RU2014149080A

RU2014149080A - Препарат экзосом - ОНКОСОМ, способ его получения, способ профилактики злокачественных новообразований и способ иммунотерапии солидных опухолей с его использованием

Info

Publication number: RU2014149080A
Application number: RU2014149080A
Authority: RU
Inventors: Сергей Петрович Голубков; Игорь Геннадьевич Сивов
Original assignee: Сергей Петрович Голубков; Игорь Геннадьевич Сивов
Priority date: 2014-12-05
Filing date: 2014-12-05
Publication date: 2016-06-27
Also published as: RU2593003C2

Abstract

1. Препарат экзосом, выделенных культурой клеток K562/i-S9, содержащий по данным иммуноферментного анализа белок в количестве 0,9-1,5 мкг/10клеток, антигены CEA в количестве 0,045-0,075 мкг/10клеток и 5Т4 -0,03-0,05 мкг/10клеток, а также лиганды FasL- менее 0,005 мкг/10клеток и TRAIL - менее 0,004 мкг/10клеток.2. Способ получения препарата экзосом по п. 1, заключающийся в том, что клетки линии K562/i-S9 культивируют при 36,5-37,5°С в течение 36-72 часов, выдерживают при 43-44°С, регенерируют при 36,5-37,5°С в течение 3,5-4,5 часов, замораживают и гомогенизируют до порошкообразного состояния, облучают гомогенат ультрафиолетовым излучением и осаждают клеточные фрагменты центрифугированием, в полученный супернатант добавляют этиловый спирт до получения его концентрации 84° и центрифугируют при 60000g в течение 20-25 минут, полученный осадок растворяют в дистиллированной воде, подвергают ультрафильтрации и лиофилизации.3. Способ профилактики злокачественных новообразований, заключающийся в вакцинации человека комбинацией препарата экзосом по п. 1 и олигодезоксинуклеотида Р-типа, представляющего собой последовательность нуклеотидов GGGGCGCCGTGATGGCGAGCGCGCC, которые вводят подкожно 1 раз в год в эффективном количестве, предпочтительно в дозах 0,01-0,04 мг/кг каждый.4. Способ иммунотерапии солидных опухолей, заключающийся в вакцинации пациента комбинацией препарата экзосом по п. 1 и олигодезоксинуклеотида Р-типа, представляющего собой последовательность нуклеотидов GGGGCGCCGTGATGGCGAGCGCGCC, которые вводят подкожно в течение не менее 2 месяцев и не реже 1 раза в неделю в эффективном количестве, предпочтительно в дозах 0,01-0,04 мг/кг каждый.5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что в течение, по меньшей мере, части периода вакцинации перорально вводят препарат - ингибитор ревертазы в эффективных дозах.

Claims

1. Препарат экзосом, выделенных культурой клеток K562/i-S9, содержащий по данным иммуноферментного анализа белок в количестве 0,9-1,5 мкг/10⁶ клеток, антигены CEA в количестве 0,045-0,075 мкг/10⁶ клеток и 5Т4 -0,03-0,05 мкг/10⁶ клеток, а также лиганды FasL- менее 0,005 мкг/10⁶ клеток и TRAIL - менее 0,004 мкг/10⁶ клеток.

2. Способ получения препарата экзосом по п. 1, заключающийся в том, что клетки линии K562/i-S9 культивируют при 36,5-37,5°С в течение 36-72 часов, выдерживают при 43-44°С, регенерируют при 36,5-37,5°С в течение 3,5-4,5 часов, замораживают и гомогенизируют до порошкообразного состояния, облучают гомогенат ультрафиолетовым излучением и осаждают клеточные фрагменты центрифугированием, в полученный супернатант добавляют этиловый спирт до получения его концентрации 84° и центрифугируют при 60000g в течение 20-25 минут, полученный осадок растворяют в дистиллированной воде, подвергают ультрафильтрации и лиофилизации.

3. Способ профилактики злокачественных новообразований, заключающийся в вакцинации человека комбинацией препарата экзосом по п. 1 и олигодезоксинуклеотида Р-типа, представляющего собой последовательность нуклеотидов GGGGCGCCGTGATGGCGAGCGCGCC, которые вводят подкожно 1 раз в год в эффективном количестве, предпочтительно в дозах 0,01-0,04 мг/кг каждый.

4. Способ иммунотерапии солидных опухолей, заключающийся в вакцинации пациента комбинацией препарата экзосом по п. 1 и олигодезоксинуклеотида Р-типа, представляющего собой последовательность нуклеотидов GGGGCGCCGTGATGGCGAGCGCGCC, которые вводят подкожно в течение не менее 2 месяцев и не реже 1 раза в неделю в эффективном количестве, предпочтительно в дозах 0,01-0,04 мг/кг каждый.

5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что в течение, по меньшей мере, части периода вакцинации перорально вводят препарат - ингибитор ревертазы в эффективных дозах.