S228P_L234A_L235A, V234A_G237A_P238S_H268A_V309L_A330S_P331S, V234A_G237A, H268Q_V309L_A330S_P331S, S267E_L328F, L234F_L235E_D265A, L234A_L235A_G237A_P238S_H268A_A330S_P331S или S228P_F234A_L235A_G237A_P238S.
56. Способ по п.53, где одна или более замен, которые модулируют связывание первой Fc-области и/или второй Fc-области с FcRn, представляют собой M428L_N434S, M252Y_S254T_T256E, T250Q_M428L, N434A и T307A_E380A_N434A, H435A, P257I_N434H, D376V_N434H, M252Y_S254T_T256E_H433K_N434F, T308P_N434A или H435R.
57. Способ по п.53, где одна или более замен, которые модулируют связывание первой Fc-области и/или второй Fc-области с протеином A, представляют собой Q311R, Q311K, T307P_L309Q, T307P_V309Q, T307P_L309Q_Q311R, T307P_V309Q_Q311R или HR435Y.
58. Способ по любому из пп.33-57, где стадии получения гетеродимерного антитела проводят в условиях соответствия GMP.
59. Способ по любому из пп.33-57, где стадии получения гетеродимерного антитела проводят во время производства лекарственного вещества, содержащего гетеродимерное антитело.
60. Способ по любому из пп.33-59, где гетеродимерное антитело представляет собой биспецифическое антитело.
61. Способ по п.60, где биспецифическое антитело связывается с CD3, CD123, BCMA, EGFR или c-Met или любой их комбинацией.
62. Способ по любому из пп.33-61, где массовое соотношение восстанавливающего агента к суммарным иммуноглобулинам в смеси составляет от примерно 1 до примерно 5.
63. Способ по п.62, где массовое соотношение составляет от примерно 1,4 до примерно 3,8.
64. Способ по п.62, где массовое соотношение составляет от примерно 3,3 до примерно 4,4.
65. Выделенное биспецифическое антитело, полученное способом по п.1.
66. Биспецифическое антитело по п.65, которое связывается с EGFR и c-Met.
67. Биспецифическое антитело по п.65 или 66, содержащее первую тяжелую цепь (HC1) SEQ ID NO: 4, первую легкую цепь (LC1) SEQ ID NO: 5, вторую тяжелую цепь (HC2) SEQ ID NO: 6 и вторую легкую цепь (LC2) SEQ ID NO: 7.
68. Биспецифическое антитело по п.65, которое связывается с CD3.
69. Выделенное биспецифическое антитело, полученное способом по п.33.
70. Биспецифическое антитело по п.69, которое связывается с EGFR и c-Met.
71. Биспецифическое антитело по п.69 или 70, содержащее первую тяжелую цепь (HC1) SEQ ID NO: 4, первую легкую цепь (LC1) SEQ ID NO: 5, вторую тяжелую цепь (HC2) SEQ ID NO: 6 и вторую легкую цепь (LC2) SEQ ID NO: 7.
72. Биспецифическое антитело по п.69, которое связывается с CD3.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US62/781,180 | 2018-12-18 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2021121021A true RU2021121021A (ru) | 2023-01-19 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2020522266A5 (ru) | ||
| CN109863170B (zh) | 具有增强的激动作用和效应子功能的工程化抗体及其他含Fc结构域分子 | |
| JP2021500348A (ja) | 単一特異性抗体から多重特異性抗体を生成させるための方法 | |
| RU2750721C2 (ru) | Способ получения мультиспецифических антител | |
| JP6742245B2 (ja) | 多重特異性抗体 | |
| CA2709430C (en) | Bivalent, bispecific antibodies | |
| CN109843916B (zh) | 具有增强的激动活性的Fc工程化抗TNFR超家族成员抗体及其使用方法 | |
| RU2016139006A (ru) | Мультимерные fc-белки | |
| RU2015145719A (ru) | Модифицированные асимметричные антитела, связывающие fc-рецептор, и способы их применения | |
| CA2869529A1 (en) | Multispecific antibodies | |
| WO2010136172A1 (en) | Tri- or tetraspecific antibodies | |
| WO2020088180A1 (en) | Cell culture process by intensified perfusion with continuous harvest and without cell bleeding | |
| TW202120537A (zh) | 用於經改善的單鏈可變片段之材料及方法 | |
| Mimoto et al. | Fc engineering to improve the function of therapeutic antibodies | |
| RU2021121021A (ru) | Способы получения гетеродимерных антител | |
| JPWO2020128870A5 (ru) | ||
| JPWO2021030657A5 (ru) | ||
| US20240043515A1 (en) | Heterodimer fc polypeptide | |
| JP7500619B2 (ja) | 抗体の二量体化を促進するためのヒンジ領域の操作 | |
| EP4200338A1 (en) | Antigen binding proteins with non-canonical disulfide in fab region | |
| WO2021150266A1 (en) | Agents that interfere with il-1beta receptor signalling | |
| JPWO2021240388A5 (ru) | ||
| JPWO2019140273A5 (ru) | ||
| RU2019144115A (ru) | Cконструированные мультиспецифические антитела и другие мультимерные белки с асимметричными мутациями в области ch2-ch3 | |
| JPWO2022047243A5 (ru) |