RU2009100519A

RU2009100519A - Plague microbe antigen detection method

Info

Publication number: RU2009100519A
Application number: RU2009100519/15A
Authority: RU
Inventors: Валерий Борисович Николаев (RU); Валерий Борисович Николаев; Евгений Юрьевич Марков (RU); Евгений Юрьевич Марков; Евгений Павлович Голубинский (RU); Евгений Павлович Голубинский; Татьяна Юрьевна Загоскина (RU); Татьяна Юрьевна Загоскина; Сергей Владимирович Балахонов (RU); Сергей Владимирович Балахонов; Елена Николаевна Субычева (RU); Елена Николаевна Субычева; Юрий Владимирович Белобородов (RU); Юрий Владимирович Белобородов; Нина Михайловна Андреевская (RU); Нина Михайловна Андреевская; Вера Александровна Михайлова (RU); Вера Александровна Михайлова; Юлия Олеговна Попова (RU); Юлия Олеговна Попова
Priority date: 2009-06-01
Filing date: 2009-06-01
Publication date: 2010-12-10
Also published as: RU2408021C2

Abstract

1. Способ обнаружения антигенов чумного микроба, включающий нанесение на твердую подложку исследуемого материала в количестве 1-2 мкл, промывание подложки после полного впитывания материала 0,01 М фосфатным буфером pH 7,2, блокирование свободных участков связывания раствором инертного белка, промывание подложки 0,01 М фосфатным буфером, помещение подложки в раствор меченных противочумных IgG и визуальное обнаружение антигенов чумного микроба: при формировании окрашенных пятен определяют наличие в исследуемом материале антигенов чумного микроба, а при отсутствии пятен - отсутствие антигенов чумного микроба, отличающийся тем, что подложку помещают в 0,067 М фосфатный буфер, содержащий 0,14 М NaCl, на 20-30 мин, после чего ее высушивают при комнатной температуре и затем помещают в раствор противочумных IgG (раствор готовят из расчета 500 мкг сухого белка на 1 мл 0,01 М фосфатного буфера) на 30 мин при температуре 37°C, после чего подложку отмывают 0,01 М фосфатным буфером и блокируют свободные участки, при этом в качестве инертного белка для блокирования свободных участков используют 1%-ный раствор казеината натрия, в который помещают подложку на 20-30 мин при температуре 20-25°C, затем наносят исследуемый материал, после чего помещают подложку в раствор меченых противочумных IgG на 40-60 мин при комнатной температуре, а в качестве меченных противочумных IgG используют противочумные IgG, меченные дисперсным красителем, затем подложку извлекают, высушивают при комнатной температуре и визуально определяют наличие или отсутствие антигенов чумного микроба. ! 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве красителя используют краситель «Diamix luminous red 1. A method for detecting plague microbe antigens, comprising applying 1-2 μl of the test material to a solid substrate, washing the substrate after completely absorbing the material with 0.01 M phosphate buffer pH 7.2, blocking free binding sites with an inert protein solution, washing the substrate 0 , 01 M phosphate buffer, placing the substrate in a solution of labeled anti-plague IgG and visual detection of plague microbe antigens: when colored stains are formed, the presence of plague micro antigens in the test material is determined ba, and in the absence of spots - the absence of plague microbe antigens, characterized in that the substrate is placed in 0.067 M phosphate buffer containing 0.14 M NaCl for 20-30 minutes, after which it is dried at room temperature and then placed in a solution of anti-plague IgG (the solution is prepared at the rate of 500 μg of dry protein per 1 ml of 0.01 M phosphate buffer) for 30 min at 37 ° C, after which the substrate is washed with 0.01 M phosphate buffer and block free areas, while as an inert protein to block free areas using a 1% solution of kaz sodium einate, in which the substrate is placed for 20-30 minutes at a temperature of 20-25 ° C, then the test material is applied, after which the substrate is placed in a solution of labeled anti-plague IgG for 40-60 minutes at room temperature, and used as labeled anti-plague IgG anti-plague IgG labeled with a disperse dye, then the substrate is removed, dried at room temperature and the presence or absence of plague microbe antigens is visually determined. ! 2. The method according to claim 1, characterized in that the dye used is the dye "Diamix luminous red

Claims

1. A method for detecting plague microbe antigens, comprising applying 1-2 μl of the test material to a solid substrate, washing the substrate after completely absorbing the material with 0.01 M phosphate buffer pH 7.2, blocking free binding sites with an inert protein solution, washing the substrate 0 , 01 M phosphate buffer, placing the substrate in a solution of labeled anti-plague IgG and visual detection of plague microbe antigens: when colored stains are formed, the presence of plague micro antigens in the test material is determined ba, and in the absence of spots - the absence of plague microbe antigens, characterized in that the substrate is placed in 0.067 M phosphate buffer containing 0.14 M NaCl for 20-30 minutes, after which it is dried at room temperature and then placed in a solution of anti-plague IgG (the solution is prepared at the rate of 500 μg of dry protein per 1 ml of 0.01 M phosphate buffer) for 30 min at 37 ° C, after which the substrate is washed with 0.01 M phosphate buffer and block free areas, while as an inert protein to block free areas using a 1% solution of kaz sodium einate, in which the substrate is placed for 20-30 minutes at a temperature of 20-25 ° C, then the test material is applied, after which the substrate is placed in a solution of labeled anti-plague IgG for 40-60 minutes at room temperature, and used as labeled anti-plague IgG anti-plague IgG labeled with a disperse dye, then the substrate is removed, dried at room temperature and the presence or absence of plague microbe antigens is visually determined.

2. The method according to claim 1, characterized in that the dye used is the dye "Diamix luminous red B".