RU2012126131A - РЕКОМБИНАНТНЫЕ ВАРИАНТЫ β-ГЛЮКОЗИДАЗЫ ДЛЯ ПРОДУКЦИИ РАСТВОРИМЫХ САХАРОВ ИЗ ЦЕЛЛЮЛОЗНОЙ БИОМАССЫ - Google Patents

РЕКОМБИНАНТНЫЕ ВАРИАНТЫ β-ГЛЮКОЗИДАЗЫ ДЛЯ ПРОДУКЦИИ РАСТВОРИМЫХ САХАРОВ ИЗ ЦЕЛЛЮЛОЗНОЙ БИОМАССЫ Download PDF

Info

Publication number
RU2012126131A
RU2012126131A RU2012126131/10A RU2012126131A RU2012126131A RU 2012126131 A RU2012126131 A RU 2012126131A RU 2012126131/10 A RU2012126131/10 A RU 2012126131/10A RU 2012126131 A RU2012126131 A RU 2012126131A RU 2012126131 A RU2012126131 A RU 2012126131A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
bgl1
approximately
variant
option
seq
Prior art date
Application number
RU2012126131/10A
Other languages
English (en)
Inventor
Цзе ЯН
Сиюнь ЧЖАН
Аттила АНДОР
Original Assignee
Кодексис, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Кодексис, Инк. filed Critical Кодексис, Инк.
Publication of RU2012126131A publication Critical patent/RU2012126131A/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
    • C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
    • C12P7/06—Ethanol, i.e. non-beverage
    • C12P7/08—Ethanol, i.e. non-beverage produced as by-product or from waste or cellulosic material substrate
    • C12P7/10—Ethanol, i.e. non-beverage produced as by-product or from waste or cellulosic material substrate substrate containing cellulosic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2445—Beta-glucosidase (3.2.1.21)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/02—Monosaccharides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/14—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01021—Beta-glucosidase (3.2.1.21)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel

Abstract

1. Вариант β-глюкозидазы (Bgl1), который идентичен, по меньшей мере, на 70% по аминокислотным остаткам 20-870 SEQ ID NO:2 и включает аминокислотную замену в положении Q291, аминокислотную замену в положении D369 и аминокислотную замену в положении E402, как определено по отношению к SEQ ID NO:2, где замена Q291 представляет собой W, A или F; замена D369 представляет собой L, Y, V, A, H, R, F, E, M, I, K, C, P или Q; и замена E402 представляет собой N.2. Вариант Bgl1 по п.1, где аминокислотная замена в положении Q291 представляет собой W, а аминокислотная замена в положении D369 представляет собой L, H, R или Y.3. Вариант Bgl1 по п.2, где аминокислотная замена в положении D369 представляет собой L.4. Вариант Bgl1 по любому из пп.1-3, который относительно природного C1 Bgl1, включающего аминокислоты 20-870 SEQ ID NO:2, обладаетa) по меньшей мере, в 5 раз более высокой термоактивностью приблизительно при рН 5 и приблизительно 65°С, илиb) по меньшей мере, в 3 раза более высокой термостабильностью приблизительно при рН 5 и приблизительно 65°С, илиc) как (a), так и (b).5. Вариант Bgl1 по п.1, дополнительно включающий, по меньшей мере, одну аминокислотную замену в положении, выбранном из группы, состоящей из Q258, Q313, S434, A475, K495 и G628.6. Вариант Bgl1 по п.5, где замена в Q258 представляет собой N или H, замена в Q313 представляет собой M, замена в S434 представляет собой P, замена в A475 представляет собой L, замена в K495 представляет собой N и замена в G628 представляет собой W.7. Вариант Bgl1 по п.6, где вариант включает замены Q258N, Q291W, Q313M, D369R, E402N, S434P, K495N и G628W.8. Вариант Bgl1 по любому из пп.1-3 или 5-7, который относительно варианта 3 C1 Bgl1 (SEQ ID NO:5) обладаетa) по меньшей мере, в 6 раз более высокой термоактивностью приблизительно при рН 5 и приблизительно 70°С, илиb) по мень�

Claims (63)

1. Вариант β-глюкозидазы (Bgl1), который идентичен, по меньшей мере, на 70% по аминокислотным остаткам 20-870 SEQ ID NO:2 и включает аминокислотную замену в положении Q291, аминокислотную замену в положении D369 и аминокислотную замену в положении E402, как определено по отношению к SEQ ID NO:2, где замена Q291 представляет собой W, A или F; замена D369 представляет собой L, Y, V, A, H, R, F, E, M, I, K, C, P или Q; и замена E402 представляет собой N.
2. Вариант Bgl1 по п.1, где аминокислотная замена в положении Q291 представляет собой W, а аминокислотная замена в положении D369 представляет собой L, H, R или Y.
3. Вариант Bgl1 по п.2, где аминокислотная замена в положении D369 представляет собой L.
4. Вариант Bgl1 по любому из пп.1-3, который относительно природного C1 Bgl1, включающего аминокислоты 20-870 SEQ ID NO:2, обладает
a) по меньшей мере, в 5 раз более высокой термоактивностью приблизительно при рН 5 и приблизительно 65°С, или
b) по меньшей мере, в 3 раза более высокой термостабильностью приблизительно при рН 5 и приблизительно 65°С, или
c) как (a), так и (b).
5. Вариант Bgl1 по п.1, дополнительно включающий, по меньшей мере, одну аминокислотную замену в положении, выбранном из группы, состоящей из Q258, Q313, S434, A475, K495 и G628.
6. Вариант Bgl1 по п.5, где замена в Q258 представляет собой N или H, замена в Q313 представляет собой M, замена в S434 представляет собой P, замена в A475 представляет собой L, замена в K495 представляет собой N и замена в G628 представляет собой W.
7. Вариант Bgl1 по п.6, где вариант включает замены Q258N, Q291W, Q313M, D369R, E402N, S434P, K495N и G628W.
8. Вариант Bgl1 по любому из пп.1-3 или 5-7, который относительно варианта 3 C1 Bgl1 (SEQ ID NO:5) обладает
a) по меньшей мере, в 6 раз более высокой термоактивностью приблизительно при рН 5 и приблизительно 70°С, или
b) по меньшей мере, в 3 раза более высокой термостабильностью приблизительно при рН 5 и приблизительно 65°С, или
c) как (a), так и (b).
9. Вариант Bgl1 по п.6, где вариант включает, по меньшей мере, одну замену в положении, выбранном из группы, состоящей из A689 и Y715.
10. Вариант Bgl1 по п.9, где замена представляет собой A689I или Y715P.
11. Вариант Bgl1 по п.10, где вариант включает замены Q258N, Q291W, Q313M, D369R, E402N, S434P, K495N, G628W, A689I и Y715P.
12. Вариант Bgl1 по пп.1-3, 5-7 или 9-11, который относительно варианта 269 C1 Bgl1 (SEQ ID NO:7) обладает
a) по меньшей мере, в 4 раза более высокой термоактивностью приблизительно при рН 4,5 и приблизительно 70°С, или
b) по меньшей мере, в 2 раза более высокой термостабильностью приблизительно при рН 4,5 и приблизительно 70°С, или
c) как (a), так и (b).
13. Вариант Bgl1 по п.10, дополнительно включающий, по меньшей мере, одну аминокислотную замену в положении, выбранном из группы, состоящей из D47, A343 и T687.
14. Вариант Bgl1 по п.13, где замена представляет собой D47I, A343C или T687W/K/C.
15. Вариант Bgl1 по п.14, где замена представляет собой T687K.
16. Вариант Bgl1 по п.14, где вариант включает замены D47I, Q258N, Q291W, Q313M, A343C, D369R, E402N, S434P, K495N, G628W, T687K, A689I и Y715P.
17. Вариант Bgl1 по пп.1-3, 5-7, 9-11 или 13-16, который относительно варианта 481 Bgl1 (SEQ ID NO:9) обладает
a) по меньшей мере, в 4 раза более высокой термоактивностью приблизительно при рН 4,2 и приблизительно 70°С, или
b) по меньшей мере, в 4 раза более высокой термостабильностью приблизительно при рН 4,5 и приблизительно 70°С, или
c) как (a), так и (b).
18. Вариант Bgl1 по п.10, дополнительно включающий, по меньшей мере, одну аминокислотную замену в положении, выбранном из группы, состоящей из I106, V260, F314 и A732.
19. Вариант Bgl1 по п.18, где замена представляет собой I106V, V260G, F314L/V или A732G/M/V.
20. Вариант Bgl1 по п.19, где замена представляет собой F314L или A732G.
21. Вариант Bgl1 по п.19, где вариант включает замены I106V, Q258N, V260G, Q291W, Q313M, F314L/V, D369R, E402N, S434P, K495N, G628W, A689I, Y715P и A732G.
22. Вариант Bgl1 по пп.1-3, 5-7, 9-11, 13-16 или 18-21, который относительно варианта 481 C1 Bgl1 (SEQ ID NO:9) обладает
a) по меньшей мере, в 2 раза более высокой термоактивностью приблизительно при рН 4 и приблизительно 70°С, или
b) по меньшей мере, в 1,1 раза более высокой термостабильностью приблизительно при рН 4,5 и приблизительно 70°С, или
c) как (a), так и (b).
23. Вариант Bgl1 по п.19, дополнительно включающий, по меньшей мере, одну аминокислотную замену в положении D47, A79, Q85, A109 или A343.
24. Вариант Bgl1 по п.23, где, по меньшей мере, одна аминокислотная замена представляет собой D47I, A79E/G/M, Q85N/H, A109S/T или A343C.
25. Вариант Bgl1 по п.24, где вариант включает аминокислотные замены D47I, A79E, Q85N, I106V, A109T, Q258N, V260G, Q291W, Q313M, F314V, A343C, D369R, E402N, S434P, K495N, G628W, A689I, Y715P и A732G.
26. Вариант Bgl1 по п.24, где вариант включает аминокислотные замены D47I, Q85N, I106V, A109S, Q258N, V260G, Q291W, Q313M, F314V, A343C, D369R, E402N, S434P, K495N, G628W, A689I, Y715P и A732G.
27. Вариант Bgl1 по п.24, где вариант включает аминокислотные замены D47I, A79M, I106V, Q258N, V260G, Q291W, Q313M, F314L, D369R, E402N, S434P, K495N, G628W, A689I, Y715P и A732G.
28. Вариант Bgl1 по пп.1-3, 5-7, 9-11, 13-16, 18-21 или 23-27, который относительно варианта 664 C1 Bgl1 (SEQ ID NO:13) обладает
a) по меньшей мере, в 2 раза более высокой термоактивностью приблизительно при рН 4 и приблизительно 70°С, или
b) по меньшей мере, в 1,1 раза более высокой термостабильностью приблизительно при рН 4,5 и приблизительно 70°С, или
c) как (a), так и (b).
29. Вариант Bgl1 по любому из пп.1-3, 5-7, 9-11, 13-16, 18-21 или 23-27, где вариант идентичен, по меньшей мере, на 75%, или идентичен, по меньшей мере, на 80%, или идентичен, по меньшей мере, на 85%, или идентичен, по меньшей мере, на 90%, или идентичен, по меньшей мере, на 95% по остаткам 20-870 SEQ ID NO:2.
30. Вариант Bgl1 по п.29, который имеет 851 аминокислотный остаток в длину.
31. Вариант β-глюкозидазы (Bgl1), который включает аминокислотные остатки 20-870 SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7; SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:13; SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19 или SEQ ID NO:21.
32. Вариант β-глюкозидазы (Bgl1), который идентичен, по меньшей мере, на 70%, или идентичен, по меньшей мере, на 75%, идентичен, по меньшей мере, на 80%, идентичен, по меньшей мере, на 85%, или идентичен, по меньшей мере, на 90%, или идентичен, по меньшей мере, на 95% по аминокислотным остаткам 20-870 SEQ ID NO:2 и включает аминокислотную замену в положении Q291, как определено по отношению к SEQ ID NO:2, где замена представляет собой W, A или F; и дополнительно где относительно природного C1 Bgl1, включающего аминокислоты 20-870 SEQ ID NO:2, вариант обладает
a) по меньшей мере, в 5 раз более высокой термоактивностью приблизительно при рН 5 и приблизительно 65°С, или
b) по меньшей мере, в 3 раза более высокой термостабильностью приблизительно при рН 5 и приблизительно 65°С, или
c) как (a), так и (b).
33. Вариант β-глюкозидазы 1 (Bgl1), который идентичен, по меньшей мере, на 70%, или идентичен, по меньшей мере, на 75%, идентичен, по меньшей мере, на 80%, идентичен, по меньшей мере, на 85%, или идентичен, по меньшей мере, на 90%, или идентичен, по меньшей мере, на 95% по аминокислотным остаткам 20-870 SEQ ID NO:2 и включает аминокислотную замену в положении D369, как определено по отношению к SEQ ID NO:2, где замена представляет собой L, Y, V, A, H, R, F, E, M, I, K, C, P или Q; и где дополнительно относительно природного C1 Bgl1, включающего аминокислоты 20-870 SEQ ID NO:2, вариант обладает:
a) по меньшей мере, в 5 раз более высокой термоактивностью приблизительно при рН 5 и приблизительно 65°С, или
b) по меньшей мере, в 3 раза более высокой термостабильностью приблизительно при рН 5 и приблизительно 65°С, или
c) как (a), так и (b).
34. Вариант β-глюкозидазы (Bgl1), который идентичен, по меньшей мере, на 70%, или идентичен, по меньшей мере, на 75%, идентичен, по меньшей мере, на 80%, идентичен, по меньшей мере, на 85%, или идентичен, по меньшей мере, на 90%, или идентичен, по меньшей мере, на 95% по аминокислотным остаткам 20-870 SEQ ID NO:2 и включает аминокислотную замену E402N, как определено по отношению к SEQ ID NO:2 и где дополнительно относительно природного C1 Bgl1, включающего аминокислоты 20-870 SEQ ID NO:2, вариант обладает:
a) по меньшей мере, в 5 раз более высокой термоактивностью приблизительно при рН 5 и приблизительно 65°С, или
b) по меньшей мере, в 3 раза более высокой термостабильностью приблизительно при рН 5 и приблизительно 65°С, или
c) как (a), так и (b).
35. Рекомбинантная нуклеиновая кислота, кодирующая вариант Bgl1 по любому из п.п.1-3, 5-7, 9-11, 13-16, 18-21, 23-27, 30, 31, 32, 33 или 34.
36. Рекомбинантная нуклеиновая кислота по п.35, которая кодирует пребелок, включающий вариант Bgl1, соединенный с сигнальным пептидом, необязательно с природным сигнальным пептидом C1 Bgl1.
37. Экспрессионный вектор, включающий рекомбинантную нуклеиновую кислоту по п.35.
38. Клетка-хозяин, которая включает рекомбинантную нуклеиновую кислоту по п.35, где указанная нуклеиновая кислота необязательно оперативно связана с промотором, отличным от промотора C1 Bgl1.
39. Клетка-хозяин по п.38, которая является видом мицелиального гриба.
40. Клетка-хозяин по п.39, которая представляет собой виды Aspergillus, Trichoderma, Humicola, Chrysosporium, Myceliophthora или Thielavia.
41. Клетка-хозяин по п.39, которая экспрессирует также, по меньшей мере, один дополнительный неприродный рекомбинантный целлюлазный полипептид, выбранный из
a) рекомбинантного эндоглюканазного (EG) полипептида и/или
b) рекомбинантного целлобиогидролазного полипептида (CBH).
42. Способ получения полипептида Bgl1, включающий культивирование клетки-хозяина по п.38 в условиях, в которых экспрессируется вариант Bgl1.
43. Способ по п.42, где вариант секретируется клеткой-хозяином.
44. Способ по п.42, дополнительно включающий стадию получения варианта Bgl1 из среды, в которой культивируется клетка.
45. Композиция, включающая вариант Bgl1 по любому из пп.1-3, 5-7, 9-11, 13-16, 18-21, 23-27, 30, 31, 32, 33 или 34 и, по меньшей мере, один дополнительный неприродный рекомбинантный целлюлазный полипептид, выбранный из
a) рекомбинантного эндоглюканазного (EG) полипептида
b) рекомбинантного целлобиогидролазного полипептида (CBH)
c) по меньшей мере, одного рекомбинантного полипептида EG и, по меньшей мере, одного рекомбинантного полипептида CBH.
46. Композиция по п.45, дополнительно включающая, по меньшей мере, один полипептид, выбранный из группы полипептидов, состоящей из гемицеллюлазы, пектиназы, лигнинпероксидазы, зависимой от марганца пероксидазы, лакказы и целлобиозодегидрогеназ.
47. Композиция по п.45, где целлобиогидролаза (CBH) и/или эндоглюканаза (EG) происходят от Trichoderma reesei, Myceliophthora thermophilia или Streptomyces avermitilis, или которые являются вариантами CBH или EG T. reesei, CBH или EG M. Thermophilia или CBH или EG S. avermitilis.
48. Композиция по п.45, включающая клетку-хозяина, экспрессирующую вариант Bgl1.
49. Способ сахарификации целлюлозного субстрата, включающий
(a) предоставление целлюлозного субстрата; и
(b) введение в контакт субстрата со смесью целлюлаз, включающей:
i) по меньшей мере, один белок с целлобиогидролазной активностью;
ii) по меньшей мере, один белок с эндоглюканазной активностью; и
iii) вариант β-глюкозидазы по любому из пп.1-3, 5-7, 9-11, 13-16, 18-21, 23-27, 30, 31, 32, 33 или 34
в условиях, в которых смесь целлюлаз катализирует гидролиз целлюлозного субстрата.
50. Способ по п.49, где целлобиогидролаза (CBH) и/или эндоглюканаза (EG) происходят от Trichoderma reesei, Myceliophthora thermophilia или Streptomyces avermitilis, или которые являются вариантами CBH или EG T. reesei, CBH или EG M. Thermophilia или CBH или EG S. avermitilis.
51. Способ по п.49, где целлюлозный субстрат представляет собой предварительно обработанную целлюлозную биомассу.
52. Способ получения глюкозы, включающий объединение целлобиозы с вариантом β-глюкозидазы по любому из пп.1-3, 5-7, 9-11, 13-16, 18-21, 23-27, 30, 31, 32, 33 или 34 в условиях, при которых продуцируется глюкоза.
53. Способ получения глюкозы, включающий объединение целлюлозного субстрата и
(a) варианта β-глюкозидазы по любому из пп.1-3, 5-7, 9-11, 13-16, 18-21, 23-27, 30, 31, 32, 33 или 34 в условиях, при которых продуцируется глюкоза;
(b) по меньшей мере, одной дополнительной целлюлазы
в условиях, при которых продуцируется глюкоза.
54. Способ по п.52 или 53, дополнительно включающий
i) культивирование микроорганизма в условиях, при которых продуцируемая глюкоза по п.46, используется в качестве источника энергии и углерода для получения метаболического продукта,
ii) получение метаболического продукта.
55. Способ по п.54, где микроорганизм представляет собой дрожжи или бактерии.
56. Способ по п.54, где метаболический продукт представляет собой спирт, органическую кислоту или углеводород с 1-20 углеродными атомами.
57. Способ по п.56, где метаболический продукт представляет собой этанол.
58. Вариант β-глюкозидазы (Bgl1), который идентичен, по меньшей мере, на 80%, или идентичен, по меньшей мере, на 85%, или идентичен, по меньшей мере, на 90%, или идентичен, по меньшей мере, на 95% по аминокислотным остаткам 20-870 SEQ ID NO:2 и включает аминокислотную замену в положении Q291, аминокислотную замену в положении D369 и аминокислотную замену в положении E402, как определено по отношению к SEQ ID NO:2.
59. Вариант Bgl1 по п.58, где вариант идентичен, по меньшей мере, на 90%, или идентичен, по меньшей мере, на 95% аминокислотным остаткам 20-870 SEQ ID NO:2.
60. Вариант Bgl1 по п.58, дополнительно включающий, по меньшей мере, одну дополнительную аминокислотную замену в D47, A79, Q85, I106, A109, Q258, V260, Q313, F314, A343, S434, A475, K495, G628, A689, Y715 или A732.
61. Вариант Bgl1 по п.60, где замена представляет собой D47I, A79E/G/M, Q85N/H, I106V, A109/S/T, V260G, Q313M, F314L/V, A343C, S434P, A475L, K495N, G628W, A689I, Y715P или A732G.
62. Вариант Bgl1 по п.61, где вариант включает, по меньшей мере, одну замену Q291W, D369L/H/R/Y или E402N.
63. Вариант Bgl1 по любому из пп.58-62, где вариант обладает относительно природного C1 Bgl1, включающего аминокислоты 20-870 SEQ ID NO:2, вариант обладает
a) по меньшей мере, в 5 раз более высокой термоактивностью приблизительно при рН 5 и приблизительно 65°С, или
b) по меньшей мере, в 3 раза более высокой термостабильностью приблизительно при рН 5 и приблизительно 65°С, или
c) как (a), так и (b).
RU2012126131/10A 2009-11-25 2010-11-24 РЕКОМБИНАНТНЫЕ ВАРИАНТЫ β-ГЛЮКОЗИДАЗЫ ДЛЯ ПРОДУКЦИИ РАСТВОРИМЫХ САХАРОВ ИЗ ЦЕЛЛЮЛОЗНОЙ БИОМАССЫ RU2012126131A (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US26460809P 2009-11-25 2009-11-25
US61/264,608 2009-11-25
US35551110P 2010-06-16 2010-06-16
US61/355,511 2010-06-16
PCT/US2010/058098 WO2011066457A2 (en) 2009-11-25 2010-11-24 Recombinant beta-glucosidase variants for production of soluble sugars from cellulosic biomass

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2012126131A true RU2012126131A (ru) 2013-12-27

Family

ID=44067244

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2012126131/10A RU2012126131A (ru) 2009-11-25 2010-11-24 РЕКОМБИНАНТНЫЕ ВАРИАНТЫ β-ГЛЮКОЗИДАЗЫ ДЛЯ ПРОДУКЦИИ РАСТВОРИМЫХ САХАРОВ ИЗ ЦЕЛЛЮЛОЗНОЙ БИОМАССЫ

Country Status (11)

Country Link
US (4) US8143050B2 (ru)
EP (2) EP2706119B1 (ru)
CN (1) CN102740868B (ru)
CA (1) CA2781884C (ru)
CO (1) CO6481004A2 (ru)
DK (1) DK2504017T3 (ru)
ES (1) ES2455269T3 (ru)
MX (2) MX355841B (ru)
PL (1) PL2504017T3 (ru)
RU (1) RU2012126131A (ru)
WO (1) WO2011066457A2 (ru)

Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX355841B (es) * 2009-11-25 2018-05-02 Codexis Inc Variantes de beta-glucosidasa recombinante para producción de azúcares solubles de biomasa celulósica.
EA201300058A1 (ru) * 2010-06-29 2013-06-28 ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. Полипептид, обладающий бета-глюкозидазной активностью, и его применение
WO2012024698A1 (en) 2010-08-20 2012-02-23 Codexis, Inc. Use of glycoside hydrolase 61 family proteins in processing of cellulose
HUE031303T2 (hu) 2010-11-02 2017-07-28 Codexis Inc Javított gombatörzsek
ES2570382T3 (es) * 2010-11-02 2016-05-18 Codexis Inc Composiciones y métodos para la producción de azúcares fermentables
BR112013033614A2 (pt) 2011-06-30 2018-05-29 Codexis Inc fermentação de pentose por microorganismo recombinante
DK2748317T3 (en) 2011-08-22 2017-07-17 Codexis Inc GH61 glycoside hydrolase protein variants and cofactors that enhance GH61 activity
US20130084608A1 (en) 2011-09-30 2013-04-04 Codexis, Inc. Fungal proteases
EP2794872A4 (en) * 2011-12-19 2015-12-09 Novozymes Inc POLYPEPTIDES HAVING BETA-GLUCOSIDASE ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES ENCODING THE SAME
BR112014031026A2 (pt) 2012-06-11 2017-06-27 Codexis Inc variantes de beta-xilosidase fúngica.
WO2014060379A1 (en) * 2012-10-16 2014-04-24 Dsm Ip Assets B.V. Cell wall deconstruction enzymes of myceliophthora fergusii (corynascus thermophilus) and uses thereof
US20150252344A1 (en) * 2012-10-31 2015-09-10 Danisco Us Inc. Beta-glucosidase from neurospora crassa
EP2922953A4 (en) 2012-11-20 2016-11-09 Shell Int Research FERMENTATION OF PENTOSIS BY A RECOMBINANT MICROORGANISM
CA2896251A1 (en) 2013-01-11 2014-07-17 Dsm Ip Assets B.V. Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material
US9850512B2 (en) 2013-03-15 2017-12-26 The Research Foundation For The State University Of New York Hydrolysis of cellulosic fines in primary clarified sludge of paper mills and the addition of a surfactant to increase the yield
ES2521940B1 (es) * 2013-05-10 2015-09-09 Abengoa Bioenergía Nuevas Tecnologías, S.A. Variantes de beta-glucosidasa con actividad de transglicosilación reducida
EP3077506A1 (en) * 2013-12-04 2016-10-12 Danisco US Inc. Compositions comprising a beta-glucosidase polypeptide and methods of use
US9951363B2 (en) 2014-03-14 2018-04-24 The Research Foundation for the State University of New York College of Environmental Science and Forestry Enzymatic hydrolysis of old corrugated cardboard (OCC) fines from recycled linerboard mill waste rejects
CN105039285A (zh) * 2014-11-16 2015-11-11 安徽大学 一种耐高糖耐碱的β-葡萄糖苷酶的表达及应用
MY185762A (en) 2015-04-10 2021-06-04 Comet Biorefining Inc Methods and compositions for the treatment of cellulosic biomass and products produced thereby
US20190002860A1 (en) * 2015-12-10 2019-01-03 Dsm Ip Assets B.V. Beta-glucosidase and uses thereof
US11173184B2 (en) * 2016-05-31 2021-11-16 Evonik Operations Gmbh Bacillus subtilis strain with probiotic activity
CN107916268B (zh) * 2017-09-30 2021-10-22 武汉轻工大学 聚半乳糖醛酸裂解酶基因、重组表达载体、菌株、聚半乳糖醛酸裂解酶及其制备方法
EP3790409A4 (en) 2018-05-10 2021-07-21 Comet Biorefining Inc. COMPOSITIONS WITH GLUCOSE AND HEMICELLULOSE AND THEIR USES
CN109596550A (zh) * 2018-12-24 2019-04-09 苏州科铭生物技术有限公司 一种基于分光光度法的海藻糖含量测定试剂盒及其方法
CN110564624B (zh) * 2019-08-13 2023-01-24 内蒙古世洪农业科技有限公司 一种高抗盐碱产黄青霉菌及其分离方法和应用
CN112574928B (zh) * 2021-01-05 2021-09-07 东北林业大学 一种寒地秸秆腐解菌剂及制作方法和应用

Family Cites Families (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3009104C2 (de) 1980-03-10 1990-10-04 Odenwald-Chemie GmbH, 6901 Schönau Verwendung eines Epoxydharzes zur Herstellung von feuerhemmenden Schichten oder Überzügen und Verfahren zur Herstellung derselben
CA1338400C (en) 1983-08-31 1996-06-18 David H. Gelfand Recombinant fungal cellulases
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US5648263A (en) 1988-03-24 1997-07-15 Novo Nordisk A/S Methods for reducing the harshness of a cotton-containing fabric
US5426039A (en) 1993-09-08 1995-06-20 Bio-Rad Laboratories, Inc. Direct molecular cloning of primer extended DNA containing an alkane diol
US6335160B1 (en) 1995-02-17 2002-01-01 Maxygen, Inc. Methods and compositions for polypeptide engineering
US6117679A (en) * 1994-02-17 2000-09-12 Maxygen, Inc. Methods for generating polynucleotides having desired characteristics by iterative selection and recombination
US5605793A (en) 1994-02-17 1997-02-25 Affymax Technologies N.V. Methods for in vitro recombination
US5837458A (en) 1994-02-17 1998-11-17 Maxygen, Inc. Methods and compositions for cellular and metabolic engineering
WO1996000787A1 (en) 1994-06-30 1996-01-11 Novo Nordisk Biotech, Inc. Non-toxic, non-toxigenic, non-pathogenic fusarium expression system and promoters and terminators for use therein
FI104465B (fi) 1995-06-14 2000-02-15 Valio Oy Proteiinihydrolysaatteja allergioiden hoitamiseksi tai estämiseksi, niiden valmistus ja käyttö
US5811381A (en) 1996-10-10 1998-09-22 Mark A. Emalfarb Cellulase compositions and methods of use
US7883872B2 (en) * 1996-10-10 2011-02-08 Dyadic International (Usa), Inc. Construction of highly efficient cellulase compositions for enzymatic hydrolysis of cellulose
US6265204B1 (en) 1997-01-17 2001-07-24 Genencor International, Inc. DNA sequences, vectors, and fusion polypeptides for secretion of polypeptides in filamentous fungi
ES2237159T3 (es) 1998-10-06 2005-07-16 Mark Aaron Emalfarb Sistema de transformacion en el campo de los hongos micoticos filamentosos en chrysosporium.
JP4221100B2 (ja) 1999-01-13 2009-02-12 エルピーダメモリ株式会社 半導体装置
US6376246B1 (en) * 1999-02-05 2002-04-23 Maxygen, Inc. Oligonucleotide mediated nucleic acid recombination
AU4964101A (en) 2000-03-30 2001-10-15 Maxygen Inc In silico cross-over site selection
US7049485B2 (en) 2000-10-20 2006-05-23 Board Of Trustees Of Michigan State University Transgenic plants containing ligninase and cellulase which degrade lignin and cellulose to fermentable sugars
DK1493027T3 (en) 2002-03-01 2014-11-17 Codexis Mayflower Holdings Llc Methods, systems and software for identifying functional biomolecules
US20050084907A1 (en) * 2002-03-01 2005-04-21 Maxygen, Inc. Methods, systems, and software for identifying functional biomolecules
US7407788B2 (en) 2002-11-21 2008-08-05 Danisco A/S, Genencor Division BGL7 beta-glucosidase and nucleic acids encoding the same
ES2347658T3 (es) * 2003-05-02 2010-11-03 Novozymes Inc. Variantes de beta-glucosidasas.
US7244605B2 (en) 2003-10-28 2007-07-17 Novozymes, Inc. Polypeptides having beta-glucosidase activity and polynucleotides encoding same
US20060041961A1 (en) * 2004-03-25 2006-02-23 Abad Mark S Genes and uses for pant improvement
WO2007075899A2 (en) 2005-12-21 2007-07-05 Maxygen, Inc. Dual agonist compounds and uses thereof
FI120045B (fi) * 2005-12-22 2009-06-15 Roal Oy Selluloosamateriaalin käsittely ja siinä käyttökelpoiset entsyymit
AU2007262634A1 (en) 2006-06-22 2007-12-27 Iogen Energy Corporation Enzyme compositions for the improved enzymatic hydrolysis of cellulose and methods of using same
US8017373B2 (en) 2006-08-31 2011-09-13 Iogen Energy Corporation Process for enzymatic hydrolysis of pretreated lignocellulosic feedstocks
WO2008073914A2 (en) 2006-12-10 2008-06-19 Dyadic International Inc. Expression and high-throughput screening of complex expressed dna libraries in filamentous fungi
US7923236B2 (en) * 2007-08-02 2011-04-12 Dyadic International (Usa), Inc. Fungal enzymes
MX2010002180A (es) 2007-08-30 2010-06-01 Iogen Energy Corp Hidrolisis enzimatica de materiales de abastecimiento lignocelulosicos utilizando enzimas auxiliares.
CA2736661A1 (en) 2007-09-07 2009-03-12 Dyadic International, Inc. Novel fungal enzymes
US20090312196A1 (en) * 2008-06-13 2009-12-17 Codexis, Inc. Method of synthesizing polynucleotide variants
CN102712916B (zh) * 2009-09-18 2015-11-25 诺维信股份有限公司 具有β-葡糖苷酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸
WO2011041594A1 (en) 2009-09-30 2011-04-07 Codexis, Inc. Recombinant c1 b-glucosidase for production of sugars from cellulosic biomass
EP2602317B1 (en) 2009-11-20 2017-08-02 Danisco US Inc. Beta-glucosidase variants with improved properties
MX355841B (es) * 2009-11-25 2018-05-02 Codexis Inc Variantes de beta-glucosidasa recombinante para producción de azúcares solubles de biomasa celulósica.

Also Published As

Publication number Publication date
EP2504017B1 (en) 2014-01-08
CN102740868B (zh) 2016-01-20
CN102740868A (zh) 2012-10-17
MX2012006016A (es) 2012-06-25
EP2504017A4 (en) 2013-07-31
US20120164709A1 (en) 2012-06-28
PL2504017T3 (pl) 2014-06-30
MX355841B (es) 2018-05-02
US8685690B2 (en) 2014-04-01
US20110129881A1 (en) 2011-06-02
CO6481004A2 (es) 2012-07-16
CA2781884A1 (en) 2011-06-03
WO2011066457A2 (en) 2011-06-03
DK2504017T3 (en) 2014-03-03
EP2706119A1 (en) 2014-03-12
US8323947B2 (en) 2012-12-04
WO2011066457A3 (en) 2011-07-21
US20120164696A1 (en) 2012-06-28
ES2455269T3 (es) 2014-04-15
EP2706119B1 (en) 2015-08-12
US8143050B2 (en) 2012-03-27
US20140065678A1 (en) 2014-03-06
EP2504017A2 (en) 2012-10-03
CA2781884C (en) 2015-01-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2012126131A (ru) РЕКОМБИНАНТНЫЕ ВАРИАНТЫ β-ГЛЮКОЗИДАЗЫ ДЛЯ ПРОДУКЦИИ РАСТВОРИМЫХ САХАРОВ ИЗ ЦЕЛЛЮЛОЗНОЙ БИОМАССЫ
Vaishnav et al. Penicillium: the next emerging champion for cellulase production
den Haan et al. Progress and challenges in the engineering of non-cellulolytic microorganisms for consolidated bioprocessing
Dashtban et al. Fungal bioconversion of lignocellulosic residues; opportunities & perspectives
Mathew et al. Progress in research on fungal cellulases for lignocellulose degradation
Srivastava et al. Application of cellulases in biofuels industries: an overview
Anasontzis et al. Homologous overexpression of xylanase in Fusarium oxysporum increases ethanol productivity during consolidated bioprocessing (CBP) of lignocellulosics
US20200056216A1 (en) Compositions and methods related to beta-glucosidase
RU2013146341A (ru) Композиции целлюлазы и способы их применения для улучшенного превращения лигноцеллюлозной биомассы в ферментируемые сахара
Phadtare et al. Recombinant thermo-alkali-stable endoglucanase of Myceliopthora thermophila BJA (rMt-egl): biochemical characteristics and applicability in enzymatic saccharification of agro-residues
US20160298157A1 (en) Compositions comprising a beta-glucosidase polypeptide and methods of use
Xiao et al. Co-expression of cellulase and xylanase genes in Saccharomyces cerevisiae toward enhanced bioethanol production from corn stover
US20110294184A1 (en) Cellulolytic polypeptides and their use in micro-organisms for the production of solvents and fuels
JP2015533294A (ja) ニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａｃｒａｓｓａ）由来のβ−グルコシダーゼ
Jain et al. Functional expression of a thermostable endoglucanase from Thermoascus aurantiacus RCKK in Pichia pastoris X-33 and its characterization
Generoso et al. Recombinant expression and characterization of an endoglucanase III (cel12a) from Trichoderma harzianum (Hypocreaceae) in the yeast Pichia pastoris
Goldenkova-Pavlova et al. The features that distinguish lichenases from other polysaccharide-hydrolyzing enzymes and the relevance of lichenases for biotechnological applications
Grieco et al. Evaluation of the enzymatic arsenal secreted by Myceliophthora thermophila during growth on sugarcane bagasse with a focus on LPMOs
Singh et al. Overview of the process of enzymatic transformation of biomass
RU2008107784A (ru) Генетическая конструкция для обеспечения экспрессии целевых гомологичных и гетерологичных генов в клетках мицелиального гриба penicillium verruculosum, используемого в качестве хозяина, способ получения штамма гриба penicillium verruculosum и способ получения ферментного препарата
EP2529013B1 (en) Novel beta-glucosidase and uses thereof
van Zyl et al. Developing cellulolytic organisms for consolidated bioprocessing of lignocellulosics
WO2011117728A2 (en) Novel cbh1-eg1 fusion proteins and use thereof
Liang et al. Gene cloning and characterization of an organic solvent-stimulated β-glucosidase and its application for the co-production of ethanol and succinic acid
Javanmard et al. Polycistronic cellulase gene expression in Pichia pastoris

Legal Events

Date Code Title Description
FA92 Acknowledgement of application withdrawn (lack of supplementary materials submitted)

Effective date: 20150407