Claims (16)
1. Выделенный из коринебактерий полинуклеотид, содержащий полинуклеотидную последовательность, выбранную из группы, включающей: а) полинуклеотид, идентичный по крайней мере на 70% полинуклеотиду, кодирующему полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2, б) полинуклеотид, кодирующий полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, идентичную по крайней мере на 70% аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2, в) полинуклеотид, комплементарный полинуклеотидам, указанным в подпункте а) или б), и г) полинуклеотид, содержащий по крайней мере 15 последовательных пар оснований полинуклеотидной последовательности, указанной в подпункте а), б) или в).1. A polynucleotide isolated from corynebacteria containing a polynucleotide sequence selected from the group consisting of: a) a polynucleotide identical to at least 70% of the polynucleotide encoding the polypeptide that contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2, b) polynucleotide, a coding polypeptide that contains an amino acid sequence identical to at least 70% of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2, c) a polynucleotide complementary to polynucleotides, decree as specified in subparagraph a) or b), and d) a polynucleotide containing at least 15 consecutive base pairs of the polynucleotide sequence specified in subparagraph a), b) or c).
2. Полинуклеотид по п. 1, который представляет собой способную к репликации в коринебактериях, предпочтительно рекомбинантную, ДНК. 2. The polynucleotide according to claim 1, which is capable of replication in corynebacteria, preferably recombinant, DNA.
3. Полинуклеотид по п. 1, который представляет собой РНК. 3. The polynucleotide according to claim 1, which is an RNA.
4. Полинуклеотид по п. 2, содержащий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1. 4. The polynucleotide according to claim 2, containing the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 1.
5. Способная к репликации ДНК по п. 2, которая включает: (I) нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, или (II) по крайней мере одну последовательность, которая соответствует последовательности, указанной в подпункте (I), в пределах вырожденности генетического кода, или (III) по крайней мере одну последовательность, которая гибридизуется с последовательностью, комплементарной последовательности, указанной в подпункте (I) или (II), и при необходимости (IV) функционально нейтральные смысловые мутации в последовательности, указанной в подпункте (I). 5. Able to replicate DNA according to claim 2, which includes: (I) the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 1, or (II) at least one sequence that corresponds to the sequence specified in subparagraph (I), the degeneracy of the genetic code, or (III) at least one sequence that hybridizes with the sequence complementary to the sequence specified in subparagraph (I) or (II), and, if necessary (IV) functionally neutral sense mutations in the sequence specified in odpunkte (I).
6. Полинуклеотидная последовательность по п. 2, кодирующая полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2. 6. The polynucleotide sequence of claim 2, encoding a polypeptide that contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2.
7. Способ ферментативного получения L-аминокислот, прежде всего L-лизина, отличающийся тем, что осуществляют следующие стадии а) ферментацию с использованием продуцирующих L-аминокислоту коринебактерий, в которых по крайней мере усиливают, прежде всего сверхэкспрессируют, ген pfk или его кодирующие нуклеотидные последовательности, б) накопление L-аминокислоты в среде или в клетках бактерий и в) выделение L-аминокислоты. 7. A method for the enzymatic production of L-amino acids, especially L-lysine, characterized in that the following steps are carried out: a) fermentation using L-amino acid producing corynebacteria, in which at least the pfk gene or its coding nucleotide amplifiers are enhanced, especially overexpressed sequences, b) the accumulation of L-amino acids in the medium or in bacterial cells and c) the allocation of L-amino acids.
8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что применяют бактерии, в которых дополнительно усиливают другие гены пути биосинтеза целевой L-аминокислоты. 8. The method according to p. 7, characterized in that bacteria are used in which other genes of the biosynthesis pathway of the target L-amino acid are additionally enhanced.
9. Способ по п. 7, отличающийся тем, что применяют бактерии, в которых по крайней мере частично подавляют пути обмена веществ, препятствующие образованию L-лизина. 9. The method according to p. 7, characterized in that bacteria are used in which at least partially inhibit metabolic pathways that prevent the formation of L-lysine.
10. Способ по п. 7, отличающийся тем, что применяют штамм, трансформированный плазмидным вектором, который несет кодирующую нуклеотидную последовательность гена pfk. 10. The method according to p. 7, characterized in that a strain is used that is transformed with a plasmid vector that carries the coding nucleotide sequence of the pfk gene.
11. Способ по любому из пп. 7-10, отличающийся тем, что применяют коринебактерии, продуцирующие L-лизин. 11. The method according to any one of paragraphs. 7-10, characterized in that the use of corynebacteria producing L-lysine.
12. Способ по п. 8, отличающийся тем, что для ферментативного получения лизина применяют бактерии, в которых одновременно усиливают, прежде всего сверхэкспрессируют или амплифицируют, один или несколько генов, выбранных из группы, включающей 12.1 ген dapA, кодирующий дигидродипиколинат-синтазу, 12.2 ген рус, кодирующий пируваткарбоксилазу, 12.3 ген tpi, кодирующий триозофосфатизомеразу, 12.4 ген gap, кодирующий глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназу, 12.5 ген pgk, кодирующий 3-фосфоглицераткиназу, 12.6 ген lysE, кодирующий экспорт лизина. 12. The method according to p. 8, characterized in that for the enzymatic production of lysine, bacteria are used in which one or more genes selected from the group consisting of 12.1 dapA gene encoding dihydrodipicolinate synthase are enhanced, first of all, overexpressed or amplified, 12.2 Rus gene encoding pyruvate carboxylase, 12.3 tpi gene encoding triose phosphate isomerase, 12.4 gap gene encoding glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, 12.5 pgk gene encoding 3-phosphoglycerate kinase, 12.6 lysE gene encoding lysine export.
13. Способ по п. 9, отличающийся тем, что для ферментативного получения L-лизина применяют бактерии, в которых одновременно ослабляют один или несколько генов, выбранных из группы, включающей 13.1 ген pck, кодирующий фосфоенолпируваткарбоксикиназу, 13.2 ген pck, кодирующий глюкозо-6-фосфатизомеразу. 13. The method according to p. 9, characterized in that for the enzymatic production of L-lysine, bacteria are used that simultaneously weaken one or more genes selected from the group comprising 13.1 pck gene encoding phosphoenolpyruvate carboxykinase, 13.2 pck gene encoding glucose-6 -phosphatisomerase.
14. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что применяют микроорганизмы вида Corynebacterium glutamicum. 14. A method according to any one of the preceding paragraphs, characterized in that microorganisms of the species Corynebacterium glutamicum are used.
15. Применение полинуклеотидных последовательностей по п. 1 в качестве праймеров для конструирования с помощью полимеразной цепной реакции ДНК генов, кодирующих фосфофруктокиназу. 15. The use of polynucleotide sequences according to claim 1 as primers for constructing, using the polymerase chain reaction, DNA of genes encoding phosphofructokinase.
16. Применение полинуклеотидных последовательностей по п. 1 в качестве гибридизационных зондов. 16. The use of polynucleotide sequences according to claim 1 as hybridization probes.