RU2000331C1 - Способ вы влени микобактерий - Google Patents
Способ вы влени микобактерийInfo
- Publication number
- RU2000331C1 RU2000331C1 SU4942381A RU2000331C1 RU 2000331 C1 RU2000331 C1 RU 2000331C1 SU 4942381 A SU4942381 A SU 4942381A RU 2000331 C1 RU2000331 C1 RU 2000331C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dna
- mycobacteria
- mycobacterium tuberculosis
- fragments
- probe
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 abstract description 33
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 abstract description 8
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 abstract description 7
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 abstract description 6
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 abstract description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 abstract description 4
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 abstract description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 abstract description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000007023 DNA restriction-modification system Effects 0.000 abstract 1
- 241000702224 Enterobacteria phage M13 Species 0.000 abstract 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 abstract 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 13
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 6
- 241001524679 Escherichia virus M13 Species 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000186366 Mycobacterium bovis Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 2
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 2
- 108010059712 Pronase Proteins 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 2
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 2
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 2
- 125000002264 triphosphate group Chemical class [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 238000007900 DNA-DNA hybridization Methods 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 208000037065 Subacute sclerosing leukoencephalitis Diseases 0.000 description 1
- 206010042297 Subacute sclerosing panencephalitis Diseases 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 230000003749 cleanliness Effects 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960003350 isoniazid Drugs 0.000 description 1
- QRXWMOHMRWLFEY-UHFFFAOYSA-N isoniazide Chemical compound NNC(=O)C1=CC=NC=C1 QRXWMOHMRWLFEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000002901 radioactive waste Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Natural products CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Использование: микробиологи , молекул рна биологи и биохими , в частности способ дифференциации различных видов микобактерий, в частности возбудител туберкулеза . Сущность изобретени : ДНК бактериофага М13 содержит в своем составе уникальные, повтор ющиес последовательности нуклеотидов. Такие последовательности имеют место и в ДНК микобактерий туберкулеза. Они обнаруживаютс рестрикцией ДНК микобактерий туберкулеза , электрофорезом их и гибридизацией ДНК-зондом М 13. Расположение полос (участков уникальных последовательностей нуклеотидов) вл етс специфичным дл каждого вида микобактерий туберкулеза и позвол ет дифференцировать их. 1 ил.
Description
Изобретение относитс к микробиологии , молекул рной биологии, биохимии, в частности к способу дифференциации и идентификации различных видов микобактерий туберкулеза, и может быть использовано в научно-исследовательских институтах и ветеринарных лаборатори х.
Известен способ дифференциации микобактерий . основанный на методах биологических , бактериологических и биохимических исследований. Эти комплексные исследовани включают скорость роста: образование пигмента (на свету или в темноте); способность к росту на простых питательных средах и при температуре 20- 25°С; каталазна активность, пероксидаэ- на активность; термостабильность каталазы; первична устойчивость к препаратам первого р да - стрептомицину, изо- ниазиду, ПАСК. Важную информацию дают
опыты на животных. Данный метод вл етс трудоемким и продолжительным (до 3 мес.). Кроме того, известен метод идентификации микобактерий путем определени нуклеотидного состава ДНК по температуре плавлени , степени подоби нуклеотидных последовательностей в сравнении между собой, где требуетс клонирование фрагментов известного ДНК, создание рекомби- нантных ДНК-зондов на плазмидных векторах.
Данный метод мы рассматриваем в качестве прототипа.
Недостатками рассматриваемого способа вл ютс больша сложность и трудоемкость , св занна с фрагментированием и клонированием специфических участков ДНК и отсутствием универсальности получаемых ДНК-зондов, т.е. необходимости
ю о о о со
Сл
О
разработки ДНК-зондов, специфичных дл каждого вида микобактерий.
Целью изобретени вл етс упрощение и повышение надежности и специфичности способа дифференциации возбудител туберкулеза крупного рогатого скота M.BovIs от атипичных форм микобактерий на основе универсального ДНК-зонда , а также межвидова дифференциаци микобзктерий туберкулеза.
Это достигаетс применением метода определени гипервариабильных последовательностей в геноме микобактерий с помощью ДНК-зонда, приготовленного из ДНК бактериофага М13.
Сущность изобретени состоит в том. что, использу зонд из ДНК бактериофага М 13, устанавливают гипервариабильные участки ДНК генома микобактерий, которые имеют различную локализацию во фрагментах ДНК в зависимости от их видимой принадлежности .
Сопоставительный анализ с прототипом позвол ет сделать вывод, что применение фермента рестрикции Есо 91 1 и зонда из ДНК бактериофага М13 позвол ет определить гипервариабильные участки ДНК различных видов микобактерий, что дает возможность установить из видовую принадлежность .
Таким образом, за вленное техническое решение соответствует критерию новизна .
По сравнению с прототипом, где требуетс клонирование фрагментов известного ДНК, создание рекомбинантных ДНК-зондов на плазмидных векторах, созданный универсальный зонд из ДНК бактериофага М13, благодар рестриктазе Есо 91 1, дающей широкий спектор гибридизирующих полос, дает возможность определени и распознавани микобактерий от патогенного штамма и друг от друга, что позвол ет сделать вывод о соответствии за вл емого решени критерию существенные отличи .
Из бактериальной массы каждого вида микобактерий выдел ют ДНК, обрабатывают их рестриктазой Есо 91 1 и подвергают электрофорезу в горизонтальном блоке 0,8%-ного агарозного гел с последующим блоттингом по Сазерну и ДНК-ДНК гибридизацией с ДНК-зондом М13.
1. Выделение хромосомальной ДНК из патогенного штамма M.BovIs, атипичных микобактерий M.kansasll, M.lntracellulare и сапрофитного M.phlel.
Бактериальную массу в количестве 1 мг 2 раза отмывали в 10 мл SSPE (ЗМ NaCI, 0.2М NaH2PCM, 0.02M ЭДТА, рН 7.8). центрифугиру при 5 тыс. об/мин по 15 мин.
Осадок ресуспендировали в 5 мл разбавленного в холодном STE-1 буфере (О.Ш NaCI, О.ОШ трис-НС. О.ОШ ЭДТА. рН 7.8) лизо- цима (14 мг/мл). Тщательно перемешивали
и инкубировали при температуре 37°С в течение 30-40 мин. После этого добавл ли 500 мкл водного раствора проназы (1 мг/мл) и 500 мкл 10% додецилсульфатл натри (SDS), перемешивали и инкубировали при температурс 50°С во встр хивающем аппарате в течение 30 мин. Лизис клеток микобактерий сопровождалс увеличением в зкости раствора . По окончании лизиса клеток в смесь добавл ли 5М NaCI до конечной концентра5 ции Ш.
Очистку от белка осуществл ли добавлением равного обьема хлороформа: изо- амилового спирта (24:1). Осторожно и плавно перемешивали в течение 10 мин и
0 центрифугировали при 6 тыс. об/мин в течение 20 мин. Супернатант осторожно отсасывали в другую пробирку и последнюю процедуру повтор ли до исчезновени белого налета на границе между хлороформом
5 и основным субстратом. После удалени белков ДНК осаждали добавлением двух объемов холодного 96° этанола. ДНК собирали стекл нной палочкой и раствор ли в 0,1xSSC и обрабат ывали РНК-зой из расчета
0 50 мкл на 1 мл в течение 1 ч при температуре 37°С. Добагэл ли 10%-ный додецилсульфат натри до конечной концентрации 0,5М, проназу в концентрации 500 мкг на 1 мл,и инкубировали в термостате при температу5 ре 37°С в течение 1 ч. После очистки ферментами ДНК экстрагировали равным объемом хлороформ: изоамиловый спирт (24 : 1) при 6 тыс. об/мин в течение 20 мин. Из супернатанта ДНК осаждали холодным
0 96° этанолом в соотношении 1 : 2. ДНК наматывали на стекл нную палочку, высушивали на воздухе при комнатной температуре и раствор ли в кип ченной бидистиллиро- ванной воде. На спектрофотометре Perkin5 Elmer определ ли концентрацию выделенных ДНК.
2. Фрагментаци видов микобактерий рестриктазой Есо 91,1, дающей широкий спектр гибридизирующих полос, электрофо0 рез и блоттинг.
Очищенный от белков ДНК микобактерий в количестве 5 мкг переносили в пробирки эпиндофора. Туда же добавл ли до 18 мкл бидистиллированной воды, 2 мкл 10х
5 буфера рестрикции (50 мМ NaCI, ЮмМтрис- HCI, рН 7,5, 10 мМ MgCl2, 5 мМ 2-меркйпто- этанол) и осторожно перемешивали. Затем вносили 3 мкл рестриктээы Есо 91 1, перемешивали и помещали на 3 ч в термостат при температуре 37°С. Реакцию останавливали добавлением ЭДТА до конечной концентрации 10 мМ.
Полученные фрагменты ДНК подвергали электрофорезу в горизонтальном блоке 0.8%-ногоагарозного гел при напр жении 0,8 В/см в течение 16 ч.
Фрагменты ДНК окрашивали в растворе этидиум бромида в течение 30 мин и фотографировали.
Следующим этапом работы вл етс блоттинг, т.е. перенос фрагментов ДНК из агарозного гел на нитроцеллюлозную мембрану . Дл денатурации ДНК гель выдерживали в 0,5 М NaOH с 1,5 М NaCI в течение 1 ч при посто нном покачивании. Затем промывали несколько рэз дистиллир н-чиной водой и вновь выдерживали в 0,5 М трис- HCI, рН 8.0 с 1,5 М NaCI и течеш-с 1 ч с последующей отмывкой дистиллированной водой.
Дл проведени блоттинга на столик электрофоретического аппарата накладывали 4 сло фильтровальной бумаги так, чтобы она свисала п камеру дл буфера. Фильтровальную бумагу смачивали 10xSSC и удал ли пузырьки воздуха при помощи стекл нной палочки. На фильтровальную бумагу аккуратно накладывали пластину агэрозы так, чтобы не было пузырьков воздуха . Работу проводили в резиновых перчатках . Нитроцеллюлазную мембрану (диаметр пор 0,45 мкм) предварительно выдерживали Е) дистиллированной ооде при температуре 90°С в течение 5 мин, Затем мембрану накладывали на эгарозу соответствующей ей размером. По кра м чгарозч помещали полоски полиэтиленовой пленки. Мембранный фильтр покрывали 4-8 сло ми фильтровальной бумаги, вырезанной, по размеру пластины. Сверху накладывали 2 сухих вафельных полотенца, сложенных по размеру, d на них устанавливали груз с массой 1 кг. В емкость дл буфера налипали 10xSSC и выдерживали 16 ч при комнатной температуре. После блоттинга нитроцеллюлозную мембрану снимали, выдерживали 5 мин в OxSSC и высушивали па воздухе при комнатной температуре 30 мин. Затем запекали мембрану под вакуум при температуре 00°С в течение 2 ч.
Дальнейшим этапом работы вл етс проведение гибридизации, где в качестве зонда используетс меченый ДНК бактериофага М13.
3. Приготовление меченого ДНК М13. К 0,5 мкг ДНК М13 добавл ли ськвенсооый праймер в количестве 2 мкл и еще 1 мкл буфера дл ник-трансл ции(Юх). 10х буфер содержит 0.1 М трис-HCI, рН 7,5, 0,1 М MgCl2, 1 М NaCI, 0.005 М 2-меркапгаэтанол,
0,1% тритон х-100. Вышеуказанную смесь ставили в термостат при температуре 65°С на 10 мин, а затем выдерживали при комнатной температуре 30 мин. За это врем происходит отжиг праймера с ДНК М13.
В пробирку с высушенной меткой (50 мкКи ) доба вл ли 8 ь:кл смеси намеченных трифосфатов (до 200 мкмоль), 1 мкл 10х буфера дл ник-трансл ции, 2 мкл
фрагмента Кленова и весь ДНК М13. Смесь выдерживали в течение 1 ч при комнатной температуре.
Зонд очищали от невключившихс трифосфатов колоночной хроматографией на
сефэдексе G-50. Удельна активность зонда определ лась на сцинтилл ционном счетчике , котора была равна о нашем опыте ч 2 НУ ими./мин мкг ДНК.
4. Предгибридизаци и гибридизаци .
Нитроцеллюлозную мембрану с фрагментами ДНК запаивали в полиэтиленовый пакет и шприцем вводили 17,2 мл предгибридиза- циоммой смеси.
Состав предгибридизационной смеси,
мл:
20х SSC10
20% SDS0.2
50х Dcnchord,2
ДистиллироЕ аннз вода5
После внесени смеси раствора из пакета удал ли пузырьки воздуха, плотно закрепл ли скрепками и выдерживали в вод ной бане при температуре 65°С в течение 2 ч.
После этого предгибридизационную смесь сливали и вносили в пакет гибридиза- ционную смесь в количестве 10 мл с меченным зондом и оставл ли на 16 ч при температуре 65°С.
Дл отмывки фильтров после гибридизации использовали смесь следующего со- сгопо мл:
;scso
20% 5
Дистиллированна вода945
После гибридизации пакет вскрывали. выливали смесь в емкость дл радиоактивных отходов и отмывали. Фильтр помещали о тнночку, заливали 200 мл отмывочного расгьора и выдерживали 1 ч при температуре 65°С. Повтор ли эту процедуру 2 раза. Чистоту отмыпки провер ли на приборе УИМ 2-2. Затем мембрану высушивали и помещали ц рентгенкасссту с рентгенплен- кой и оставп ли в холодильнике при температуре -70°С на 1G ч. По истечении времени экспозиции пленку про вл ли и делали -фотоснимки (чертеж 1),
На чертеже изображен радиоавтографический снимок расположени гипервариабильных последовательностей нуклеоти- дов после блот-гибридизации фрагментов ДНК различных видов микобактерий туберкулеза , расщепленных рестриктазой Есо 91 1.
В радиоавтографическом снимке четко видны специфические дл каждого вида микобактерий расположени полос.
Сравнительный анализ гипервариа- бильных участков различных видов туберку- леза показывает, что M.BovIs отличаетс от остальных видов наличием дополнительных мажорных фрагментов в области 21, 19, 16 тыс ч пар нуклеотидов (ТПН) и минорных фрагментов в области 20, 14, 11 тпн; M.kansasll дополнительно имеет мажорных фрагментов в области 17,7,5,3 ТПН, а также отличаетс наличием минорных фрагментов в области 13 ТПН: M.phlel отличаетс от остальных наличием минорных фрагментов в области 15. 10. 6 ТПН; M.lntracellulare отличаетс наличием минорных фрагментов в области 16 ТПН.
Claims (1)
1.Ъ г 3&%
f ; ... , - 9Ж
.
tft t+
г л
-Tim n н
-19m.n н
-15тпн. -Птпн
-3 т n н.
-1тпц
- 5/77/7//
-Ъгппн
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU4942381 RU2000331C1 (ru) | 1991-06-04 | 1991-06-04 | Способ вы влени микобактерий |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU4942381 RU2000331C1 (ru) | 1991-06-04 | 1991-06-04 | Способ вы влени микобактерий |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2000331C1 true RU2000331C1 (ru) | 1993-09-07 |
Family
ID=21577723
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU4942381 RU2000331C1 (ru) | 1991-06-04 | 1991-06-04 | Способ вы влени микобактерий |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2000331C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2163022C1 (ru) * | 1999-05-28 | 2001-02-10 | Московский городской научно-практический центр борьбы с туберкулезом | Способ диагностики туберкулеза |
-
1991
- 1991-06-04 RU SU4942381 patent/RU2000331C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Артюшин С.К., Фомин Б.А. и др. Бюл. ВИЭВ. 1987. 64. с.52-54. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2163022C1 (ru) * | 1999-05-28 | 2001-02-10 | Московский городской научно-практический центр борьбы с туберкулезом | Способ диагностики туберкулеза |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Weisblum et al. | Plasmid copy number control: isolation and characterization of high-copy-number mutants of plasmid pE194 | |
| US4358535A (en) | Specific DNA probes in diagnostic microbiology | |
| Plasterk et al. | Transposition of structural genes to an expression sequence on a linear plasmid causes antigenic variation in the bacterium Borrelia hermsii | |
| Stone et al. | Detection of Salmonella serovars from clinical samples by enrichment broth cultivation-PCR procedure | |
| Rantakokko-Jalava et al. | Optimal DNA isolation method for detection of bacteria in clinical specimens by broad-range PCR | |
| Parker et al. | A relaxed mutant with an altered ribosomal protein L11 | |
| JPS6391093A (ja) | 高分子量ｄｎａの迅速単離方法 | |
| HU196242B (en) | Process and reagent combination for identifying microorganisms by sandwich-hybridization of nucleic acids | |
| De la Cruz et al. | Hemolysis determinant common to Escherichia coli hemolytic plasmids of different incompatibility groups | |
| EP0547789A1 (en) | Process for lysing mycobacteria | |
| RAZIN et al. | Cleavage patterns of the mycoplasma chromosome, obtained by using restriction endonucleases, as indicators of genetic relatedness among strains | |
| CA2553286C (en) | Method for detecting pathogenic mycobacteria in clinical specimens | |
| Dillon et al. | A PCR assay for discriminatingNeisseria gonorrhoeaeβ-lactamase-producing plasmids | |
| Macrina et al. | Simple method for demonstrating small plasmid deoxyribonucleic acid molecules in oral streptococci | |
| Druel et al. | Aseptic meningitis after neurosurgery: a demonstration of bacterial involvement | |
| RU2000331C1 (ru) | Способ вы влени микобактерий | |
| Kaufmann et al. | Ribotyping of bacterial genomes | |
| EP0696638A1 (en) | Process for lysing mycobacteria | |
| JPS62266000A (ja) | 微生物の急速ｄｎａ試験 | |
| KR100436741B1 (ko) | 세균 검출용 유전자 및 이를 이용한 세균의 검출방법 | |
| US5593832A (en) | Method for forensic analysis | |
| Jolley | Multi-locus sequence typing | |
| Premaraj et al. | Use of PCR and sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis techniques for differentiation of Prevotella intermedia sensu stricto and Prevotella nigrescens | |
| Beul et al. | Characterisation of cryptic plasmids in clinical isolates of Bacteroides fragilis | |
| RU2289627C2 (ru) | СПОСОБ И НАБОР ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ДНК БАКТЕРИИ ЗАБОЛЕВАНИЯ ЛАЙМСКОГО БОРРЕЛИОЗА-Borrelia burgdorferi |