RU2008680C1 - Method of assay of substance biological activity - Google Patents
Method of assay of substance biological activity Download PDFInfo
- Publication number
- RU2008680C1 RU2008680C1 SU5037565A RU2008680C1 RU 2008680 C1 RU2008680 C1 RU 2008680C1 SU 5037565 A SU5037565 A SU 5037565A RU 2008680 C1 RU2008680 C1 RU 2008680C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- aoa
- working
- biological
- substance
- control
- Prior art date
Links
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims abstract description 52
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 title claims description 28
- 238000003556 assay Methods 0.000 title 1
- WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N Malondialdehyde Chemical compound O=CCC=O WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 82
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims abstract description 44
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 claims abstract description 22
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims abstract description 11
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 8
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 36
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 19
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 claims description 11
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 9
- 229940118019 malondialdehyde Drugs 0.000 claims description 9
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 6
- 230000037323 metabolic rate Effects 0.000 claims description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 3
- -1 respectively Chemical compound 0.000 claims description 3
- 230000000881 depressing effect Effects 0.000 claims 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 claims 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 claims 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 10
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 8
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 6
- BTFTUFBNYKHSTI-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(3,5-ditert-butyl-4-hydroxyphenyl)propanedioic acid Chemical compound CC(C)(C)C1=CC(C(N)(C(O)=O)C(O)=O)=CC(C(C)(C)C)=C1O BTFTUFBNYKHSTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 5
- IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N Diphosphoinositol tetrakisphosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 4
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 description 4
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Natural products OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 4
- WHWDWIHXSPCOKZ-UHFFFAOYSA-N hexahydrofarnesyl acetone Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)=O WHWDWIHXSPCOKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000001853 liver microsome Anatomy 0.000 description 4
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 3
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 3
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- CWEFIMQKSZFZNY-UHFFFAOYSA-N pentyl 2-[4-[[4-[4-[[4-[[4-(pentoxycarbonylamino)phenyl]methyl]phenyl]carbamoyloxy]butoxycarbonylamino]phenyl]methyl]phenyl]acetate Chemical compound C1=CC(CC(=O)OCCCCC)=CC=C1CC(C=C1)=CC=C1NC(=O)OCCCCOC(=O)NC(C=C1)=CC=C1CC1=CC=C(NC(=O)OCCCCC)C=C1 CWEFIMQKSZFZNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXRKCOCTEMYUEG-UHFFFAOYSA-N 5-aminoisoindole-1,3-dione Chemical compound NC1=CC=C2C(=O)NC(=O)C2=C1 PXRKCOCTEMYUEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000018436 Coriandrum sativum Species 0.000 description 2
- 235000002787 Coriandrum sativum Nutrition 0.000 description 2
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 2
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 229920006264 polyurethane film Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- XHTYQFMRBQUCPX-UHFFFAOYSA-N 1,1,3,3-tetramethoxypropane Chemical compound COC(OC)CC(OC)OC XHTYQFMRBQUCPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNKZMNRKLCTJAY-UHFFFAOYSA-N 4'-Methylacetophenone Chemical compound CC(=O)C1=CC=C(C)C=C1 GNKZMNRKLCTJAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFVMLCJEDYAOIB-FYWRMAATSA-N 5-ethyl-2-methoxy-3-methyl-6-[2-[(e)-3-methyl-4-phenylbut-3-enyl]-1,3-oxazol-4-yl]pyran-4-one Chemical compound O1C(OC)=C(C)C(=O)C(CC)=C1C1=COC(CC\C(C)=C\C=2C=CC=CC=2)=N1 OFVMLCJEDYAOIB-FYWRMAATSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000002234 Allium sativum Species 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- 235000000832 Ayote Nutrition 0.000 description 1
- 235000000604 Chrysanthemum parthenium Nutrition 0.000 description 1
- 240000004244 Cucurbita moschata Species 0.000 description 1
- 235000009854 Cucurbita moschata Nutrition 0.000 description 1
- 235000009804 Cucurbita pepo subsp pepo Nutrition 0.000 description 1
- OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N Ethane Chemical compound CC OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007890 Leonurus cardiaca Species 0.000 description 1
- 235000000802 Leonurus cardiaca ssp. villosus Nutrition 0.000 description 1
- 240000000366 Melilotus officinalis Species 0.000 description 1
- 235000017822 Melilotus officinalis Nutrition 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFVMLCJEDYAOIB-UHFFFAOYSA-N Phenoxan Natural products O1C(OC)=C(C)C(=O)C(CC)=C1C1=COC(CCC(C)=CC=2C=CC=CC=2)=N1 OFVMLCJEDYAOIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000012677 beetroot red Nutrition 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000001914 calming effect Effects 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 150000001993 dienes Chemical class 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 239000010408 film Substances 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000004611 garlic Nutrition 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000001589 microsome Anatomy 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000033040 negative regulation of metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 238000005502 peroxidation Methods 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 235000015136 pumpkin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области биохимии, а более конкретно - к определению биологической активности (БА) веществ. Областью его применения являются преимущественно фармакология, медицина, экология, производство продуктов питания. Оно может использоваться для определения БА фармакологических средств, пленок медицинского назначения, продуктов питания, питательных смесей, фитонапитков, примесей в питьевой воде, различных органических и неорганических веществ и материалов. The invention relates to the field of biochemistry, and more specifically to the determination of the biological activity (BA) of substances. Its scope is mainly pharmacology, medicine, ecology, food production. It can be used to determine BA pharmacological agents, films of medical use, food, nutritional mixtures, herbal drinks, impurities in drinking water, various organic and inorganic substances and materials.
Известны способы определения БА веществ, основанные на введении животному испытуемого вещества и наблюдении за изменениями у него обменных процессов, например липидного обмена [1] . Known methods for determining AD of substances based on the introduction of the test substance to the animal and monitoring changes in its metabolic processes, such as lipid metabolism [1].
При этом дополнительно у животного может вызываться воспалительный процесс, например введением четыреххлористого углерода, что резко увеличивает мембранный метаболизм, в частности перекисное окисление липидов [2] . In addition, an inflammatory process can be caused in an animal, for example, by the introduction of carbon tetrachloride, which dramatically increases membrane metabolism, in particular lipid peroxidation [2].
Эти способы позволяют определить БА вещества по реакции живого организма в целом, которая состоит как из непосредственного действия биологически активного вещества на клеточные мембраны, так и опосредованного действия на них через другие системы организма. Это не позволяет определить прямое действие биологически активных веществ на клетку. Недостатком этих способов является и необходимость использования для их реализации животных. These methods make it possible to determine the BA of a substance by the reaction of a living organism as a whole, which consists of both the direct action of a biologically active substance on cell membranes and the indirect effect on them through other body systems. This does not allow to determine the direct effect of biologically active substances on the cell. The disadvantage of these methods is the need to use animals for their implementation.
Известен способ определения БА веществ (витамина Е в сочетании с витамином A), представляющий собой метод исследования БА в модельных условиях с заданными параметрами, основанный на определении влияния испытуемого вещества (витамина) на перекисное окисление лецитина (аскорбат-зависимое) в суспензии липосом [3] . There is a method of determining AD of substances (vitamin E in combination with vitamin A), which is a method for studying AD in model conditions with specified parameters, based on determining the effect of the test substance (vitamin) on the peroxidation of lecithin (ascorbate-dependent) in a suspension of liposomes [3 ].
При этом способе потенциальная возможность проявления БА вещества уменьшена, поскольку БА исследуется при определенных заданных условиях повышения перекисного окисления липидов (ПОЛ). Кроме того, модельная система не обеспечивает полной объективности результатов, поскольку в такой системе нет многих составляющих биологической клеточной мембраны, т. е. этот способ не дает результата, полно свидетельствующего об изменении мембранного метаболизма и системы адаптации, так как в нем изучается влияние биологически активного вещества только на образование метаболита ПОЛ - малонового альдегида и не исследуется влияние биологически активного вещества на способность клетки деградировать малоновый альдегид, на антиокислительную активность и др. With this method, the potential for the manifestation of AD of a substance is reduced, since AD is studied under certain given conditions for increasing lipid peroxidation (LP). In addition, the model system does not provide complete objectivity of the results, since such a system does not have many components of the biological cell membrane, i.e., this method does not give a result that fully indicates a change in membrane metabolism and the adaptation system, since it studies the effect of biologically active substances only on the formation of the metabolite of LPO - malonic aldehyde and the effect of biologically active substances on the ability of a cell to degrade malonic aldehyde on antioxidant is not studied nuyu activity and others.
Известен способ определения БА веществ, например, биологических жидкостей и реагентов, при котором определяют их антиокислительную активность [4] . Для определения антиокислительной активности биологической жидкости используют ее способность окислять SH-группы, присутствующие в растворимых белках хрусталика глаза млекопитающих. A known method for determining AD of substances, for example, biological fluids and reagents, in which they determine their antioxidant activity [4]. To determine the antioxidant activity of a biological fluid, its ability to oxidize SH groups present in soluble proteins of the lens of the mammalian eye is used.
Этот способ сложен, так как он требует выделения, гомогенизации и очистки хрусталика глаза. Кроме того, этот способ малоинформативен, поскольку он позволяет определить БА веществ только в отношении антиокислительной активности. Он не позволяет выявить влияние биологически активного вещества на метаболизм малонового альдегида. Способ требует забоя животного. This method is complex because it requires isolation, homogenization and purification of the lens of the eye. In addition, this method is uninformative, since it allows the determination of AD of substances only with respect to antioxidant activity. It does not allow to reveal the effect of a biologically active substance on the metabolism of malonic aldehyde. The method requires the slaughter of an animal.
Из известных способов наиболее близким к заявленному по совокупности признаков является способ определения биологической активности веществ, включающий приготовление контрольного и рабочего биологических препаратов клеточной субстанции животного организма, добавление испытуемого вещества в рабочий биологический препарат, инкубацию контрольного и рабочего биологических препаратов, определение в них показателей метаболизма, в качестве одного из которых используют содержание в биологическом препарате малонового альдегида, сравнение показателей метаболизма в контрольном и рабочем биологических препаратах и суждение о степени биологической активности испытуемого вещества по величине показателей метаболизма [5] . Of the known methods, the closest to the claimed combination of characteristics is a method for determining the biological activity of substances, including the preparation of a control and working biological preparations of the cellular substance of an animal organism, adding a test substance to a working biological preparation, incubating a control and working biological preparations, determining metabolic parameters in them, as one of which use the content in the biological preparation of malonic aldehyde, equal s metabolic indicators in the reference and working of biological preparations and the judgment of the degree of the biological activity of the test substance in magnitude metabolism indices [5].
Определение БА веществ при этом способе основано на влиянии биологически активного вещества на показатели метаболизма в микросомах печени взрослых крыс "ин витро". При этом вначале приготавливают микросомы печени и хранят их при отрицательной температуре (- 18оС) до использования, т. е. в качестве клеточной субстанции используют замороженные микросомы печени. Рабочий биологический препарат получают добавлением в него испытуемого вещества. После инкубации контрольного и рабочего биологических препаратов в среде с перекисью водорода определяют в них содержание малонового альдегида, продукцию пентана и этана и уровень хемилюминесценции.The determination of AD of substances in this method is based on the influence of a biologically active substance on metabolic parameters in the liver microsomes of adult rats in vitro. Thus initially prepared liver microsomes and store them at negative temperatures (- 18 C) until use, ie as cellular substance used frozen liver microsomes... A working biological preparation is obtained by adding a test substance to it. After incubation of the control and working biological preparations in a medium with hydrogen peroxide, the content of malonic aldehyde, the production of pentane and ethane, and the level of chemiluminescence are determined in them.
Этот способ недостаточно информативен, имеет недостаточно высокую достоверность и сложен. Для осуществления способа необходимо использовать животных и забивать их. Выделение микросом печени (по сравнению, например, с выделением эритроцитов) представляет собой сложный и длительный процесс. Кроме того, используются микросомы с заранее заданной интенсивностью мембранного метаболизма (условия активации ПОЛ), что сужает возможность проявления БА. Все показатели способа характеризуют активность ПОЛ, который является лишь одной из составляющих мембранного метаболизма. This method is not informative enough, has a low reliability and is complicated. To implement the method, it is necessary to use animals and slaughter them. Isolation of liver microsomes (compared, for example, with the release of red blood cells) is a complex and lengthy process. In addition, microsomes are used with a predetermined intensity of membrane metabolism (LPO activation conditions), which narrows the possibility of AD. All indicators of the method characterize the activity of LPO, which is only one of the components of membrane metabolism.
Задача, на решение которой направлено изобретение, состоит в создании высокоэффективного способа определения БА веществ, лишенного недостатков, свойственных прототипу. Технический результат заключается в расширении информативности способа за счет выявления характера БА вещества, повышении достоверности и упрощении способа. The problem to which the invention is directed, is to create a highly effective method for determining AD of substances, devoid of the disadvantages inherent in the prototype. The technical result consists in expanding the information content of the method by identifying the nature of the BA of the substance, increasing the reliability and simplification of the method.
Это достигается тем, что при способе определения БА веществ, включающем приготовление контрольного и рабочего биологических препаратов клеточной субстанции живого организма, добавление испытуемого вещества в рабочий биологический препарат, инкубацию контрольного и рабочего биологических препаратов, определение в них показателей метаболизма, в качестве одного из которых используют содержание в биологическом препарате малонового альдегида, сравнение показателей метаболизма в контрольном и рабочем биологических препаратах и суждение о степени биологической активности испытуемого вещества по величине изменений показателей метаболизма, в качестве клеточной субстанции биологических препаратов используют свежеприготовленные эритроциты, в качестве показателей метаболизма дополнительно используют степень гемолиза эритроцитов, интенсивность деградации малонового альдегида и антиокислительную активность, а после определения показателей метаболизма в контрольном и рабочем биологических препаратах рассчитывают соотношения
МАр/Гр, МАк/Гк, Др/МАр, Дк/МАк, АОАр/МАр, АОАк/МАк, где МАк, МАр - содержание малонового альдегида в контрольном и рабочем биологических препаратах соответственно;
Гк, Гр - степень гемолиза эритроцитов в контрольном и рабочем биологических препаратах соответственно;
Дк, Др - интенсивность деградации малонового альдегида в контрольном и рабочем биологических препаратах соответственно;
АОАк, АОАр - антиокислительная активность в контрольном и рабочем биологических препаратах соответственно;
при этом делают вывод об отсутствии биологической активности у испытуемого вещества, если между величинами соответствующих показателей метаболизма и их соотношений в контрольном и рабочем биологических препаратах различий нет, о наличии у испытуемого вещества слабой биологической активности, если
Гр - Гк 
МАр - МАк 
Др - Дк 
АОАр - АОАк 
МАр/Гр - МАк/Гк ≈ 0,
Др/МАр - Дк/МАк ≈ 0,
АОАр/МАр - АОАк/МАк ≈ 0, о наличии у испытуемого вещества высокой биологической активности, инициирующей мембранный метаболизм, если
Гр - Гк > 0,
МАр - МАк > 0,
Др - Дк > 0,
АОАр - АОАк > 0,
МАр/Гр - МАк/Гк < 0,
Др/МАр - Дк/МАк > 0,
АОАр/МАр - АОАк/МАк > 0, о наличии у испытуемого вещества высокой биологической активности, угнетающей мембранный метаболизм, если
Гр - Гк < 0,
МАр - МАк < 0,
Др - Дк < 0,
АОАр - АОАк < 0,
МАр/Гр - МАк/Гк > 0,
Др/МАр - Дк/МАк < 0,
АОАр/МАр - АОАк/МАк < 0, о наличии у испытуемого вещества токсической биологической активности, если изменения величин показателей метаболизма и их соотношений в контрольном и рабочем биологических препаратах имеют резкий несбалансированный характер.This is achieved by the fact that with the method for determining AD of substances, including the preparation of a control and working biological preparations of a cellular substance of a living organism, adding a test substance to a working biological preparation, incubating a control and working biological preparations, determining metabolic parameters in them, one of which is used the content of malonic aldehyde in the biological preparation, comparison of metabolic parameters in the control and working biological preparations, and is destined e about the degree of biological activity of the test substance in terms of changes in metabolic rates, freshly prepared red blood cells are used as the cellular substance of biological preparations, the degree of erythrocyte hemolysis, the rate of malondialdehyde degradation and antioxidant activity are additionally used, and after determining the metabolic rate in the control and working biological preparations calculate the ratio
MA r / G p , MA k / G k , D p / MA p , D k / MA k , AOA p / MA p , AOA k / MA k , where MA k , MA p is the content of malondialdehyde in the control and working biological preparations, respectively;
G to , G p - the degree of hemolysis of red blood cells in the control and working biological products, respectively;
D to , D p - the intensity of degradation of malondialdehyde in the control and working biological preparations, respectively;
AOA k , AOA p - antioxidant activity in the control and working biological preparations, respectively;
at the same time, they conclude that there is no biological activity in the test substance, if there are no differences between the values of the corresponding metabolic parameters and their ratios in the control and working biological preparations, and the test substance has weak biological activity if
G r - G to
MA r -
D r -
AOA r - AOA to
MA r / G p - MA k / G k ≈ 0,
D r / MA r - D to / MA to ≈ 0,
AOA p / MA p - AOA k / MA k ≈ 0, the presence of a test substance of high biological activity that initiates membrane metabolism, if
Г р - Г к > 0,
MA p - MA to > 0,
D p - D to > 0,
AOA p - AOA to > 0,
MA r / G p - MA k / G k <0,
D r / MA r - D to / MA to > 0,
AOA p / MA p - AOA k / MA k > 0, the presence of a test substance of high biological activity that inhibits membrane metabolism, if
Г р - Г к <0,
MA p - MA k <0,
D p - Dk <0,
AOA p - AOA k <0,
MA r / G p - MA k / G k > 0,
D p / MA p - D k / MA k <0,
AOA r / MA p - AOA k / MA k <0, indicating the presence of a toxic biological activity of a test substance if changes in the values of metabolic parameters and their ratios in the control and working biological preparations are sharply unbalanced.
Признаки, отличающие предложенный способ от прототипа, характеризуют выбор клеточной субстанции биологических препаратов, использование в качестве показателей метаболизма дополнительно перекисного гемолиза, интенсивности деградации малонового альдегида и антиокислительной активности, расчет соотношений соответствующих показателей метаболизма в контрольном и рабочем биологических препаратах, суждение о степени и характере БА по изменению всех указанных показателей метаболизма и их соотношений. Signs that distinguish the proposed method from the prototype characterize the choice of the cellular substance of biological preparations, the use of additional peroxide hemolysis, the rate of degradation of malonic aldehyde and antioxidant activity as indicators of metabolism, the calculation of the ratios of the corresponding metabolic parameters in the control and working biological preparations, the judgment on the degree and nature of AD by a change in all of these metabolic parameters and their ratios.
Указанный технический результат обеспечивается всей совокупностью существенных признаков. The specified technical result is provided by the totality of essential features.
Биологически активные вещества (например, витамины, гормоны, питательные смеси, анти- и проаксиданты, фитонапитки, полисолодовые экстракты и др. ) являются препаратами неспецифического действия, влияющими на систему адаптации живого организма. При любых заболеваниях организма нарушается прежде всего эта система, которая непосредственно связана с интенсивностью мембранного метаболизма. Поэтому исследование БА веществ по их влиянию на показатели мембранного метаболизма позволяет выявить их прямое действие на мембраны, определить характер БА и дозовую зависимость. Мембранный метаболизм объективно связан со способностью клетки к ПОЛ и наработке его метаболита, к дальнейшей деградации образованного метаболита и его задержке путем связывания в клетке. Это и определило в качестве показателей метаболизма помимо содержания малонового альдегида, являющегося основным метаболитом, выбор степени гемолиза, интенсивности деградации малонового альдегида и антиокислительной активности. При этом оценка изменений не только абсолютных значений самих показателей, но и их соотношений обеспечивает повышение информативности способа, позволяя выявить характер БА. Использование соотношений показателей в относительных единицах облегчает построение алгоритмической модели способа. Biologically active substances (for example, vitamins, hormones, nutrient mixtures, anti- and proaxidants, phytonutrients, polysalt malt extracts, etc.) are nonspecific drugs that affect the adaptation system of a living organism. With any diseases of the body, this system is primarily disturbed, which is directly related to the intensity of membrane metabolism. Therefore, the study of AD substances according to their effect on the parameters of membrane metabolism allows us to identify their direct effect on the membrane, to determine the nature of AD and dose dependence. Membrane metabolism is objectively related to the ability of a cell to undergo lipid peroxidation and the production of its metabolite, to further degradation of the formed metabolite and its retention by binding in the cell. This determined, as indicators of metabolism, in addition to the content of malondialdehyde, which is the main metabolite, the choice of the degree of hemolysis, the degree of degradation of malondialdehyde and antioxidant activity. Moreover, the assessment of changes not only in the absolute values of the indicators themselves, but also in their ratios provides an increase in the information content of the method, making it possible to identify the nature of BA. The use of ratios of indicators in relative units facilitates the construction of an algorithmic model of the method.
На фиг. 1 и 2 показаны примеры дозовой зависимости характера БА фармакологических препаратов феноксана и анфена соответственно; на фиг. 3 и 4 приведены диаграммы, поясняющие выявление гемосовместимости полиуретановых пленок "Витур Т" и "Биомер" соответственно. In FIG. Figures 1 and 2 show examples of a dose dependence of the nature of AD of pharmacological preparations of phenoxane and anfen, respectively; in FIG. Figures 3 and 4 are diagrams explaining the identification of hemocompatibility of Vitur T and Biomer polyurethane films, respectively.
Сущность способа поясняется следующей последовательностью операций. Приготавливают контрольный и рабочий биологические препараты в виде контрольной и нескольких рабочих проб 5% -ной взвеси свежих эритроцитов с добавлением в рабочие пробы различных доз испытуемого вещества. Например, может быть приготовлено три рабочие пробы с низкой (10-15 М), средней (10-10 М) и высокой (10-7 М) дозами. Все пробы выполняют одинаковыми, например, объемом по 2 мл. Затем инкубируют все пробы 20-30 мин в физиологической среде: трис-HCl буфер, рН 7,4 с добавлением хлористого калия. В каждой пробе по интенсивности мембранного метаболизма определяют в эритроцитах показатели (параметры), характеризующие клеточную систему адаптации: содержание в эритроцитах общего (и связанного) малонового альдегида (МА), степень гемолиза эритроцитов (Г), интенсивность деградации малонового альдегида (Д), антиокислительную активность (АОА) по задержке выхода иода из иодистого калия при добавлении в пробы перекиси водорода. Дополнительно может определяться также и содержание свободных радикалов и концентрация диеновых конъюгатов. Интенсивность деградации малонового альдегида может определяться, например, при добавлении в пробы синтезированного из 1,1,3,3-тетраметоксипропана малонового альдегида.The essence of the method is illustrated by the following sequence of operations. The control and working biological preparations are prepared in the form of a control and several working samples of a 5% suspension of fresh red blood cells with various doses of the test substance added to the working samples. For example, three working samples can be prepared with low (10 -15 M), medium (10 -10 M) and high (10 -7 M) doses. All samples are performed the same, for example, with a volume of 2 ml. Then all samples are incubated for 20-30 min in physiological medium: Tris-HCl buffer, pH 7.4 with the addition of potassium chloride. In each sample, according to the intensity of membrane metabolism, indicators (parameters) are determined in red blood cells that characterize the cellular system of adaptation: the content of total (and bound) malonic aldehyde (MA) in red blood cells, the degree of hemolysis of red blood cells (G), the rate of degradation of malonic aldehyde (D), and antioxidant activity (AOA) in delaying the release of iodine from potassium iodide when hydrogen peroxide is added to the samples. Additionally, the content of free radicals and the concentration of diene conjugates can also be determined. The degradation rate of malonic aldehyde can be determined, for example, by adding malonic aldehyde synthesized from 1,1,3,3-tetramethoxypropane into the samples.
По изменениям величин указанных показателей и их соотношений (МА, Г, Д, АОА, МА/Г, Д/МА, АОА/МА) во всех пробах с добавлением испытуемого вещества по сравнению с контрольной пробой судят о степени и характере БА. При этом отсутствие изменений этих величин свидетельствует об отсутствии БА у испытуемого вещества. Уменьшение величин Г и МА при повышении соотношения МА/Г указывает на угнетение ПОЛ. Уменьшение величин Д и особенно Д/МА свидетельствует о снижении способности клетки избавляться от метаболита. Уменьшение АОА и АОА/МА свидетельствует о снижении антиокислительной активности клетки. Изменение величин параметров в противоположную сторону предполагает и "противоположную" БА. Причем изменение только одного или двух показателей без изменения соотношений указывает на слабую БА испытуемого вещества. Изменения соотношений показателей свидетельствуют о более сильной БА, чем при изменении абсолютных значений одних показателей без изменения их соотношений. By the changes in the values of these indicators and their ratios (MA, G, D, AOA, MA / G, D / MA, AOA / MA) in all samples with the addition of the test substance compared to the control sample, the degree and nature of AD are judged. Moreover, the absence of changes in these values indicates the absence of AD in the test substance. A decrease in G and MA with increasing MA / G ratio indicates inhibition of LP. A decrease in D values and especially D / MA indicates a decrease in the ability of the cell to get rid of the metabolite. A decrease in AOA and AOA / MA indicates a decrease in the antioxidant activity of the cell. Changing the values of the parameters in the opposite direction also implies the "opposite" BA. Moreover, a change in only one or two indicators without changing the ratio indicates a weak BA of the test substance. Changes in the ratios of indicators indicate a stronger BA than when changing the absolute values of some indicators without changing their ratios.
Резкие разбалансированные изменения показателей и особенно их соотношений указывают на токсическое, нарушающее процессы адаптации (срыв адаптации на уровне клетки) действие биологически активного вещества. При этом испытуемое вещество на уровне целого организма имеет действие то же, что и на уровне клетки и ее мембраны. Таким образом, изобретение позволяет сделать объективные выводы о БА испытуемого вещества простым методом. Sharp unbalanced changes in indicators and especially their ratios indicate a toxic, disrupting adaptation processes (disruption of adaptation at the cell level) effect of a biologically active substance. In this case, the test substance at the level of the whole organism has the same effect as at the level of the cell and its membrane. Thus, the invention allows to draw objective conclusions about the AD of the test substance by a simple method.
П р и м е р 1. Изучалась БА фармакологических препаратов - феноксана и анфена. Выявлено, что при низком исходном содержании малонового альдегида (МА), интенсивности его деградации (Д) и антиокислительной активности (АОА) в дозах 10-8-10-14 М, эти величины повышаются после экспозиции эритроцитов с этими препаратами. Причем соотношения МА/Г, Д/МА также меняются в сторону их нормализации. При высоких исходных значениях параметров экспозиция эритроцитов с этими препаратами приводит к снижению соответствующих параметров. Таким образом, феноксан и анфен обладают нормализующим действием на клеточные мембраны (при повышении МА снижают его, а при снижении - повышают). Однако их БА зависит не только от исходного состояния метаболических процессов в мембране, но и от дозы введенного препарата.PRI me R 1. We studied the BA of pharmacological preparations - phenoxane and phenol. It was found that with a low initial content of malondialdehyde (MA), its degradation rate (D) and antioxidant activity (AOA) at doses of 10 -8 -10 -14 M, these values increase after the exposure of red blood cells with these drugs. Moreover, the ratios MA / G, D / MA also change in the direction of their normalization. At high initial values of the parameters, the exposure of red blood cells with these drugs leads to a decrease in the corresponding parameters. Thus, phenoxane and anfen have a normalizing effect on cell membranes (with an increase in MA, they decrease it, and with a decrease, they increase it). However, their AD depends not only on the initial state of metabolic processes in the membrane, but also on the dose of the drug administered.
На фиг. 1 и 2 показаны относительные изменения соотношений МА/Г, Д/МА, АОА/МА в эритроцитах в зависимости от дозы препаратов, введенных в инкубационную среду, для феноксана и анфена соответственно. Например, как видно из фиг. 1, феноксан в дозе 10-14 М дает резкое увеличение МА/Г (что указывает на уменьшение ПОЛ), уменьшение соотношения Д/МА (что обуславливает снижение способности клетки избавляться от метаболита) и снижение АОА/МА (антиокислительной защиты), т. е. приводит к общему угнетению метаболических процессов в клетке, а следовательно, к снижению клеточной адаптации. Доза 10-11 М не ведет к существенным изменениям в соотношении параметров, а доза 10-8 М вызывает увеличение Д/МА и АОА/МА и уменьшение МА/Г, что свидетельствует об активации мембранного метаболизма и клеточной адаптации. Анфен отличается от феноксана тем, что он вызывает обратный дозовый эффект лишь в отношении величины МА/Г, тогда как два других соотношения изменяются в дозах 10-8 М и 10-14 М однонаправленно. Это свидетельствует о большей физиологичности действия анфена по сравнению с феноксаном.In FIG. Figures 1 and 2 show the relative changes in the ratios MA / G, D / MA, AOA / MA in erythrocytes depending on the dose of the drugs introduced into the incubation medium for phenoxane and anfen, respectively. For example, as can be seen from FIG. 1, phenoxane at a dose of 10 -14 M gives a sharp increase in MA / G (which indicates a decrease in lipid peroxidation), a decrease in the D / MA ratio (which leads to a decrease in the ability of the cell to get rid of the metabolite) and a decrease in AOA / MA (antioxidant protection), t. e. leads to a general inhibition of metabolic processes in the cell, and therefore, to a decrease in cellular adaptation. A dose of 10 -11 M does not lead to significant changes in the ratio of parameters, and a dose of 10 -8 M causes an increase in D / MA and AOA / MA and a decrease in MA / G, which indicates the activation of membrane metabolism and cell adaptation. Anfen differs from phenoxan in that it causes the opposite dose effect only with respect to MA / G, while the other two ratios change in doses of 10 -8 M and 10 -14 M unidirectionally. This indicates a higher physiological effect of anfen compared to phenoxane.
П р и м е р 2. Выявлялась БА полиуретановых пленок медицинского назначения (их гемосовместимость). Экспозиция эритроцитов (5% -ная взвесь) осуществлялась с пленками, покрывающими внутреннюю поверхность бюкс, в течение 20-40 мин. На фиг. 3 показаны относительные изменения величин показателей метаболизма и их соотношений для пленки "Витур Т" (Витур Т непереосажденный), на фиг. 4 - для пленки "Биомер". Пленка "Витур Т" приводит к резкому повышению ПОЛ (повышению Г и МА) со снижением величин Д/МА и АОА. Это свидетельствует о резком ухудшении состояния клеточной мембраны, характеризующимся засорением клетки малоновым альдегидом и снижением защиты от окисления. Это указывает на снижение адаптационной способности клетки и позволяет сделать вывод о неудовлетворительной гемосовместимости такого материала. Пленка "Биомер" дает умеренное увеличение ПОЛ без изменения соотношений параметров, что позволяет сделать заключение о физиологическом характере изменений, не затрагивающем систему адаптации, а следовательно, об удовлетворительной гемосовместимости. PRI me
П р и м е р 3. Выявлялась БА фитонапитков. Фитонапиток N 1 содержит экстракт пустырника, кориандра, донника, порошок тыквы, лимонную и аскорбиновую кислоты, сахар. Фитонапиток N 2 содержит экстракт золотого корня, хрена, чеснока, кориандра, порошка свеклы, сахар, лимонную и аскорбиновую кислоты. PRI me R 3. Identified BA phytonutrients. Phyton drink N 1 contains motherwort, coriander, melilot extract, pumpkin powder, citric and ascorbic acid, sugar.
В таблице приведены значения показателей метаболизма и их соотношений для трех доз "ин витро" фитонапитков. Из таблицы видно, что доза 50 мкл для обоих фитонапитков не является физиологичной, так как резко повышает ПОЛ, снижает соотношения Д/МА и АОА/МА, что свидетельствует об уменьшении адаптационных возможностей в клетке. По изменениям величин параметров можно заключить, что фитонапиток N 1 в минимальной дозе слабо снижает мембранный метаболизм (ПОЛ и Д) без изменения соотношений показателей. Это дает приближение к "комфортному" состоянию, имеющему место при покое. Поэтому можно сделать вывод, что в небольших количествах "ин виво" этот фитонапиток будет оказывать успокаивающее действие на организм. Увеличение дозы может привести к нежелательным изменениям клеточного метаболизма (повышению МА и снижению степени очистки от малонового альдегида). The table shows the values of metabolic rates and their ratios for three doses of in vitro phytonutrients. It can be seen from the table that the dose of 50 μl for both phytonutrients is not physiological, since it sharply increases LP, reduces the D / MA and AOA / MA ratios, which indicates a decrease in adaptive capabilities in the cell. According to the changes in the parameter values, it can be concluded that phytonutrient N 1 in the minimum dose weakly reduces membrane metabolism (POL and D) without changing the ratio of indicators. This gives an approximation to the "comfortable" state, which takes place at rest. Therefore, we can conclude that in small amounts "in vivo" this phyton drink will have a calming effect on the body. Increasing the dose can lead to undesirable changes in cellular metabolism (increase in MA and a decrease in the degree of purification from malonic aldehyde).
Фитонапиток N 2 резко повышает ПОЛ (судя по увеличению Г и снижению МА/Г), не меняя Д/МА, снижая АОА/МА уже в дозе 5 мкл. В дозе 10 мкл понижающее мембранный метаболизм действие усиливается. Так как повышение активности ПОЛ и Д сопровождается увеличением модификации клеточной мембраны и активности всего организма (аналогично действию стресса), можно полагать, что этот напиток обладает действием, повышающим работоспособность и активность человека. Однако снижение АОА/МА заставляет отказаться от применения этого напитка в больших количествах, а также в любых количествах людям, находящимся в стрессовом состоянии. Таким образом, изобретение не только выявляет БА фитонапитков, но и дает основу для выработки рекомендаций по их дозировке "ин виво", позволяет оценить, при каких состояниях организма фитонапитки дают оптимально положительный эффект.
Изобретение обеспечивает расширение информативности способа определения БА веществ за счет выявления характера БА, повышение достоверности и упрощение способа. Способ пригоден для определения БА веществ любой консистенции - жидкостей, пленок, порошков, твердых тел, конденсатов газов. Он эффективен при определении БА фармакологических препаратов, продуктов питания, питательных смесей, фитонапитков, пленок медицинского назначения, материалов для детских игрушек и пищевой тары, примесей в питьевой воде. (56) 1. Патент США N 4440786, кл. C 07 C 59/52, 1984. The invention provides an extension of the information content of the method for determining AD of substances by identifying the nature of AD, increasing reliability and simplifying the method. The method is suitable for determining BA of substances of any consistency - liquids, films, powders, solids, gas condensates. It is effective in determining the BA of pharmacological preparations, food, nutritional mixtures, phytonutrients, medical films, materials for children's toys and food packaging, and impurities in drinking water. (56) 1. U.S. Patent No. 4,440,786, cl. C 07 C 59/52, 1984.
2. Corongin F. P. et al. Antioxidants and Lipid Peroxidation. "in vivo" Studies. "Biochemical Pharmacology", 1985, v. 34, N 3, p. 397-398. 2. Corongin F. P. et al. Antioxidants and Lipid Peroxidation. "in vivo" Studies. "Biochemical Pharmacology", 1985, v. 34, N 3, p. 397-398.
3. Галкина С. И. Влияние различных форм витамина A и его сочетания с витамином Е на перекисное окисление липидов. Вопросы медицинской химии, 1984, N 4, с. 91-94. 3. Galkina S. I. Influence of various forms of vitamin A and its combination with vitamin E on lipid peroxidation. Questions of medical chemistry, 1984, N 4, p. 91-94.
4. Патент США N 4615877, кл. G 01 N 33/48, 1986. 4. US patent N 4615877, CL. G 01 N 33/48, 1986.
5. Muller A. et al. A Novel Biological Active Seleno-Organic Compound-I, Glutathione Peroxidase - Like Activity in vitro and Antioxidant Capacity of PZ51 (Ebselen). "Biochemical Pharmacology", 1989, v. 33, N 20, p. 3235-3239. 5. Muller A. et al. A Novel Biological Active Seleno-Organic Compound-I, Glutathione Peroxidase - Like Activity in vitro and Antioxidant Capacity of PZ51 (Ebselen). "Biochemical Pharmacology", 1989, v. 33, N 20, p. 3235-3239.
Claims (1)
МАрГp, МАк/Гк, ДрМАр, ДкМАк, АОАрМАр, АОАкМАк,
где МАк, МАр - содержание малонового альдегида в контрольном и рабочем биологических препаратах соответственно;
Гк, Г - соответственно степень гемолиза эритроцитов в контрольном и рабочих препаратах соответственно;
Дк, Др - интенсивность деградации малонового альдегида соответственно,
АОАк, АОАр - антиокислительная активность в контрольном и рабочем препаратах соответственно;
при этом делают вывод о способности испытуемого вещества слабо изменить мембранный метаболизм, если Гр - Гк ≥ О, МАр - МАк ≥ О, Др - Дк ≥ О, АОАр - АОАк ≥ О, МАр/Гр - МАк/Гк ≈ О, Др/МАр - Дк/МАк ≈ О, АОАр/МАр - АОАк/МАк ≈ О, о наличии у испытуемого вещества высокой биологической активности, инициирующей мембранный метаболизм, если Гр - Гк > О, МАр - МАк > О, Др - Дк > О, АОАр - АОАк > О, МАр/Гр - МАк/Гк < О, Др/МАр - Дк/МАк > О, АОАр/МАр - АОАк/МАк > О, о наличии у испытуемого вещества высокой биологической активности, угнетающей мембранный метаболизм, если Гр - Гк < О, МАр - МАк < О, Др - Дк < О, АОАр - АОАк < О, МАр/Гр - МАк/Гк > О, Др/МАр - Дк/МАк < О, АОАр/МАр - АОАк/МАк < О, о наличии у испытуемого вещества биологической активности, приводящей к паталогическим изменениям мембранного метаболизма, если изменения величин его показателей имеют разнонаправленный несбалансированный характер. METHOD FOR DETERMINING SUBSTANCE BIOLOGICAL ACTIVITY, including preparation of a control and working biological preparations of a cellular substance of a living organism, adding a test substance to a working biological preparation, incubation of a control and working biological preparations, determination of metabolic indicators in them, as one of which the content of malonic aldehyde, a comparison of metabolic rates in the control and working biological preparations and the judgment of the degree of biological activity of the test substance of a given concentration in terms of changes in metabolic rates, characterized in that freshly prepared red blood cells are used as the cellular substance of biological preparations, the degree of erythrocyte hemolysis, the rate of malondialdehyde degradation and antioxidant activity are additionally used, and after determining the metabolic rate in the control and working biological preparations calculate the ratio
AI p T p, MA k / T k, R p AI p, D AI to k, AOA p AI p, AOA to MA k
where MA to , MAR - the content of malondialdehyde in the control and working biological preparations, respectively;
G to , G - respectively, the degree of hemolysis of red blood cells in the control and working drugs, respectively;
D to , D p - the degradation rate of malondialdehyde, respectively,
AOA k , AOA p - antioxidant activity in the control and working preparations, respectively;
while concluding that the ability of the test substance to slightly change the membrane metabolism, if G p - G k ≥ O, MA p - MA k ≥ O, D p - D k ≥ O, AOA p - AOA k ≥ O, MA p / G p - MA k / T to ≈ G, D p / AI p - D c / MA to ≈ G, AOA p / IDA - AOA to / MA to ≈ G, about the presence of the test substance of high biological activity, initiating membrane metabolism, if G r - G k > O, MA r - MA k > O, D r - D k > O, AOA p - AOA k > O, MA r / G p - MA k / G k <O, D r / AI p - D c / MA k>, AOA p / AI p - to AOA / MA k>, about the presence of the test substance of high biological activity, depressing the membrane IU tabolizm if T p - T a <O, MA p - MA to <O, D p - D to the <O AOA p - AOA to the <O, MA p / T p - MA / r k> O, D p / MA p - D c / MA to the <O AOA p / MA p - AOA to / MA to <Oh, about the presence of the test substance in biological activity, resulting in the pathological changes of membrane metabolism, if you change the values of its parameters are multidirectional unbalanced character.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU5037565 RU2008680C1 (en) | 1992-04-14 | 1992-04-14 | Method of assay of substance biological activity |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU5037565 RU2008680C1 (en) | 1992-04-14 | 1992-04-14 | Method of assay of substance biological activity |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2008680C1 true RU2008680C1 (en) | 1994-02-28 |
Family
ID=21601972
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU5037565 RU2008680C1 (en) | 1992-04-14 | 1992-04-14 | Method of assay of substance biological activity |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2008680C1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2238554C1 (en) * | 2003-07-25 | 2004-10-20 | Закрытое акционерное общество "АП Химавтоматика" | Method for determining total antioxidation activity of biologically active substances |
| RU2270251C2 (en) * | 2003-03-31 | 2006-02-20 | Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Сибирского отделения Российской Академии Медицинских наук | Determination of substance biological activity (variants) |
| RU2492472C2 (en) * | 2009-09-11 | 2013-09-10 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Казанский (Приволжский) Федеральный Университет" (ФГАОУ ВПО КФУ) | Method of determining biological activity of substance |
-
1992
- 1992-04-14 RU SU5037565 patent/RU2008680C1/en active
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2270251C2 (en) * | 2003-03-31 | 2006-02-20 | Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Сибирского отделения Российской Академии Медицинских наук | Determination of substance biological activity (variants) |
| RU2238554C1 (en) * | 2003-07-25 | 2004-10-20 | Закрытое акционерное общество "АП Химавтоматика" | Method for determining total antioxidation activity of biologically active substances |
| RU2492472C2 (en) * | 2009-09-11 | 2013-09-10 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Казанский (Приволжский) Федеральный Университет" (ФГАОУ ВПО КФУ) | Method of determining biological activity of substance |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Brewer et al. | Methaemoglobin reduction test: a new, simple, in vitro test for identifying primaquine-sensitivity | |
| Suzuki et al. | Assay method for myeloperoxidase in human polymorphonuclear leukocytes | |
| Corry et al. | t-Butyl hydroperoxide-induced changes in the physicochemical properties of human erythrocytes | |
| Schmid et al. | Assessment of phagocytic and antimicrobial activity of human granulocytes | |
| Lipińska et al. | Reactive oxygen species and serum antioxidant defense in juvenile idiopathic arthritis | |
| Dursun et al. | Protein oxidation in Type 2 diabetic patients on hemodialysis | |
| Kumosani | L-ergothioneine level in red blood cells of healthy human males in the Western province of Saudi Arabia | |
| Kampen et al. | Flow cytometric measurement of neutrophil respiratory burst in whole bovine blood using live Staphylococcus aureus | |
| RU2008680C1 (en) | Method of assay of substance biological activity | |
| Lewis et al. | Association between elevated hepatic water-soluble protein-bound cadmium levels and chronic bronchitis and/or emphysema | |
| Magnani et al. | Red blood cell phagocytosis and lysis following oxidative damage by phenylhydrazine | |
| Tsen et al. | The relationship between the glutathione content of rat erythrocytes and their hemolysis by various agents in vitro | |
| Dupont et al. | Relationships between in vitro lymphoproliferative responses and levels of contaminants in blood of free-ranging adult harbour seals (Phoca vitulina) from the North Sea | |
| US5891728A (en) | Test for determining pyrogenic effect of a material | |
| Petrakis et al. | Coloration of breast fluid related to concentration of cholesterol, cholesterol epoxides, estrogen, and lipid peroxides | |
| Gottschalk et al. | Vulnerability and immune response: An overview | |
| Jähnchen et al. | Determination of phenylbutazone in plasma | |
| RU2160898C1 (en) | Method for determining antioxidation activity of antioxidant preparations | |
| US9784753B2 (en) | Biological system to test in vitro if a substance is immune reactive | |
| Fazekas et al. | A competitive protein binding assay for urinary riboflavin | |
| RU2102757C1 (en) | Method to determine antioxidant activity of blood plasma | |
| IE41658B1 (en) | Dispersion for electrophoretic analysis | |
| RU2188419C2 (en) | Method for studying anti-aggregation action of preparations by determining blood platelet aggregation in vitro | |
| Costongs et al. | A new method for chemical analysis of faeces | |
| SU1659851A1 (en) | Method for determination of membrane-toxic action of chemicals |