RU2005101076A

RU2005101076A - Фармацевтический препарат и способ лечения злокачественных опухолей у человека с помощью аргининовой депривации

Info

Publication number: RU2005101076A
Application number: RU2005101076/13A
Authority: RU
Inventors: Нин Мань ЧЕН (CN); Нин Мань ЧЕН; Юнь Чун ЛЕУН (CN); Юнь Чун ЛЕУН; Вай Хун ЛО (CN); Вай Хун ЛО
Original assignee: Байо-Кэнсер Тритмент Интернэшнл Лимитид (Cn); Байо-Кэнсер Тритмент Интернэшнл Лимитид
Priority date: 2002-06-20
Filing date: 2003-06-20
Publication date: 2005-08-27
Also published as: AU2003250371A1; EP1908478A1; WO2004000349A1; RU2335539C2; JP2005538709A; AU2003250371B2; EP1908478B1

Claims

1. Изолированная рекомбинантная аргиназа I человека, имеющая по существу такую же аминокислотную последовательность как изложено на Фигуре 2С и имеющая чистоту 80-100%.

2. Рекомбинантная аргиназа I человека по п.1, кроме того, имеющая шесть дополнительных гистидинов, присоединенных к ее аминоконцу.

3. Рекомбинантная аргиназа I человека по п.1 или 2, имеющая удельную активность, по меньшей мере, 250 МЕ/мг.

4. Рекомбинантная аргиназа I человека по п.3, имеющая удельную активность от 500 до 600 МЕ/мг.

5. Рекомбинантная аргиназа I человека по п.4, содержащая модификацию, приводящую к периоду полужизни в плазме in vitro, по меньшей мере, приблизительно 3 дня.

6. Рекомбинантная аргиназа I человека по п.1 или 2, имеющая чистоту, по меньшей мере, 90%.

7. Рекомбинантная аргиназа I человека по п.5, где указанная модификация является пэгилированием.

8. Рекомбинантная аргиназа I человека по п.7, где указанное пэгилирование является следствием ковалентного присоединения, по меньшей мере, одной молекулы полиэтиленгликоля (ПЭГ) к указанной аргиназе с использованием сшивающего агента.

9. Рекомбинантная аргиназа I человека по п.8, где указанный сшивающий агент выбран из группы, состоящей из 2,4,6-трихлор-s-триазина (циануринхлорида, СС) и сукцинимида пропионовой кислоты (SPA).

10. Способ производства рекомбинантного белка, предусматривающий:

(a) клонирование гена, кодирующего указанный белок;

(b) конструирование рекомбинантного штамма Bacillus subtilis для экспрессии указанного белка;

(c) ферментацию указанных рекомбинантных клеток Bacillus subtilis с использованием ферментации с подпиткой;

(d) воздействие тепловым шоком на указанные рекомбинантные клетки Bacillus subtilis для активации экспрессии указанного рекомбинантного белка; и

(е) очистку указанного рекомбинантного белка из продукта указанной ферментации.

11. Способ по п.10, где указанная Bacillus subtilis является профагом.

12. Способ по п.10 или 11, где указанный белок является аргиназой I человека.

13. Способ по п.12, где указанная аргиназа I человека имеет шесть гистидинов, присоединенных к ее аминоконцу, и указанная стадия очистки содержит аффинную хроматографию на хелатной колонке.

14. Способ по п.12, где указанная стадия ферментации производится с использованием питательной среды, состоящей по существу из 180-320 г/л глюкозы, 2-4 г/л MgSO₄·7H₂O, 45-80 г/л триптона, 7-12 г/л К₂HPO₄ и 3-6 г/л KH₂PO₄.

15. Фармацевтическая композиция, содержащая выделенную и по существу очищенную аргиназу.

16. Фармацевтическая композиция по п.15, где указанная рекомбинантная аргиназа человека является аргиназой I человека.

17. Фармацевтическая композиция по п.15, где указанная рекомбинантная аргиназа человека является аргиназой I человека, содержащей шесть дополнительных гистидинов, присоединенных к ее аминоконцу.

18. Фармацевтическая композиция по п.15, где указанная композиция далее приготовлена в фармацевтически приемлемом носителе.

19. Фармацевтическая композиция по п.15, где указанное приготовление указанной фармацевтической композиции осуществляют в форме, приемлемой для перрорального использования, в форме стерильного раствора для иъецирования или стерильной суспензии для инъецирования.

20. Фармацевтическая композиция по п.16, где указанная рекомбинантная аргиназа I человека имеет удельную ферментативную активность, по меньшей мере, 250 МЕ/мг.

21. Фармацевтическая композиция по п.20, где указанная рекомбинантная аргиназа I человека имеет удельную ферментативную активность 500-600 МЕ/мг.

22. Фармацевтическая композиция по п.16, где указанная рекомбинантная аргиназа I человека имеет период полужизни в указанной плазме пациента, по меньшей мере, 3 дня.

23. Фармацевтическая композиция по п.22, где указанная рекомбинантная аргиназа I человека имеет период полужизни в указанной плазме пациента, по меньшей мере, приблизительно 1 день.

24. Использование аргиназы I человека по п.1 для приготовления лекарственного средства.

25. Использование по п.24, где лекарственное средство используется для лечения злокачественных опухолей человека.

26. Использование по п.25, где указанные злокачественные опухоли человека представляют собой опухоли печени, рак молочной железы, рак ободочной и прямой кишки.

27. Способ лечения злокачественных опухолей человека, предусматривающий введение рекомбинантной аргиназы человека внутрь пациента.

28. Способ лечения злокачественных опухолей у пациента, предусматривающий введение фармацевтической композиции, которая снижает физиологический уровень аргинина у указанного пациента до уровня ниже 10 мкМ, по меньшей мере, в течение 3 дней.