RU2006123427A

RU2006123427A - Гликопэгилированный гранулоцитарный колониестимулирующий фактор

Info

Publication number: RU2006123427A
Application number: RU2006123427/04A
Authority: RU
Inventors: Шон ДЕФРИЗ (US); Шон Дефриз; Хенрик КЛАУСЕН (DK); Хенрик Клаусен; Дэвид А. ЦОПФ (US); Дэвид А. Цопф; Чжи-Гуан ВАНГ (US); Чжи-Гуан Ванг; Марк ШВАРЦ (US); Марк ШВАРЦ; Бинюань ВУ (US); Бинюань Ву; Кэрин БАУЭ (US); Кэрин БАУЭ
Original assignee: Неоз Текнолоджиз, Инк. (Us); Неоз Текнолоджиз, Инк.
Priority date: 2003-12-03
Filing date: 2004-12-03
Publication date: 2008-01-10
Also published as: RU2400490C2

Claims

1. Пептид гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, содержащий фрагмент:

где D выбран из -ОН и R¹-L-HN;

G выбран из R¹-L и С(О)(С₁-С₆)алкила;

R¹ представляет собой группу, выбранную из фрагментов, включающих линейный или разветвленный остаток полиэтиленглиголя; и

L означает линкер, выбранный из связи, замещенного или незамещенного алкила и замещенного или незамещенного гетероалкила,

при условии, что если D представляет собой ОН, то G представляет собой R¹-L, а если G представляет собой С(О)(С₁-С₆)алкил, то D представляет собой R¹-L-NH-.

2. Пептид по п.1, где R¹-L имеет формулу:

где а равно целому числу от 0 до 20.

3. Пептид по п.1, где R¹ имеет структуру, которая выбрана из

где е и f независимо равны целым числам, выбранным из 1-2500, а

q равно целому числу от 0 до 20.

4. Пептид по п.1, где R¹ имеет структуру, которая выбрана из:

где е, f и f' равны целым числам, независимо выбранным из 1-2500, а

q и q' означают целые числа, независимо выбранные из 1-20.

5. Пептид по п.1, где R¹ имеет структуру, которая выбрана из

где е, f и f' независимо равны целым числам, выбранным из 1-2500, а

q, q' и q" равны целым числам, независимо выбранным из 1-20.

6. Пептид по п.1, где R¹ имеет структуру, которая выбрана из

где е и f независимо равны целым числам, выбранным из 1-2500.

7. Пептид G-CSF по п.1, где указанный фрагмент имеет формулу

8. Пептид G-CSF по п.1, где указанный фрагмент имеет формулу

9. Пептид G-CSF по п.1, где указанный фрагмент имеет формулу

где АА означает аминокислотный остаток указанного пептида.

10. Пептид G-CSF по п.9, где указанный аминокислотный остаток выбран из серина или треонина.

11. Пептид G-CSF по п.1, где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1.

12. Пептид G-CSF по п.11, где указанным аминокислотным остатком является треонин в положении 133 SEQ ID NO:1.

13. Пептид G-CSF по п.1, где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:2.

14. Пептид G-CSF по п.1, где указанный фрагмент имеет формулу:

где а, b, c, d, i, r, s, t и u равны целым числам, независимо выбранным из 0 и 1;

q равно 1;

е, f, g и h независимо равны целым числам, выбранным из 0-6;

j, k, l и m независимо равны целым числам, выбранным из 0-100;

v, w, x и y независимо выбраны из 0 и 1, а, по меньшей мере, один из v, w, x и y равен 1;

AA означает аминокислотный остаток указанного пептида G-CSF;

Sia-(R) имеет формулу:

где

D выбран из -ОН и R¹-L-HN;

G выбран из R¹-L- и -С(О)(С₁-С₆)алкила;

R¹ представляет собой группу, содержащую фрагмент, выбранный из линейного или разветвленного остатка полиэтиленгликоля;

L представляет собой линкер, выбранный из связи, замещенного или незамещенного алкила и замещенного или незамещенного гетероалкила, при условии, что если D означает ОН, то G означает R¹-L, и если G означает -С(О)(С₁-С₆)алкил, то D означает R¹-L-NH-.

15. Пептид по п.14, где указанный аминокислотный остаток представляет собой аспарагиновый остаток.

16. Пептид по п.1, где указанный пептид представляет собой биологически активный пептид гранулоцитарного колониестимулирующего фактора.

17. Способ получения конъюгата пептида G-CSF, содержащего фрагмент

где D выбран из -ОН и R¹-L-HN;

G выбран из R¹-L и С(О)(С₁-С₆)алкила;

R¹ представляет собой группу, содержащую фрагмент, выбранный из линейного или разветвленного остатка полиэтиленглиголя;

L означает линкер, который выбран из связи, замещенного или незамещенного алкила и замещенного или незамещенного гетероалкила,

при условии, что если D представляет собой ОН, то G представляет собой R¹-L, а если G представляет собой С(О)(С₁-С₆)алкил, то D представляет собой R¹-L-NH-;

включающий

(а) контактирование пептида G-CSF, являющегося субстратом, с донорным фрагментом ПЭГ-сиаловая кислота, имеющим формулу:

и с ферментом, переносящим указанную ПЭГ-сиаловую кислоту на аминокислотный остаток или гликозильный остаток указанного пептида G-CSF в условиях, подходящих для такого переноса.

18. Способ по п.17, где R¹-L имеет формулу:

где а равно целому числу от 0 до 20.

19. Способ по п.17, где R¹ имеет структуру, которая выбрана из:

где е и f независимо равны целым числам, выбранным из 1-2500;

q равно целому числу от 0 до 20.

20. Способ по п.17, где R¹ имеет структуру, которая выбрана из:

21. Способ по п.17, где R¹ имеет структуру, которая выбрана из

22. Способ по п.17, где R¹ имеет структуру, которая выбрана из

23. Способ по п.17, который перед проведением стадии (а) включает:

(b) экспрессию указанного пептида гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, используемого в качестве субстрата, в подходящем хозяине.

24. Способ по п.17, где указанный хозяин выбран из клетки насекомого и клетки млекопитающего.

25. Способ стимуляции продуцирования воспалительных лейкоцитов у млекопитающего, включающий введение указанному млекопитающему пептида по п.1.

26. Способ лечения инфекции у пациента, нуждающегося в этом, включающий стадию введения указанному пациенту количества пептида по п.1, эффективного для облегчения указанного состояния у указанного пациента.

27. Фармацевтическая композиция, содержащая пептид гранулоцитарного колониестимулирующего фактора по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.

28. Способ осуществления рефолдинга нерастворимого рекомбинантного белка гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (G-CSF), включающий стадии

(а) солюбилизации белка G-CSF;

(b) контактирования растворимого белка G-CSF с буфером, содержащим окислительно-восстановительную пару для рефолдинга белка G-CSF, где указанный подвергнутый рефолдингу белок G-CSF является биологически активным.