RU1797059C - Способ определени эндогенной интоксикации - Google Patents

Abstract

Способ определени  эндогенной интоксикации , Использование: в медицине, в ла . .I бораторной практике. Цель: повышение точности , упрощение и ускорение способа. Сущность изобретени : после осаждени  белка крови трихлоруксусной кислотой, центрифугировани , к супернатанту добавл ют щелочь и реактив Бенедикта и через 15 мин устанавливают оптическую плотность пробы при 330 нм и при значени х более 0,25 опт.ед./мл определ ют наличие эндогенной интоксикации. Положительный эффект: использование способа позволит на 20% и более повысить точность способа и почти в 1,5 раза ускорить его.

Description

Изобретение относитс  к медицине и предназначено дл  диагностики эндогенных интоксикаций любого происхождени .

Известен способ диагностики эндогенной интоксикации при почечной недостаточности путем определени  в сыворотке крови субстратов эндогенной интоксикации средней молекул рной массы с помощью обработки сыворотки крови 20-25% трихлоруксусной кислотой с последующим центри- фугированием и определением в супернатанте белково-пептидных компонентов методом Лоури.

К недостаткам известного способа относ тс  недостаточно высока  точность, определенна  техническа  сложность, что св зано с использованием метода Лоури. На осуществление аналитического этапа способа затрачиваетс  не менее АО минут.

Целью изобретени   вл етс  повышение точности, упрощение и ускорение способа диагностики эндогенной интоксикации.

Цель достигаетс  тем, что сыворотку или плазму крови депротеинируют трихлоруксусной кислотой в конечной концентрации не менее 8%, отдел ют осадок белка центрифугированием, в супернатанте провод т биуретовую реакцию с реактивом Венедикта и через 15 мин (после добавлени  реактива Бенедикта) провод т спектрофото- метрическое определение в супернатанте субстратов эндогенной интоксикации - определ ют оптическую плотность пробы при 330 нм, и при значени х более 0,25 опт.ед./мл диагностируют эндогенную интоксикацию .

Способ осуществл ют следующим образом .

Образцы биологической жидкости (сыворотки или плазмы крови) в количестве 1,0 мл депротеинируют добавлением 0,2 мл трихлоруксусной кислоты в конечной концентрации не менее 8%:

- через 5 мин осадок белка отдел ют центрифугированием: центрифугирование осуществл ют в течение 5-15 мин при 3000 об/мин:

(Л

XI

о

VJ

о ел

Ч)

- после осаждени  белка провод т в супернатанте биуретовую реакцию с реактивом Бенедикта: 0,5 мл супернатанта перенос т в пробирки, содержащие 1,5 мл НаО и 2,0 мл 6%-ного раствора NaOH, добавл ют 0,2 мл реактива Бенедикта (опыт); в контрольные пробирки вместо супернатанта внос т дистиллированную воду; , - не менее чем через 15 минут измер ют оптическую плотность пробы при 330 нм в опыте и контроле в кюветах с длиной оптического пути 10 мм;

- количество субстратов эндогенной интоксикации (биуретположительных веществ ) выражают в единицах оптической плотности при 330 нм на 1 мл биологической жидкости. Дл  расчета величину оптической плотности Еззо умножают на 2 (дл  приведени  к 1 мл) и на разведение, которое складываетс  из разведени  биологической жидкости при депротеинировании в 1,2 раза и исходного разделени  биологического материала (если таковое имеетс );

- при величине оптической плотности, превышающей 0,25 опт.ед./мл диагностируют эндогенную интоксикацию.

Осуществление за вл емого способа при обследовании 14 здоровых доноров показало , что среднее значение содержани  субстратов эндогенной интоксикации в норме составл ет 0,22 ±0,01 опт.ед./мл, а предельное значение (верхн   граница нормы) дл  содержани  биуретположительных веществ-0 ,25 ед./мл.

Пример 1. Больной Д-н поступил с проникающим ранением толстого кишечника . На второй день после оперативного вме- шательства состо ние ухудшилось, развилс  разлитой перитонит, t 39,5 . У больного вз то 4 мл крови, которую центрифугировали в течение 10 минут при 3000 об/мин. К 1,0 мл полученной сыворотки добавл ли 0,2 мл 60% ТХУ, центрифугировали в течение 30 минут при 3000 .об/мин. Полученный супернатант - 0,5 мл - перенесли в пробирку, добавили 1,5 мл дистиллированной воды и 2,0 мл 6% NaOH и 0,2 мл реактива Бенедикта. Через 15 минут замер ли оптическую плотность при 330 нм против контрол  (в контроле замен ли сыворотку крови на 0,9% Nad). Величина оптической

плотности - 0,434 ед., т.е. содержание субстратов эндогенной интоксикации составило 1,042 опт. ед/мл, что превышает верхнюю границу нормы в 4,17 раза. В соответствии с предложенным способом постзвлен диагноз: синдром эндогенной интоксикации. Диагноз подтвержден клинически .

П р им е р 2. Больной Ч-в, 2.9 лет, Поступил с жалобами на боли в правой подвздошной области, слабость, головную боль, диспептические  влени , t ° 39,7° С, При физикальном обследовании заподозрен острый аппендицит. При оперативном вмешательстве был удален гангренозноизмененный аппендикул рный отросток, обнаружен местный перитонит. В соответствии с предложенным способом определено содержание субстратов эндогенной интоксикации в сыворотке крови больного; Еззо 0,252

ед., содержание биуретположительных субстратов эндогенной интоксикации - 0,605 опт.ед./мл, что превысило верхнюю границу нормы в 2,42 раза. Диагноз: эндогенна  интоксикаци , что соответствует клиническому состо нию больного.

По сравнению со способом-прототипом повысилась точность диагностики. Способ более прост в техническом осуществлении, так как содержит меньше технологических

операций. Продолжительность аналитического этапа предложенного способа составл ет 15 мин.