Claims (20)
1. Бактериальный пептид, проявляющий ферментативную активность бета-галактозидазы, обладающий оптимальной активностью при рН ниже рН 6,7, измеренную при 37°С, где бактериальный пептид имеет аминокислотную последовательность, представленную любой из следующих последовательностей SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и/или 20, либо их ферментативно активными фрагментами, или аминокислотную последовательность, представленную любой из следующих последовательностей SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20, имеющую не более 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 аминокислотных замен, добавлений или делеций, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 80% идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей.1. Bacterial peptide exhibiting beta-galactosidase enzymatic activity having optimal activity below pH 6.7 measured at 37°C, wherein the bacterial peptide has an amino acid sequence represented by any of the following sequences of SEQ ID NOs: 1, 2, 3 , 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 and/or 20, or their enzymatically active fragments, or an amino acid sequence represented by any of the following sequences SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 or 20, having no more than 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 or 22 amino acid substitutions, additions or deletions, or an amino acid sequence with at least 80% sequence identity to any of the specified sequences.
2. Бактериальный пептид по п. 1, который имеет аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90% идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей, предпочтительно с по меньшей мере 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей.2. The bacterial peptide according to claim 1, which has an amino acid sequence with at least 90% sequence identity to any of the specified sequences, preferably with at least 95%, 96%, 97%, 98% or 99% sequence identity to any of the specified sequences.
3. Бактериальный пептид по любому из пп. 1 или 2, который обладает оптимальной активностью при рН ниже рН 5,5, измеренной при 37°С, предпочтительно обладает оптимальной активностью при рН от рН 3 до рН 5, измеренной при 37°С.3. Bacterial peptide according to any one of paragraphs. 1 or 2, which has optimal activity below pH 5.5, measured at 37°C, preferably has optimal activity between pH 3 and pH 5, measured at 37°C.
4. Бактериальный пептид по любому из пп. 1-3, который имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, 2, 3, 5, 6, 7, 11, 12 и/или 14 или ее ферментативно активными фрагментами, или аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, 2, 3, 5, 6, 7, 11, 12 и/или 14, имеющую не более 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 аминокислотных замен, добавлений или делеций, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 80% идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей, предпочтительно с по меньшей мере 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей.4. Bacterial peptide according to any one of paragraphs. 1-3, which has the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, 2, 3, 5, 6, 7, 11, 12 and/or 14 or enzymatically active fragments thereof, or the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, 2, 3, 5, 6, 7, 11, 12 and/or 14 having no more than 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 , 16, 17, 18, 19, 20, 21 or 22 amino acid substitutions, additions or deletions, or an amino acid sequence with at least 80% sequence identity to any of these sequences, preferably at least 90%, 95%, 96% , 97%, 98% or 99% sequence identity of any of the indicated sequences.
5. Бактериальный пептид по любому из пп. 1-4, имеющий происхождение из молочнокислой бактерии, предпочтительно имеющий происхождение из молочнокислой бактерии родов Lactococcus, Lactobacillus, Streptococcus.5. Bacterial peptide according to any one of paragraphs. 1-4, derived from a lactic acid bacterium, preferably derived from a lactic acid bacterium of the genera Lactococcus, Lactobacillus, Streptococcus.
6. Бактериальный пептид по любому из пп. 1-5, где ферментативная бета-галактозидазная активность определена путем разведения бактериального пептида в буфере (буферный раствор 50 ммоль NaH2PO4, рН 6,7, содержащий 100 мкмоль MgSO4) и добавления указанного бактериального пептида (140 ммоль лактозы, приготовленной в 100 ммоль натрий-цитратного буферного раствора с рН 4,5, содержащего 100 мкмоль MgSO4) к реакционной смеси, которая приготовлена путем смешивания 13 мкл разведенного бактериального пептида к 37 мкл раствора лактозы, и инкубации в течение 10 мин при 37°С.6. Bacterial peptide according to any one of paragraphs. 1-5, where the enzymatic beta-galactosidase activity is determined by diluting the bacterial peptide in a buffer (buffer solution 50 mmol NaH 2 PO 4 , pH 6.7 containing 100 μmol MgSO 4 ) and adding the specified bacterial peptide (140 mmol lactose, prepared in 100 mmol sodium citrate buffer pH 4.5 containing 100 μmol MgSO 4 ) to the reaction mixture, which is prepared by mixing 13 μl of diluted bacterial peptide to 37 μl of lactose solution, and incubation for 10 min at 37°C.
7. Клетка-хозяин, экспрессирующая бактериальный пептид по любому из пп. 1-6, для получения молочного продукта или производимого из молока продукта с пониженным содержанием лактозы.7. The host cell expressing the bacterial peptide according to any one of paragraphs. 1-6 to obtain a dairy product or a lactose-reduced product derived from milk.
8. Способ получения кисломолочного продукта, включающий стадии:8. A method for obtaining a fermented milk product, including the steps:
а) обеспечения молочной основы, иa) providing a milk base, and
б) преобразования молочной основы в кисломолочный продукт, который имеет рН от 3,0 до 5,0, иb) converting the milk base into a fermented milk product which has a pH of 3.0 to 5.0, and
в) добавления до, во время или после любой из стадий (а) - (б) бактериального пептида по любому из пп. 1-6.c) adding before, during or after any of the stages (a) - (b) bacterial peptide according to any one of paragraphs. 1-6.
9. Способ по п. 8, дополнительно включающий стадию:9. The method of claim 8, further comprising the step of:
г) подвергания кисломолочного продукта термообработке для снижения содержания бактерий до не более 1х10ехр02 КОЕ (колониеобразующая единица) на г, с получением термообработанного кисломолочного продукта.d) subjecting the fermented milk product to heat treatment to reduce the bacterial content to not more than 1 x 10exp02 cfu (colony forming unit) per g, to obtain a heat-treated fermented milk product.
10. Способ по любому из пп. 8, 9, дополнительно включающий стадию:10. The method according to any one of paragraphs. 8, 9, further comprising the step of:
д) хранения кисломолочного продукта, полученного на стадии (б), или термообработанного кисломолочного продукта, полученного на стадии (г), при температуре по меньшей мере 20°С, предпочтительно в течение по меньшей мере 1 суток, более предпочтительно в течение по меньшей мере 3 суток.e) storing the fermented milk product obtained in step (b) or the heat-treated fermented milk product obtained in step (d) at a temperature of at least 20°C, preferably for at least 1 day, more preferably for at least 3 days.
11. Способ по любому из пп. 8-10, при котором молочную основу преобразуют в кисломолочный продукт путем добавления химического подкислителя и/или путем ферментации заквасочной культуры молочнокислых бактерий.11. The method according to any one of paragraphs. 8-10, in which the milk base is converted into a fermented milk product by adding a chemical acidifier and/or by fermenting a starter culture of lactic acid bacteria.
12. Способ по любому из пп. 8-11, где бактериальный пептид, проявляющий ферментативную активность бета-галактозидазы, добавляют на стадии (б), и/или бактериальный пептид, проявляющий ферментативную активность бета-галактозидазы, добавляют между стадиями (б) и (в), и/или бактериальный пептид, проявляющий ферментативную активность бета-галактозидазы, добавляют между стадиями (в) и (г).12. The method according to any one of paragraphs. 8-11, where a bacterial peptide exhibiting beta-galactosidase enzymatic activity is added in step (b) and/or a bacterial peptide exhibiting beta-galactosidase enzymatic activity is added between steps (b) and (c), and/or a bacterial a peptide exhibiting beta-galactosidase enzymatic activity is added between steps (c) and (d).
13. Кисломолочный продукт, который имеет рН от 3,0 до 5,0, содержащий бактериальный пептид по любому из пп. 1-6.13. A fermented milk product that has a pH of 3.0 to 5.0, containing a bacterial peptide according to any one of paragraphs. 1-6.
14. Применение бактериального пептида по любому из пп. 1-6 в качестве лактазы в способе получения кисломолочного продукта из молочной основы для преобразования по меньшей мере части лактозы, присутствующей в молочной основе, в глюкозу и галактозу.14. The use of a bacterial peptide according to any one of paragraphs. 1-6 as lactase in a process for producing a fermented milk product from a milk base to convert at least a portion of the lactose present in the milk base into glucose and galactose.
15. Композиция, содержащая бактериальный пептид по любому из пп. 1-6.15. Composition containing a bacterial peptide according to any one of paragraphs. 1-6.