RU1775882C - Способ консервирования эритроцитов - Google Patents
Способ консервирования эритроцитов Download PDFInfo
- Publication number
- RU1775882C RU1775882C SU4844856A RU1775882C RU 1775882 C RU1775882 C RU 1775882C SU 4844856 A SU4844856 A SU 4844856A RU 1775882 C RU1775882 C RU 1775882C
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- freezing
- speed
- medium
- erythrocytes
- propanediol
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к криобиологии. Целью изобретения является повышение качества целевого продукта за счет снижения токсичности при его использовании. Эритроциты замораживают в два этапа: на первом до температуры кристаллизации консервируемой среды, на второй со скоростью 30 - 100°С/мин до (-170) (-180)°С. Замораживание осуществляют в среде, содержащей, мас. 1,2-пропандиол 20 26; поливинилпирролидон ( мол.мас. 11090)8 12; хлористый натрий 0,5 0,9; вода бидистиллированная остальное. 6 табл.
Description
Изобретение относится к криобиологии, а именно к низкотемпературному консервированию эритроцитов человека, и может быть использовано на станциях переливания крови.
Известен способ консервирования эритроцитов под защитой глицерина. Однако этот способ требует нескольких отмывок из-за его высокой токсичности, в результате чего большое теряется количество (до 10%) клеток.
Наиболее близким к заявляемому является способ консервирования эритроцитов, согласно которому их замораживают со скоростью 1214оC/мин до (-150)-(-170)оС в среде, содержащей 37% 1,2-пропандиола (1,2-ПД), сахарозу, хлористый натрий и воду бидистиллированную, затем погружают в жидкий азот и хранят при -196оС. После размораживания их отмывают одноэтапно и ресуспендируют.
Недостатком этого способа является то, что после отмывки в эритромассе остается достаточно большое количество 1,2-ПД (около 1,5%), что не позволяет переливать большие объемы крови.
Целью изобретения является повышение качества целевого продукта за счет снижения токсичности при его использовании.
Способ осуществляют следующим образом. Эритроциты центрифугируют при 35000 об/мин (2050g) в течение 15 мин и удаляют надосадок и слой лейкоцитов. Смешивают (1: 1) c криоконсервирующей средой, содержащей, мас. 1,2-ПД 20-26 ПВП-11090 8-12 NaCl 0,5-0,9 Вода бидистил- лированная Остальное
Через 15 мин эритровзвесь центрифугируют при 35000 об/мин в течение 15 мин, удаляют супернатант и слой лейкоцитов. Эритроцитную массу помещают в контейнер и охлаждают до температуры кристаллизации консервирующей среды (-14)-(-16)оС. Охлаждение на первом этапе должно осуществляться медленно (не выше 2оС/мин), так как чем ниже скорость охлаждения, тем при более высокой отрицательной температуре можно получить кристаллы льда в образце. Достигнув температуры кристаллизации, выдерживают 10-15 мин и замораживают со скоростью 30-100оС/мин (-170)-(-180)оС, затем погружают в жидкий азот и хранят при -196оС. Отогревают сначала до (-80)-(-110)оС со скоростью 10оС/мин, а затем со скоростью 80-100оС/мин. Размороженные эритроциты отмывают одноэтапно для чего их суспендируют в среде N 1 (1:1), содержащей 10% сахарозы, 1,5% NaCl и воду бидистиллированную, а затем добавляют среду N 2, (1:1), содержащую сахарозу, 0,9% NaCl и воду бидистиллированную.
Через 15 мин эритровзвесь центрифугируют при 35000 об/мин в течение 15 мин, удаляют супернатант и слой лейкоцитов. Эритроцитную массу помещают в контейнер и охлаждают до температуры кристаллизации консервирующей среды (-14)-(-16)оС. Охлаждение на первом этапе должно осуществляться медленно (не выше 2оС/мин), так как чем ниже скорость охлаждения, тем при более высокой отрицательной температуре можно получить кристаллы льда в образце. Достигнув температуры кристаллизации, выдерживают 10-15 мин и замораживают со скоростью 30-100оС/мин (-170)-(-180)оС, затем погружают в жидкий азот и хранят при -196оС. Отогревают сначала до (-80)-(-110)оС со скоростью 10оС/мин, а затем со скоростью 80-100оС/мин. Размороженные эритроциты отмывают одноэтапно для чего их суспендируют в среде N 1 (1:1), содержащей 10% сахарозы, 1,5% NaCl и воду бидистиллированную, а затем добавляют среду N 2, (1:1), содержащую сахарозу, 0,9% NaCl и воду бидистиллированную.
После центрифугирования и удаления надосадка эритроциты ресуспендируют во взвешивающем растворе ЦНИИГПК-8в.
П р и м е р 1. К 125 мл эритромассы приливали 125 мл консервирующей среды, содержащей, мас. 1,2-ПЛ 20 ПВП-11090 10 NaCl 0,5 Вода бидистил- лированная Остальное
Через 15 мин центрифугировали при 2050 g 15 мин. Надосадок и слой лейкоцитов удаляли, а эритромассу объемом 120 мл переливали в контейнер и охлаждали со скоростью 1оC/мин до -16оС и выдерживали при этой температуре 10 мин.
Через 15 мин центрифугировали при 2050 g 15 мин. Надосадок и слой лейкоцитов удаляли, а эритромассу объемом 120 мл переливали в контейнер и охлаждали со скоростью 1оC/мин до -16оС и выдерживали при этой температуре 10 мин.
Затем образцы замораживали со скоростью 30оС/мин до -170оС и переносили в жидкий азот, где хранили при -196оС. Отогревание контейнера осуществляли со скоростью 10оС/мин до -110оС. Затем переносили в водяную баню с температурой 42оС на 100c (80оС/мин). К эритромассе добавляли (1:1) раствор N 1, затем раствор N 2. Поле центрифугирования и удаления надосадка к эритромассе добавляли (1:1) раствор ЦНИИГПК-8в.
Сохранность эритроцитов определяли по гемолизу, который составил 96% Концентрацию остаточного 1,2-ПД определяли методом ЯМР (0,73±0,14%).
П р и м е р 2. Способ осуществляли в соответствии с примером 1, за исключением того, что консервирующая среда содержала различную концентрацию 1,2-ПД. Результаты представлены в табл. 1.
Из табл. 1 видно, что при концентрации 1,2-ПД выше 26% и ниже 18% увеличивается гемолиз эритроцитов, что свидетельствует о низкой сохранности эритроцитов. Следовательно, среду с такими концентрациями 1,2-ПД нельзя применять для достижения поставленной цели.
П р и м е р 3. Способ осуществляли в соответствии с примером 1, за исключением того, что в консервирующей среде варьировали концентрацию ПВП-11090. Результаты представлены в табл. 2.
Из табл. 2 следует, что оптимальная концентрация ПВП в среде 12% При уменьшении концентрации ПВП возрастает гемолиз, а при увеличении наблюдается агломерация эритроцитов.
П р и м е р 4. Способ осуществляли аналогично примеру 1, за исключением того, что для замораживания использовали среды, одна из которых содержала максимальные концентрации компонентов, другая минимальные, третья и четвертая запредельные. Результаты представлены в табл. 3.
Из табл. 3 видно, что при использовании среды с концентрациями компонентов ниже заявляемых резко возрастает гемолиз эритроцитов, а при более высоких концентрациях происходит их агломерация.
П р и м е р 5. Способ осуществляли аналогично примеру 1, за исключением того, что изменяли температуру охлаждения на первом этапе.
Из табл. 4 видно, что замораживание на первом этапе до температур выше или ниже температуры кристаллизации среды приводит к увеличению гемолиза.
П р и м е р 6. Способ осуществляли аналогично примеру 1, за исключением того, что изменяли скорость замораживания на втором этапе, результаты представлены в табл. 5.
Из табл. 5 следует, что оптимальная скорость охлаждения на втором этапе до 110оС/мин. При повышении или понижении скорости гемолиз возрастает.
Использование в консервирующей среде ПВП-11090 вместо сахарозы и новый режим замораживания позволяют снизить концентрацию ПД в среде и соответственно снизить концентрацию остаточного ПД в консервированных эритроцитах, не понижая при этом уровень сохранности клеток.
Таким образом, заявляемый способ позволяет снизить концентрацию остаточного 1,2-ПД в консервированных эритроцитах на 20-40% не снижая их сохранности. Это дает возможность использовать криоконсервированные эритроциты для трансфузий в больших объемах.
Claims (1)
- СПОСОБ КОНСЕРВИРОВАНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ, включающий отделение плазмы, добавление к эритроцитам консервирующего раствора, содержащего 1,2-пропандиол, хлористый натрий, бидистиллированную воду, центрифугирование с последующим замораживанием осадка при (-150) (-170)oС, хранением в жидком азоте, отогреве и отмывании при использовании, отличающийся тем, что, с целью повышения качества целевого продукта за счет снижения токсичности при его использовании, консервирующий раствор содержит 8 12 мас. водного раствора поливинилпирролидона (мол. м. 12000 ± 2700), 20 26 мас. 1,2-пропандиола, 0,5 0,9 мас. хлористого натрия, а замораживание проводят вначале со скоростью 1oС / мин до (-16)oС, затем со скоростью 30 - 100oС / мин.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU4844856 RU1775882C (ru) | 1990-05-29 | 1990-05-29 | Способ консервирования эритроцитов |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU4844856 RU1775882C (ru) | 1990-05-29 | 1990-05-29 | Способ консервирования эритроцитов |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU1775882C true RU1775882C (ru) | 1995-09-10 |
Family
ID=30441853
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU4844856 RU1775882C (ru) | 1990-05-29 | 1990-05-29 | Способ консервирования эритроцитов |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU1775882C (ru) |
-
1990
- 1990-05-29 RU SU4844856 patent/RU1775882C/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Методические рекомендации МЗ СССР, Харьков, 1990. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4059967A (en) | Process for freezing blood platelets | |
US5309723A (en) | Method of freezing red blood cells | |
US4473552A (en) | Anaerobic method for preserving whole blood, tissue and components containing living mammalian cells | |
Pegg | Long-term preservation of cells and tissues: a review. | |
US3347745A (en) | Process for freezing erythrocytes | |
JP2007519712A (ja) | 生物学的材料ならびに生物学的材料の保存のための方法および溶液 | |
Huggins | Prevention of hemolysis of large volumes of red blood cells slowly frozen and thawed in the presence of dimethylsulfoxide | |
CN112167243B (zh) | 红细胞冻存液及快速冻存方法 | |
RU1775882C (ru) | Способ консервирования эритроцитов | |
Cohen et al. | Platelet preservation. II. Preservation of canine platelet concentrates by freezing in solutions of glycerol plasma | |
Lionetti et al. | Improved method for the cryopreservation of human red cells in liquid nitrogen with hydroxyethyl starch | |
Doebbler et al. | Cryogenic preservation of whole blood for transfusion in vitro study of a process using rapid freezing, thawing and protection by polyvinylpyrrolidone | |
RU2195111C1 (ru) | Способ криоконсервирования клеточных суспензий | |
Baar | Albumin and Hydroxy‐Ethyl Starch in the Cryopreservation of Red Cells—an In Vitro Study | |
Spieles et al. | The effect of storage temperature on the stability of frozen erythrocytes | |
Weatherbee et al. | The effect of plasma on hydroxyethyl starch-preserved red cells | |
Greenwood et al. | Hydroxyethyl starch as a cryoprotective agent for human red blood cells the relation between the molecular properties and the cryoprotective effect | |
SU596202A1 (ru) | Способ консервировани эритроцитов | |
RU2138162C1 (ru) | Способ криоконсервации богатой тромбоцитами плазмы | |
RU2051580C1 (ru) | Способ консервации эритроцитов | |
SU888896A1 (ru) | Способ консервации эритроцитов | |
Pegg | Cryobiology-a review | |
UA149378U (uk) | Спосіб кріоконсервування еритроцитів собак | |
Kim et al. | Influence of pre-freeze treatment and cryo-storagetemperature on the post-thaw stability of canine red blood cells cryopreserved in the presence of hydroxyethyl starch | |
Scheiwe et al. | A method of calculation of optimal cooling rates for cryopreservation of blood cells on the basis of volume loss during freezing |