Claims (7)
1. Пептидный вектор PGE-k, обеспечивающий избирательный транспорт экзогенного генетического материала в живую клетку млекопитающих и человека, несущую наружные рецепторы к эпидермальному фактору роста, и последующее поступление материала в ядро указанной клетки, с аминокислотной последовательностью SEQ ID № 1, состоящей из аминокислотной последовательности человеческого эпидермального фактора роста (SEQ ID № 2), которая является участком связывания с наружными рецепторами названной клетки, и модифицированной последовательности сигнального пептида Т-антигена SV-40 (SEQ ID № 3), которая отвечает за связывание экзогенного генетического материала и преодоление им ядерной оболочки указанной клетки1. The peptide vector PGE-k, providing selective transport of exogenous genetic material into a living cell of mammals and humans, carrying external receptors to the epidermal growth factor, and subsequent supply of material to the nucleus of the specified cell, with the amino acid sequence of SEQ ID No. 1, consisting of the amino acid sequence human epidermal growth factor (SEQ ID No. 2), which is the site of binding to the external receptors of the named cell, and a modified signal sequence peptide T-antigen SV-40 (SEQ ID No. 3), which is responsible for the binding of exogenous genetic material and overcoming the nuclear membrane of the specified cell
2. Нуклеотидная последовательность, кодирующая слитый белок, который состоит из мутантного тиоредоксина (Glu30His, Gln62His), линкерной последовательности -(Gly-Ser)2-Gly-(Asp)4-Lys-, специфически расщепляемой энтерокиназой, и пептидного вектора по п.1, и характеризуется аминокислотной последовательностью SEQ ID № 4.2. The nucleotide sequence encoding a fusion protein, which consists of a mutant thioredoxin (Glu30His, Gln62His), a linker sequence - (Gly-Ser) 2 -Gly- (Asp) 4 -Lys-, specifically cleaved by enterokinase, and the peptide vector according to claim 1, and is characterized by the amino acid sequence of SEQ ID No. 4.
3. Нуклеотидная последовательность по п.2, отличающаяся тем, что представляет собой SEQ ID № 5.3. The nucleotide sequence according to claim 2, characterized in that it is SEQ ID No. 5.
4. Рекомбинантная плазмида pGEK для экспрессии слитого белка, включающего пептидный вектор по п.1, которая характеризуется тем, что имеет размер 3691 п.о. и состоит из4. Recombinant plasmid pGEK for expression of a fusion protein comprising the peptide vector according to claim 1, which is characterized in that it has a size of 3691 bp and consists of
Ndel/Aatll фрагмента плазмиды pGEMEX-1, имеющего размер 2347 п.о. и содержащего участок инициации репликации Ori и ген устойчивости к ампициллину Bla;Ndel / Aatll fragment of plasmid pGEMEX-1 having a size of 2347 bp and containing Ori replication initiation site and Bla ampicillin resistance gene;
Aatll/Hindlll фрагмента плазмиды pGEMEX-1, имеющего размер 755 п.о. и содержащего f10riAatll / Hindlll fragment of plasmid pGEMEX-1 having a size of 755 bp and containing f10ri
нуклеотидной последовательности по п.3.the nucleotide sequence according to claim 3.
5. Штамм Escherichia coli В-8389 ВКПМ, содержащий рекомбинантную плазмиду рСЕК-продуцент слитого белка, включающего пептидный вектор, который обеспечивает избирательный транспорт экзогенного генетического материала в клетку млекопитающего и человека.5. The strain Escherichia coli B-8389 VKPM containing a recombinant plasmid pCEK producing a fusion protein comprising a peptide vector that provides selective transport of exogenous genetic material into the cell of a mammal and a human.
6. Способ получения пептидного вектора, предусматривающий6. A method of producing a peptide vector, comprising
культивирование трансгенного штамма по п.5 в условиях, обеспечивающих экспрессию включающего пептидный вектор слитого белка;culturing the transgenic strain according to claim 5 under conditions ensuring expression of a fusion protein comprising a peptide vector;
выделение и последующий гидролиз слитого белка энтерокиназой или другой протеазой, распознающей включенную в него линкерную последовательность и специфически расщепляющей пептидную связь, следующую за указанным линкером,иisolation and subsequent hydrolysis of the fusion protein with an enterokinase or other protease that recognizes the linker sequence included in it and specifically cleaves the peptide bond following the linker, and
выделение целевого продукта.the selection of the target product.
7. Способ генетической модификации живой клетки млекопитающих и человека, несущей наружные рецепторы к эпидермальному фактору роста, предусматривающий контактирование названной клетки с экзогенным генетическим материалом в присутствии пептидного вектора, состоящего из последовательности, обеспечивающего избирательный транспорт экзогенного генетического материала к клетке-мишени и через ее клеточную мембрану, и производного последовательности сигнала ядерной локализации, отличающийся тем, что используют пептидный вектор по п.1.7. A method for the genetic modification of a living mammalian cell and a human cell carrying external receptors for epidermal growth factor, comprising contacting said cell with exogenous genetic material in the presence of a peptide vector consisting of a sequence that provides selective transport of exogenous genetic material to the target cell and through its cellular a membrane and a derivative of a nuclear localization signal sequence, characterized in that the peptide vector according to claim 1 is used.