RU2004113441A - Способ получения рекомбинантных белков в эукариотических клетках - Google Patents

Способ получения рекомбинантных белков в эукариотических клетках Download PDF

Info

Publication number
RU2004113441A
RU2004113441A RU2004113441/13A RU2004113441A RU2004113441A RU 2004113441 A RU2004113441 A RU 2004113441A RU 2004113441/13 A RU2004113441/13 A RU 2004113441/13A RU 2004113441 A RU2004113441 A RU 2004113441A RU 2004113441 A RU2004113441 A RU 2004113441A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
fvii
temperature
culture
specified
approximately
Prior art date
Application number
RU2004113441/13A
Other languages
English (en)
Inventor
Ида Мелгор КНУДСЕН (DK)
Ида Мелгор КНУДСЕН
Original Assignee
Ново Нордиск Хелт Кэр Аг (Ch)
Ново Нордиск Хелт Кэр Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from PCT/DK2001/000634 external-priority patent/WO2002029084A2/en
Application filed by Ново Нордиск Хелт Кэр Аг (Ch), Ново Нордиск Хелт Кэр Аг filed Critical Ново Нордиск Хелт Кэр Аг (Ch)
Publication of RU2004113441A publication Critical patent/RU2004113441A/ru

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Claims (41)

1. Способ получения полипептидов в эукариотических клетках, включающий стадии
(i) культивирования клеток, экспрессирующих указанный полипептид, на микроносителях при условиях и при температуре заданного значения, подходящих для экспрессии указанного полипептида;
(ii) охлаждения культуры до предварительно заданной температуры, которая ниже указанной температуры заданного значения;
(iii) осаждения микроносителей и
(iv) сбора всей или части культуральной среды.
2. Способ по п.1, дополнительно включающий стадию добавления свежей среды в культуральный сосуд после указанного сбора среды.
3. Способ по п.1 или 2, дополнительно включающий стадию извлечения указанного полипептида из собранной культуральной среды.
4. Способ по п.1, где указанная предварительно заданная температура является температурой, которая приблизительно на 5-30°С ниже заданного значения.
5. Способ по п.4, где указанная предварительно заданная температура является температурой, которая приблизительно на 5-20°С ниже заданного значения.
6. Способ по п.5, где указанная предварительно заданная температура является температурой, которая приблизительно на 5-15°С ниже заданного значения.
7. Способ по п.6, где указанная предварительно заданная температура является температурой, которая на приблизительно 10°С ниже заданного значения.
8. Способ по п.1, где указанную культуру охлаждают до температуры приблизительно 18 - 32°С перед осаждением.
9. Способ по п.7, где указанную культуру охлаждают до температуры приблизительно 20 - 30°С.
10. Способ по п.9, где указанную культуру охлаждают до температуры приблизительно 22 - 28°С.
11. Способ по п.10, где указанную культуру охлаждают до температуры приблизительно 24 - 28°С.
12. Способ по п.11, где указанную культуру охлаждают до температуры приблизительно 25 - 27°С.
13. Способ по п.1, где эукариотические клетки являются клетками насекомых.
14. Способ по п.1, где эукариотические клетки являются клетками млекопитающих.
15. Способ по п.14, где клетки млекопитающих выбраны из группы, состоящей из клеток НЕК, ВНК и СНО.
16. Способ по п.15, где клетки млекопитающих являются клетками СНО.
17. Способ по п.1, где указанный полипептид является фактором VII или родственным фактору VII полипептидом.
18. Способ по п.17, где указанный полипептид является фактором VII дикого типа человека.
19. Способ по п.17, где указанный полипептид является родственным фактору VII полипептидом, выбранным из группы, состоящей из L305V-FVII, L305V/M306D/D309S-FVII, L305I-FVII, L305T-FVII, F374P-FVII, V158T/M298Q-FVII, V158D/E296V/M298Q-FVII, K337A-FVII, M298Q-FVII, V158D/M298Q-FVII, L305V/K337A-FVII, V158D/E296V/M298Q/L305V-FVII, V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII, V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII, K157A-FVII, E296V-FVII, E296V/M298Q-FVII, V158D/E296V-FVII, V158D/M298K-FVII, S336G-FVII; S52А-фактора VII, S60A-фактора VII; R152Е-фактора VII, S344А-фактора VII, фактора VIIa, лишенного домена Gla; и P11Q/K33E-FVII, T106N-FVII, K143N/N145T-FVII, V253N-FVII, R290N/A292T-FVII, G291N-FVII, R315N/V317T-FVII, K143N/N145T/R315N/V317T-FVII; и FVII, имеющего замены, добавления или делеции в аминокислотной последовательности от 233Thr до 240Asn, FVII, имеющего замены, добавления или делеции в аминокислотной последовательности от 304Arg до 329Cys.
20. Способ по п.1, где указанный полипептид продуцируется на уровне, по меньшей мере, приблизительно 15 мг/л культуры.
21. Способ по п.1, где указанный полипептид является фактором VII человека, указанные клетки являются клетками СНО, указанные носители являются макропористыми носителями, указанное заданное значение температуры культивирования равно 36°С и указанную культуру охлаждают до приблизительно 26°С перед предоставлением носителям возможности осаждаться.
22. Способ культивирования эукариотических клеток, включающий стадии
(i) культивирования клеток на микроносителях при условиях и при температуре заданного значения, подходящих для поддержания этой культуры;
(ii) охлаждения культуры до предварительно заданной температуры, которая ниже указанной температуры заданного значения;
(iii) осаждения микроносителей и
(iv) сбора всей или части культуральной среды.
23. Способ по п.22, дополнительно включающий стадию добавления свежей среды в культуральный сосуд после сбора культуральной среды.
24. Способ по любому из пп. 22 и 23, где предварительно заданная температура является температурой, которая на приблизительно 5-30°С ниже температуры заданного значения.
25. Способ по п.24, где предварительно заданная температура является температурой, которая приблизительно на 5-20°С ниже температуры заданного значения.
26. Способ по п.25, где указанная предварительно заданная температура является температурой, которая приблизительно на 5-15°С ниже заданного значения.
27. Способ по п.26, где указанная предварительно заданная температура является температурой, которая приблизительно на 10°С ниже заданного значения.
28. Способ по любому из пп.22 и 23, где указанную культуру охлаждают до температуры приблизительно 18 - 32°С.
29. Способ по п.28, где указанную культуру охлаждают до температуры приблизительно 20 - 30°С.
30. Способ по п.29, где указанную культуру охлаждают до температуры приблизительно 22 - 28°С.
31. Способ по п.30, где указанную культуру охлаждают до температуры приблизительно 24 - 28°С.
32. Способ по п.31, где указанную культуру охлаждают до температуры приблизительно 25 - 27°С.
33. Способ по п.22, где эукариотические клетки являются клетками насекомых.
34. Способ по п.22, где эукариотические клетки являются клетками млекопитающих.
35. Способ по п.34, где клетки млекопитающих выбраны из группы, состоящей из клеток НЕК, ВНК и СНО.
36. Способ по п.35, где клетки млекопитающих являются клетками СНО.
37. Способ по п.22, где указанные клетки продуцируют требуемый фактор VII или родственный фактору VII полипептид.
38. Способ по п.37, где требуемый полипептид является фактором VII дикого типа человека.
39. Способ по п.38, где требуемый полипептид является родственным фактору VII полипептидом, выбранным из группы, состоящей из L305V-FVII, L305V/M306D/D309S-FVII, L305I-FVII, L305T-FVII, F374P-FVII, V158T/M298Q-FVII, V158D/E296V/M298Q-FVII, K337A-FVII, M298Q-FVII, V158D/M298Q-FVII, L305V/K337A-FVII, V158D/E296V/M298Q/L305V-FVII, V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII, V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII, K157A-FVII, E296V-FVII, E296V/M298Q-FVII, V158D/E296V-FVII, V158D/M298K-FVII, S336G-FVII; S52А-фактора VII, S60A-фактора VII; R152Е-фактора VII, S344А-фактора VII, фактора VIIa, лишенного домена Gla; и P11Q/K33E-FVII, T106N-FVII, K143N/N145T-FVII, V253N-FVII, R290N/A292T-FVII, G291N-FVII, R315N/V317T-FVII, K143N/N145T/R315N/V317T-FVII; и FVII, имеющего замены, добавления или делеции в аминокислотной последовательности от 233Thr до 240Asn, FVII, имеющего замены, добавления или делеции в аминокислотной последовательности от 304Arg до 329Cys.
40. Способ по п.22, где требуемый полипептид продуцируется на уровне, по меньшей мере, приблизительно 15 мг/л культуры.
41. Способ сбора полипептидов, продуцируемых эукариотическими клетками, растущими в культуре с микроносителями, включающий (i) охлаждение культуры до предварительно заданной температуры, которая ниже температуры заданного значения культивирования, с последующим (ii) осаждением микроносителей.
RU2004113441/13A 2001-10-02 2002-09-20 Способ получения рекомбинантных белков в эукариотических клетках RU2004113441A (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DKPCT/DK01/00634 2001-10-02
DKPCT/DK01/00632 2001-10-02
PCT/DK2001/000634 WO2002029084A2 (en) 2000-10-02 2001-10-02 Industrial-scale serum-free production of recombinant factor vii in mammalian cells
PCT/DK2001/000632 WO2002029083A2 (en) 2000-10-02 2001-10-02 Industrial-scale serum-free production of recombinant proteins in mammalian cells
DKPA200200460 2002-03-26

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2004113441A true RU2004113441A (ru) 2005-05-20

Family

ID=35820426

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2004113441/13A RU2004113441A (ru) 2001-10-02 2002-09-20 Способ получения рекомбинантных белков в эукариотических клетках

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2004113441A (ru)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2460206A1 (en) Method for production of recombinant proteins in eukaryote cells
JP5523674B2 (ja) 植物タンパク質加水分解産物を含有する血清フリーの細胞培養液におけるポリペプチドの生産
CN101098883B (zh) 减少含有目的维生素k依赖性蛋白质的组合物中的蛋白质污染物的含量
US20190032026A1 (en) Virus filtration of liquid factor VII compositions
RU2005132170A (ru) Способ получения сериновых протеаз, содержащих gla-остаток
WO2006035060A2 (en) Purification of a bulk of a factor vii polypeptide by fractionated elution from an anion-exchange material
CN101253197A (zh) 结合gla结构域的人fvⅱ单克隆抗体及其应用
RU2004113441A (ru) Способ получения рекомбинантных белков в эукариотических клетках
CN101268185B (zh) 因子ⅶ多肽的疏水作用色谱纯化
CN101802187B (zh) 通过热处理降低因子vii多肽组合物中的二聚体含量
MXPA06005967A (en) Nanofiltration of factor vii solutions to remove virus

Legal Events

Date Code Title Description
FA94 Acknowledgement of application withdrawn (non-payment of fees)

Effective date: 20091013