RU2012888C1 - Способ получения латексного диагностикума - Google Patents
Способ получения латексного диагностикума Download PDFInfo
- Publication number
- RU2012888C1 RU2012888C1 SU4941436A RU2012888C1 RU 2012888 C1 RU2012888 C1 RU 2012888C1 SU 4941436 A SU4941436 A SU 4941436A RU 2012888 C1 RU2012888 C1 RU 2012888C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- diagnosticum
- latex
- polygroup
- immunoglobulins
- hours
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а более конкретно к микробиологии. Целью является повышение информативности диагностикума и сорбционной емкости латекса. Поставленная цель достигается тем, что получают полигрупповую сыворотку путем одновременной иммунизации кроликов смесью антигенов возбудителей чумы, сапа, мелиоидоза, туляремии и бруцеллеза в соотношении 0,1 : 1 : 1 : 6 : 4, в качестве сенситина использованы иммуноглобулины из полигрупповой сыворотки. Сенсибилизацию латексов проводили при соотношении 10 мг носителя на 0,1 мг глобулинов, при PH - 7,0 - 7,4, в течение 4 ч при комнатной температуре, затем 12 ч при 4С при постоянном равномерном перемешивании. Способ обеспечивает увеличение глобулиновой нагрузки на единицу носителя и позволяет сократить как минимум в 2 раза время анализа, в 4 раза снизить расходы препаратов относительно прототипа при использовании полученного диагностикума. 1 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, а более конкретно к микробиологии, и касается лабораторной диагностики особо опасных инфекций.
Известны различные способы получения диагностикумов с использованием искусственных носителей.
Методика получения латексного диагностикума на основе моноклональных антител (МКАТ) к V. cholerae серогруппы 01 с чувствительностью 5˙106-1˙107 КОЕ/мл сложна и требует дополнительного применения дорогостоящего оборудования и химреактивов.
Известен также диагностикум с полимерными микросферами диаметром 4-5 мкм в качестве носителей, ковалентно связанными с иммуноглобулинами из чумных коммерческих агглютинирующих сывороток. Активность диагностикума с типичными штаммами возбудителя чумы, выращенными при 37оС составила 3˙ 105 м. т. /мл, но чувствительность по отношению к микроорганизму, культивированному при 28оС значительно ниже - 5 ˙107 м. т. /мл.
Наиболее близким аналогом (прототипом) является способ получения антительного диагностикума, в котором в качестве носителя использована суспензия полиакролеинового латекса с диаметром сфер 1,8 мкм, активированная казеином и танином. Латексные частицы сенсибилизировали иммуноглобулинами чумной сыворотки в соотношении 0,15 мг иммуноглобулина на 50 мг носителя, экспозиция 3 ч при комнатной температуре и постоянном перемешивании. Затем сенсибилизированную суспензию осаждали и дважды промывали 0,15 М раствором NaCl. Отмытую сенсибилизированную суспензию полиакролеинового носителя диспергировали в 1 мл 5% -ного желатоза 5% -ной сахарозной среды, разливали по 0,2 мл в ампулы и лиофильно высушивали. Лиофилизированное содержимое ампулы суспендировали в 4 мл 0,05 М ФСБ рН 7,2 и использовали для постановки реакции агглютинации латекса.
Была отмечена высокая специфичность и чувствительность полученного диагностикума. Однако, при необходимости резкого увеличения объема работы по обнаружению неизвестного возбудителя опасных инфекций бактериальной природы, например в условиях эпидотряда, коммерческие иммуноглобулиновые монодиагностикумы мало пригодны. Каждую поступившую пробу необходимо исследовать по крайней мере с четырьмя различными препаратами, что очень громоздко и неприемлемо, особенно в полевых условиях.
Предлагаемый полигрупповой латексный диагностикум в четыре раза сокращает количество анализов и значительно экономит бакпрепараты.
Целью изобретения является способ получения полигруппового иммуноглобулинового диагностикума к пяти видам возбудителей особо опасных бактериальных инфекций, позволяющий увеличить количество адсорбированных иммуноглобулинов на единице носителя и сократить время анализа при использовании полученного диагностикума.
Поставленная цель достигается тем, что получают полигрупповую сыворотку путем одновременной иммунизации кроликов смесью антигенов возбудителей чумы, сапа, мелиоидоза, туляремии и бруцеллеза в соотношении 0,1: 1: 1: 6: 4. Иммуноглобулины из сывороток выделяют каприловой кислотой по известной методике. Полиакролеиновые частицы с микросфер 1,8 мкм сенсибилизируют иммуноглобулинами полигрупповой сыворотки по следующей методике. Приливают в бюкс равные объемы 1,25% -ной латексной суспензии и взвеси иммуноглобулинов с концентрацией белка 50-100 мкг/мл и перемешивают на магнитной мешалке при температуре 20-23оС в течение 4 ч. Затем этот процесс продолжают при температуре 4-5оС 12 ч. Смесь отмывают 0,15 М раствором ФСБ и осадок ресуспендируют в 1 мл среды высушивания, состоящей из смеси 2% -ного раствора бычьего сывороточного альбумина и 5% -ного раствора сахарозы. Диагностикум разливают в ампулы по 0,5 мл и лиофильно высушивают. Перед постановкой реакции агглютинации латекса содержимое ампулы растворяют в 5 мл 0,05 М ФСБ рН 7,2.
Таким образом, применение предложенной совокупности приемов (получение полигрупповой сыворотки, сенсибилизация латекса полигрупповыми иммуноглобулинами) позволило придать способу новое качество - получить полигрупповой диагностикум, который позволяет обнаруживать любой из пяти бактериальных возбудителей особо опасных инфекций в загрязненных пробах, что значительно сокращает время и объем проводимого анализа и дает возможность повысить сорбционную емкость носителя.
П р и м е р 1. Готовят забуференный 0,15 М раствор NaCl pH 7,2 и используют его в качестве разводящей жидкости. 1 мл 1,25% -ной суспензии полиакролеинового латекса приливают к 1 мл взвеси полигрупповых иммуноглобулинов с концентрацией белка 100 мкг/мл и перемешивают на магнитной мешалке при 20оС в течение 4 ч. Затем перемешивание продолжается при 4оС 12 ч. Сенсибилизированный латекс осаждают центрифугированием при 3 тыс. об. /мин, отмывают 0,05 М раствором ФСБ и осадок ресуспендируем в 10 мл этого же раствора. С полученным диагностикумом ставят реакцию агглютинации латекса. Контроли: 1) диагностикум с разводящей жидкостью; 2) диагностикум с взвесью гетерологичных микроорганизмов. Наблюдают положительную реакцию (зонтики) в лунках, где содержатся возбудители чумы, сапа, мелиоидоза, туляремии бруцеллеза в концентрации ≥6˙105 м. т. /мл. В контролях-компактные диски на дне лунок.
П р и м е р 2. Сенсибилизация как в примере 1, но в качестве разводящей жидкости используют забуференный 0,15 М раствор NaCl pH - 7,0. При постановке реакции агглютинации латекса наблюдают широкие "пуговки" на дне лунок в контролях, т. е. результат сомнительный.
П р и м е р 3. Сенсибилизация латекса как в примере 1, но рН разводящей жидкости 7,4. Полученный диагностикум в контролях дает нечетко очерченные диски на мутном фоне, т. е. результат сомнительный.
П р и м е р 4. Готовят 4 диагностикума с концентрациями белка 50 и 100 мкг/мл (1 пара) и 50 и 100 мкг/мл (2 пара), как в примере 1, причем первые 2 сенсибилизируют только 4 ч, а два других дополнительно по 12 ч при 4оС.
С полученными диагностикумами ставят реакции агглютинации латекса, используя взвеси убитых микроорганизмов.
Результаты РАЛ приведены в таблице.
Таким образом, как видно из таблицы, увеличение нагрузки глобулинов на единицу носителя приводит к спонтанной агглютинации в контролях, что препятствует получению полигруппового диагностикума известным способом, а предлагаемый способ позволяет достичь указанную цель.
П р и м е р 5. Для исследования поступило 20 проб полевого материала, подозреваемого на зараженность возбудителями бактериальных особо опасных инфекций. Анализ проведен с помощью коммерческих монодиагностикумов чумного, сапного, мелиоидозного, туляремийного, бруцеллезного. Всего поставлено 80 реакций. Параллельно исследовали поступившие пробы диагностикумом полигрупповым латексным. Проведено 20 анализов. Результаты по всем пробам получены в первом случае через 6 ч (из расчета 3 мин на 1 анализ и 2 ч на получение четких результатов), с использованием полигруппового диагностикума 3 ч. Затрачено 24 мл (6 мл х 4) монодиагностикумов и 6 мл полигруппового диагностикума соответственно в 1-м и 2-м случаях.
Как видно по результатам, сэкономлены время, диагностические препараты, планшеты, снижены трудозатраты на исследование проб. Причем, эффект от применения полигруппового латексного диагностикума будет возрастать с увеличением количества поступивших для анализа проб.
Таким образом, благодаря предлагаемому способу удалось получить полигрупповой диагностикум, позволяющий сократить в 2 раза время анализа, в 4 раза сократить объем расхода препаратов относительно прототипа и увеличить глобулиновую нагрузку на единицу носителя.
(56) Авторское свидетельство СССР N 1596926, кл. G 01 N 33/53, 1989.
Claims (1)
- СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛАТЕКСНОГО ДИАГНОСТИКУМА путем сенсибилизации полиакролеинового латекса иммуноглобулинами чумной сыворотки, отличающийся тем, что, с целью повышения информативности диагностикума и повышения сорбционной емкости латексных частиц, сенсибилизацию осуществляют иммуноглобулинами антисыворотки, содержащей дополнительно иммуноглобулины к сапу, мелиоидозу, туляремии и бруцеллезу и полученной при иммунизации кроликов соответствующими антителами в соотношении 0,1 : 1 : 1 : 6 : 4, причем при сенсибилизации берут 0,1 мг глобулинов на 10 мг частиц латекса, ингибируют при рН 7,0 - 7,4 в течение 4 ч в комнатной температуре и 12 ч при 4oС при постоянном равномерном перемешивании.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU4941436 RU2012888C1 (ru) | 1991-06-03 | 1991-06-03 | Способ получения латексного диагностикума |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU4941436 RU2012888C1 (ru) | 1991-06-03 | 1991-06-03 | Способ получения латексного диагностикума |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2012888C1 true RU2012888C1 (ru) | 1994-05-15 |
Family
ID=21577266
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU4941436 RU2012888C1 (ru) | 1991-06-03 | 1991-06-03 | Способ получения латексного диагностикума |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2012888C1 (ru) |
-
1991
- 1991-06-03 RU SU4941436 patent/RU2012888C1/ru active
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4060597A (en) | Serological reagent and preparation thereof | |
US5770388A (en) | Method of separation employing magnetic particles and second medium | |
EP0110993A1 (en) | Particulate ligand assay-methods and products | |
EP0194156B1 (en) | Method of measuring the amount of immune antibody in serum | |
US3564089A (en) | Diagnostic reagent for syphilis | |
US4329151A (en) | Stable diagnostic reagent and method for qualitative determinations of streptococci infections | |
AU2017321642B2 (en) | Antibody measurement method using antigen-carrying insoluble carrier particles on which antigen is immobilized by different methods, and reagent for antibody measurement | |
JPH0613582B2 (ja) | 多官能性親水性球状微粒子、その製造方法及びその使用方法 | |
SE448577B (sv) | Ett direkt agglutinationstest for detektion av antigener i kroppsvetskor | |
Jenkins et al. | Detection of meningitis antigens in buffer and body fluids by ultrasound-enhanced particle agglutination | |
US4547466A (en) | Detecting rheumatoid factor with synthetic particles having immune complexes thereon | |
RU2012888C1 (ru) | Способ получения латексного диагностикума | |
JPS60177265A (ja) | 抗体の免疫グロブリンのクラス別検出法 | |
IE921089A1 (en) | Assay | |
JPH11133029A (ja) | 大腸菌o157の分析方法及び分析用試薬 | |
EP0134868A1 (en) | Unicellular organisms activated by glutaraldehyde as solid carriers for sensitizing agents and uses of sensitized unicellular organisms | |
CN112710826A (zh) | 一种提高试剂稳定性的包被和封闭方法 | |
CN100519759C (zh) | 一种制备用于快速检测伤寒的凝集试剂的方法 | |
EP0281493B1 (en) | A process for the preparation of diagnostic reagents | |
EP0534043A2 (en) | Novel antistreptolysin-o reagent for use with Beckman nephelometer system | |
RU2056057C1 (ru) | Способ получения иммобилизованного иммуноглобулина на твердой фазе | |
JPH08327629A (ja) | 検体前処理方法 | |
RU2228764C2 (ru) | Способ получения суспензионного диагностикума (варианты) | |
SU1125549A1 (ru) | Способ получени иммуносорбента | |
Dietz et al. | Use of latex particles in serology of tuberculosis |