RU2021104719A - Способ получения клеток из зубной пульпы - Google Patents
Способ получения клеток из зубной пульпы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2021104719A RU2021104719A RU2021104719A RU2021104719A RU2021104719A RU 2021104719 A RU2021104719 A RU 2021104719A RU 2021104719 A RU2021104719 A RU 2021104719A RU 2021104719 A RU2021104719 A RU 2021104719A RU 2021104719 A RU2021104719 A RU 2021104719A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- paragraphs
- pluripotent stem
- stem cells
- dental pulp
- Prior art date
Links
- 210000003074 Dental Pulp Anatomy 0.000 title claims 27
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 claims 83
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 claims 42
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 14
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims 14
- 101710031486 HLA-DQA2 Proteins 0.000 claims 12
- 102100005616 HLA-DQA2 Human genes 0.000 claims 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims 12
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 claims 12
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 claims 12
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 claims 11
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims 11
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 claims 11
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims 10
- 108010001801 Tumor Necrosis Factor-alpha Proteins 0.000 claims 10
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims 10
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 claims 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 10
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims 10
- 102100016492 CD34 Human genes 0.000 claims 8
- 108060001251 CD34 Proteins 0.000 claims 8
- 102000033147 ERVK-25 Human genes 0.000 claims 8
- 108091005771 Peptidases Proteins 0.000 claims 8
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims 8
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims 8
- 101710039712 NT5E Proteins 0.000 claims 7
- 102100017063 NT5E Human genes 0.000 claims 7
- 102100008333 THY1 Human genes 0.000 claims 7
- 101700026084 THY1 Proteins 0.000 claims 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims 7
- XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N (5Z)-7-[(1R,2R,3R)-3-hydroxy-2-[(1E,3S)-3-hydroxyoct-1-en-1-yl]-5-oxocyclopentyl]hept-5-enoic acid Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N 0.000 claims 6
- 102000038640 B7-1 Antigen Human genes 0.000 claims 6
- 108010035053 B7-1 Antigen Proteins 0.000 claims 6
- 108010021800 B7-2 Antigen Proteins 0.000 claims 6
- 102000007697 B7-2 Antigen Human genes 0.000 claims 6
- 108010063916 CD40 Antigens Proteins 0.000 claims 6
- 206010008118 Cerebral infarction Diseases 0.000 claims 6
- 102100015249 VEGFA Human genes 0.000 claims 6
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 claims 6
- 229960002986 dinoprostone Drugs 0.000 claims 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 6
- 102100005866 ALCAM Human genes 0.000 claims 5
- 101710033748 ALCAM Proteins 0.000 claims 5
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 5
- 102100009705 ENG Human genes 0.000 claims 5
- 101710004859 ENG Proteins 0.000 claims 5
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims 5
- 108091006822 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims 5
- 102100005499 PTPRC Human genes 0.000 claims 5
- 101700059076 PTPRC Proteins 0.000 claims 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims 5
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims 5
- 102100013137 CD40 Human genes 0.000 claims 4
- 101710040446 CD40 Proteins 0.000 claims 4
- 102100019451 CD80 Human genes 0.000 claims 4
- 101700080477 CD80 Proteins 0.000 claims 4
- 102000020504 Collagenase family Human genes 0.000 claims 4
- 108060005980 Collagenase family Proteins 0.000 claims 4
- 206010019641 Hepatic cirrhosis Diseases 0.000 claims 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims 4
- 230000001684 chronic Effects 0.000 claims 4
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 claims 4
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 claims 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims 4
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims 4
- 201000004044 liver cirrhosis Diseases 0.000 claims 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims 4
- 102100005826 CD19 Human genes 0.000 claims 3
- 101700087100 CD19 Proteins 0.000 claims 3
- 102100013078 CD47 Human genes 0.000 claims 3
- 101700033237 CD47 Proteins 0.000 claims 3
- 210000001612 Chondrocytes Anatomy 0.000 claims 3
- 102000003815 Interleukin-11 Human genes 0.000 claims 3
- 108090000177 Interleukin-11 Proteins 0.000 claims 3
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims 3
- 210000004409 Osteocytes Anatomy 0.000 claims 3
- 108060008443 TPPP Proteins 0.000 claims 3
- -1 VCAM-I Proteins 0.000 claims 3
- 230000032823 cell division Effects 0.000 claims 3
- 101710008066 lasB Proteins 0.000 claims 3
- 101710004421 nprS Proteins 0.000 claims 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 3
- 102100002944 ACAN Human genes 0.000 claims 2
- 108010067219 Aggrecans Proteins 0.000 claims 2
- 206010003816 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims 2
- 102100013858 BSG Human genes 0.000 claims 2
- 101710019228 BSG Proteins 0.000 claims 2
- 102100008428 CCL2 Human genes 0.000 claims 2
- 101700006000 CCL2 Proteins 0.000 claims 2
- 102100019450 CD81 Human genes 0.000 claims 2
- 101700062651 CD81 Proteins 0.000 claims 2
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N Caprylic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 206010011401 Crohn's disease Diseases 0.000 claims 2
- 102100000579 HGF Human genes 0.000 claims 2
- 108060003940 IL6 Proteins 0.000 claims 2
- 206010021972 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 claims 2
- 102000004369 Insulin-Like Growth Factor Binding Protein 4 Human genes 0.000 claims 2
- 108090000969 Insulin-Like Growth Factor Binding Protein 4 Proteins 0.000 claims 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 claims 2
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 claims 2
- 101700039143 LAMP2 Proteins 0.000 claims 2
- 102100005969 LAMP2 Human genes 0.000 claims 2
- 102100004732 MRC1 Human genes 0.000 claims 2
- 101700029479 MRC1 Proteins 0.000 claims 2
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 claims 2
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 claims 2
- 208000010125 Myocardial Infarction Diseases 0.000 claims 2
- 101710043203 P23p89 Proteins 0.000 claims 2
- 206010039073 Rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims 2
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 claims 2
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 claims 2
- 102100006015 TIMP3 Human genes 0.000 claims 2
- 108010031429 Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-3 Proteins 0.000 claims 2
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 claims 2
- 230000001154 acute Effects 0.000 claims 2
- 201000009596 autoimmune hypersensitivity disease Diseases 0.000 claims 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims 2
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 claims 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 claims 2
- 201000005795 chronic inflammatory demyelinating polyneuritis Diseases 0.000 claims 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims 2
- 200000000018 inflammatory disease Diseases 0.000 claims 2
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 claims 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims 2
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims 2
- 230000003287 optical Effects 0.000 claims 2
- 210000000056 organs Anatomy 0.000 claims 2
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 claims 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims 2
- 229910001414 potassium ion Inorganic materials 0.000 claims 2
- 201000004681 psoriasis Diseases 0.000 claims 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims 2
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 claims 2
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims 2
- LAQPKDLYOBZWBT-NYLDSJSYSA-N (2S,4S,5R,6R)-5-acetamido-2-{[(2S,3R,4S,5S,6R)-2-{[(2R,3R,4R,5R)-5-acetamido-1,2-dihydroxy-6-oxo-4-{[(2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy}hexan-3-yl]oxy}-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy}-4-hydroxy-6-[(1R,2R)-1,2,3-trihydrox Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]([C@@H](NC(C)=O)C=O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 LAQPKDLYOBZWBT-NYLDSJSYSA-N 0.000 claims 1
- 102100009261 ACE Human genes 0.000 claims 1
- 101700039001 ACE Proteins 0.000 claims 1
- 102100016493 CD33 Human genes 0.000 claims 1
- 101700017647 CD33 Proteins 0.000 claims 1
- 108050003733 CD34 antigen Proteins 0.000 claims 1
- 102100003279 CD38 Human genes 0.000 claims 1
- 101700044948 CD38 Proteins 0.000 claims 1
- 102100019144 CD46 Human genes 0.000 claims 1
- 101710027020 CD46 Proteins 0.000 claims 1
- 102100013391 CD55 Human genes 0.000 claims 1
- 101710006195 CD55 Proteins 0.000 claims 1
- 102100004444 CD58 Human genes 0.000 claims 1
- 101710018147 CD58 Proteins 0.000 claims 1
- 102100003281 CD59 Human genes 0.000 claims 1
- 101700073334 CD59 Proteins 0.000 claims 1
- 102100006400 CSF2 Human genes 0.000 claims 1
- 239000005635 Caprylic acid (CAS 124-07-2) Substances 0.000 claims 1
- 108010014419 Chemokine CXCL1 Proteins 0.000 claims 1
- 102000016950 Chemokine CXCL1 Human genes 0.000 claims 1
- 102000012192 Cystatin C Human genes 0.000 claims 1
- 108010061642 Cystatin C Proteins 0.000 claims 1
- 102100012353 DPP4 Human genes 0.000 claims 1
- 101700039720 DPP4 Proteins 0.000 claims 1
- 102100009509 ENTPD1 Human genes 0.000 claims 1
- 101710011427 ENTPD1 Proteins 0.000 claims 1
- 102100016439 FAS Human genes 0.000 claims 1
- 101700079540 FAS Proteins 0.000 claims 1
- 102100018914 GYPA Human genes 0.000 claims 1
- 101710042158 GYPA Proteins 0.000 claims 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims 1
- 102100020458 HLA-A Human genes 0.000 claims 1
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 claims 1
- 101710006705 ITGA1 Proteins 0.000 claims 1
- 102100019333 ITGA1 Human genes 0.000 claims 1
- 102100008588 ITGA5 Human genes 0.000 claims 1
- 101710006709 ITGA5 Proteins 0.000 claims 1
- 102100001477 ITGB3 Human genes 0.000 claims 1
- 101710006664 ITGB3 Proteins 0.000 claims 1
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 claims 1
- 102100016985 KIT Human genes 0.000 claims 1
- 101710009391 KIT Proteins 0.000 claims 1
- 101700048185 LAMP1 Proteins 0.000 claims 1
- 102100005918 LAMP1 Human genes 0.000 claims 1
- 102000017095 Leukocyte Common Antigens Human genes 0.000 claims 1
- 108010013709 Leukocyte Common Antigens Proteins 0.000 claims 1
- 108090000028 MMP12 Proteins 0.000 claims 1
- 101700060512 MMP2 Proteins 0.000 claims 1
- 102100014894 MMP2 Human genes 0.000 claims 1
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 claims 1
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 claims 1
- DZTHIGRZJZPRDV-LBPRGKRZSA-N N-acetyl-L-tryptophan Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)C)C(O)=O)=CNC2=C1 DZTHIGRZJZPRDV-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims 1
- 102100007544 NCAM1 Human genes 0.000 claims 1
- 101700077124 NCAM1 Proteins 0.000 claims 1
- 102100008795 NGFR Human genes 0.000 claims 1
- 101710038602 NGFR Proteins 0.000 claims 1
- 102000003729 Neprilysin Human genes 0.000 claims 1
- 102100004939 PDGFRB Human genes 0.000 claims 1
- 101710018346 PDGFRB Proteins 0.000 claims 1
- 102100018954 PECAM1 Human genes 0.000 claims 1
- 101710027269 PECAM1 Proteins 0.000 claims 1
- 102100002607 TIMP1 Human genes 0.000 claims 1
- 101700065146 TIMP2 Proteins 0.000 claims 1
- 102100006014 TIMP2 Human genes 0.000 claims 1
- 108090001109 Thermolysin Proteins 0.000 claims 1
- 108010031374 Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-1 Proteins 0.000 claims 1
- 108010031372 Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2 Proteins 0.000 claims 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims 1
- 102100019577 VCAM1 Human genes 0.000 claims 1
- 101700058634 VCAM1 Proteins 0.000 claims 1
- 108010007093 dispase Proteins 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims 1
- 230000003301 hydrolyzing Effects 0.000 claims 1
- 229960002446 octanoic acid Drugs 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims 1
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 claims 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims 1
Claims (97)
1. Способ получения клеток, полученных из пульпы зуба, обогащенных плюрипотентными стволовыми клетками, включающий
стадию (а) гидролиза пульпы зуба протеазой для приготовления суспензии пульпы зуба;
стадию (b) культивирования суспензии для пролиферации плюрипотентных стволовых клеток, содержащихся в суспензии;
стадию (c) замораживания пролиферированных плюрипотентных стволовых клеток в состоянии, в котором плюрипотентные стволовые клетки суспендированы в первой жидкости для криоконсервации;
стадию (d) размораживания замороженных плюрипотентных стволовых клеток;
стадию (е) культивирования размороженных плюрипотентных стволовых клеток в состоянии, в котором плюрипотентные стволовые клетки прикреплены к поверхностям частиц носителя для пролиферации плюрипотентных стволовых клеток на поверхности частиц носителя;
стадию (f) приведения частиц носителя в контакт с протеазой для отделения плюрипотентных стволовых клеток, прикрепленных к поверхностям частиц носителя, от частиц носителя; и
стадию (g) приготовления суспензии отделенных плюрипотентных стволовых клеток.
2. Способ получения по п. 1, отличающийся тем, что качественные тесты плюрипотентных стволовых клеток выполняются на стадии (c) или (d).
3. Способ получения по п. 2, отличающийся тем, что качественные тесты выполняются на клетках, фракционированных из клеток перед суспендированием в первой жидкости для криоконсервации, на субкультивированных клетках, которые были фракционированы из клеток перед суспендированием в первой жидкости для криоконсервации, на предварительно замороженных клетках, которые были суспендированы в первой жидкости для криоконсервации фракционированы, на клетках непосредственно после оттаивания, которые были фракционированы и заморожены, и/или на клетках, полученных фракционированием, замораживанием, оттаиванием и культивированием.
4. Способ получения по п. 3, отличающийся тем, что качественные тесты выполняются для одного или более из следующих качественных тестов a-j:
Качественный тест a, который проверяет, что доля числа клеток, показывающих по существу веретеновидную форму во всех клетках при наблюдении под оптическим микроскопом, больше или равна 99%, больше или равна 99,5%, больше или равна до 99,9%, или больше или равно 99,95%,
Качественный тест b, который проверяет, что жизнеспособность клеток больше или равна 50%, больше или равна 60%, больше или равна 70%, больше или равна 80%, больше или равна 90%, или больше или равна 95%,
Качественный тест c, который проверяет, что клетки являются положительными по CD73, CD90, CD105 и CD166 и отрицательными по CD34 и CD45 в профилях экспрессии маркеров антигенов клеточной поверхности, или проверяет, что клетки положительны, по меньшей мере, по одному из CD73 и CD90 и отрицательны по CD34 в профилях экспрессии маркеров антигенов клеточной поверхности,
Качественный тест d, который проверяет, что клетки отрицательны по CD40, CD80, CD86 и антигену MHC-класса II в профилях экспрессии маркеров антигенов клеточной поверхности, или проверяет, что клетки отрицательны, по меньшей мере, по одному из числа CD40, CD80, CD86 и антигену MHC-класса II в профилях экспрессии маркеров антигенов клеточной поверхности,
Качественный тест е, который проверяет, что клетки остаются отрицательными по CD40, CD80 и CD86 и становятся положительными по антигену MHC-класса II в профилях экспрессии маркеров антигенов клеточной поверхности, когда клетки стимулируются интерфероном-γ, или проверяет, что по меньшей мере, любая из клеток отрицательна по CD40, отрицательна по CD80, отрицательна по CD86 или положительна по антигену MHC-класса II в профилях экспрессии маркеров антигенов клеточной поверхности, когда клетки стимулируются интерфероном-γ,
Качественный тест f, который проверяет, что клетки экспрессируют простагландин E2 и/или фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), и уровень экспрессии простагландина E2 увеличивается за счет стимуляции клеток TNF-α,
Качественный тест g, который проверяет, что уровень экспрессии аггрекана увеличивается при культивировании клеток в среде, содержащей вещество, которое индуцирует дифференцировку в хондроциты,
Качественный тест h, который подтверждает, что количество кальция, накопленного в клетках, увеличивается, когда клетки культивируются в среде, содержащей вещество, которое вызывает дифференцировку в остеоциты,
Качественный тест i, который подтверждает, что клетки обладают способностью делиться, по меньшей мере, 10, 14 или 15 раз в планшете для культивирования клеток, и
Качественный тест j, который проверяет, что среднее время удвоения клеток в планшете для культивирования клеток составляет 96 часов, 84 часа, 72 часа, 48 часов или 36 часов в течение периода качественного теста i.
5. Способ получения по любому из пп. 1-4, дополнительно включающий загрузку суспензии на фильтрующую мембрану для сбора клеток, прошедших стадию (g).
6. Способ получения по п. 5, отличающийся тем, что фильтрующая мембрана имеет диаметр пор от 20 мкм до 80 мкм.
7. Способ получения по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что пульпу зуба получают из постоянных или временных зубов человека.
8. Способ получения по любому из пп. 1-7, отличающийся тем, что протеаза, используемая на стадии (а), включает сериновую протеазу, металлопротеазу или их смесь.
9. Способ получения по любому из пп. 1-7, отличающийся тем, что протеаза, используемая на стадии (а), включает металлопротеиназу.
10. Способ получения по любому из пп. 1-7, отличающийся тем, что протеаза, используемая на стадии (а), включает матриксную металлопротеиназу, нейтральную металлопротеиназу или их смесь.
11. Способ получения по любому из пп. 1-7, отличающийся тем, что протеаза, используемая на стадии (а), включает коллагеназу и нейтральную металлопротеиназу.
12. Способ получения по п. 11, отличающийся тем, что коллагеназа включает коллагеназу I, коллагеназу II или их смесь.
13. Способ получения по п. 10 или 11, отличающийся тем, что нейтральная металлопротеиназа включает термолизин, диспазу или их смесь.
14. Способ получения по любому из пп. 1-13, отличающийся тем, что первая жидкость для криоконсервации, используемая на стадии (с), включает бикарбонатный раствор Рингера, человеческий сывороточный альбумин и DMSO.
15. Способ получения по любому из пп. 1-14, отличающийся тем, что частицы носителя, используемые на стадии (е), имеют по существу сферическую форму, имеющую диаметр от 80 до 300 мкм в набухшем состоянии.
16. Способ получения по п. 15, отличающийся тем, что частицы носителя представляют собой пористые частицы носителя, имеющие поры диаметром от 3 до 40 мкм, которые открыты на поверхности частиц носителя в набухшем состоянии.
17. Способ получения по любому из пп. 1-16, отличающийся тем, что частицы носителя содержат желатин.
18. Способ получения по любому из пп. 1-17, отличающийся тем, что протеаза, используемая на стадии (f), включает сериновую протеазу, металлопротеазу или их смесь.
19. Способ получения по любому из пп. 1-17, отличающийся тем, что протеаза, используемая на стадии (f), включает трипсин.
20. Способ получения по любому из пп. 1-19, дополнительно включающий стадию (h) замораживания суспензии, полученной на стадии (g), в состоянии, в котором суспензия суспендирована во второй жидкости для криоконсервации.
21. Способ получения по п. 20, отличающийся тем, что вторая жидкость для криоконсервации, используемая на стадии (h), включает бикарбонатный раствор Рингера, человеческий сывороточный альбумин и DMSO.
22. Способ получения по любому из пп. 1-19, отличающийся тем, что качественные тесты плюрипотентных стволовых клеток проводят на стадии (g).
23. Способ получения по п. 20 или 21, отличающийся тем, что качественные тесты плюрипотентных стволовых клеток проводят на стадии (g) или (h).
24. Способ получения по п. 22 или 23, отличающийся тем, что качественные тесты проводят на клетках, фракционированных из клеток перед суспендированием во второй жидкости для криоконсервации, на субкультивированных клетках, которые были фракционированы из клеток перед суспендированием во второй жидкости для криоконсервации, на предварительно замороженных клетках, которые были суспендированы во второй жидкости для криоконсервации и фракционированы, на клетках сразу после оттаивания, которые были фракционированы и заморожены, и/или на клетках, полученных фракционированием, замораживанием, оттаиванием и культивированием.
25. Способ получения по п. 22 или 24, отличающийся тем, что качественные тесты выполняются для одного или более из следующих качественных тестов a-j:
Качественный тест a’, который проверяет, что доля числа клеток, показывающих по существу веретеновидную форму во всех клетках при наблюдении под оптическим микроскопом, больше или равна 99%, больше или равна 99,5%, больше или равна равно 99,9% или больше или равна 99,95%,
Качественный тест b’, который проверяет, что жизнеспособность клетки больше или равна 50%, больше или равна 60%, больше или равна 70%, больше или равна 80%, больше или равна 90% , или больше или равна 95%,
Качественный тест c’, который проверяет, что клетки являются положительными по CD73, CD90, CD105 и CD166 и отрицательными по CD34 и CD45 в профилях экспрессии маркеров антигенов клеточной поверхности, или проверяет, что клетки положительны, по меньшей мере, по одному из CD73 и CD90 и отрицательны по CD34 в профилях экспрессии маркеров антигенов клеточной поверхности,
Качественный тест d’, который проверяет, что клетки отрицательны по CD40, CD80, CD86 и антигену MHC-класса II в профилях экспрессии маркеров антигенов клеточной поверхности, или проверяет, что клетки отрицательны, по меньшей мере, по одному из числа CD40, CD80, CD86 и антигену MHC-класса II в профилях экспрессии маркеров антигенов клеточной поверхности,
Качественный тест е’, который проверяет, что клетки остаются отрицательными по CD40, CD80 и CD86 и становятся положительными по антигену MHC-класса II в профилях экспрессии маркеров антигенов клеточной поверхности, когда клетки стимулируются интерфероном-γ, или проверяет, что по меньшей мере, любая из клеток отрицательна по CD40, отрицательна по CD80, отрицательна по CD86 или положительна по антигену MHC-класса II в профилях экспрессии маркеров антигенов клеточной поверхности, когда клетки стимулируются интерфероном-γ,
Качественный тест f, который проверяет, что клетки экспрессируют простагландин E2 и/или фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), и уровень экспрессии простагландина E2 увеличивается за счет стимуляции клеток TNF-α,
Качественный тест g’, который проверяет, что уровень экспрессии аггрекана увеличивается при культивировании клеток в среде, содержащей вещество, которое индуцирует дифференцировку в хондроциты,
Качественный тест h’, который проверяет, что количество кальция, накопленного в клетках, увеличивается при культивировании клеток в среде, содержащей вещество, которое индуцирует дифференцировку в остеоциты,
Качественный тест i’, который проверяет способность клеток делиться, по меньшей мере, 3, 4 или 5 раз в планшете для культивирования клеток, и
Качественный тест j’, который проверяет, что среднее время удвоения клеток в планшете для культивирования клеток составляет 96 часов, 84 часа, 72 часа, 48 часов или 36 часов в течение периода качественного теста i’.
26. Способ получения по любому из пп. 22-25, отличающийся тем, что показатель положительности CD107b в плюрипотентных стволовых клетках, используемых в качественных тестах на стадии (g) или (h), выше, чем соответствующий показатель положительности для плюрипотентных стволовых клеток, используемых в качественных тестах на стадии (c) или (d).
27. Способ получения по любому из пп. 22-26, отличающийся тем, что показатель положительности, по меньшей мере, одного из CD39, CD49a, CD61, CD107a, CD107b и CD143 в плюрипотентных стволовых клетках, используемых в качественных тестах на стадии (g) или (h), выше, чем соответствующий показатель положительности в плюрипотентных стволовых клетках, используемых в качественных тестах на стадии (c) или (d), и где показатель положительности CD146 в плюрипотентных стволовых клетках, используемых в качественных тестах на стадии (g) или (h), ниже, чем соответствующий показатель положительности в плюрипотентных стволовых клетках, используемых в качественных тестах на стадии (c) или (d).
28. Способ получения по любому из пп. 22-27, отличающийся тем, что уровень экспрессии, по меньшей мере, одного из IL-6, HGF, IGFBP-4, IL-11, TIMP-3 и TIMP-2 в используемых плюрипотентных стволовых клетках в качественных тестах на стадии (g) или (h), выше, чем соответствующий уровень экспрессии в плюрипотентных стволовых клетках, используемых в качественных тестах на стадии (c) или (d).
29. Клетки, полученные способом получения по любому из пп. 1-28.
30. Клетки по п. 29, которые являются положительными по CD73, CD90, CD105 и CD166 и отрицательными по CD34 и CD45.
31. Клетки по п. 30, которые отрицательны по CD40, CD80, CD86 и антигену MHC-класса II.
32. Клетки по п. 31, которые становятся положительными по антигену MHC-класса II, когда клетки стимулируются интерфероном-γ.
33. Плюрипотентные стволовые клетки, полученные из пульпы зуба, имеющие, по меньшей мере, одну характеристику, показанную в пунктах (1)-(4) ниже.
(1) клетки положительны по CD73, CD90, CD105 и CD166
и отрицательны по CD34, CD40, CD45, CD80, CD86 и антигену MHC-класса II
становятся положительными по антигену MHC-класса II, когда клетки стимулируются интерфероном-γ, и экспрессируют простагландин E2 и/или фактор роста эндотелия сосудов, и уровень экспрессии простагландина E2 увеличивается, когда клетки стимулируются TNF-α,
(2) клетки являются положительными, по меньшей мере, по одному из числа CD73, CD90, CD105 и CD166 и отрицательными по CD34 и CD45,
(3) клетки являются положительными, по меньшей мере, по одному из числа CD47, CD81 и CD147 и отрицательными, по меньшей мере, по одному из числа CD19, CD34 и CD206, и
(4) клетки являются положительными, по меньшей мере, по одному из числа CD47, CD81 и CD147 и отрицательными, по меньшей мере, по одному из числа CD19, CD31, CD33, CD34, CD38, CD45, CD206, CD235a и SSEA-1.
34. Клетки по п. 33, которые обладают способностью дифференцироваться в остеоциты и хондроциты.
35. Клетки по п. 33 или 34, отличающиеся тем, что средний диаметр клеток в состоянии, в котором клетки приготовлены так, что они плавают в среде, составляет от 16 до 20 мкм.
36. Клетки по любому из пп. 33-35, которые обладают способностью делиться, по меньшей мере, 3 раза в среде in vitro, где среднее время удвоения находится в диапазоне 96 часов.
37. Плюрипотентные стволовые клетки, полученные из пульпы зуба, по любому из пп. 33-35, которые имеют следующие характеристики: клетки делятся, по меньшей мере, в 10, 15, 16 или 17 раз в среде in vitro, и среднее время деления клеток находится в диапазоне 48 часов, и клетки обладают способностью делиться, по меньшей мере, 10, 14 или 15 раз в среде in vitro, и среднее время деления клеток находится в диапазоне 96 часов, 84 часов, 72 часов, 48 часов или 36 часов.
38. Плюрипотентные стволовые клетки, полученные из пульпы зуба, по любому из пп. 33-35, которые имеют следующие характеристики: клетки делятся, по меньшей мере, в 16, 21, 22 или 23 раза в среде in vitro, и клетки обладают способностью делиться, по меньшей мере, 3, 4 или 5 раз в среде in vitro, и среднее время деления клеток находится в диапазоне 96 часов, 84 часов, 72 часов, 48 часов или 36 часов.
39. Плюрипотентные стволовые клетки, полученные из пульпы зуба, по любому из пп. 33-38, которые являются отрицательными, по меньшей мере, по одному из числа CD19, CD26, CD106, CD117 и CD271.
40. Плюрипотентные стволовые клетки, полученные из пульпы зуба, по любому из пп. 33-39, которые являются положительными, по меньшей мере, по одному из числа CD140b и HLA-A, -B и -C.
41. Плюрипотентные стволовые клетки, полученные из пульпы зуба, по любому из пп. 33-40, которые являются отрицательными, по меньшей мере, по одному из числа CD56 и CD146.
42. Плюрипотентные стволовые клетки, полученные из пульпы зуба, по любому из пп. 33-41, которые являются положительными, по меньшей мере, по одному из числа CD49e и CD95.
43. Плюрипотентные стволовые клетки, полученные из пульпы зуба, по любому из пп. 33-42, которые являются положительными, по меньшей мере, по одному из числа CD10, CD46, CD47, CD55, CD58 и CD59.
44. Плюрипотентные стволовые клетки, полученные из пульпы зуба, по любому из пп. 33-43, которые экспрессируют, по меньшей мере, один из числа ММР-2, IGFBP-4, цистатина С, IL-6, IL-11, MCP-1, IL-8, HGF, VEGF, TIMP-1, TIMP-2, и TIMP-3.
45. Плюрипотентные стволовые клетки, полученные из пульпы зуба, по любому из пп. 33-44, которые экспрессируют, по меньшей мере, один из числа GROα, VCAM-I и IP-10.
46. Плюрипотентные стволовые клетки, полученные из пульпы зуба, по любому из пп. 33-45, которые экспрессируют IL-6 и в которых уровень его экспрессии повышен за счет стимуляции TNF-α и стимуляции интерфероном-γ.
47. Плюрипотентные стволовые клетки, полученные из пульпы зуба, по любому из пп. 33-46, которые экспрессируют IL-11 и в которых уровень его экспрессии повышен за счет стимуляции TNF-α и стимуляции интерфероном-γ.
48. Плюрипотентные стволовые клетки, полученные из пульпы зуба, по любому из пп. 33-47, которые экспрессируют IP-10 и в которых уровень его экспрессии повышен за счет стимуляции TNF-α и стимуляции интерфероном-γ.
49. Плюрипотентные стволовые клетки, полученные из пульпы зуба, по любому из пп. 33-48, которые экспрессируют МСР-1 и в которых уровень его экспрессии повышен за счет стимуляции TNF-α и стимуляции интерфероном-γ.
50. Плюрипотентные стволовые клетки, полученные из пульпы зуба, по любому из пп. 33-49, отличающиеся тем, что экспрессия GM-CSF индуцируется стимуляцией TNF-α.
51. Плюрипотентные стволовые клетки, полученные из пульпы зуба, по любому из пп. 33-50, которые экспрессируют HGF и в которых уровень его экспрессии снижен за счет стимуляции TNF-α и повышен за счет стимуляции интерфероном-γ.
52. Плюрипотентные стволовые клетки, полученные из пульпы зуба, по любому из пп. 33-51, которые экспрессируют IL-8 и в которых уровень его экспрессии повышен за счет стимуляции TNF-α.
53. Плюрипотентные стволовые клетки, полученные из пульпы зуба, по любому из пп. 33-52, в которых пульпа зуба получена из постоянных или временных зубов человека.
54. Композиция, содержащая плюрипотентные стволовые клетки, полученные из пульпы зуба, по любому из пп. 33-53, суспендированные в бикарбонатном растворе Рингера, содержащем человеческий сывороточный альбумин и диметилсульфоксид.
55. Композиция, содержащая плюрипотентные стволовые клетки, полученные из пульпы зуба, по любому из пп. 33-53, суспендированные в растворе, содержащем ионы натрия, ионы калия, ионы кальция, ионы магния, ионы гидрокарбоната, ионы цитрата, человеческий сывороточный альбумин и диметилсульфоксид.
56. Композиция по п. 55, отличающаяся тем, что ионы натрия, ионы калия, ионы кальция, ионы магния, ионы гидрокарбоната, ионы цитрата, человеческий сывороточный альбумин и диметилсульфоксид содержатся соответственно в концентрациях от 91 до 113 мМ, от 2,52 до 3,08 мМ, от 0,95 до 1,16 мМ, от 0,315 до 0,385 мМ, от 15,6 до 19,2 мМ, от 1,04 до 1,28 мМ, от 46 до 56 г/л и от 9% до 11% (об./об.).
57. Композиция по любому из пп. 54-56, дополнительно содержащая ацетилтриптофан или его соль; и каприловую кислоту или ее соль.
58. Композиция по любому из пп. 54-57, отличающаяся тем, что плюрипотентные стволовые клетки, полученные из пульпы зуба, содержатся при плотности от 5×106 до 8×107 клеток/мл.
59. Композиция по любому из пп. 54-58, инкапсулированная в контейнере в количестве от 1 до 20 мл.
60. Композиция по п. 59, отличающаяся тем, что контейнер изготовлен из стекла или пластика.
61. Композиция по любому из пп. 54-60, которая находится в замороженном состоянии.
62. Фармацевтическая композиция, содержащая композицию по любому из пп. 54-61.
63. Фармацевтическая композиция по п. 62, которая представляет собой терапевтический агент для лечения заболевания, выбранного из группы, состоящей из аутоиммунного заболевания, воспалительного заболевания, ревматоидного артрита, болезни Крона, хронического воспалительного заболевания кишечника, инфаркта миокарда, инфаркта головного мозга (включая хронический церебральный инфаркт и острый инфаркт головного мозга), хронического воспалительного демиелинизирующего полиневрита, рассеянного склероза, системной красной волчанки, цирроза печени (включая декомпенсированный цирроз печени), сепсиса, остеоартрита, псориаза и отторжения трансплантата органа.
64. Фармацевтическая композиция по п. 62 для применения при лечении заболевания, выбранного из группы, состоящей из аутоиммунного заболевания, воспалительного заболевания, ревматоидного артрита, болезни Крона, хронического воспалительного заболевания кишечника, инфаркта миокарда, инфаркта головного мозга (включая хронический инфаркт мозга и острый инфаркт мозга), хронического воспалительного демиелинизирующего полиневрита, рассеянного склероза, системной красной волчанки, цирроза печени (включая декомпенсированный цирроз печени), сепсиса, остеоартрита, псориаза и отторжения трансплантата органа.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2018-143793 | 2018-07-31 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2022105712A Division RU2022105712A (ru) | 2018-07-31 | 2019-07-30 | Способ получения клеток из зубной пульпы |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2021104719A true RU2021104719A (ru) | 2022-08-25 |
| RU2795621C2 RU2795621C2 (ru) | 2023-05-05 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2022105712A (ru) | Способ получения клеток из зубной пульпы | |
| Sargent et al. | Hydrodynamic modulation of embryonic stem cell differentiation by rotary orbital suspension culture | |
| CA2583151C (en) | Identification and isolation of multipotent cells from non-osteochondral mesenchymal tissue | |
| Kotobuki et al. | Cultured autologous human cells for hard tissue regeneration: preparation and characterization of mesenchymal stem cells from bone marrow | |
| EP1165830B1 (en) | Adipose-derived stem cells and lattices | |
| US20020045260A1 (en) | Method of isolating mesenchymal stem cells | |
| US20160030639A1 (en) | Allografts Combined with Tissue Derived Stem Cells For Bone Healing | |
| US20110318833A1 (en) | Adipose-derived stem cells and laticces | |
| CN103667186B (zh) | 一种恢复间充质干细胞全能性的方法 | |
| US20220395537A1 (en) | Methods of stem cell culture for obtaining products, and implementations thereof | |
| JP2017512842A (ja) | 改善された幹細胞組成物 | |
| CN105647856A (zh) | 促进人脐带间充质干细胞向软骨细胞分化的方法 | |
| Gohi et al. | Enhanced efficiency in isolation and expansion of hAMSCs via dual enzyme digestion and micro-carrier | |
| RU2021104719A (ru) | Способ получения клеток из зубной пульпы | |
| EP1908820A1 (en) | Stem cell and/or progenitor cell enrichment | |
| CN111733128A (zh) | 人脂肪间充质干细胞制备方法及体外分化能力鉴定方法 | |
| Yang et al. | Fibrin matrix-supported three-dimensional organ culture of adipose tissue for selective outgrowth, expansion, and isolation of adipose-derived stem cells | |
| CN110923192B (zh) | 一种成熟肝细胞的长期体外培养方法 | |
| WO2009040458A1 (es) | Procedimiento de obtención de células madre mesenquimales con capacidad pluripotente | |
| WO2021071875A1 (en) | Chondrogenic human mesenchymal stem cell (msc) sheets | |
| Utama | ISOLATION OF AMNIOTIC FLUID MESENCHYMAL STEM CELLS (AF MSCs) OBTAINED FROM CAESAREAN SECTIONS | |
| WO2023208112A1 (zh) | 无动物源性细胞膜片及其制备方法和应用 | |
| Dave | Comparative study of decelluralized extracellular matrix from porcine derived tissues as a substrate for in-vitro mouse mesenchymal stem cell culture | |
| Petrenko et al. | Choice of conditions of human bone marrow stromal cells seeding into polymer macroporus sponges | |
| AU2021201033A1 (en) | Culturing of stem cells |