RU2012137953A - Способ снижения степени гликозилирования белков, способы и белки - Google Patents
Способ снижения степени гликозилирования белков, способы и белки Download PDFInfo
- Publication number
- RU2012137953A RU2012137953A RU2012137953/10A RU2012137953A RU2012137953A RU 2012137953 A RU2012137953 A RU 2012137953A RU 2012137953/10 A RU2012137953/10 A RU 2012137953/10A RU 2012137953 A RU2012137953 A RU 2012137953A RU 2012137953 A RU2012137953 A RU 2012137953A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- protein
- glycosylation
- degree
- methylotrophic yeast
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/005—Glycopeptides, glycoproteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
- C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
- C12N15/815—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts for yeasts other than Saccharomyces
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
- C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
1. Способ уменьшения степени гликозилирования белка, представленного формулой I:X-B-Y-A,гдеХ представляет собой последовательность лидерного пептида, содержащую по меньшей мере одну аминокислоту,В представляет собой аминокислотную последовательность В-цепи молекулы инсулина, его производного или аналога,Y представляет собой линкерный пептид, содержащий по меньшей мере одну аминокислоту,А представляет собой аминокислотную последовательность А-цепи молекулы инсулина, его производного или аналога,и А- и В-цепи могут быть модифицированы путем замены, делеции и/или добавления аминокислоты;продуцируемого штаммом метилотрофных дрожжей, модифицированного посредством инактивации по меньшей мере одного или более гена, выбранного из группы, включающей гены РМТ1, РМТ5 и РМТ6, имеющие нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NOs 1, 4 и 5 соответственно, при этом указанные последовательности кодируют протеин-маннозилтранферазу или его функциональную часть.2. Способ по п.1, в котором указанный штамм метилотрофных дрожжей принадлежит роду Pichia sp.3. Способ по п.2, в котором указанный штамм метилотрофных дрожжей принадлежит виду Pichia pastoris.4. Способ по п.1, в котором способ гликозилирования представляет собой О-гликозилирование.5. Способ по п.1, в котором степень гликозилирования снижается на величину по меньшей мере от 10% до 99%.6. Способ по п.5, в котором степень гликозилирования снижается на 25%.7. Способ по п.5, в котором степень гликозилирования снижается на 65%.8. Вектор, содержащий ген протеин-маннозилтрансферазы или его функциональную часть, выбранный из группы, включающей гены РМТ1, РМТ5 и РМТ6, имеющий нуклеотидную последов
Claims (25)
1. Способ уменьшения степени гликозилирования белка, представленного формулой I:
X-B-Y-A,
где
Х представляет собой последовательность лидерного пептида, содержащую по меньшей мере одну аминокислоту,
В представляет собой аминокислотную последовательность В-цепи молекулы инсулина, его производного или аналога,
Y представляет собой линкерный пептид, содержащий по меньшей мере одну аминокислоту,
А представляет собой аминокислотную последовательность А-цепи молекулы инсулина, его производного или аналога,
и А- и В-цепи могут быть модифицированы путем замены, делеции и/или добавления аминокислоты;
продуцируемого штаммом метилотрофных дрожжей, модифицированного посредством инактивации по меньшей мере одного или более гена, выбранного из группы, включающей гены РМТ1, РМТ5 и РМТ6, имеющие нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NOs 1, 4 и 5 соответственно, при этом указанные последовательности кодируют протеин-маннозилтранферазу или его функциональную часть.
2. Способ по п.1, в котором указанный штамм метилотрофных дрожжей принадлежит роду Pichia sp.
3. Способ по п.2, в котором указанный штамм метилотрофных дрожжей принадлежит виду Pichia pastoris.
4. Способ по п.1, в котором способ гликозилирования представляет собой О-гликозилирование.
5. Способ по п.1, в котором степень гликозилирования снижается на величину по меньшей мере от 10% до 99%.
6. Способ по п.5, в котором степень гликозилирования снижается на 25%.
7. Способ по п.5, в котором степень гликозилирования снижается на 65%.
8. Вектор, содержащий ген протеин-маннозилтрансферазы или его функциональную часть, выбранный из группы, включающей гены РМТ1, РМТ5 и РМТ6, имеющий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NOs 1, 4 и 5 соответственно.
9. Вектор по п.8, где указанным вектором трансформируют штамм метилотрофных дрожжей для снижения степени или изменения гликозилирования белка.
10. Вектор по п.8, в котором указанный штамм метилотрофных дрожжей принадлежит роду Pichia sp.
11. Вектор по п.10, в котором указанный штамм метилотрофных дрожжей принадлежит виду Pichia pastoris.
12. Способ получения нокаутированного штамма метилотрофных дрожжей, включающий:
(а) вектор, включающий последовательность нуклеиновой кислоты, способную к гомологичной рекомбинации, содержащую целевую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере один из генов, выбранных из группы, включающей гены РМТ1, РМТ5 и РМТ6, имеющий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NOs 1, 4 и 5 соответственно, и последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую селективный маркер,
(б) культивирование клеток в условиях, делающих возможной гомологичную рекомбинацию между ДНК, кодирующей целевой ген в векторе, и ДНК, кодирующей целевой ген в клетке-хозяине, что приводит к нарушению целевого гена в клетке-хозяине;
(в) селекцию клеток-хозяев с инактивированным целевым геном для получения нокаутированного штамма метилотрофных дрожжей.
13. Белок, продуцируемый с помощью способа по любому из пп.1-7 или 12.
14. Нокаутированный штамм метилотрофных дрожжей, содержащий по меньшей мере один инактивированный ген, выбранный из группы, включающей РМТ1, РМТ5 и РМТ6, имеющий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NOs 1, 4 и 5 соответственно.
15. Штамм с нокаутом гена РМТ1, как указано в п.14, с номером доступа МТСС5515.
16. Штамм с нокаутом гена РМТ5, как указано в п.14, с номером доступа МТСС5517.
17. Штамм с нокаутом гена РМТ6, как указано в п.14, с номером доступа МТСС5518.
18. Нокаутированный штамм по п.14, в котором указанный штамм-хозяин продуцирует белок со сниженным уровнем гликозилирования, по сравнению с белковым продуктом, экспрессированным в немодифицированном штамме-хозяине.
19. Нокаутированный штамм по п.14, в котором указанный штамм-хозяин продуцирует белок, в котором степень гликозилирования снижена по меньшей мере на 25%.
20. Нокаутированный штамм по п.14, в котором указанный штамм-хозяин продуцирует белок, в котором степень гликозилирования снижена по меньшей мере на 65%.
21. Белок, продуцируемый нокаутированным штаммом по п.14.
22. Белок, продуцируемый нокаутированным штаммом по п.21, где нокаутированный штамм представляет собой один из штаммов МТСС5515, МТСС5517, МТСС5518 или любой модифицированный штамм на его основе.
23. Способ по п.12, где указанный белок имеет селективный маркер нуклеиновой кислоты, представляющий собой маркер устойчивости к зеоцину.
24. Белок по п.21, где указанный белок имеет селективный маркер нуклеиновой кислоты, представляющий собой маркер устойчивости к зеоцину.
25. Белок по п.21, где указанный белок представляет собой молекулу инсулина/ аналога инсулина/предшественника инсулина.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IN332/CHE/2010 | 2010-02-10 | ||
| IN332CH2010 | 2010-02-10 | ||
| PCT/IN2010/000190 WO2011099028A1 (en) | 2010-02-10 | 2010-03-29 | Method of reducing glycosylation of proteins, processes and proteins thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2012137953A true RU2012137953A (ru) | 2014-03-20 |
| RU2575607C2 RU2575607C2 (ru) | 2016-02-20 |
Family
ID=
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP5860413B2 (ja) | 2016-02-16 |
| CN103003438B (zh) | 2016-01-20 |
| US20120309935A1 (en) | 2012-12-06 |
| EP2534255A4 (en) | 2014-04-16 |
| CN103003438A (zh) | 2013-03-27 |
| EP2534255A1 (en) | 2012-12-19 |
| JP2013519370A (ja) | 2013-05-30 |
| US8778659B2 (en) | 2014-07-15 |
| MX2012009349A (es) | 2013-02-11 |
| WO2011099028A1 (en) | 2011-08-18 |
| EP2534255B1 (en) | 2017-05-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2013135484A (ru) | Молекулы нуклеиновых кислот, которые придают устойчивость к насекомым-вредителям отряда жестокрылых | |
| NZ612405A (en) | Nucleic acid molecules that target the vacuolar atpase c subunit and confer resistance to coleopteran pests | |
| RU2008125815A (ru) | Теломеразная обратная транскриптаза птиц | |
| NZ595476A (en) | Plant snf1-related protein kinase gene | |
| EA201490374A1 (ru) | Ген пестицида axmi279 и способы его применения | |
| NZ604057A (en) | Plant cytochrome p450 | |
| RU2014132889A (ru) | Микроорганизм из рода escherichia, обладающий усиленной способностью к продукции l-триптофана, и способ получения l-триптофана с его использованием | |
| RU2017127367A (ru) | Белок, ассоциированный с устойчивостью к болезни, и кодирующий его ген и их применение в регулировании устойчивости растений к болезни | |
| Lozada-Chávez et al. | “Hypothesis for the modern RNA world”: a pervasive non-coding RNA-based genetic regulation is a prerequisite for the emergence of multicellular complexity | |
| JP2013538554A5 (ru) | ||
| RU2016146483A (ru) | Молекулы нуклеиновой кислоты dre4, сообщающие резистентность к жесткокрылым вредителям | |
| RU2012108470A (ru) | Белки, связанные с формой зерен и листьев риса, гены, кодирующие указанные белки, и их применения | |
| RU2018126740A (ru) | Пестицидные гены и способы использования | |
| HRP20200471T1 (hr) | Tonoplastni protonsko/šećerni antiporterski proteini i njihova upotreba u povećavanju koncentracije saharoze u biljnom organu za skladištenje saharoze | |
| MX2021010663A (es) | Metodo de cultivo de plantas resistentes a la mancha gris de la hoja. | |
| RU2377248C2 (ru) | Устойчивые к грибкам растения и их использование | |
| Kurahashi et al. | Homologous genes, Pe. pleurotolysin A and Pe. ostreolysin, are both specifically and highly expressed in primordia and young fruiting bodies of Pleurotus eryngii | |
| RU2013104989A (ru) | Элемент днк, обладающий активностью, направленной на усиление экспрессии чужеродного гена | |
| CN102604974A (zh) | 稻瘟病抗性基因Piym2及其应用 | |
| JP2013531967A5 (ru) | ||
| RU2014121383A (ru) | Происходящий из гена человека промотор | |
| CN103820469A (zh) | 玉米纹枯病抗病相关基因grmzm2g169240及其应用 | |
| RU2012137953A (ru) | Способ снижения степени гликозилирования белков, способы и белки | |
| NZ629391A (en) | Plants having improved growth properties | |
| CN110699357B (zh) | 纹枯病菌微小rna、其对玉米基因的调控作用及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HE9A | Changing address for correspondence with an applicant |