Claims (30)
1. Молекула нуклеиновой кислоты, включающая индуцируемый теплом промотор и выбранная из следующих нуклеиновых кислот: (a) нуклеиновая кислота, последовательность которой включает последовательность промотора гена Hansenula polymorpha, кодирующего белок с активностью трегалоза-6-фосфатсинтазы; (b) нуклеиновая кислота с последовательностью, указанной в SEQ ID NO:1; (c) нуклеиновая кислота с последовательностью, которая проявляет, по меньшей мере, 40% идентичность на протяжении длины в 300 п.н. с одной из последовательностей, указанных в (а) или (b); (d) нуклеиновая кислота, которая гибридизуется с комплементарной цепью одной из нуклеиновых кислот, указанных в (а), (b) или (с); (e) производная одной из нуклеиновых кислот, указанных в (а), (b) или (с), полученная заменой, присоединением и/или делецией одного или большего количества нуклеотидов; (f) фрагмент одной из нуклеиновых кислот, указанных в (а)-(е), который сохраняет функцию индуцируемого теплом промотора; (g) комбинация нескольких нуклеиновых кислот, указанных в (а) - (f), где последовательности нуклеиновых кислот могут отличаться или быть одинаковыми, или молекула нуклеиновой кислоты, последовательность которой комплементарна последовательности одной из нуклеиновых кислот, указанных в (а)-(g), при условии, что молекула нуклеиновой кислоты не представляет последовательность промотора гена трегалоза-6-фосфатсинтазы Saccharomyces cerevisiae или Schizosaccharomyces pombe.1. A nucleic acid molecule comprising a heat-induced promoter and selected from the following nucleic acids: (a) a nucleic acid, the sequence of which includes the promoter sequence of the Hansenula polymorpha gene encoding a protein with trehalose-6-phosphate synthase activity; (b) a nucleic acid with the sequence indicated in SEQ ID NO: 1; (c) a nucleic acid with a sequence that exhibits at least 40% identity over a length of 300 bp with one of the sequences specified in (a) or (b); (d) a nucleic acid that hybridizes to a complementary strand of one of the nucleic acids indicated in (a), (b) or (c); (e) a derivative of one of the nucleic acids indicated in (a), (b) or (c), obtained by replacement, addition and / or deletion of one or more nucleotides; (f) a fragment of one of the nucleic acids indicated in (a) to (e), which retains the function of the heat-induced promoter; (g) a combination of several nucleic acids specified in (a) - (f), where the nucleic acid sequences may differ or be the same, or a nucleic acid molecule whose sequence is complementary to the sequence of one of the nucleic acids specified in (a) - (g ), provided that the nucleic acid molecule does not represent the promoter sequence of the trehalose-6-phosphate synthase gene of Saccharomyces cerevisiae or Schizosaccharomyces pombe.
2. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, отличающаяся тем, что нуклеиновая кислота, указанная в (с) проявляет, по меньшей мере, 60% идентичности с одной из последовательностей, указанных в (а) или (b), или с комплементарной им последовательностью.2. The nucleic acid molecule according to claim 1, characterized in that the nucleic acid indicated in (c) exhibits at least 60% identity with one of the sequences specified in (a) or (b), or with a complementary sequence.
3. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, отличающаяся тем, что нуклеиновая кислота, указанная в (с) проявляет, по меньшей мере, 80% идентичности с одной из последовательностей, указанных в (а) или (b), или с комплементарной им последовательностью.3. The nucleic acid molecule according to claim 1, characterized in that the nucleic acid indicated in (c) exhibits at least 80% identity with one of the sequences specified in (a) or (b), or complementary to them sequence.
4. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, отличающаяся тем, что нуклеиновая кислота, указанная в (с) проявляет, по меньшей мере, 90% идентичности с одной из последовательностей, указанных в (а) или (b), или с комплементарной им последовательностью.4. The nucleic acid molecule according to claim 1, characterized in that the nucleic acid indicated in (c) exhibits at least 90% identity with one of the sequences specified in (a) or (b), or with a complementary sequence.
5. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, отличающаяся тем, что нуклеиновая кислота, указанная в (с) проявляет, по меньшей мере, 95% идентичности с одной из последовательностей, указанных в (а) или (b), или с комплементарной им последовательностью.5. The nucleic acid molecule according to claim 1, characterized in that the nucleic acid indicated in (c) exhibits at least 95% identity with one of the sequences specified in (a) or (b), or complementary to them sequence.
6. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что она представляет, по меньшей мере, один элемент теплового шока, имеющий последовательность NGAANNNNNNNGAAN (SEQ ID NO:2), или комплементарную ей последовательность, где нуклеотидами, обозначенными N, независимо друг от друга могут быть А, Т, С или G.6. A nucleic acid molecule according to any one of the preceding paragraphs, characterized in that it represents at least one heat shock element having the sequence NGAANNNNNNNGAAN (SEQ ID NO: 2), or a sequence complementary to it, where the nucleotides designated N, independently from each other can be A, T, C or G.
7. Молекула нуклеиновой кислоты по п.6, отличающаяся тем, что она представляет, по меньшей мере, один элемент теплового шока с последовательностью NGAANNBWMNNGAAN (SEQ ID NO:3), или комплементарной ей последовательностью, где В означает G, С или Т, W означает А или Т и М означает С или А.7. The nucleic acid molecule according to claim 6, characterized in that it represents at least one heat shock element with the sequence NGAANNBWMNNGAAN (SEQ ID NO: 3), or a sequence complementary to it, where B is G, C or T, W means A or T and M means C or A.
8. Молекула нуклеиновой кислоты по п.7, отличающаяся тем, что элемент теплового шока выбран из TGAAGCCTCTTGAAA (SEQ ID NO:4) и/или TGAATATAAAGGAAA (SEQ ID NO:5) и/или комплементарных им последовательностей, при этом два или большее количество элементов теплового шока там, где они присутствуют, могут представлять одинаковые или различные последовательности.8. The nucleic acid molecule according to claim 7, characterized in that the heat shock element is selected from TGAAGCCTCTTGAAA (SEQ ID NO: 4) and / or TGAATATAAAGGAAA (SEQ ID NO: 5) and / or sequences complementary to them, with two or more the number of heat shock elements where they are present may represent the same or different sequences.
9. Молекула нуклеиновой кислоты по пп.6, 7 или 8, отличающаяся тем, что она представляет, по меньшей мере, два различных элемента теплового шока.9. The nucleic acid molecule according to claims 6, 7 or 8, characterized in that it represents at least two different elements of heat shock.
10. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что она не содержит элемента STRE, имеющего последовательность ССССТ или AGGGG.10. A nucleic acid molecule according to any one of the preceding paragraphs, characterized in that it does not contain an STRE element having the sequence CCCST or AGGGG.
11. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, отличающаяся тем, что фрагмент, указанный в (f), включает последовательность от нуклеотида 228 до нуклеотида 792 в SEQ ID NO:1.11. The nucleic acid molecule according to claim 1, characterized in that the fragment indicated in (f) comprises a sequence from nucleotide 228 to nucleotide 792 in SEQ ID NO: 1.
12. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, отличающаяся тем, что фрагмент, указанный в (f), включает последовательность от нуклеотида 492 до нуклеотида 792 в SEQ ID NO:1.12. The nucleic acid molecule according to claim 1, characterized in that the fragment indicated in (f) comprises a sequence from nucleotide 492 to nucleotide 792 in SEQ ID NO: 1.
13. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, отличающаяся тем, что фрагмент, указанный в (f), включает последовательность от нуклеотида 627 до нуклеотида 713 в SEQ ID NO:1.13. The nucleic acid molecule according to claim 1, characterized in that the fragment indicated in (f) comprises a sequence from nucleotide 627 to nucleotide 713 in SEQ ID NO: 1.
14. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что она, кроме того, включает, по меньшей мере, одну последовательность нуклеиновой кислоты гетерологичного гена под транскрипционным контролем индуцируемого теплом промотора.14. A nucleic acid molecule according to any one of the preceding paragraphs, characterized in that it further comprises at least one nucleic acid sequence of a heterologous gene under the transcriptional control of a heat-induced promoter.
15. Молекула нуклеиновой кислоту по любому из пп.1-13, отличающаяся тем, что она, кроме того, включает последовательность нуклеиновой кислоты под транскрипционным контролем индуцируемого теплом промотора, которая выбрана из следующих последовательностей: (i) последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид с аминокислотной последовательностью трегалоза-6-фосфатсинтазы Hansenula polymorpha; (ii) последовательность нуклеиновой кислоты, которая указана в SEQ ID NO:6; (iii) последовательность нуклеиновой кислоты, которая проявляет, по меньшей мере, 80% идентичности с последовательностью, указанной в SEQ ID NO:6; (iv) последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид с аминокислотной последовательностью, указанной в SEQ ID NO:7 или с ее частичной последовательностью, где полипептид проявляет трегалоза-6-фосфатсинтазную активность; (v) последовательность нуклеиновой кислоты, которая, принимая во внимание вырожденность генетического кода, кодирует полипептид с аминокислотной последовательностью, указанной в SEQ ID NO:7, или с его частичной последовательностью, при этом полипептид проявляет трега-лоза-6-фосфатсинтазную активность; (vi) последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид, аминокислотная последовательность которого проявляет, по меньшей мере, 80% идентичности с аминокислотной последовательностью, указанной в SEQ ID NO:7.15. A nucleic acid molecule according to any one of claims 1 to 13, characterized in that it further comprises a nucleic acid sequence under the transcriptional control of a heat-induced promoter, which is selected from the following sequences: (i) a nucleic acid sequence that encodes a polypeptide with the amino acid sequence of trehalose-6-phosphate synthase Hansenula polymorpha; (ii) the nucleic acid sequence as indicated in SEQ ID NO: 6; (iii) a nucleic acid sequence that exhibits at least 80% identity with the sequence specified in SEQ ID NO: 6; (iv) a nucleic acid sequence that encodes a polypeptide with the amino acid sequence indicated in SEQ ID NO: 7 or with its partial sequence, where the polypeptide exhibits trehalose-6-phosphate synthase activity; (v) a nucleic acid sequence that, taking into account the degeneracy of the genetic code, encodes a polypeptide with the amino acid sequence indicated in SEQ ID NO: 7 or with a partial sequence thereof, wherein the polypeptide exhibits trehalose-6-phosphate synthase activity; (vi) a nucleic acid sequence that encodes a polypeptide whose amino acid sequence exhibits at least 80% identity with the amino acid sequence indicated in SEQ ID NO: 7.
16. Молекула нуклеиновой кислоты по п.15, отличающаяся тем, что последовательность нуклеиновой кислоты, указанная в (iii) проявляет, по меньшей мере, 90% идентичности с последовательностью, указанной в SEQ ID NO:6.16. The nucleic acid molecule according to clause 15, wherein the nucleic acid sequence specified in (iii) exhibits at least 90% identity with the sequence specified in SEQ ID NO: 6.
17. Молекула нуклеиновой кислоты по п.15, отличающаяся тем, что последовательность, указанная в (vi) кодирует полипептид, аминокислотная последовательность которого проявляет, по меньшей мере, 90% идентичности с аминокислотной последовательностью, указанной в SEQ ID NO:7.17. The nucleic acid molecule according to clause 15, wherein the sequence indicated in (vi) encodes a polypeptide whose amino acid sequence shows at least 90% identity with the amino acid sequence specified in SEQ ID NO: 7.
18. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов встроенная в клетку-хозяин не природного происхождения, которая является прокариотической или эукариотической.18. The nucleic acid molecule according to any one of the preceding paragraphs embedded in a host cell of non-natural origin, which is prokaryotic or eukaryotic.
19. Молекула нуклеиновой кислоты по п.18, отличающаяся тем, что указанная эукариотическая клетка-хозяин является грибковой клеткой.19. The nucleic acid molecule according to claim 18, wherein said eukaryotic host cell is a fungal cell.
20. Молекула нуклеиновой кислоты по п.19, отличающаяся тем, что указанной грибковой клеткой-хозяином является дрожжевая клетка.20. The nucleic acid molecule according to claim 19, characterized in that said fungal host cell is a yeast cell.
21. Молекула нуклеиновой кислоты по п.20, отличающаяся тем, что указанной дрожжевой клеткой-хозяином является Hansenula polymorpha.21. The nucleic acid molecule according to claim 20, characterized in that said host yeast cell is Hansenula polymorpha.
22. Экспрессирующий вектор, включающий, по меньшей мере, одну молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-13.22. An expression vector comprising at least one nucleic acid molecule according to any one of claims 1 to 13.
23. Набор, включающий (a) экспрессирующий вектор по п.22, который пригоден для включения в него клонированной нуклеиновой кислоты, которая кодирует рекомбинантный белок, и (b) клетку-хозяина, которая подходит для индукции индуцируемого теплом промотора и для продукции рекомбинантного белка.23. A kit comprising (a) an expression vector according to claim 22, which is suitable for incorporating a cloned nucleic acid that encodes a recombinant protein, and (b) a host cell that is suitable for the induction of a heat-induced promoter and for the production of a recombinant protein .
24. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-21, используемая для экспрессии гена под контролем индуцируемого теплом промотора.24. The nucleic acid molecule according to any one of claims 1 to 21, used for gene expression under the control of a heat-induced promoter.
25. Экспрессирующий вектор по п.22 используемый для экспрессии гена под контролем индуцируемого теплом промотора.25. The expression vector of claim 22, used for gene expression under the control of a heat-induced promoter.
26. Набор по п.23 используемый для экспрессии гена под контролем индуцируемого теплом промотора.26. The kit according to item 23 used for gene expression under the control of a heat-induced promoter.
27. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-21, используемая для получения одного или большего количества белков.27. The nucleic acid molecule according to any one of claims 1 to 21, used to obtain one or more proteins.
28. Экспрессирующий вектор по п.22 используемый для получения одного или большего количества белков.28. The expression vector according to item 22 is used to obtain one or more proteins.
29. Набор по п.23 используемый для получения одного или большего количества белков.29. The kit according to item 23 used to produce one or more proteins.
30. Способ получения одного или большего количества белков, включающий (i) клонирование, по меньшей мере, одной нуклеиновой кислоты, которая кодирует рекомбинантный белок, в экспрессирующем векторе по п.22, так чтобы клонированная таким образом нуклеиновая кислота находилась под транскрипционным контролем индуцируемого теплом промотора; (ii) введение экспрессирующего вектора, полученного в (i), в клетку-хозяина, подходящую для индукции индуцируемого теплом промотора и для получения рекомбинантного белка; (iii) культивирование клетки-хозяина, полученной в (ii); (iv) индукцию индуцируемого теплом промотора по существу известными способами.30. A method for producing one or more proteins, comprising (i) cloning at least one nucleic acid that encodes a recombinant protein in the expression vector according to claim 22, so that the nucleic acid thus cloned is under heat-induced transcriptional control promoter; (ii) introducing an expression vector obtained in (i) into a host cell suitable for inducing a heat-inducible promoter and for producing a recombinant protein; (iii) culturing the host cell obtained in (ii); (iv) induction of a heat-induced promoter by methods known per se.