RU2013152864A

RU2013152864A - Высокоселективный ингибитор контактной активации на основе инфестина 4

Info

Publication number: RU2013152864A
Application number: RU2013152864/10A
Authority: RU
Inventors: Фазоил Иноятович Атауллаханов; Михаил Александрович Пантелеев; Владимир Николаевич Колядко; Татьяна Алексеевна Вуймо; Рузанна Арменовна Овсепян; Степан Сергеевич Суров; Вера Анатольевна Корнеева
Original assignee: Общество с ограниченной ответственностью "Гематологическая Корпорация" (ООО "ГемаКор")
Priority date: 2013-11-28
Filing date: 2013-11-28
Publication date: 2015-06-10
Also published as: WO2015080629A1; EP3075742A1; US20160376634A1; US10006080B2; EP3075742A4; RU2556116C2; EP3075742B1

Abstract

1. Полипептид для ингибирования контактной активации в тестируемом образце крови или ее продукта, который характеризуется последовательностью мутанта инфестина 4 MutB (SEQ ID NO: 1) и по существу соответствует ей, где указанная последовательность может иметь модификации вне участка ингибирующей петли, существенно сохраняющие активность указанного полипептида, являющегося высокоселективным ингибитором фХIIа, селективность которого выше, чем у нативного инфестина 4 и Mut15, или активность которого выше, чем у нативного инфестина 4 и Mut15.2. Полипептид по п. 1, где модификации аминокислотной последовательности вне участка ингибирующей петли представляют собой изменения N- или С-концов последовательности SEQ ID NO: 1, делеции или вставки одного или нескольких аминокислотных остатков, а также консервативные аминокислотные замены.3. Применение полипептида по п. 1 для исследования свертывания в тестируемом образце крови или ее продукта, которое включаетa) получение образца для исследования свертывания,b) подавление контактной активации свертывания в образце посредством приведения образца в контакт с упомянутым полипептидом и инкубация полученной смеси,c) приведение в контакт активатора свертывания крови с образцом, подготовленным на стадии b); иd) измерение параметров свертывания в образце.4. Применение по п. 3, где получение тестируемого образца крови или ее продукта включает забор крови в пробирку, содержащую антикоагулянт, выбранный из группы: цитрат натрия, ЭДТА, ингибитор тромбина или ингибитор фХа, и последующее блокирование антикоагулянта, в частности, рекальцификация образца.5. Применение по п. 4, где получение образца крови

Claims

1. Полипептид для ингибирования контактной активации в тестируемом образце крови или ее продукта, который характеризуется последовательностью мутанта инфестина 4 MutB (SEQ ID NO: 1) и по существу соответствует ей, где указанная последовательность может иметь модификации вне участка ингибирующей петли, существенно сохраняющие активность указанного полипептида, являющегося высокоселективным ингибитором фХIIа, селективность которого выше, чем у нативного инфестина 4 и Mut15, или активность которого выше, чем у нативного инфестина 4 и Mut15.

2. Полипептид по п. 1, где модификации аминокислотной последовательности вне участка ингибирующей петли представляют собой изменения N- или С-концов последовательности SEQ ID NO: 1, делеции или вставки одного или нескольких аминокислотных остатков, а также консервативные аминокислотные замены.

3. Применение полипептида по п. 1 для исследования свертывания в тестируемом образце крови или ее продукта, которое включает

a) получение образца для исследования свертывания,

b) подавление контактной активации свертывания в образце посредством приведения образца в контакт с упомянутым полипептидом и инкубация полученной смеси,

c) приведение в контакт активатора свертывания крови с образцом, подготовленным на стадии b); и

d) измерение параметров свертывания в образце.

4. Применение по п. 3, где получение тестируемого образца крови или ее продукта включает забор крови в пробирку, содержащую антикоагулянт, выбранный из группы: цитрат натрия, ЭДТА, ингибитор тромбина или ингибитор фХа, и последующее блокирование антикоагулянта, в частности, рекальцификация образца.

5. Применение по п. 4, где получение образца крови или ее продукта дополнительно включает очистку крови от нежелательных клеток и клеточных компонентов, в частности, путем фильтрации или центрифугирования.

6. Применение по п. 3, где образец крови или ее продукта является свежеполученным, находится в лиофилизованной или замороженной форме, которую переводят в жидкую форму перед проведением исследования.

7. Применение по п. 6, где образец крови или ее продукта представляет собой цельную кровь или ее продукты, такие как богатая тромбоцитами плазма, бедная тромбоцитами плазма, освобожденная от тромбоцитов плазма, фракционированная плазма.

8. Применение по п. 3, где образец крови или ее продукта получен от здорового субъекта или от субъекта, который страдает нарушением свертывания крови, в частности, от субъекта с геморрагиями или тромбозами, имеющего нарушения или дефициты системы гемостаза.

9. Применение по п. 3, где образец крови или ее продукта получен от пациента при хирургических вмешательствах или при осуществлении терапии.

10. Применение по п. 3, где образец крови или ее продукта содержит природные или рекомбинантные белки или другие препараты, которые обладают гемостатической или фибринолитической активностью.

11. Применение по п. 3, где указанный полипептид находится в высушенной форме, или лиофилизованной форме, или адсорбирован на поверхности, с которой контактирует образец крови или ее продукта, или предварительно растворен в растворе, содержащем соль, буферное вещество, экципиент или стабилизатор.

12. Применение по п. 3, где смесь, полученная на стадии b), инкубируется при температуре от +20°C до+40°C, предпочтительно, при +37°C, в течение времени, по меньшей мере, 3 минуты.

13. Применение по п. 3, где указанный полипептид берут в количестве, достаточном для эффективного блокирования контактной активации.

14. Применение по п. 13, где достаточным является количество указанного полипептида, при котором АЧТВ нормальной плазмы увеличено более чем в 2 раза, преимущественно более чем в 3 раза, по сравнению с АЧТВ плазмы без полипептида.

15. Применение по п. 14, где достаточным является количество указанного полипептида, при котором отсутствуют артефактные сгустки вдали от активатора свертывания в образце нормальной замороженной плазмы, в течение более чем 15 минут, преимущественно более чем 30 минут, после активации.

16. Применение по п. 3, где приведение в контакт активатора свертывания крови с образцом крови или ее продукта на этапе с) осуществляют путем добавления в указанный образец и последующего перемешивания активатора свертывания в растворенной форме.

17. Применение по п. 3, где активатор свертывания в растворенной форме наслаивают на образец крови или ее продукта без перемешивания, или образец приводят в контакт с активатором, который иммобилизован на поверхности.

18. Применение по п. 3, где активатор свертывания является тканевым фактором или одной из протеаз свертывания: VIIa, Ха, II, IXa, ХIа, ХIIа.

19. Применение по п. 3, где параметрами свертывания являются: время задержки начала свертывания, время свертывания, время задержки наработки тромбина, время достижения максимума тромбина, максимальная концентрация тромбина, угол наклона тромбоэластограммы, скорость роста сгустка, размер сгустка в фиксированный момент времени, наличие сгустков вдали от активатора свертывания, скорость лизиса сгустка.

20. Применение полипептида по п. 1 в качестве антикоагулянта, блокирующего контактную активацию, путем приведения в контакт с указанным полипептидом образца крови или ее продукта, для забора и увеличения времени хранения образца.

21. Применение по п. 20, где указанный полипептид находится в высушенной форме, или лиофилизованной форме, или адсорбирован на поверхности, с которой контактирует образец, или предварительно растворен в растворе, содержащем соль, буферное вещество, экципиент или стабилизатор.

22. Применение по п. 20, где забор крови осуществляется в пробирку, содержащую антикоагулянт, выбранный из группы: цитрат натрия, ЭДТА, ингибитор тромбина или ингибитор фХа.

23. Применение по п. 20, где хранение образца крови или ее продукта производится в замороженном виде при отрицательных температурах ниже 0°C, преимущественно ниже -50°C, или в жидком виде при положительной температуре более 0°C, преимущественно от +20°C до +40°C.

24. Применение по п. 20, где время хранения составляет более 10 минут, преимущественно, от одного дня и более, преимущественно, более одной недели.

25. Применение по п. 20, где образец крови или ее продукта получен от субъекта, не имеющего нарушений свертывания крови, или от субъекта, который страдает нарушением свертывания крови, в частности, от субъекта с геморрагиями или тромбозами, имеющего нарушения или дефициты системы гемостаза, или от субъекта при хирургических вмешательствах или при осуществлении терапии.