RU2013773C1

RU2013773C1 - Method of glycemia assay in cadaverous blood

Info

Publication number: RU2013773C1
Authority: RU
Inventors: Н.Н. Качина; Г.Г. Ковалева; В.Н. Крюков; В.К. Городецкий; В.Е. Формазюк
Original assignee: Качина Наталия Николаевна
Priority date: 1990-10-31
Filing date: 1990-10-31
Publication date: 1994-05-30

Abstract

FIELD: medicine. SUBSTANCE: method involves determination of glycated hemoglobin, and glycemia is diagnosed if its concentration is increased by 2-3 times as compared with normal value. Positive effect: invention ensures to determine glycemia for elapsed 3-4 months of life. EFFECT: enhanced precision of assay.

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к судебной медицине. The invention relates to medicine, namely to forensic medicine.

Целью изобретения является повышение точности. The aim of the invention is to increase accuracy.

П р и м е р 1. Мужчина 60 лет, смерть наступила от острой кровопотери в результате разрыва внутренних органов при автомобильной травме. Кровь взята шприцом из бедренной вены. Исследование проводят спустя 1-1,5 ч после взятия крови. Для определения концентрации общего гемоглобина в 5 мл трансформирующего раствора, состоящего из ацетоциангидрина-0,5 мл, калия железистосинеродистого - 200 мг, натрия двууглекислого - 1 г и дистиллированной воды до 1 л, добавляют 10 мкл цельной жидкой трупной крови, дают постоять 20 мин и затем колориметрируют на спектрофотометре СФ-26 против холостой пробы при длине волны 620 нм. Экстинкция общего гемоглобина равна 0,226, затем по калибровочному графику находят концентрацию общего гемоглобина, она равна 8,4 г% ; что соответствует 1,30˙ 10^-3 моль/л. Затем определяют концентрацию гликированного гемоглобина. Для этого в пробирку наливают 0,1 мл цельной трупной крови, добавляют 0,9 мл дистиллированной воды и 0,5 мл 0,2 н. раствора трихлоруксусной кислоты. Пробирку закрывают резиновой пробкой, в которую вставлена инъекционная игла. Пробу перемешивают и ставят в штатив, помещенный в кипящую водяную баню. Через 10 мин иглы вынимают. Пробу нагревают еще 50 мин (общее время нагрева 60 мин). Затем пробу вынимают и после охлаждения к ней добавляют 0,5 мл 40% -ного раствора трихлоруксусной кислоты. После перемешивания пробу центрифугируют 10 мин при 6000 об/мин. Затем в обычную пробирку отбирают 1 мл надосадочной жидкости и добавляют 1 мл концентрированной соляной кислоты и 1 мл 0,02 М раствора тиобарбитуровой кислоты. Пробу перемешивают, пробирку закрывают стеклянной пробкой "слезкой" и инкубируют 6 мин на кипящей водяной бане. После инкубации измеряют величину экстинкции окрашенного комплекса при длине волны 432,5 нм. Окраска стабильна в течение 1 ч. Контрольная проба содержит 1 мл дистиллированной воды, 1 мл концентрированной соляной кислоты и 1 мл 0,02 М раствора тиобарбитуровой кислоты, контроль нагревают 6 мин на кипящей водяной бане.PRI me R 1. A man of 60 years old, death came from acute blood loss as a result of rupture of internal organs in a car accident. Blood taken by a syringe from a femoral vein. The study is carried out after 1-1.5 hours after taking the blood. To determine the concentration of total hemoglobin in 5 ml of a transforming solution consisting of acetocyanhydrin-0.5 ml, potassium ferruginate - 200 mg, sodium bicarbonate - 1 g and distilled water up to 1 l, add 10 μl of whole liquid cadaveric blood, allow to stand for 20 minutes and then colorimetric on an SF-26 spectrophotometer against a blank at a wavelength of 620 nm. The extinction of the total hemoglobin is equal to 0.226, then, according to the calibration graph, the concentration of total hemoglobin is found, it is equal to 8.4 g%; which corresponds to 1.30˙ 10 ^-3 mol / l. Then determine the concentration of glycated hemoglobin. To do this, 0.1 ml of whole cadaveric blood is poured into a test tube, 0.9 ml of distilled water and 0.5 ml of 0.2 N are added. trichloroacetic acid solution. The tube is closed with a rubber stopper into which the injection needle is inserted. The sample is mixed and placed in a tripod placed in a boiling water bath. After 10 minutes, the needles are removed. The sample is heated for another 50 minutes (total heating time 60 minutes). Then the sample is taken out and after cooling, 0.5 ml of a 40% trichloroacetic acid solution is added to it. After stirring, the sample is centrifuged for 10 minutes at 6000 rpm. Then, 1 ml of the supernatant was collected in a standard tube and 1 ml of concentrated hydrochloric acid and 1 ml of a 0.02 M thiobarbituric acid solution were added. The sample is mixed, the test tube is closed with a glass stopper "tear" and incubated for 6 min in a boiling water bath. After incubation, the extinction of the colored complex is measured at a wavelength of 432.5 nm. The color is stable for 1 hour. The control sample contains 1 ml of distilled water, 1 ml of concentrated hydrochloric acid and 1 ml of a 0.02 M solution of thiobarbituric acid, the control is heated for 6 min in a boiling water bath.

Содержание гликированного гемоглобина в крови выражают в процентах от суммарного гемоглобина. Определение концентрации гликированного гемоглобина проводят по калибровочному графику, построенному по стандартным растворам кетоаминного соединения - фруктозоглицина, величина экстинкции которого соответствует величине экстинкции гликированного гемоглобина. The content of glycated hemoglobin in the blood is expressed as a percentage of the total hemoglobin. Determination of the concentration of glycated hemoglobin is carried out according to the calibration graph, built on standard solutions of the ketoamine compound - fructozoglycine, the extinction value of which corresponds to the magnitude of the extinction of glycated hemoglobin.

Величина экстинкции гликированного гемоглобина равна 0,078, что по калибровочному графику соответствует концентрации 3,0˙ 10^-4 моль/л. Далее подставляют в формулу
(% ) =

100% =

100% = 5.76 % .The magnitude of the extinction of glycated hemoglobin is 0.078, which according to the calibration graph corresponds to a concentration of 3.0 · 10 ^-4 mol / l. Next, substitute in the formula
(%) =

100% =

100% = 5.76%.

П р и м е р 2. Мужчина 52 лет, смерть наступила внезапно от ишемической болезни сердца. Кровь взята шпpицом из печеночных вен (а)= портальной вены (в) и подвздошной вены (с). Исследования проводят соответственно описанным методикам. Содержание гликированного гемоглобина соответственно равно:
а) 4,16% в) 3,46% с) 5,17%
Содержание глюкозы в тех же образцах крови соответственно равно:
а) 76 мг% в) 3315 мг% с) 84 мг% , что показывает резкое отличие содержания глюкозы в различных отделах сосудистой системы трупа, в то время как количество гликированного гемоглобина примерно одинаково во всех образцах.PRI me R 2. A man of 52 years, death occurred suddenly from coronary heart disease. Blood was taken from the hepatic veins (a) = portal vein (c) and iliac vein (s). Studies are carried out according to the described methods. The content of glycated hemoglobin is respectively equal to:
a) 4.16% c) 3.46% c) 5.17%
The glucose content in the same blood samples is respectively equal to:
a) 76 mg% c) 3315 mg% c) 84 mg%, which shows a sharp difference in the glucose content in different parts of the vascular system of the corpse, while the amount of glycated hemoglobin is approximately the same in all samples.

Использование изобретения позволит определить гликемию за истекшие 3-4 месяца жизни. Using the invention will determine glycemia over the past 3-4 months of life.

Claims

METHOD FOR DETERMINING GLYCEMIA IN CORE BLOOD by means of biochemical blood tests, characterized in that, in order to increase accuracy, the concentration of glycated hemoglobin is determined and, with an increase in its concentration by 2 to 3 times, the glycemia is determined over the past 3 to 4 months of life.