RU2009129838A - ПЛАЗМИДНЫЙ ВЕКТОР pE-Lc-LTP, ШТАММ БАКТЕРИИ Escherichia coli ДЛЯ ЭКСПРЕССИИ ЛИПИД-ТРАНСПОРТИРУЮЩИХ БЕЛКОВ ЧЕЧЕВИЦЫ Lens culinaris И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ УКАЗАННЫХ БЕЛКОВ - Google Patents

Abstract

1. Плазмидный вектор рЕ-Lc-LTP для экспрессии в клетках Escherichia coli липид-транспортирующих белков чечевицы Lens culinaris, содержащий ген гибридного полипептида Trx-Lc-LTP, включающего аминокислотную последовательность белка тиоредоксина, аффинную метку, сайт расщепления и последовательность липид-транспортирующего белка Lc-LTP, выбранную из группы последовательностей SEQ ID Nos.1-8, где ! аффинная метка - аминокислотная последовательность, позволяющая проводить аффинную очистку гибридного полипептида на сорбентах с иммобилизованными ионами металлов, ! сайт расщепления - участок аминокислотной последовательности, расположенный между последовательностями липид-транспортирующего белка Lc-LTP и тиоредоксина, позволяющий проводить частичное расщепление гибридного полипептида химическим или ферментативным способом. ! 2. Плазмидный вектор по п.1, содержащий в составе гена гибридного полипептида промотор Т5. ! 3. Плазмидный вектор по п.1, содержащий в составе гена гибридного полипептида промотор Т7. ! 4. Плазмидный вектор по п.1, где последовательность белка тиоредоксина представляет собой последовательность тиоредоксина A Escherichia coli с заменой внутреннего остатка Met на Leu, а сайт расщепления представляет собой остаток Met. ! 5. Плазмидный вектор по п.1, с нуклеотидной последовательностью, выбранной из группы последовательностей SEQ ID Nos.9-11. ! 6. Штамм бактерии Escherichia coli - продуцент гибридного полипептида Trx-Lc-LTP, полученный путем трансформации клеток родительского штамма BL21 (DE3) или XL1-Blue плазмидным вектором pE-Lc-LTP. ! 7. Способ получения липид-транспортирующих белков чечевицы Lens culinaris, включающий экспрессию целевого белка в составе гибридного полипе�

Claims (9)

1. Плазмидный вектор рЕ-Lc-LTP для экспрессии в клетках Escherichia coli липид-транспортирующих белков чечевицы Lens culinaris, содержащий ген гибридного полипептида Trx-Lc-LTP, включающего аминокислотную последовательность белка тиоредоксина, аффинную метку, сайт расщепления и последовательность липид-транспортирующего белка Lc-LTP, выбранную из группы последовательностей SEQ ID Nos.1-8, где

аффинная метка - аминокислотная последовательность, позволяющая проводить аффинную очистку гибридного полипептида на сорбентах с иммобилизованными ионами металлов,

сайт расщепления - участок аминокислотной последовательности, расположенный между последовательностями липид-транспортирующего белка Lc-LTP и тиоредоксина, позволяющий проводить частичное расщепление гибридного полипептида химическим или ферментативным способом.

2. Плазмидный вектор по п.1, содержащий в составе гена гибридного полипептида промотор Т5.

3. Плазмидный вектор по п.1, содержащий в составе гена гибридного полипептида промотор Т7.

4. Плазмидный вектор по п.1, где последовательность белка тиоредоксина представляет собой последовательность тиоредоксина A Escherichia coli с заменой внутреннего остатка Met на Leu, а сайт расщепления представляет собой остаток Met.

5. Плазмидный вектор по п.1, с нуклеотидной последовательностью, выбранной из группы последовательностей SEQ ID Nos.9-11.

6. Штамм бактерии Escherichia coli - продуцент гибридного полипептида Trx-Lc-LTP, полученный путем трансформации клеток родительского штамма BL21 (DE3) или XL1-Blue плазмидным вектором pE-Lc-LTP.

7. Способ получения липид-транспортирующих белков чечевицы Lens culinaris, включающий экспрессию целевого белка в составе гибридного полипептида Trx-Lc-LTP в штамме-продуценте, полученном путем трансформации клеток родительского штамма бактерии Escherichia coli плазмидным вектором pE-Lc-LTP, лизис клеток, аффинную очистку гибридного белка на металлохелатном носителе, расщепление гибридного белка по сайту, расположенному между последовательностями Lc-LTP и тиоредоксина, и очистку целевого липид-транспортирующего белка методом обращенно-фазовой ВЭЖХ.

8. Способ по п.7, где гибридный белок расщепляют бромцианом в кислой среде по остатку Met.

9. Способ по п.7, где гибридный белок расщепляют кислотным гидролизом по связи Asp-Pro.