RU2013143490A

RU2013143490A - Способ выявления циркулирующих опухолевых клеток, микроэмбол и апоптотических телец в крови больных раком легкого человека

Info

Publication number: RU2013143490A
Application number: RU2013143490/15A
Authority: RU
Inventors: Татьяна Николаевна Замай; Галина Сергеевна Замай; Ольга Сергеевна Коловская; Анна Сергеевна Замай; Алексей Васильевич Крат; Виктор Константинович Бельтюков; Андрей Арсеньевич Модестов
Original assignee: Общество с ограниченной ответственностью "МедБиоТех"
Priority date: 2013-09-26
Filing date: 2013-09-26
Publication date: 2015-04-10
Also published as: RU2571821C2

Abstract

1. Способ выявления циркулирующих опухолевых клеток, микроэмбол и апоптотических телец в крови больных раком легкого человека, включающий центрифугирование образца периферической крови больных раком легкого, отделение плазмы крови, инкубацию концентрированного клеточного осадка с гипотоническим раствором хлорида аммония с разрушением эритроцитов, ресуспензирование оставшихся клеток в фосфатном буфере, микроскопирование образца на предметных стеклах, отличающийся тем, что перед стадией ресуспензирования оставшиеся после разрушения эритроцитов клетки осаждают центрифугированием и путем добавления гипотонического раствора хлорида натрия частично разрушают лейкоциты, далее образец центрифугируют и снимают надосадок, осадок, содержащий неразрушенные клетки, ресуспензируют в фосфатном буфере, содержащем Caи Mg, для восстановления объема оставшихся клеток, после чего клетки концентрируют для уменьшения общего объема образца, полученную клеточную суспензию инкубируют с маскирующей ДНК, затем добавляют аптамеры, специфичные к раку легкого, меченые флуоресцентной меткой, полученные образцы исследуют с помощью методов микроскопии, позволяющих регистрировать флуоресцентные метки.2. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют аптамеры, специфичные к опухолевым тканям легкого человека, полученные в процессе селекции, имеющие установленную нуклеотидную последовательность, отраженную как SEQ ID NO 1 - SEQ ID NO 34.3. Способ по п.1, отличающийся тем, что после стадии инкубации клеточной суспензии с маскирующей ДНК одновременно с аптамерами добавляют моноклональные антитела, меченные флуоресцентной меткой, специф�

Claims

1. Способ выявления циркулирующих опухолевых клеток, микроэмбол и апоптотических телец в крови больных раком легкого человека, включающий центрифугирование образца периферической крови больных раком легкого, отделение плазмы крови, инкубацию концентрированного клеточного осадка с гипотоническим раствором хлорида аммония с разрушением эритроцитов, ресуспензирование оставшихся клеток в фосфатном буфере, микроскопирование образца на предметных стеклах, отличающийся тем, что перед стадией ресуспензирования оставшиеся после разрушения эритроцитов клетки осаждают центрифугированием и путем добавления гипотонического раствора хлорида натрия частично разрушают лейкоциты, далее образец центрифугируют и снимают надосадок, осадок, содержащий неразрушенные клетки, ресуспензируют в фосфатном буфере, содержащем Ca²⁺ и Mg²⁺, для восстановления объема оставшихся клеток, после чего клетки концентрируют для уменьшения общего объема образца, полученную клеточную суспензию инкубируют с маскирующей ДНК, затем добавляют аптамеры, специфичные к раку легкого, меченые флуоресцентной меткой, полученные образцы исследуют с помощью методов микроскопии, позволяющих регистрировать флуоресцентные метки.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют аптамеры, специфичные к опухолевым тканям легкого человека, полученные в процессе селекции, имеющие установленную нуклеотидную последовательность, отраженную как SEQ ID NO 1 - SEQ ID NO 34.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что после стадии инкубации клеточной суспензии с маскирующей ДНК одновременно с аптамерами добавляют моноклональные антитела, меченные флуоресцентной меткой, специфичные к антигенам эпителиальных клеток.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что выявление циркулирующих опухолевых клеток, микроэмбол и апоптотических телец в крови больных раком легкого человека осуществляют путем микроскопирования мазка, полученного в результате распределенного по предметному стеклу осадка от центрифугирования полученного образца для исследования, зафиксированного в метиловом спирте и окрашенного по Романовскому-Гимзе.