RU1807393C

RU1807393C - Способ отсроченного определени гликемии

Info

Publication number: RU1807393C
Authority: RU
Inventors: Наталия Николаевна Качина; Галина Геннадьевна Ковалева; Виталий Николаевич Крюков; Виталий Ефимович Формазюк
Original assignee: Совместное советско-германское предприятие "Константа"
Priority date: 1990-11-14
Filing date: 1990-11-14
Publication date: 1993-04-07

Abstract

Использование: относитс к медицине, а именно к судебной медицине. Цель изобретени - повышение точности. Сущность изобретени : в сухом п тне крови трупа определ ют содержание гликированного гемоглобина и при увеличении его содержани в 2-3 раза по сравнению с нормой определ ют гликемию. Положительный эффект: изобретение позволит определить уровень гликемии за истекшие 3-4 мес ца жизни..

Description

Изобретение относитс к области медицины , а именно к судебной медицине.

Цель изобретени - повышение точности .

Пример 1. Женщина 60 лет, смерть наступила от кровоизли ни в желудочки мозга в результате закрытой черепно-мозговой травмы. Кровь берут шприцом из бедренной вены и исследуют через 1-1,5 часа после изь ти следующим образом. Сначала определ ют концентрацию общего гемоглобина методом, примен емым в клинико-диагностической лаборатории и переведенную в моль/л. Дл этого в /йл трансформирующего раствора, состо щего ; из ацетоциангидрина -0,5 мл, кали желе- зистосинеродистого - 200 мг, натри двууглекислого- 1 г и дистиллированной воды до 1 л добавл ют 10 мкл цельной жидкой трупной крови, дают посто ть 20 мин и затем колориметрируют на спектрофотометре СФ-26 против холостой, пробы при длине волны 540 нм. Экстинкци общего гемоглобина равна 0,350, затем по калибровочному графику находим концентрацию общего гемоглобина , она равна 13,1 г %, что соответствует при переводе в моль/л - 2,03 .

Затем определ ют концентрацию гликированного гемоглобина. Дл этого в пробирку наливают 0,1 мл цельной трупной крови, добавл ют 0,9 мл дистиллированной воды и 0,5 мл 0,2 н раствора трихлоруксусной кислоты . Пробирку закрывают резиновой проб- кой. в которую вставлена инъекционна игла. Пробу перемешивают и став т в штатив , помещенный в кип щую вод ную баню. Через 10 мин иглы вынимают. Пробу нагревают еще 50 мин (общее врем нагрева 60 мин). Затем пробу вынимают и после охлаждени к ней добавл ют 0,5 мл 40%-ного раствора трихлоруксусной кислоты (дл осаждени белков), После перемешивани пробу центрифугируют 10 мин при 6000 об/мин, Затем в обычную пробирку аккуратно отбирают 1 мл надосадочной жидкости и добавл ют 1 мл концентрированной сол ной кислоты и 1 мл 0,02 м раствора тиобар- битуровой кислоты. Пробу перемешивают, пробирку закрывают стекл нной пробкой слезкой и инкубируют 6 мин на кип щей вод ной бане. После инкубации измер ют величину экстинкции окрашенного комп-, лекса при длине волны 432,5 нм. Окраска стабильна в течение 1 ч. Контрольна проба

ел

с

оо

О

XI со о со

содержит 1 мл дистиллированной воды, 1 мл концентрированной сол ной кислоты 1 мл 0,02 м раствора тиобарбитуровой кислоты, контроль нагревают 6 минут на кип щей вод ной бане.

Содержание гликировэнного гемоглобина в крови выражают в процентах от сум- марного гемоглобина. Определение концентрации гликированного гемоглобина провод т по калибровочному графику, построенному по стандартным растворам ке- тоаминного соединени - фруктозоглицина величина экстинкции которого соответствует величине экстинкции гликированного гемоглобина .

Величина экстинкции гликированного гемоглобина равна 0,085, что по калибровочному графику соответствует концентрации 3,25 1СГ4 моль/л. Далее подставл ем-в формулу:

(%) Ю0%

1л25 1° .0% 2,203 10 3 2

Параллельно определ ют количественное содержание глюкозы в крови глюкозо- оксидазным методом, дл чего в центрифужную пробирку наливают 0,2 мл 5%-ного раствора сернокислого цинка, 0,2 мл 0,3 н раствора едкого натра, 0,5 мл дистиллированной воды и 50 мкл крови. Центрифугируют 5 мин при 4000 об/мин, отбирают 0,5 мл надосадочной жидкости и добавл ют 2,0 мл рабочего раствора, состо щего из I H ацетатного буфера с ,8, глюкозооксидазы, пероксидазы и 1%-ного раствора ортотолидина в абсолютном спирте . Осторожно перемешивают и провод т исследование через 15 мин. Колориметри- руют при длине волны 620 нм против холостой пробы. Результат смотр т по калибровочному графику в мг%. В данном случае содержание глюкозы в крови равно - 0,0 мг%.

Затем высушивают данный образец крови в чашке Петри в эксикаторе, распределив его тонким слоем, в течение суток. После этого приступают к определению гликированного гемоглобина и глюкозы в сухом п тне. Дл этого навеску сухой крови массой 120 мг помещают в пробирку.растирают стекл нной палочкой и заливают 0,8 мл раствора . Оставл ют сто ть 50-60 мин;посто н- но перемешива палочкой.

Определение общего гемоглобина провод т по выше указанной методике с добав- лением 20 мкл раствора крови. Концентраци его по калибровочному графику и переведенна в моль/л равна 1,57 КГ3.

Дл определени концентрации гликированного гемоглобина в пробирку набирают

0,2 мл раствора крови, добавл ют 0,8 мл дистиллированной воды и 0,5 мл 0,2 н раствора трихлоруксусной кислоты. Далее исследование идет по выше указанной методике. Содержание гликированного гемоглобина в

крови выражают в процентах от суммарного гемоглобина. Величина гликированного гемоглобина по калибровочному графику соответствует концентрации 2,52 моль/л. Далее подставл ют в формулу, параллельно

определ ют количественное содержание глюкозы в растворе крови глюкозооксидаз- ным методом, дл чего в центрифужную пробирку наливаем 0,2 мл 5%-ного раствора сернокислого цинка, 0,2 мл 0,3 н раствора

едкого натра, 0,5 мл дистиллированной воды и 100 мкл раствора крови.

Результат смотр т по калибровочному графику в мг%, В данном случае содержание глюкозы в сухом п тне крови равно - 0,0

мг%.

Пример 2. Мужчина 60 лет, смерть наступила от интоксикации в результате рака желудка с прорастанием в поджелудочную железу, Кровь вз та шприцом из

бедренной вены. Исследовани провод т соответственно вышеописанным методикам; сначала в жидкой цельной крови, затем через трое суток в сухом п тне крови. Содержа ние гликированного гемоглобина и глюкозы

в жидкой цельной крови, соответственно, было равно: 4,23% и 0,00 мг%.

Содержание гликированного гемоглобина и глюкозы в сухом п тне крови, спуст трое суток после высушивани , соответственно , было равно: 4,3% и 0,00 мг%.

Пример 3. Мужчина 41 года, смерть наступила в результате разрушени головного мозга при огнестрельном ранении в голову. Кровь вз та шприцом из бедренной

вены. Содержание гликированного гемоглобина и глюкозы в жидкой цельной крови, соответственно , было равно: 4,5% и 0,00 мг%. Содержание гликированного гемоглобина и глюкозы в сухом п тне крови, спуст

сутки после высушивани , соответственно, было равно: 4,59% и 0,00 мг%.

Использование изобретени позволит определить уровень глюкозы за истекшие 3-4 мес ца жизни.

Claims

Формула изобретени Способ отсроченного определени глике-- мии путем биохимического исследовани сухого п тна трупной крови, отличающий51807393 6

с тем, что, с целью повышени точности, его в 2-3 раза по сравнению с нормой опре- определ ют содержание гликированного дел ют гликемию, гемоглобина и при увеличении содержани