RU2005107701A - Индуцируемый клеточный анализ киназы фокальной адгезии - Google Patents
Индуцируемый клеточный анализ киназы фокальной адгезии Download PDFInfo
- Publication number
- RU2005107701A RU2005107701A RU2005107701/13A RU2005107701A RU2005107701A RU 2005107701 A RU2005107701 A RU 2005107701A RU 2005107701/13 A RU2005107701/13 A RU 2005107701/13A RU 2005107701 A RU2005107701 A RU 2005107701A RU 2005107701 A RU2005107701 A RU 2005107701A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- fak
- cells
- inducing agent
- gene
- agent
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
- C12N9/1205—Phosphotransferases with an alcohol group as acceptor (2.7.1), e.g. protein kinases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/91—Transferases (2.)
- G01N2333/912—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
- G01N2333/91205—Phosphotransferases in general
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Claims (14)
1. Способ идентификации клеточноактивных ингибиторов киназы фокальной адгезии (FAK), который включает:
(а) добавление индуцирующего агента к клеткам млекопитающего для индукции экспрессии гена, кодирующего FAK, причем указанные клетки млекопитающего стабильно трансфицированы указанным геном и данный ген экспрессируется в присутствии указанного индуцирующего агента;
(b) добавление испытуемого соединения;
(с) захват экспрессированной FAK при помощи FAK-захватывающего агента; и
(d) определение фосфорилирования указанной FAK.
2. Способ по п. 1, в котором указанные клетки млекопитающего наносят на поверхность первой твердой фазы и определяют фосфорилирование FAK путем воздействия на фосфорилированную FAK антителом против фосфотирозина и обнаружения присутствия указанного антитела.
3. Способ по п. 1, в котором указанный FAK-захватывающий агент включает антитела одного или нескольких типов.
4. Способ по п. 3, в котором антитела одного или нескольких типов включают антитело против фосфотирозина.
5. Способ по п. 1, в котором указанное фосфорилирование пропорционально связыванию антитела против фосфотирозина с захваченной FAK.
6. Способ по п. 2, в котором указанные клетки естественным путем сцепляются с поверхностью первой твердой фазы, причем указанные клетки лизируют лизирующим буфером до захвата экспрессированной FAK.
7. Способ по п. 1, в котором индуцирующий агент является агонистом экспрессии гена, кодирующего FAK.
8. Способ по п. 1, в котором указанное испытуемое соединение ингибирует киназа-зависимое фосфорилирование FAK.
9. Способ измерения цитотоксичности испытуемого соединения, который включает:
(а) стабильную трансфекцию клеток млекопитающего геном, кодирующим FAK, причем указанный ген экспрессируется в присутствии индуцирующего агента;
(b) добавление индуцирующего агента для индукции экспрессии указанного гена, кодирующего FAK;
(с) добавление испытуемого соединения;
(d) добавление индикатора цитотоксичности к указанным клеткам;
(е) определение цитотоксичности испытуемого соединения.
10. Клетка млекопитающего, стабильно трансфицированная молекулой рекомбинантной нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, содержащий последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, 2, 3 и 4, причем для экспрессии указанного белка необходимо присутствие индуцирующего агента.
11. Клетка млекопитающего, стабильно трансфицированная рекомбинантной нуклеиновой кислотой, которая экспрессирует белок FAK в результате индукции.
12. Клетка млекопитающего по п. 11, в которой нуклеиновая кислота кодирует белки, выбираемые из группы, состоящей из сплайсированных вариантов FAK человека, каталитического домена FAK человека, FAK мыши, FAK крысы и FAK цыпленка.
13. Клетка млекопитающего, стабильно трансфицированная молекулой рекомбинантной нуклеиновой кислоты, содержащей полинуклеотид, выбираемый из группы, состоящей из SEQ ID NO:5, 6, 7 и 8, причем для экспрессии указанного полинуклеотида необходимо присутствие индуцирующего агента.
14. Способ идентификации клеточноактивных ингибиторов киназы фокальной адгезии (FAK), который включает стадии:
(а) нанесение на поверхность первой твердой фазы гомогенной популяции клеток млекопитающего с достижением адгезии указанных клеток к поверхности первой твердой фазы, причем указанные клетки стабильно трансфицированы геном, кодирующим FAK, и указанный ген экспрессируется в присутствии индуцирующего агента;
(b) добавление индуцирующего агента для индукции экспрессии указанного гена, кодирующего FAK;
(с) добавление испытуемого соединения;
(d) солюбилизацию сцепленных клеток для высвобождения клеточного лизата;
(е) нанесение на поверхность второй твердой фазы FAK-захватывающего агента с достижением адгезии FAK-захватывающего агента к поверхности второй твердой фазы;
(f) введение клеточного лизата в соприкосновение со сцепленным FAK-захватывающим агентом, вследствие чего FAK-захватывающий агент захватывает FAK;
(g) введение захваченной FAK в соприкосновение с антителом против фосфотирозина; и
(h) измерение связывания антитела против фосфотирозина с захваченной FAK, причем величина связывания антитела против фосфотирозина с захваченной FAK пропорциональна величине фосфорилирования указанной FAK.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US41207802P | 2002-09-19 | 2002-09-19 | |
| US60/412,078 | 2002-09-19 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2005107701A true RU2005107701A (ru) | 2005-08-27 |
Family
ID=32030798
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005107701/13A RU2005107701A (ru) | 2002-09-19 | 2003-09-08 | Индуцируемый клеточный анализ киназы фокальной адгезии |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1546372A4 (ru) |
| JP (1) | JP2006500022A (ru) |
| KR (1) | KR20050052663A (ru) |
| CN (1) | CN1681939A (ru) |
| AU (1) | AU2003259498A1 (ru) |
| CA (1) | CA2497434A1 (ru) |
| NO (1) | NO20051869L (ru) |
| RU (1) | RU2005107701A (ru) |
| WO (1) | WO2004027018A2 (ru) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100934706B1 (ko) * | 2006-12-07 | 2009-12-31 | 재단법인서울대학교산학협력재단 | Ｔｍ４ｓｆ５의 기능을 저해하는 항암물질의 스크리닝 방법및 칼콘계 화합물을 함유하는 항암조성물 |
| WO2009046129A2 (en) * | 2007-10-01 | 2009-04-09 | Columbia University | Methods for treating adult respiratory distress syndrome |
| CN109112213B (zh) * | 2017-06-22 | 2021-01-12 | 中国科学院动物研究所 | 检测黏着斑激酶结构变异体的pcr引物及其检测方法与应用 |
| KR102007450B1 (ko) | 2018-05-31 | 2019-08-05 | 한국과학기술연구원 | 대장암 치료제 발굴을 위한 신규 표적 치료 작용점의 스크리닝 방법 및 이를 이용하여 선별한 대장암 치료 예후 바이오마커 |
| KR102408538B1 (ko) * | 2020-10-29 | 2022-06-15 | 한국과학기술연구원 | Fak 활성 억제제를 스크리닝하기 위한 조성물, 키트 및 방법 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6395506B1 (en) * | 1991-04-18 | 2002-05-28 | Becton, Dickinson And Company | Device for monitoring cells |
| EP0948604B1 (en) * | 1996-12-11 | 2004-07-21 | Sugen, Inc. | Screening methods for compounds binding to the Pyk2 polypeptide |
| US20010055585A1 (en) * | 1997-12-03 | 2001-12-27 | William G. Cance | Frnk proteins in the treatment of tumor cells |
| US6133031A (en) * | 1999-08-19 | 2000-10-17 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense inhibition of focal adhesion kinase expression |
-
2003
- 2003-09-08 AU AU2003259498A patent/AU2003259498A1/en not_active Abandoned
- 2003-09-08 JP JP2004537413A patent/JP2006500022A/ja active Pending
- 2003-09-08 CN CNA038221519A patent/CN1681939A/zh active Pending
- 2003-09-08 CA CA002497434A patent/CA2497434A1/en not_active Abandoned
- 2003-09-08 WO PCT/IB2003/003968 patent/WO2004027018A2/en not_active Application Discontinuation
- 2003-09-08 EP EP03797456A patent/EP1546372A4/en not_active Withdrawn
- 2003-09-08 RU RU2005107701/13A patent/RU2005107701A/ru not_active Application Discontinuation
- 2003-09-08 KR KR1020057004717A patent/KR20050052663A/ko not_active Application Discontinuation
-
2005
- 2005-04-18 NO NO20051869A patent/NO20051869L/no unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2003259498A1 (en) | 2004-04-08 |
| CN1681939A (zh) | 2005-10-12 |
| CA2497434A1 (en) | 2004-04-01 |
| NO20051869D0 (no) | 2005-04-18 |
| NO20051869L (no) | 2005-06-16 |
| WO2004027018A3 (en) | 2004-09-16 |
| KR20050052663A (ko) | 2005-06-03 |
| EP1546372A2 (en) | 2005-06-29 |
| EP1546372A4 (en) | 2006-08-23 |
| JP2006500022A (ja) | 2006-01-05 |
| WO2004027018A2 (en) | 2004-04-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE202020005492U1 (de) | Nachweis von Antikörpern gegen Sarsr-Cov | |
| Maidorn et al. | Nanobodies reveal an extra-synaptic population of SNAP-25 and Syntaxin 1A in hippocampal neurons | |
| Holthoff et al. | Detection of Anti–β1-AR Autoantibodies in Heart Failure by a Cell-Based Competition ELISA | |
| Towbin et al. | Immunoblotting in the clinical laboratory | |
| Picard et al. | Protocol for high‐resolution electrophoresis separation of myosin heavy chain isoforms in bovine skeletal muscle | |
| RU98110067A (ru) | Способ обнаружения предшествующего воздействия на млекопитающих радиации или радиомиметрических химикатов | |
| KR910700459A (ko) | 인슐린 의존성 진성당뇨병의 조기검진 및 치료를 위한 방법 및 조성물 | |
| CN105473745A (zh) | 用于表征人膜蛋白的功能和相互作用的病毒体展示阵列 | |
| Towbin et al. | An immunoblotting method for high‐resolution isoelectric focusing of protein isoforms on immobilized pH gradients | |
| ATE323764T1 (de) | Kappa/mu ähnliche proteintyrosinphosphatase, proteintyrosinphosphatase lambda | |
| RU2005107701A (ru) | Индуцируемый клеточный анализ киназы фокальной адгезии | |
| RU2016100732A (ru) | Способы | |
| Reichel et al. | Detection of Sotatercept (ACE‐011) in human serum by SAR‐PAGE and western single blotting | |
| CA2245732A1 (en) | Detection of dioxin-like compounds by detection of transformed ah receptor/arnt complex | |
| Francavilla et al. | SILAC-based temporal phosphoproteomics | |
| JP2005500053A5 (ru) | ||
| Shimura et al. | Affinity probe capillary electrophoresis of insulin using a fluorescence‐labeled recombinant Fab as an affinity probe | |
| Stephenson et al. | Identification of host insulin binding sites on Schistosoma japonicum insulin receptors | |
| Alibardi | Immunocytochemistry suggests that the prevalence of a sub‐type of beta‐proteins determines the hardness in the epidermis of the hard‐shelled turtle | |
| EE05691B1 (et) | Ekspressioonivektorid ja nende rakendused | |
| JP6624755B2 (ja) | プロテインタグ、タグ化タンパク質及びタンパク質精製方法 | |
| Sato et al. | Towards the molecular dissection of fertilization signaling: Our functional genomic/proteomic strategies | |
| DK1693456T3 (da) | Fremgangsmåde til identificering af modulatorer af en G-protein-koblet receptor | |
| JP2002529075A5 (ru) | ||
| JP2004520811A5 (ru) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FA92 | Acknowledgement of application withdrawn (lack of supplementary materials submitted) |
Effective date: 20060627 |