RU2019124813A - Бесклеточное получение сахаров - Google Patents

Бесклеточное получение сахаров Download PDF

Info

Publication number
RU2019124813A
RU2019124813A RU2019124813A RU2019124813A RU2019124813A RU 2019124813 A RU2019124813 A RU 2019124813A RU 2019124813 A RU2019124813 A RU 2019124813A RU 2019124813 A RU2019124813 A RU 2019124813A RU 2019124813 A RU2019124813 A RU 2019124813A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
allulose
phosphate
cell
thermostable
cells
Prior art date
Application number
RU2019124813A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2776637C2 (ru
RU2019124813A3 (ru
Inventor
Дрю С. КАННИНГЭМ
Дэниэл МАСИЧРЭН
Мэтью Эдуардо МОУРА
Уильям Джереми БЛЕЙК
Original Assignee
Гринлайт Байосайенсис, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Гринлайт Байосайенсис, Инк. filed Critical Гринлайт Байосайенсис, Инк.
Publication of RU2019124813A publication Critical patent/RU2019124813A/ru
Publication of RU2019124813A3 publication Critical patent/RU2019124813A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2776637C2 publication Critical patent/RU2776637C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/02—Monosaccharides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/90—Isomerases (5.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/90—Isomerases (5.)
    • C12N9/92—Glucose isomerase (5.3.1.5; 5.3.1.9; 5.3.1.18)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/14—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12Y204/01—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C12Y204/01049—Cellodextrin phosphorylase (2.4.1.49)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y503/00—Intramolecular oxidoreductases (5.3)
    • C12Y503/01—Intramolecular oxidoreductases (5.3) interconverting aldoses and ketoses (5.3.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y503/00—Intramolecular oxidoreductases (5.3)
    • C12Y503/01—Intramolecular oxidoreductases (5.3) interconverting aldoses and ketoses (5.3.1)
    • C12Y503/01009—Glucose-6-phosphate isomerase (5.3.1.9)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y504/00—Intramolecular transferases (5.4)
    • C12Y504/02—Phosphotransferases (phosphomutases) (5.4.2)
    • C12Y504/02002—Phosphoglucomutase (5.4.2.2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y504/00—Intramolecular transferases (5.4)
    • C12Y504/02—Phosphotransferases (phosphomutases) (5.4.2)
    • C12Y504/02005—Phosphoglucomutase (glucose-cofactor) (5.4.2.5)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y504/00—Intramolecular transferases (5.4)
    • C12Y504/02—Phosphotransferases (phosphomutases) (5.4.2)
    • C12Y504/02006—Beta-phosphoglucomutase (5.4.2.6)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)

Claims (121)

1. Способ получения соединения аллюлозы, предусматривающий стадии:
превращения полимерного глюкозного углевода в глюкозо-1-фосфат (G1P), катализируемого α-глюкан- или целлодекстринфосфорилазой; превращения указанного глюкозо-1-фосфата (G1P) с получением глюкозо-6-фосфата (G6P), катализируемого фосфоглюкомутазой; превращения указанного глюкозо-6-фосфата (G6P) в фруктозо-6-фосфат (F6P), катализируемого фосфоглюкоизомеразой; превращения указанного фруктозо-6-фосфата (F6P) с получением аллюлозо-6-фосфата (A6P), катализируемого аллюлозо-6-фосфатэпимеразой (A6PE); и превращения указанной аллюлозо-6-фосфатэпимеразы (A6P) в аллюлозу, катализируемого аллюлозо-6-фосфатфосфатазой (A6PP).
2. Способ по п. 1, при котором полимерный глюкозный углевод представляет собой крахмал, целлодекстрин или гликоген.
3. Способ по п. 1 или 2, при котором α-глюканфосфорилаза выбрана из группы, состоящей из α-глюканфосфорилаз Aquifex aeolicus, Thermocrinis minervae, Thermosulfidibacter takaii, Thermosulfurimonas dismutans, Thermococcus litoralis, Palaeococcus pacificus, Thermotoga neapolitana, Ruminiclostridium thermocellum, Pyrococcus abyssi, Thermococcus thioreducens, Deinococcus radiodurans, Sulfolobus acidocaldarius, Thermus caldophilus, Meiothermus silvanus, Oceanithermus profundus, Ardenticatena maritima, Thermococcus barophilus, Pseudothermotoga thermarum, Hydrogenobacter thermophilus, Thermus oshimai, Meiothermus ruber и Marinitoga piezophila.
4. Способ по любому из пп. 1-3, при котором целлодекстринфосфорилаза выбрана из группы, состоящей из целлодекстринфосфорилаз Clostridium thermocellum, Clostridium straminisolvens, Thermotoga RQ2; Ignisphaera aggregans, Thermotoga maritima, Spirochaeta thermophila, Caldicellulosiruptor bescii, Dictyoglomus thermophilum, Thermoanaerobacterium thermosaccharolyticum, Thermosipho africanus, Caldisalinibacter kiritimatiensis, Defluviitalea phaphyphila, Caldicellulosiruptor kronotskyensis, Thermococcus sibiricus и Thermosphaera aggregans.
5. Способ по любому из пп. 1-4, при котором фосфоглюкомутаза выбрана из группы, состоящей из фосфоглюкомутаз Thermococcus kodakaraensis, Pyrococcus kukulkanii, Ammonifex degensii, Methanothermobacter wolfeii, Methanothermus fervidus, Sulfolobus acidocaldarius, Archaeoglobus fulgidus, Ferroglobus placidus, Geoglobus ahangari, Archaeoglobus veneficus, Archaeoglobus sulfaticallidus, Aciduliprofundum boonie, Clostridium thermocellum, Defluviitalea phaphyphila, Caminicella sporogenes, Caloranaerobacter ferrireducens, Thermosipho malanesiensis, Fervidobacterium pennivorans, Symbiobacterium thermophilum, Spirochaeta thermophila и Thermoanaerobacter wiegelii.
6. Способ по любому из пп. 1-5, при котором фосфоглюкоизомераза выбрана из группы, состоящей из фосфоглюкоизомераз Thermus thermophilus, Meiothermus timidus, Thermus filiformis, Marinithermus hydrothermalis, Thermosipho africanus, Sulfurihydrogenibium azorense, Persephonella marina, Marinitoga piezophila, Kosmotoga olearia, Thermotoga maritima, Geobacillus stearothermophilus, Anoxybacillus flavithermus, Thermosulfidibacter takaii, Fervidobacterium nodosum, Clostridium thermocellum, Thermoanaerobacterium thermosaccharolyticum, Methanococcus jannaschii, Methanotorris igneus, Methanocaldococcus villosus, Methanothermococcus okinawensis, Pseudothermotoga thermarum, Deferribacter desulfuricans и Thermovibrio ammonificans.
7. Способ по любому из пп. 1-6, при котором аллюлозо-6-фосфатэпимераза выбрана из группы, состоящей из аллюлозо-6-фосфатэпимераз Thermobacterium thermosaccharolyticum, Thermoanaerobacter brockii, Caldanaerobacter subterraneus, Deferribacter desulfuricans, Thermocrinis ruber, Hydrogenivirga sp. 128-5-R1-1, Brevibacillus thermoruber, Thermosipho atlanticus и Thermosulfidibacter takaii.
8. Способ по любому из пп. 1-7, при котором аллюлозо-6-фосфатфосфатаза выбрана из группы, состоящей из аллюлозо-6-фосфатфосфатаз Thermoanaerobacter wiegelii, Thermoanaerobacter ethanolicus, Thermus islandicus, Deinococcus geothermalis DSM 11300, Thermosphaera aggregans, Crenarchaeota archaeon, Pyrococcus horikoshii Ot3, Aquifex aeolicus, Ruminiclostridium thermocellum, Desulfotomaculum kuznetsovii, Caldanaerobacter subterraneus, Acidothermus cellulolyticus, Methanothermobacter thermautotrophicus, Thermobifida fusca, Thermotoga neapolitana, Petrotoga mobilis и Thermodesulfatator indicus, Thermus thermophilus, Bacteroides vulgatus и Bacteroides fragilus.
9. Способ по любому из пп. 1-8, при котором аллюлозо-6-фосфатфосфатаза специфична к аллюлозо-6-фосфату.
10. Способ по любому из пп. 1-9, при котором по меньшей мере один из указанных ферментов является термостабильным, или по меньшей мере два из указанных ферментов являются термостабильными.
11. Способ по любому из пп. 2-10, при котором крахмал или гликоген предварительно обрабатывают α-амилазой и деветвящим ферментом с получением неразветвленного мальтодекстрина.
12. Способ по п. 11, при котором деветвящий фермент выбран из изоамилаз и пуллуланаз.
13. Способ по п. 12, при котором изоамилазы выбраны из изоамилаз Sulfolobus tokodaii, Metallosphaera hakonensis, Sphaerobacter thermophiles и Bacillus lentus.
14. Способ по п. 12 или 13, при котором пуллуланазы выбраны из пуллуланаз Fervidobacterium pennavorans. Thermotoga sp. RQ5, Bacillus flavocaldarius, Thermosipho africanus и Kosmotoga olearia.
15. Бесклеточный способ получения аллюлозы, причем способ предусматривает:
(a) культивирование клеток, сконструированных для экспрессии термостабильной α-глюканфосфорилазы, термостабильной фосфоглюкомутазы, термостабильной фосфоглюкоизомеразы, термостабильной аллюлозо-6-фосфатэпимеразы и термостабильной аллюлозо-6-фосфатфосфатазы, с получением культивируемых клеток, которые экспрессируют термостабильные ферменты;
(b) лизирование культивируемых клеток с получением клеточного лизата;
(с) нагревание клеточного лизата до температуры, которая инактивирует природные молекулы с ферментативной активностью, но не инактивирует термостабильные ферменты со стадии (а), с получением инактивированного нагреванием лизата; и
(d) инкубирование инактивированного нагреванием лизата в присутствии крахмала, гликогена или его частично гидролизированного производного и неорганического фосфата с получением аллюлозы.
16. Бесклеточный способ по п. 15, при котором крахмал или гликоген предварительно обрабатывают α-амилазой и деветвящим ферментом с получением неразветвленного мальтодекстрина.
17. Бесклеточный способ по п. 15, при котором крахмал или гликоген предварительно обрабатывают α-амилазой с получением разветвленного мальтодекстрина и на стадии (d) добавляют деветвящий фермент.
18. Бесклеточный способ по п. 15, при котором на стадии (d) добавляют деветвящий фермент.
19. Бесклеточный способ по любому из пп. 16-18, при котором деветвящий фермент выбран из изоамилаз и пуллуланаз.
20. Бесклеточный способ по п. 19, при котором изоамилазы выбраны из изоамилаз Sulfolobus tokodaii, Metallosphaera hakonensis, Sphaerobacter thermophiles и Bacillus lentus.
21. Бесклеточный способ по п. 19 или 20, при котором пуллуланазы выбраны из пуллуланаз Fervidobacterium pennavorans. Thermotoga sp. RQ5, Bacillus flavocaldarius, Thermosipho africanus и Kosmotoga olearia.
22. Бесклеточный способ получения аллюлозы, причем способ предусматривает:
(а) культивирование по меньшей мере двух клеточных популяций, причем клетки каждой популяции сконструированы для экспрессии по меньшей мере одного фермента, выбранного из группы, состоящей из термостабильных α-глюканфосфорилаз, термостабильных фосфоглюкомутаз, термостабильных фосфоглюкоизомераз, термостабильных аллюлозо-6-фосфатэпимераз и термостабильных аллюлозо-6-фосфатфосфатаз, с получением по меньшей мере двух культивируемых популяций клеток, экспрессирующих разные ферменты;
(b) лизирование клеток по меньшей мере двух культивируемых популяций с получением по меньшей мере двух клеточных лизатов;
(c) объединение по меньшей мере двух клеточных лизатов с получением смеси клеточных лизатов, которая содержит термостабильную α-глюканфосфорилазу, термостабильную фосфоглюкомутазу, термостабильную фосфоглюкоизомеразу, термостабильную аллюлозо-6-фосфатэпимеразу и термостабильную аллюлозо-6-фосфатфосфатазу;
(d) нагревание смеси клеточных лизатов до температуры, которая инактивирует природные молекулы с ферментативной активностью, но не инактивирует термостабильные ферменты со стадии (с), с получением инактивированного нагреванием лизата; и
(e) инкубирование реакционной смеси в присутствии крахмала, гликогена или его частично гидролизированного производного и неорганического фосфата с получением аллюлозы.
23. Бесклеточный способ получения аллюлозы, причем способ предусматривает:
(а) культивирование по меньшей мере двух клеточных популяций, причем клетки каждой популяции сконструированы для экспрессии по меньшей мере одного фермента, выбранного из группы, состоящей из α-глюканфосфорилаз, фосфоглюкомутаз, фосфоглюкоизомераз, аллюлозо-6-фосфатэпимераз и аллюлозо-6-фосфатфосфатаз, с получением по меньшей мере двух культивируемых популяций клеток, экспрессирующих разные ферменты, причем по меньшей мере один из вышеперечисленных ферментов является термостабильным;
(b) лизирование клеток по меньшей мере двух культивируемых популяций с получением по меньшей мере двух клеточных лизатов;
(с) необязательно нагревание одного или более из клеточных лизатов со стадии (b) до температуры, которая инактивирует природные молекулы с ферментативной активностью, но не инактивирует термостабильные ферменты со стадии (а), с получением инактивированного нагреванием лизата;
(d) объединение клеточных лизатов со стадий (b) и (c) с получением смеси клеточных лизатов, которая содержит α-глюканфосфорилазу, фосфоглюкомутазу, фосфоглюкоизомеразу, аллюлозо-6-фосфатэпимеразу и аллюлозо-6-фосфатфосфатазу, причем по меньшей мере один из вышеперечисленных ферментов является термостабильным; и
(e) инкубирование смеси клеточных лизатов в присутствии крахмала, гликогена или его частично гидролизированного производного и неорганического фосфата с получением аллюлозы.
24. Бесклеточный способ получения аллюлозы, причем способ предусматривает:
(а) культивирование по меньшей мере двух клеточных популяций, причем клетки каждой популяции сконструированы для экспрессии по меньшей мере одного фермента, выбранного из группы, состоящей из термостабильных α-глюканфосфорилаз, термостабильных фосфоглюкомутаз, термостабильных фосфоглюкоизомераз, термостабильных аллюлозо-6-фосфатэпимераз и термостабильных аллюлозо-6-фосфатфосфатаз, с получением по меньшей мере двух культивируемых популяций клеток, экспрессирующих разные ферменты;
(b) лизирование клеток по меньшей мере двух культивируемых популяций с получением по меньшей мере двух клеточных лизатов;
(с) объединение по меньшей мере двух клеточных лизатов с получением смеси клеточных лизатов;
(d) нагревание смеси клеточных лизатов до температуры, которая инактивирует природные молекулы с ферментативной активностью, но не инактивирует термостабильные ферменты со стадии (а), с получением инактивированного нагреванием лизата;
(e) добавление к инактивированному нагреванием лизату по меньшей мере одного очищенного фермента, выбранного из группы, состоящей из α-глюканфосфорилаз, фосфоглюкомутаз, фосфоглюкоизомераз, аллюлозо-6-фосфатэпимераз и аллюлозо-6-фосфатфосфатаз, с получением реакционной смеси, содержащей α-глюканфосфорилазу, фосфоглюкомутазу, фосфоглюкоизомеразу, аллюлозо-6-фосфатэпимеразу и аллюлозо-6-фосфатфосфатазу; и
(f) инкубирование реакционной смеси в присутствии крахмала, гликогена или его частично гидролизированного производного и неорганического фосфата с получением аллюлозы.
25. Бесклеточный способ получения аллюлозы, причем способ предусматривает:
(а) культивирование по меньшей мере двух клеточных популяций, причем клетки каждой популяции сконструированы для экспрессии по меньшей мере одного фермента, выбранного из группы, состоящей из α-глюканфосфорилаз, фосфоглюкомутаз, фосфоглюкоизомераз, аллюлозо-6-фосфатэпимераз и аллюлозо-6-фосфатфосфатаз, с получением по меньшей мере двух культивируемых популяций клеток, экспрессирующих разные ферменты, причем по меньшей мере один из вышеперечисленных ферментов является термостабильным;
(b) лизирование клеток по меньшей мере двух культивируемых популяций с получением по меньшей мере двух клеточных лизатов;
(с) необязательно нагревание одного или более из клеточных лизатов со стадии (b) до температуры, которая инактивирует природные молекулы с ферментативной активностью, но не инактивирует термостабильные ферменты со стадии (а), с получением инактивированного нагреванием лизата;
(d) объединение клеточных лизатов со стадий (b) и (с) с получением смеси клеточных лизатов;
(e) добавление к смеси клеточных лизатов по меньшей мере одного очищенного фермента, выбранного из группы, состоящей из α-глюканфосфорилаз, фосфоглюкомутаз, фосфоглюкоизомераз, аллюлозо-6-фосфатэпимераз и аллюлозо-6-фосфатфосфатаз, с получением реакционной смеси, содержащей α-глюканфосфорилазу, фосфоглюкомутазу, фосфоглюкоизомеразу, аллюлозо-6-фосфатэпимеразу и аллюлозо-6-фосфатфосфатазу; и
(f) инкубирование реакционной смеси в присутствии крахмала, гликогена или его частично гидролизированного производного и неорганического фосфата с получением аллюлозы.
26. Бесклеточный способ по любому из пп. 15-25, при котором α-глюканфосфорилаза(ы) выбрана(ы) из группы, состоящей из α-глюканфосфорилаз Aquifex aeolicus, Thermocrinis minervae, Thermosulfidibacter takaii, Thermosulfurimonas dismutans, Thermococcus litoralis, Palaeococcus pacificus, Thermotoga neapolitana, Ruminiclostridium thermocellum, Pyrococcus abyssi, Thermococcus thioreducens, Deinococcus radiodurans, Sulfolobus acidocaldarius, Thermus caldophilus, Meiothermus silvanus, Oceanithermus profundus, Ardenticatena maritima, Thermococcus barophilus, Pseudothermotoga thermarum, Hydrogenobacter thermophilus, Thermus oshimai, Meiothermus ruber и Marinitoga piezophila.
27. Бесклеточный способ по любому из пп. 15-26, при котором фосфоглюкомутаза(ы) выбрана(ы) из группы, состоящей из фосфоглюкомутаз Thermococcus kodakaraensis, Pyrococcus kukulkanii, Ammonifex degensii, Methanothermobacter wolfeii, Methanothermus fervidus, Sulfolobus acidocaldarius, Archaeoglobus fulgidus, Ferroglobus placidus, Geoglobus ahangari, Archaeoglobus veneficus, Archaeoglobus sulfaticallidus, Aciduliprofundum boonie, Clostridium thermocellum, Defluviitalea phaphyphila, Caminicella sporogenes, Caloranaerobacter ferrireducens, Thermosipho malanesiensis, Fervidobacterium pennivorans, Symbiobacterium thermophilum, Spirochaeta thermophila и Thermoanaerobacter wiegelii.
28. Бесклеточный способ по любому из пп. 15-27, при котором фосфоглюкоизомераза(ы) выбрана(ы) из группы, состоящей из фосфоглюкоизомераз Thermus thermophilus, Meiothermus timidus, Thermus filiformis, Marinithermus hydrothermalis, Thermosipho africanus, Sulfurihydrogenibium azorense, Persephonella marina, Marinitoga piezophila, Kosmotoga olearia, Thermotoga maritima, Geobacillus stearothermophilus, Anoxybacillus flavithermus, Thermosulfidibacter takaii, Fervidobacterium nodosum, Clostridium thermocellum, Thermoanaerobacterium thermosaccharolyticum, Methanococcus jannaschii, Methanotorris igneus, Methanocaldococcus villosus, Methanothermococcus okinawensis, Pseudothermotoga thermarum, Deferribacter desulfuricans и Thermovibrio ammonificans.
29. Бесклеточный способ по любому из пп. 15-28, при котором аллюлозо-6-фосфатэпимераза(ы) выбрана(ы) из группы, состоящей из аллюлозо-6-фосфатэпимераз Thermobacterium thermosaccharolyticum, Thermoanaerobacter brockii, Caldanaerobacter subterraneus, Deferribacter desulfuricans, Thermocrinis ruber, Hydrogenivirga sp. 128-5-R1-1, Brevibacillus thermoruber, Thermosipho atlanticus и Thermosulfidibacter takaii.
30. Бесклеточный способ по любому из пп. 15-29, при котором аллюлозо-6-фосфатфосфатаза(ы) выбрана(ы) из группы, состоящей из аллюлозо-6-фосфатфосфатаз Thermoanaerobacter wiegelii, Thermoanaerobacter ethanolicus, Thermus islandicus, Deinococcus geothermalis DSM 11300, Thermosphaera aggregans, Crenarchaeota archaeon, Pyrococcus horikoshii Ot3, Aquifex aeolicus, Ruminiclostridium thermocellum, Desulfotomaculum kuznetsovii, Caldanaerobacter subterraneus, Acidothermus cellulolyticus, Methanothermobacter thermautotrophicus, Thermobifida fusca, Thermotoga neapolitana, Petrotoga mobilis и Thermodesulfatator indicus, Thermus thermophilus, Bacteroides vulgatus, а также Bacteroides fragilus.
31. Бесклеточный способ по пп. 16-30, при котором крахмал или гликоген предварительно обрабатывают α-амилазой и деветвящим ферментом с получением неразветвленного мальтодекстрина.
32. Бесклеточный способ по пп. 16-30, при котором крахмал или гликоген предварительно обрабатывают α-амилазой с получением разветвленного мальтодекстрина и реакционную смесь инкубируют в присутствии деветвящего фермента.
33. Бесклеточный способ по пп. 16-30, при котором реакционную смесь инкубируют в присутствии деветвящего фермента.
34. Бесклеточный способ по любому из пп. 31-33, при котором деветвящий фермент выбран из изоамилаз и пуллуланаз.
35. Бесклеточный способ по п. 34, при котором изоамилазы выбраны из изоамилаз Sulfolobus tokodaii, Metallosphaera hakonensis, Sphaerobacter thermophiles и Bacillus lentus.
36. Бесклеточный способ по п. 34 или 35, при котором пуллуланазы выбраны из пуллуланаз Fervidobacterium pennavorans. Thermotoga sp. RQ5, Bacillus flavocaldarius, Thermosipho africanus и Kosmotoga olearia.
37. Способ по любому из пп. 15-36, при котором клетки включают бактериальные клетки.
38. Способ по любому из пп. 15-37, при котором клетки включают дрожжевые клетки.
39. Способ по любому из пп. 15-38, при котором по меньшей мере один из ферментов является гетерологичным по отношению к клеткам.
40. Способ по любому из пп. 15-39, при котором стадия (b) лизирования включает механическое, химическое, ферментативное, осмотическое или термическое лизирование культивированных клеток.
41. Способ по любому из пп. 15-40, при котором стадия нагревания (c) или (d) включает нагревание клеточного лизата до температуры по меньшей мере 50°C.
42. Способ по любому из пп. 15-41, при котором крахмал содержит амилозу, амилопектин или как амилозу, так и амилопектин.
43. Способ по любому из пп. 15-42, при котором два или более ферментов из α-глюканфосфорилазы, фосфоглюкомутазы, фосфоглюкоизомеразы, аллюлозо-6-фосфатэпимеразы, аллюлозо-6-фосфатфосфатазы и/или деветвящего фермента экспрессируются в форме единого гибридного белка, бифункционального или мультифункционального белка.
44. Клеточный лизат, полученный способом по любому из пп. 15-43.
45. Сконструированная клетка, содержащая α-глюканфосфорилазу, фосфоглюкомутазу, фосфоглюкоизомеразу, аллюлозо-6-фосфатэпимеразу, аллюлозо-6-фосфатфосфатазу и, необязательно, деветвящий фермент, необязательно причем по меньшей мере один из вышеперечисленных ферментов является термостабильным ферментом.
46. Сконструированная клетка по п. 45, причем такая клетка представляет собой бактериальную клетку или дрожжевую клетку.
47. Единый клеточный лизат, смесь клеточных лизатов, полученных по меньшей мере из двух клеточных популяций, или реакционная смесь, которые содержат α-глюканфосфорилазу, фосфоглюкомутазу, фосфоглюкоизомеразу, аллюлозо-6-фосфатэпимеразу, аллюлозо-6-фосфатфосфатазу и, необязательно, деветвящий фермент, необязательно причем по меньшей мере один из вышеперечисленных ферментов является термостабильным ферментом.
48. Бесклеточный способ получения аллюлозы, причем способ предусматривает:
(a) культивирование клеток, сконструированных для экспрессии термостабильной целлодекстринфосфорилазы, термостабильной фосфоглюкомутазы, термостабильной фосфоглюкоизомеразы, термостабильной аллюлозо-6-фосфатэпимеразы и термостабильной аллюлозо-6-фосфатфосфатазы, с получением культивируемых клеток, которые экспрессируют ферменты;
(b) лизирование культивируемых клеток с получением клеточного лизата;
(с) нагревание клеточного лизата до температуры, которая инактивирует природные молекулы с ферментативной активностью, но не инактивирует термостабильные ферменты со стадии (а), с получением инактивированного нагреванием лизата; и
(d) инкубирование инактивированного нагреванием лизата в присутствии целлодекстрина и неорганического фосфата с получением аллюлозы.
49. Бесклеточный способ получения аллюлозы, причем способ предусматривает:
(а) культивирование по меньшей мере двух клеточных популяций, причем клетки каждой популяции сконструированы для экспрессии по меньшей мере одного фермента, выбранного из группы, состоящей из термостабильных целлодекстринфосфорилаз, термостабильных фосфоглюкомутаз, термостабильных фосфоглюкоизомераз, термостабильных аллюлозо-6-фосфатэпимераз и термостабильных аллюлозо-6-фосфатфосфатаз, с получением по меньшей мере двух культивируемых популяций клеток, экспрессирующих разные ферменты;
(b) лизирование клеток по меньшей мере двух культивируемых популяций с получением по меньшей мере двух клеточных лизатов;
(c) объединение по меньшей мере двух клеточных лизатов с получением смеси клеточных лизатов, которая содержит термостабильную целлодекстринфосфорилазу, термостабильную фосфоглюкомутазу, термостабильную фосфоглюкоизомеразу, термостабильную аллюлозо-6-фосфатэпимеразу и термостабильную аллюлозо-6-фосфатфосфатазу;
(d) нагревание смеси клеточных лизатов до температуры, которая инактивирует природные молекулы с ферментативной активностью, но не инактивирует термостабильные ферменты со стадии (с), с получением инактивированного нагреванием лизата; и
(e) инкубирование реакционной смеси в присутствии целлодекстрина и неорганического фосфата с получением аллюлозы.
50. Бесклеточный способ получения аллюлозы, причем способ предусматривает:
(а) культивирование по меньшей мере двух клеточных популяций, причем клетки каждой популяции сконструированы для экспрессии по меньшей мере одного фермента, выбранного из группы, состоящей из целлодекстринфосфорилаз, фосфоглюкомутаз, фосфоглюкоизомераз, аллюлозо-6-фосфатэпимераз и аллюлозо-6-фосфатфосфатаз, с получением по меньшей мере двух культивируемых популяций клеток, экспрессирующих разные ферменты, причем по меньшей мере один из вышеперечисленных ферментов является термостабильным;
(b) лизирование клеток по меньшей мере двух культивируемых популяций с получением по меньшей мере двух клеточных лизатов;
(с) необязательно нагревание одного или более из клеточных лизатов со стадии (b) до температуры, которая инактивирует природные молекулы с ферментативной активностью, но не инактивирует термостабильные ферменты со стадии (а), с получением инактивированного нагреванием лизата;
(d) объединение по меньшей мере двух клеточных лизатов со стадий (b) и (c) с получением смеси клеточных лизатов, которая содержит целлодекстринфосфорилазу, фосфоглюкомутазу, фосфоглюкоизомеразу, аллюлозо-6-фосфатэпимеразу и аллюлозо-6-фосфатфосфатазу, причем по меньшей мере один из вышеперечисленных ферментов является термостабильным; и
(e) инкубирование реакционной смеси в присутствии целлодекстрина и неорганического фосфата с получением аллюлозы.
51. Бесклеточный способ получения аллюлозы, причем способ предусматривает:
(а) культивирование по меньшей мере двух клеточных популяций, причем клетки каждой популяции сконструированы для экспрессии по меньшей мере одного фермента, выбранного из группы, состоящей из термостабильных целлодекстринфосфорилаз, термостабильных фосфоглюкомутаз, термостабильных фосфоглюкоизомераз, термостабильных аллюлозо-6-фосфатэпимераз и термостабильных аллюлозо-6-фосфатфосфатаз, с получением по меньшей мере двух культивируемых популяций клеток, экспрессирующих разные ферменты;
(b) лизирование клеток по меньшей мере двух культивируемых популяций с получением по меньшей мере двух клеточных лизатов;
(с) объединение по меньшей мере двух клеточных лизатов с получением смеси клеточных лизатов;
(d) нагревание смеси клеточных лизатов до температуры, которая инактивирует природные молекулы с ферментативной активностью, но не инактивирует термостабильные ферменты со стадии (а), с получением инактивированного нагреванием лизата;
(e) добавление к инактивированному нагреванием лизату по меньшей мере одного очищенного фермента, выбранного из группы, состоящей из целлодекстринфосфорилаз, фосфоглюкомутаз, фосфоглюкоизомераз, аллюлозо-6-фосфатэпимераз и аллюлозо-6-фосфатфосфатаз, с получением реакционной смеси, содержащей целлодекстринфосфорилазу, фосфоглюкомутазу, фосфоглюкоизомеразу, аллюлозо-6-фосфатэпимеразу и аллюлозо-6-фосфатфосфатазу; и
(f) инкубирование реакционной смеси в присутствии целлодекстрина и неорганического фосфата с получением аллюлозы.
52. Бесклеточный способ получения аллюлозы, причем способ предусматривает:
(а) культивирование по меньшей мере двух клеточных популяций, причем клетки каждой популяции сконструированы для экспрессии по меньшей мере одного фермента, выбранного из группы, состоящей из целлодекстринфосфорилаз, фосфоглюкомутаз, фосфоглюкоизомераз, аллюлозо-6-фосфатэпимераз и аллюлозо-6-фосфатфосфатаз, с получением по меньшей мере двух культивируемых популяций клеток, экспрессирующих разные ферменты, причем по меньшей мере один из вышеперечисленных ферментов является термостабильным; и
(b) лизирование клеток по меньшей мере двух культивируемых популяций с получением по меньшей мере двух клеточных лизатов;
(с) необязательно нагревание одного или более из клеточных лизатов со стадии (b) до температуры, которая инактивирует природные молекулы с ферментативной активностью, но не инактивирует термостабильные ферменты со стадии (а), с получением инактивированного нагреванием лизата;
(d) объединение клеточного лизата со стадий (b) и (с) с получением смеси клеточных лизатов;
(e) добавление к смеси клеточных лизатов по меньшей мере одного очищенного фермента, выбранного из группы, состоящей из целлодекстринфосфорилаз, фосфоглюкомутаз и глюкозо-6-фосфатфосфатаз, с получением реакционной смеси, содержащей целлодекстринфосфорилазы, фосфоглюкомутазы, фосфоглюкоизомеразы, аллюлозо-6-фосфатэпимеразы и аллюлозо-6-фосфатфосфатазы, с получением реакционной смеси, содержащей целлодекстринфосфорилазу, фосфоглюкомутазу, фосфоглюкоизомеразу, аллюлозо-6-фосфатэпимеразу и аллюлозо-6-фосфатфосфатазы;
(f) инкубирование реакционной смеси в присутствии целлодекстрина и неорганического фосфата с получением аллюлозы.
53. Бесклеточный способ по любому из пп. 48-52, при котором целлодекстринфосфорилаза(ы) выбрана(ы) из группы, состоящей из целлодекстринфосфорилаз Clostridium thermocellum, Clostridium straminisolvens, Thermotoga RQ2; Ignisphaera aggregans, Thermotoga maritima, Spirochaeta thermophila, Caldicellulosiruptor bescii, Dictyoglomus thermophilum, Thermoanaerobacterium thermosaccharolyticum, Thermosipho africanus, Caldisalinibacter kiritimatiensis, Defluviitalea phaphyphila, Caldicellulosiruptor kronotskyensis, Thermococcus sibiricus и Thermosphaera aggregans.
54. Бесклеточный способ по любому из пп. 48-53, при котором фосфоглюкомутаза(ы) выбраны(ы) из группы, состоящей из фосфоглюкомутаз Thermococcus kodakaraensis, Pyrococcus kukulkanii, Ammonifex degensii, Methanothermobacter wolfeii, Methanothermus fervidus, Sulfolobus acidocaldarius, Archaeoglobus fulgidus, Ferroglobus placidus, Geoglobus ahangari, Archaeoglobus veneficus, Archaeoglobus sulfaticallidus, Aciduliprofundum boonie, Clostridium thermocellum, Defluviitalea phaphyphila, Caminicella sporogenes, Caloranaerobacter ferrireducens, Thermosipho malanesiensis, Fervidobacterium pennivorans, Symbiobacterium thermophilum, Spirochaeta thermophila и Thermoanaerobacter wiegelii.
55. Бесклеточный способ по любому из пп. 48-54, при котором фосфоглюкоизомераза(ы) выбрана(ы) из группы, состоящей из фосфоглюкоизомераз Thermus thermophilus, Meiothermus timidus, Thermus filiformis, Marinithermus hydrothermalis, Thermosipho africanus, Sulfurihydrogenibium azorense, Persephonella marina, Marinitoga piezophila, Kosmotoga olearia, Thermotoga maritima, Geobacillus stearothermophilus, Anoxybacillus flavithermus, Thermosulfidibacter takaii, Fervidobacterium nodosum, Clostridium thermocellum, Thermoanaerobacterium thermosaccharolyticum, Methanococcus jannaschii, Methanotorris igneus, Methanocaldococcus villosus, Methanothermococcus okinawensis, Pseudothermotoga thermarum, Deferribacter desulfuricans и Thermovibrio ammonificans.
56. Бесклеточный способ по любому из пп. 48-55, при котором аллюлозо-6-фосфатэпимераза(ы) выбрана(ы) из группы, состоящей из аллюлозо-6-фосфатэпимераз Thermobacterium thermosaccharolyticum, Thermoanaerobacter brockii, Caldanaerobacter subterraneus, Deferribacter desulfuricans, Thermocrinis ruber, Hydrogenivirga sp. 128-5-R1-1, Brevibacillus thermoruber, Thermosipho atlanticus и Thermosulfidibacter takaii.
57. Бесклеточный способ по любому из пп. 48-56, при котором аллюлозо-6-фосфатфосфатаза(ы) выбрана(ы) из группы, состоящей из аллюлозо-6-фосфатфосфатаз Thermoanaerobacter wiegelii, Thermoanaerobacter ethanolicus, Thermus islandicus, Deinococcus geothermalis DSM 11300, Thermosphaera aggregans, Crenarchaeota archaeon, Pyrococcus horikoshii Ot3, Aquifex aeolicus, Ruminiclostridium thermocellum, Desulfotomaculum kuznetsovii, Caldanaerobacter subterraneus, Acidothermus cellulolyticus, Methanothermobacter thermautotrophicus, Thermobifida fusca, Thermotoga neapolitana, Petrotoga mobilis и Thermodesulfatator indicus, Thermus thermophilus, Bacteroides vulgatus и Bacteroides fragilus.
58. Способ по любому из пп. 48-57, при котором клетки включают бактериальные клетки.
59. Способ по любому из пп. 48-58, при котором клетки включают дрожжевые клетки.
60. Способ по любому из пп. 48-59, при котором по меньшей мере один из ферментов является гетерологичным по отношению к клеткам.
61. Способ по любому из пп. 48-60, при котором стадия (b) лизирования включает механическое, химическое или ферментативное лизирование культивированных клеток.
62. Способ по любому из пп. 48-61, при котором стадия нагревания (c) или (d) включает нагревание клеточного лизата до температуры по меньшей мере 50°C.
63. Способ по любому из пп. 48-62, при котором целлодекстринфосфорилаза содержит амилозу, амилопектин или как амилозу, так и амилопектин.
64. Способ по любому из пп. 48-63, при котором два или более ферментов из целлодекстринфосфорилазы, фосфоглюкомутазы, фосфоглюкоизомеразы, аллюлозо-6-фосфатэпимеразы, аллюлозо-6-фосфатфосфатазы и/или деветвящего фермента экспрессируются в форме единого гибридного белка, бифункционального или мультифункционального белка.
65. Клеточный лизат, полученный способом по любому из пп. 48-64.
66. Сконструированная клетка, содержащая целлодекстринфосфорилазу, фосфоглюкомутазу, фосфоглюкоизомеразу, аллюлозо-6-фосфатэпимеразу и аллюлозо-6-фосфатфосфатазу.
67. Сконструированная клетка, содержащая целлодекстринфосфорилазу, фосфоглюкомутазу, фосфоглюкоизомеразу, аллюлозо-6-фосфатэпимеразу и аллюлозо-6-фосфатфосфатазу, необязательно причем по меньшей мере один из вышеперечисленных ферментов является термостабильным ферментом.
68. Единый клеточный лизат, смесь клеточных лизатов, полученных по меньшей мере из двух клеточных популяций, или реакционная смесь, которые содержат целлодекстринфосфорилазу, фосфоглюкомутазу, фосфоглюкоизомеразу, аллюлозо-6-фосфатэпимеразу и аллюлозо-6-фосфатфосфатазу, необязательно причем по меньшей мере один из вышеперечисленных ферментов является термостабильным ферментом.
RU2019124813A 2017-01-06 2018-01-05 Бесклеточное получение сахаров RU2776637C2 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762443447P 2017-01-06 2017-01-06
US62/443,447 2017-01-06
US201762538181P 2017-07-28 2017-07-28
US62/538,181 2017-07-28
PCT/US2018/012516 WO2018129275A1 (en) 2017-01-06 2018-01-05 Cell-free production of sugars

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2019124813A true RU2019124813A (ru) 2021-02-08
RU2019124813A3 RU2019124813A3 (ru) 2021-11-29
RU2776637C2 RU2776637C2 (ru) 2022-07-22

Family

ID=

Also Published As

Publication number Publication date
US20220282291A1 (en) 2022-09-08
EP3565892A4 (en) 2020-10-07
US20190249210A1 (en) 2019-08-15
US10316342B2 (en) 2019-06-11
EP3565892A1 (en) 2019-11-13
US20200140907A1 (en) 2020-05-07
KR20190100386A (ko) 2019-08-28
CO2019007857A2 (es) 2019-08-30
US20180320210A1 (en) 2018-11-08
MX2019008159A (es) 2019-12-09
US20210123082A1 (en) 2021-04-29
WO2018129275A1 (en) 2018-07-12
JP7186167B2 (ja) 2022-12-08
CL2019001844A1 (es) 2019-11-29
CA3049386A1 (en) 2018-07-12
US10704067B2 (en) 2020-07-07
US10577635B2 (en) 2020-03-03
JP2020503059A (ja) 2020-01-30
RU2019124813A3 (ru) 2021-11-29
CN110300800A (zh) 2019-10-01
BR112019013853A2 (pt) 2020-01-28
AU2018205503A1 (en) 2019-07-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2020503059A5 (ru)
Bertoldo et al. Starch-hydrolyzing enzymes from thermophilic archaea and bacteria
US10704067B2 (en) Cell-free production of sugars
Zhou et al. One-pot biosynthesis of high-concentration α-glucose 1-phosphate from starch by sequential addition of three hyperthermophilic enzymes
Wang et al. Industrially produced pullulanases with thermostability: Discovery, engineering, and heterologous expression
Nakai et al. Efficient chemoenzymatic oligosaccharide synthesis by reverse phosphorolysis using cellobiose phosphorylase and cellodextrin phosphorylase from Clostridium thermocellum
Kitaoka Diversity of phosphorylases in glycoside hydrolase families
Li et al. An extremely thermostable amylopullulanase from Staphylothermus marinus displays both pullulan-and cyclodextrin-degrading activities
Verhaeghe et al. The quest for a thermostable sucrose phosphorylase reveals sucrose 6′-phosphate phosphorylase as a novel specificity
Andrade et al. Extremely thermophilic microorganisms and their polymer-hidrolytic enzymes
Amin et al. Glycoside hydrolases and glycosyltransferases from hyperthermophilic archaea: Insights on their characteristics and applications in biotechnology
Nahálka Physiological aggregation of maltodextrin phosphorylase from Pyrococcus furiosus and its application in a process of batch starch degradation to α-d-glucose-1-phosphate
Park et al. Characterization of an exo-acting intracellular α-amylase from the hyperthermophilic bacterium Thermotoga neapolitana
Ubiparip et al. Thermostable alpha-glucan phosphorylases: characteristics and industrial applications
Verhees et al. ADP-dependent phosphofructokinases in mesophilic and thermophilic methanogenic archaea
Sun et al. Construction of an artificial in vitro synthetic enzymatic platform for upgrading low-cost starch to value-added disaccharides
Elleuche et al. Starch-hydrolyzing enzymes from thermophiles
WO2022213721A1 (zh) 人工油体固定化多酶生产塔格糖的方法
Tian et al. Thermostable amylosucrase from Calidithermus timidus DSM 17022: insight into its characteristics and tetrameric conformation
Dai et al. Dictyoglomus turgidum DSM 6724 α-Glucan phosphorylase: Characterization and its application in multi-enzyme cascade reaction for d-tagatose production
Tian et al. Modulation of Flexible loops in catalytic cavities reveals the thermal activation mechanism of a glycogen-debranching enzyme
Hansen et al. The phosphofructokinase-B (MJ0406) from Methanocaldococcus jannaschii represents a nucleoside kinase with a broad substrate specificity
Ju et al. Biochemical and structural insights into an Ochrobactrum sp. CSL1 ribose-5-phosphate isomerase A and its roles in isomerization of rare sugars
Paul et al. A GH57 4-α-glucanotransferase of hyperthermophilic origin with potential for alkyl glycoside production
Sakuraba et al. Cloning, expression, and characterization of the first archaeal ATP-dependent glucokinase from aerobic hyperthermophilic archaeon Aeropyrum pernix