RU2002102105A - Способ выделения плазмид Burholderia pseudomallei - Google Patents
Способ выделения плазмид Burholderia pseudomalleiInfo
- Publication number
- RU2002102105A RU2002102105A RU2002102105/13A RU2002102105A RU2002102105A RU 2002102105 A RU2002102105 A RU 2002102105A RU 2002102105/13 A RU2002102105/13 A RU 2002102105/13A RU 2002102105 A RU2002102105 A RU 2002102105A RU 2002102105 A RU2002102105 A RU 2002102105A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- tris
- plasmids
- minutes
- rpm
- isolation
- Prior art date
Links
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title claims 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 4
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims 3
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Tris Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M buffer Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N edta Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N Bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N Ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 claims 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 claims 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims 1
- 230000002490 cerebral Effects 0.000 claims 1
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 claims 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims 1
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 claims 1
- 230000002458 infectious Effects 0.000 claims 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 claims 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 claims 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims 1
- 239000003973 paint Substances 0.000 claims 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims 1
- PIEPQKCYPFFYMG-UHFFFAOYSA-N tris acetate Chemical compound CC(O)=O.OCC(N)(CO)CO PIEPQKCYPFFYMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- JNEZJAAADKQBBD-UHFFFAOYSA-N tris(2-chlorophenyl) borate Chemical compound ClC1=CC=CC=C1OB(OC=1C(=CC=CC=1)Cl)OC1=CC=CC=C1Cl JNEZJAAADKQBBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims 1
Claims (1)
- Способ выделения плазмид Burkholdena pseudomallei и их использование в качестве эпидемиологического маркера при внутривидовом типировании штаммов, включающий культивирование, выделение плазмид и группировку штаммов по плазмидному спектру, отличающийся тем, что выращивание культуры проводят на плотной питательной среде с сердечно-мозговым экстрактом (BHI, ″Difco″) в течение 16-18 час при 37°С, смывают низкосолевым буфером (40 мМ Трис-ацетата, 2 мМ ЭДТА, рН 8,0), доводят суспензию до концентрации 1 млрд м.к./мл и по каплям смешивают 3 мл с 6 мл лизирующего буфера (5% додецилсульфат натрия, 50 мМ Трис, 50 мМ ЭДТА, рН 12,6) во флаконах объемом 50 мл, перемешивают на магнитной мешалке 3 мин (100 об/мин) при температуре 18-24°С, прогревают лизат в течение 15 мин при 60°С и после просветления лизата нейтрализуют раствор при температуре 18-24°С добавлением 900 мкл 2 М раствора Tris-HCl (рН 8,0), перемешивают 3 мин (100 об/мин) и затем добавляют 990 мкл 5 М NaCl, после перемешивания лизата по каплям вносят равное количество забуференого свежеперегнанного фенола, перемешивают 3 мин (100 об/мин) и оставляют при комнатной температуре на 10 мин, после чего повторно перемешивают в том же режиме, через 10 мин после отстоя суспензии отбирают водную фазу в новые флаконы на 20 мл и проводят однократную обработку хлороформом, выдерживают 5 мин на льду и дополнительно добавляют 160 мкл 5 М NaCl к водной фазе, после чего перемешивают и вновь выдерживают 10 мин на льду, отбирают 1 мл суспензии в пробирки типа ″Эппендорф″ и после центрифугирования на микрофуге в течение 10 мин при 15 тыс. об/мин отбирают в новую пробирку 40 мкл надосадочной жидкости, добавляют 5 мкл краски (3 mM Tris, pH 7,2; 0,25% бромфенолового синего; 90% глицерина) и вносят в лунку для электрофореза, проводят электрофорез в 0,8% агарозном геле в течение 4 ч (5ν/см) в трис-боратном буфере с последующей окраской ДНК этидиум бромидом (0,5 мкг/мл) в течение 20 мин, отмывкой в течение 10 мин в Н2О и визуализацией в УФ-свете, по результатам электрофоретического разделения проводят группировку штаммов по размеру выявленных плазмид и, в случае возникновения инфекционного процесса, вызванного плазмидсодержащим штаммом, определяют его групповую принадлежность, что облегчает выявление источника инфекции.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2002102105/13A RU2218401C2 (ru) | 2002-01-23 | 2002-01-23 | Способ выделения плазмид burkholderia pseudomallei |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2002102105/13A RU2218401C2 (ru) | 2002-01-23 | 2002-01-23 | Способ выделения плазмид burkholderia pseudomallei |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2002102105A true RU2002102105A (ru) | 2003-08-20 |
| RU2218401C2 RU2218401C2 (ru) | 2003-12-10 |
Family
ID=32065910
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2002102105/13A RU2218401C2 (ru) | 2002-01-23 | 2002-01-23 | Способ выделения плазмид burkholderia pseudomallei |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2218401C2 (ru) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113046452B (zh) * | 2021-03-23 | 2022-02-25 | 中国人民解放军陆军军医大学 | 一种用于检测类鼻疽伯克霍尔德菌的组合物及其应用 |
-
2002
- 2002-01-23 RU RU2002102105/13A patent/RU2218401C2/ru not_active IP Right Cessation
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kauffmann et al. | DNA isolation from soil samples for cloning in different hosts | |
| Chen et al. | A simple and rapid method for the preparation of gram-negative bacterial genomic DNA. | |
| Ito et al. | Transformation of intact yeast cells treated with alkali cations | |
| EP0918877B1 (en) | Methods for isolating nucleic acids using alkaline protease | |
| Amani et al. | A simple and rapid leaf genomic DNA extraction method for polymerase chain reaction analysis | |
| CN104450684A (zh) | 一种磁珠法提取细菌中核酸的试剂盒及提取方法 | |
| Wackernagel | Genetic transformation in E. coli: the inhibitory role of the recBC DNase | |
| CN108220284A (zh) | 一种磁珠法细菌基因组dna提取试剂盒及应用 | |
| Rahimpour et al. | Purification of plasmid DNA with polymer‐salt aqueous two‐phase system: Optimization using response surface methodology | |
| Krüger et al. | Active protection by bacteriophages T3 and T7 against E. coli B-and K-specific restriction of their DNA | |
| Barciszewska et al. | The nucleotide sequence of methionine elongator tRNA from wheat germ | |
| Dobritsa | Restriction analysis of the Frankia spp. genome | |
| RU2002102105A (ru) | Способ выделения плазмид Burholderia pseudomallei | |
| Li et al. | Effect of salt on purification of plasmid DNA using size-exclusion chromatography | |
| Yu et al. | Large-volume sample stacking with polarity switching for the analysis of bacteria by capillary electrophoresis with laser-induced fluorescence detection | |
| Mahony et al. | Rapid extraction of plasmids from Clostridium perfringens | |
| Holubova et al. | Transfer of liposome-encapsulated plasmid DNA to Bacillus subtilis protoplasts and calcium-treated Escherichia coli cells | |
| ES2336548T3 (es) | Metodos y composiciones para extraer proteinas de celulas. | |
| Abbas et al. | Evaluation three methods of the extraction and purification of bacterial DNA of Gram positive and Gram negative bacteria | |
| CN105441423A (zh) | 一种土壤样品中微生物基因组的快速提取方法 | |
| Meyhack et al. | Processing of precursor particles containing 17S rRNA in a cell free system | |
| CN112481252A (zh) | 一种大规模提取用于转染哺乳动物细胞的无内毒素质粒的方法 | |
| US4518698A (en) | Plasmid and production thereof | |
| US9200272B2 (en) | Extraction buffer and method for isolating high-quality RNA from cells exposed to metal chloride solutions and clay mineral suspensions | |
| CN109652409A (zh) | 一种提取金黄色葡萄球菌质粒的方法 |