RU2015150091A - Способ получения и использования тканеинженерных конструкций на основе прогениторных клеток для лечения заболеваний сердца - Google Patents

Claims (15)

1. Способ получения микроткани сердца на основе прогениторных клеток сердца, включающий получение культуры прогениторных клеток сердца с последующим их высаживанием на культуральные чашки из расчета 100000-1000000 клеток на см² площади поверхности и культивированием до формирования микроткани при температуре 34-37°С в течение 12-240 часов в среде роста, с последующим откреплением микроткани сердца от поверхности культуральной чашки, которое осуществляют посредством обработки микроткани сначала раствором, обеспечивающим удаление двухвалентных катионов кальция и магния при температуре буферного раствора +18 - +37°С, затем нейтральным раствором при температуре +2 - +4°С с последующим механическим снятием микроткани с поверхности культуральной чашки.

2. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что используют культуральные чашки с покрытием из коллагена, и/или фибронектина, и/или ламинина, и/или желатина, и/или фибрина в количестве 0,1-1000 мкг/см².

3. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что используют культуральные чашки диаметром 10-100 мм.

4. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что в качестве среды роста используют среду, содержащую 0,5-10% ФБС, 1-100 нг/мл bFGF, 1-100 нг/мл EGF, 2% В27, 1-5х инсулин-трансферрин селенита.

5. Способ по п. 4, характеризующийся тем, что в качестве среды роста используют среду DMEM F12, или IMDM, или F12, или RPMI, или MEM, или DMEM, или Myelocult.

6. Способ по п. 4, характеризующийся тем, что среда роста дополнительно содержит 0,01-3% пенициллина-стрептомицина, и/или 0,01-1 мМ 2-меркаптоэтанола, и/или 0,1-5 мМ Л-глутамина.

7. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что перед откреплением микроткани сердца от поверхности культуральной чашки ее промывают раствором для удаления следовых количеств среды роста при температуре буферного раствора +18 - +37°С.

8. Способ по п. 7, характеризующийся тем, что для промывки используют раствор Хэнкса, или раствор Эрла, или раствор Дульбекко.

9. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что в качестве раствора, обеспечивающего удаление двухвалентных катионов кальция и магния, используют раствора Версена, при этом промывку раствором осуществляют в 1-10 этапов.

10. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что в качестве нейтрального раствора, используют раствор Хэнкса без Са++ Mg++, или раствор Эрла, или раствор Дульбекко.

11. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что для механического снятия микроткани культуральную чашку помещают на лед.

12. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что для механического снятия с поверхности культуральной чашки микроткань одним неотрывным движением обводят по периметру культуральной чашки для отсоединения ее краев от бортов чашки, затем движениями, направленными от периферии микроткани к центру, добиваются отслойки микроткани от чашки, после отсоединения 80-90% микроткани от поверхности культуральной чашки аккуратными постукивающими движениями по дну чашки добиваются его флотации в фосфатно-солевом буфере.

13. Способ лечения заболеваний сердца, связанных с повреждением стенки левого и/или правого желудочков сердца при инфаркте миокарда, включающий трансплантацию микроткани, полученной по п. 1, в период фазы ранней диллатации стенки левого желудочка или в течение первых двух недель после инфаркта миокарда, при этом имикроткань на зону повреждения наносят поверхностью, которая при культивировании размещалась на культуральной чашке, после чего осуществляют послойное ушивание раны.

14. Способ по п. 13, характеризующийся тем, что ушивание раны осуществляют через 5-40 минут после нанесения микроткани на зону повереждения.

15. Способ по п. 13, характеризующийся тем, что микротканью сердца покрывают не менее 10-100% зоны повреждения.