RU2016149102A - Новый биспецифический формат, подходящий для применения в скрининге с высокой пропускной способностью - Google Patents
Новый биспецифический формат, подходящий для применения в скрининге с высокой пропускной способностью Download PDFInfo
- Publication number
- RU2016149102A RU2016149102A RU2016149102A RU2016149102A RU2016149102A RU 2016149102 A RU2016149102 A RU 2016149102A RU 2016149102 A RU2016149102 A RU 2016149102A RU 2016149102 A RU2016149102 A RU 2016149102A RU 2016149102 A RU2016149102 A RU 2016149102A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- protein complex
- receptors
- bispecific protein
- fragment
- scfv
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/14—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from fungi, algea or lichens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
- C07K2319/21—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand containing a His-tag
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
- C07K2319/73—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing coiled-coiled motif (leucine zippers)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Claims (53)
1. Биспецифический белковый комплекс, имеющий формулу A-X:Y-B где:
A-X представляет собой слитый белок;
Y-B представляет собой второй слитый белок;
X:Y представляет собой гетеродимерный связующий фрагмент;
: обозначает связывающее взаимодействие между X и Y;
А представляет собой первый белковый компонент биспецифического белкового комплекса, выбранный из фрагмента Fab или Fabʹ;
В представляет собой второй белковый компонент биспецифического белкового комплекса, выбранный из фрагмента Fab или Fabʹ;
Х представляет собой первый партнер по связыванию связывающей пары, независимо выбранный из антигена, или антитела, или его связывающего фрагмента; и
Y представляет собой второй партнер по связыванию связывающей пары, независимо выбранный из антигена, или антитела, или его связывающего фрагмента;
с условием, что если Х представляет собой антиген, Y представляет собой антитело или его связывающий фрагмент, специфичные к антигену, обозначаемому X, и если Y представляет собой антиген, Х представляет собой антитело или его связывающий фрагмент, специфичные к антигену, обозначаемому Y.
2. Биспецифический белковый комплекс по п. 1, где A представляет собой фрагмент Fab.
3. Биспецифический белковый комплекс по п. 1, где B представляет собой фрагмент Fab.
4. Биспецифический белковый комплекс по п. 1, где X присоединен, необязательно через линкер, к C-концу тяжелой цепи фрагмента Fab или Fabʹ.
5. Биспецифический белковый комплекс по п. 1, где Y присоединен, необязательно через линкер, к C-концу тяжелой цепи фрагмента Fab или Fabʹ.
6. Биспецифический белковый комплекс по п. 1, где X независимо выбран из scFv, VHH и пептида, при условии, что, если X представляет собой пептид, Y представляет собой антитело, или его связывающий фрагмент, такой как scFv или VHH, а если X представляет собой scFv или VHH, Y представляет собой антиген, такой как пептид.
7. Биспецифический белковый комплекс по п. 1, где Y независимо выбран из scFv, VHH и пептида, при условии, что, если Y представляет собой пептид, X представляет собой антитело, или его связывающий фрагмент, такой как scFv или VHH, а если Y представляет собой scFv или VHH, X представляет собой антиген, такой как пептид.
8. Биспецифический белковый комплекс по п. 6, где длина пептида варьирует от 5 до 25 аминокислот.
9. Биспецифический белковый комплекс по п. 1, где сродство связывания между X и Y составляет 5 нМ или выше.
10. Биспецифический белковый комплекс по п. 9, где сродство связывания между X и Y составляет 900 пМ или выше, например, 800, 700, 600, 500, 400 или 300 пМ.
11. Биспецифический белковый комплекс по п. 1, где X ли Y представляет собой scFv или VHH, специфичный к пептиду GCN4 (SEQ ID NO:1, или аминокислоты 1-38 последовательности SEQ ID NO:1).
12. Биспецифический белковый комплекс по п. 11, где scFv представляет собой 52SR4 (SEQ ID NO:3, или аминокислоты 1-243 последовательности SEQ ID NO:3).
13. Биспецифический белковый комплекс по п. 1, где X или Y представляет собой пептид GCN4 (SEQ ID NO:1, или аминокислоты 1-38 последовательности SEQ ID NO:1).
14. Биспецифический белковый комплекс по п. 1, где A и/или B является специфичным к антигену, выбранному из группы, включающей в себя: рецепторы клеточной поверхности, такие как Т-клеточные или В-клеточные сигнальные рецепторы, костимуляторные молекулы, ингибиторы контрольных точек, рецепторы естественных клеток-киллеров, иммуноглобулиновые рецепторы, рецепторы семейства TNFR, рецепторы семейства В7, молекулы адгезии, интегрины, рецепторы цитокинов/хемокинов, GPCR, рецепторы факторов роста, киназа-содержащие рецепторы, тканеспецифические антигены, раковые антигены, рецепторы, распознающие патогены, рецепторы комплемента, рецепторы гормонов, или растворимые молекулы, такие как цитокины, хемокины, лейкотриены, факторы роста, гормоны, ферменты и ионные каналы.
15. Композиция, содержащая один или несколько биспецифических белковых комплексов, определенных по любому из пп. 1-14.
16. Биспецифический белковый комплекс по п. 1, или композиция по п. 15 для применения в терапии.
17. Способ детекции синергической функции биспецифического белкового комплекса по любому из пп. 1-14, включающий в себя тестирование биспецифического белкового комплекса с помощью одного или нескольких функциональных анализов.
18. Способ детекции синергической биологической функции гетеродимер-связанного биспецифического белкового комплекса формулы A-X:Y-B,
где Х:Y представляет собой гетеродимерный связующий фрагмент,
: обозначает связывающее взаимодействие между X и Y;
А и В представляют собой компоненты биспецифического комплекса, присутствующие в виде слитых белков с X и Y соответственно, а указанный способ включает в себя следующие стадии:
(i) тестирование части или всего мультиплекса, содержащего, по меньшей мере, один гетеродимер-связанный биспецифический белковый комплекс, на активность с помощью функционального анализа; и
(ii) анализ результатов функционального анализа с целью детекции синергической биологической функции гетеродимер-связанного биспецифического белкового комплекса;
где Y представляет собой антиген, а X представляет собой антитело, или его связывающий фрагмент, специфичный к Y, или X представляет собой антиген, а Y представляет собой антитело, или его связывающий фрагмент, специфичный к X.
19. Способ по п. 18, где мультиплекс находится в виде массива.
20. Способ по п. 18, где мультиплекс содержит, по меньшей мере, два гетеродимер-связанных биспецифических белковых комплекса.
21. Способ по п. 18, где гетеродимер-связанный биспецифический белковый комплекс (комплексы) не содержит участок Fc.
22. Способ по п. 18, где A независимо выбран из фрагмента Fab, фрагмента Fabʹ, VHH, VH, VL и scFv.
23. Способ по п. 22, где A представляет собой фрагмент Fab или Fabʹ, такой как Fab.
24. Способ по п. 18, где B независимо выбран из антитела, фрагмента Fab, фрагмента Fabʹ, VHH, VH, VL и scFv.
25. Способ по п. 24, где B представляет собой фрагмент Fab или Fabʹ, такой как Fab фрагмент.
26. Способ по п. 18, где X присоединен, необязательно через линкер, к C-концу тяжелой цепи антитела, фрагмента Fab или Fabʹ.
27. Способ по п. 18, где Y присоединен, необязательно через линкер, к C-концу тяжелой цепи антитела, фрагмента Fab или Fabʹ.
28. Способ по п. 18, где X независимо выбран из scFv, VHH и пептида, с условием, что, если Х представляет собой пептид, Y представляет собой антитело или его связывающий фрагмент, такой как scFv или VHH, а если Х представляет собой scFv или VHH, Y представляет собой антиген, такой как пептид.
29. Способ по п. 18, где Y независимо выбран из scFv, VHH и пептида, с условием, что, если Y представляет собой пептид, X представляет собой антитело или его связывающий фрагмент, такой как scFv или VHH, а если Y представляет собой scFv или VHH, X представляет собой антиген, такой как пептид.
30. Способ по п. 28, где длина пептида варьирует от 5 до 25 аминокислот.
31. Способ по п. 18, где сродство связывания между X и Y составляет 5 нМ или выше.
32. Способ по п. 31, где сродство связывания между X и Y составляет 900 пМ или выше, например, 800, 700, 600, 500, 400 или 300 пМ.
33. Способ по п. 18, где X или Y представляет собой scFv или VHH, специфичный к пептиду GCN4 (SEQ ID NO: 1, или аминокислоты 1-38 последовательности SEQ ID NO: 1).
34. Способ по п. 33, где scFv представляет собой 52SR4 (SEQ ID NO: 3, или аминокислоты 1-243 последовательности SEQ ID NO: 3).
35. Способ по п. 18, где X или Y представляет собой пептид GCN4 (SEQ ID NO: 1, или аминокислоты 1-38 последовательности SEQ ID NO: 1).
36. Способ по п. 18, где A и/или B является специфичным к антигену, выбранному из группы, включающей в себя: рецепторы клеточной поверхности, такие как Т-клеточные или В-клеточные сигнальные рецепторы, костимуляторные молекулы, ингибиторы контрольных точек, рецепторы естественных клеток-киллеров, иммуноглобулиновые рецепторы, рецепторы семейства TNFR, рецепторы семейства В7, молекулы адгезии, интегрины, рецепторы цитокинов/хемокинов, GPCR, рецепторы факторов роста, киназа-содержащие рецепторы, тканеспецифические антигены, раковые антигены, рецепторы, распознающие патогены, рецепторы комплемента, рецепторы гормонов, или растворимые молекулы, такие как цитокины, хемокины, лейкотриены, факторы роста, гормоны, ферменты и ионные каналы.
37. Способ по любому из пп. 18-36, где гетеродимер-связанные биспецифические белковые комплексы не очищают перед тестированием.
38. Способ по п. 37, где слитые белки A-X и Y-B получают путем временной экспрессии и не очищают перед смешиванием в молярном соотношении 1:1 с получением каждого гетеродимер-связанного биспецифического белкового комплекса.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB1409558.2A GB201409558D0 (en) | 2014-05-29 | 2014-05-29 | Method |
| GB1409558.2 | 2014-05-29 | ||
| PCT/EP2015/061819 WO2015181282A1 (en) | 2014-05-29 | 2015-05-28 | New bispecific format suitable for use in high-through-put screening |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2016149102A true RU2016149102A (ru) | 2018-07-03 |
| RU2016149102A3 RU2016149102A3 (ru) | 2019-02-04 |
| RU2780436C2 RU2780436C2 (ru) | 2022-09-23 |
Family
ID=
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| IL275743A (en) | B-specific template suitable for use in High-Through-Put filtering | |
| HRP20200679T1 (hr) | Molekule koje vežu antigen i sadrže trimer tnf ligand obitelji | |
| WO2018057735A8 (en) | Antibodies for siglec-15 and methods of use thereof | |
| RU2012131671A (ru) | Способ полипептидной модификации для очистки полипептидных мультимеров | |
| ES2657443T3 (es) | Anticuerpos anti-GITR y usos de los mismos | |
| HRP20210561T1 (hr) | Mjesta za vezanje antitijela specifičnih za egfrviii | |
| RU2018104703A (ru) | Опухолеспецифичное антитело против egfr и его применение | |
| IL275270A (en) | Recombinant scavenger cell surface proteins | |
| PE20191463A1 (es) | Anticuerpos biespecificos de union especifica pd1 y lag3 | |
| EA202192103A1 (ru) | Антитела и химерные антигенные рецепторы, специфичные к орфанному рецептору типа рецеторной тирозинкиназы 1 (ror1) | |
| EA200800696A1 (ru) | Полипептиды и антитела | |
| JP2016536322A5 (ru) | ||
| JP2016520600A (ja) | 新規抗体 | |
| JP2019528077A5 (ru) | ||
| HRP20140258T1 (hr) | Bispecifiäśni proteini koji se vežu na antigene | |
| EA201591407A1 (ru) | Антитела, содержащие химерные константные домены | |
| RU2015144098A (ru) | Четырехвалентные биспецифические антитела | |
| CA2797981A1 (en) | Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them | |
| JP2015146822A5 (ru) | ||
| RU2015152077A (ru) | Тримерные антигенсвязывающие молекулы | |
| RU2016114504A (ru) | Би- или полиспецифические полипептиды, связывающие поверхностные антигены иммунных эффекторных клеток и антигены hbv для лечения инфекций bv и ассоциированных с ними состояний | |
| JP2010511397A5 (ru) | ||
| JP2014158485A5 (ru) | ||
| JP2018528786A5 (ru) | ||
| AU2017361846A1 (en) | T cell recruiting polypeptides capable of binding CD123 and TCR alpha/beta |