RU2004113441A - Способ получения рекомбинантных белков в эукариотических клетках - Google Patents
Способ получения рекомбинантных белков в эукариотических клетках Download PDFInfo
- Publication number
- RU2004113441A RU2004113441A RU2004113441/13A RU2004113441A RU2004113441A RU 2004113441 A RU2004113441 A RU 2004113441A RU 2004113441/13 A RU2004113441/13 A RU 2004113441/13A RU 2004113441 A RU2004113441 A RU 2004113441A RU 2004113441 A RU2004113441 A RU 2004113441A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- fvii
- temperature
- culture
- specified
- approximately
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Claims (41)
1. Способ получения полипептидов в эукариотических клетках, включающий стадии
(i) культивирования клеток, экспрессирующих указанный полипептид, на микроносителях при условиях и при температуре заданного значения, подходящих для экспрессии указанного полипептида;
(ii) охлаждения культуры до предварительно заданной температуры, которая ниже указанной температуры заданного значения;
(iii) осаждения микроносителей и
(iv) сбора всей или части культуральной среды.
2. Способ по п.1, дополнительно включающий стадию добавления свежей среды в культуральный сосуд после указанного сбора среды.
3. Способ по п.1 или 2, дополнительно включающий стадию извлечения указанного полипептида из собранной культуральной среды.
4. Способ по п.1, где указанная предварительно заданная температура является температурой, которая приблизительно на 5-30°С ниже заданного значения.
5. Способ по п.4, где указанная предварительно заданная температура является температурой, которая приблизительно на 5-20°С ниже заданного значения.
6. Способ по п.5, где указанная предварительно заданная температура является температурой, которая приблизительно на 5-15°С ниже заданного значения.
7. Способ по п.6, где указанная предварительно заданная температура является температурой, которая на приблизительно 10°С ниже заданного значения.
8. Способ по п.1, где указанную культуру охлаждают до температуры приблизительно 18 - 32°С перед осаждением.
9. Способ по п.7, где указанную культуру охлаждают до температуры приблизительно 20 - 30°С.
10. Способ по п.9, где указанную культуру охлаждают до температуры приблизительно 22 - 28°С.
11. Способ по п.10, где указанную культуру охлаждают до температуры приблизительно 24 - 28°С.
12. Способ по п.11, где указанную культуру охлаждают до температуры приблизительно 25 - 27°С.
13. Способ по п.1, где эукариотические клетки являются клетками насекомых.
14. Способ по п.1, где эукариотические клетки являются клетками млекопитающих.
15. Способ по п.14, где клетки млекопитающих выбраны из группы, состоящей из клеток НЕК, ВНК и СНО.
16. Способ по п.15, где клетки млекопитающих являются клетками СНО.
17. Способ по п.1, где указанный полипептид является фактором VII или родственным фактору VII полипептидом.
18. Способ по п.17, где указанный полипептид является фактором VII дикого типа человека.
19. Способ по п.17, где указанный полипептид является родственным фактору VII полипептидом, выбранным из группы, состоящей из L305V-FVII, L305V/M306D/D309S-FVII, L305I-FVII, L305T-FVII, F374P-FVII, V158T/M298Q-FVII, V158D/E296V/M298Q-FVII, K337A-FVII, M298Q-FVII, V158D/M298Q-FVII, L305V/K337A-FVII, V158D/E296V/M298Q/L305V-FVII, V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII, V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII, K157A-FVII, E296V-FVII, E296V/M298Q-FVII, V158D/E296V-FVII, V158D/M298K-FVII, S336G-FVII; S52А-фактора VII, S60A-фактора VII; R152Е-фактора VII, S344А-фактора VII, фактора VIIa, лишенного домена Gla; и P11Q/K33E-FVII, T106N-FVII, K143N/N145T-FVII, V253N-FVII, R290N/A292T-FVII, G291N-FVII, R315N/V317T-FVII, K143N/N145T/R315N/V317T-FVII; и FVII, имеющего замены, добавления или делеции в аминокислотной последовательности от 233Thr до 240Asn, FVII, имеющего замены, добавления или делеции в аминокислотной последовательности от 304Arg до 329Cys.
20. Способ по п.1, где указанный полипептид продуцируется на уровне, по меньшей мере, приблизительно 15 мг/л культуры.
21. Способ по п.1, где указанный полипептид является фактором VII человека, указанные клетки являются клетками СНО, указанные носители являются макропористыми носителями, указанное заданное значение температуры культивирования равно 36°С и указанную культуру охлаждают до приблизительно 26°С перед предоставлением носителям возможности осаждаться.
22. Способ культивирования эукариотических клеток, включающий стадии
(i) культивирования клеток на микроносителях при условиях и при температуре заданного значения, подходящих для поддержания этой культуры;
(ii) охлаждения культуры до предварительно заданной температуры, которая ниже указанной температуры заданного значения;
(iii) осаждения микроносителей и
(iv) сбора всей или части культуральной среды.
23. Способ по п.22, дополнительно включающий стадию добавления свежей среды в культуральный сосуд после сбора культуральной среды.
24. Способ по любому из пп. 22 и 23, где предварительно заданная температура является температурой, которая на приблизительно 5-30°С ниже температуры заданного значения.
25. Способ по п.24, где предварительно заданная температура является температурой, которая приблизительно на 5-20°С ниже температуры заданного значения.
26. Способ по п.25, где указанная предварительно заданная температура является температурой, которая приблизительно на 5-15°С ниже заданного значения.
27. Способ по п.26, где указанная предварительно заданная температура является температурой, которая приблизительно на 10°С ниже заданного значения.
28. Способ по любому из пп.22 и 23, где указанную культуру охлаждают до температуры приблизительно 18 - 32°С.
29. Способ по п.28, где указанную культуру охлаждают до температуры приблизительно 20 - 30°С.
30. Способ по п.29, где указанную культуру охлаждают до температуры приблизительно 22 - 28°С.
31. Способ по п.30, где указанную культуру охлаждают до температуры приблизительно 24 - 28°С.
32. Способ по п.31, где указанную культуру охлаждают до температуры приблизительно 25 - 27°С.
33. Способ по п.22, где эукариотические клетки являются клетками насекомых.
34. Способ по п.22, где эукариотические клетки являются клетками млекопитающих.
35. Способ по п.34, где клетки млекопитающих выбраны из группы, состоящей из клеток НЕК, ВНК и СНО.
36. Способ по п.35, где клетки млекопитающих являются клетками СНО.
37. Способ по п.22, где указанные клетки продуцируют требуемый фактор VII или родственный фактору VII полипептид.
38. Способ по п.37, где требуемый полипептид является фактором VII дикого типа человека.
39. Способ по п.38, где требуемый полипептид является родственным фактору VII полипептидом, выбранным из группы, состоящей из L305V-FVII, L305V/M306D/D309S-FVII, L305I-FVII, L305T-FVII, F374P-FVII, V158T/M298Q-FVII, V158D/E296V/M298Q-FVII, K337A-FVII, M298Q-FVII, V158D/M298Q-FVII, L305V/K337A-FVII, V158D/E296V/M298Q/L305V-FVII, V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII, V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII, K157A-FVII, E296V-FVII, E296V/M298Q-FVII, V158D/E296V-FVII, V158D/M298K-FVII, S336G-FVII; S52А-фактора VII, S60A-фактора VII; R152Е-фактора VII, S344А-фактора VII, фактора VIIa, лишенного домена Gla; и P11Q/K33E-FVII, T106N-FVII, K143N/N145T-FVII, V253N-FVII, R290N/A292T-FVII, G291N-FVII, R315N/V317T-FVII, K143N/N145T/R315N/V317T-FVII; и FVII, имеющего замены, добавления или делеции в аминокислотной последовательности от 233Thr до 240Asn, FVII, имеющего замены, добавления или делеции в аминокислотной последовательности от 304Arg до 329Cys.
40. Способ по п.22, где требуемый полипептид продуцируется на уровне, по меньшей мере, приблизительно 15 мг/л культуры.
41. Способ сбора полипептидов, продуцируемых эукариотическими клетками, растущими в культуре с микроносителями, включающий (i) охлаждение культуры до предварительно заданной температуры, которая ниже температуры заданного значения культивирования, с последующим (ii) осаждением микроносителей.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DKPCT/DK01/00634 | 2001-10-02 | ||
DKPCT/DK01/00632 | 2001-10-02 | ||
PCT/DK2001/000634 WO2002029084A2 (en) | 2000-10-02 | 2001-10-02 | Industrial-scale serum-free production of recombinant factor vii in mammalian cells |
PCT/DK2001/000632 WO2002029083A2 (en) | 2000-10-02 | 2001-10-02 | Industrial-scale serum-free production of recombinant proteins in mammalian cells |
DKPA200200460 | 2002-03-26 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2004113441A true RU2004113441A (ru) | 2005-05-20 |
Family
ID=35820426
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2004113441/13A RU2004113441A (ru) | 2001-10-02 | 2002-09-20 | Способ получения рекомбинантных белков в эукариотических клетках |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2004113441A (ru) |
-
2002
- 2002-09-20 RU RU2004113441/13A patent/RU2004113441A/ru not_active Application Discontinuation
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA2460206A1 (en) | Method for production of recombinant proteins in eukaryote cells | |
JP5523674B2 (ja) | 植物タンパク質加水分解産物を含有する血清フリーの細胞培養液におけるポリペプチドの生産 | |
CN101098883B (zh) | 减少含有目的维生素k依赖性蛋白质的组合物中的蛋白质污染物的含量 | |
US20190032026A1 (en) | Virus filtration of liquid factor VII compositions | |
RU2005132170A (ru) | Способ получения сериновых протеаз, содержащих gla-остаток | |
WO2006035060A2 (en) | Purification of a bulk of a factor vii polypeptide by fractionated elution from an anion-exchange material | |
CN101253197A (zh) | 结合gla结构域的人fvⅱ单克隆抗体及其应用 | |
RU2004113441A (ru) | Способ получения рекомбинантных белков в эукариотических клетках | |
CN101268185B (zh) | 因子ⅶ多肽的疏水作用色谱纯化 | |
CN101802187B (zh) | 通过热处理降低因子vii多肽组合物中的二聚体含量 | |
MXPA06005967A (en) | Nanofiltration of factor vii solutions to remove virus |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
FA94 | Acknowledgement of application withdrawn (non-payment of fees) |
Effective date: 20091013 |