RU1768636C - Способ получени антигена вируса болезни Гамборо - Google Patents

Abstract

Использование: биотехнологи , вирусологи , способ получени  высокоактивного специфического антигена дл  постановки реакции диффузионной преципитации и других серологических реакций при диагностике болезни Гамборо. Сущность изобретени : используют 35-40-дневных цыпл т, бурсальный индекс которых составл ет не менее 5,0. При этом вз тие фабрициевых сумок дл  выделени  вируса болезни Гамборо осущеставл ют спуст  90-96 ч после заражени  вирусом. 1 табл.

Description

Изобретение относитс  к вирусологии и может быть использовано при получении высокоактивного специфического антигена дл  постановки реакции диффузионной пре- ципитзции /РДП/ и других серологических реакций при диагностике болезни Гамборо.

За рубежом известны способы получени  антигена дл  постановки серологических реакций при диагностике болезни Гамборо путем заражени  свободных от патогенной микрофлоры цыпл т /СПФ-цып- л т/ 21-дневного возраста, вз ти  от них фабрициевых сумок, выделени  и очистки антигена /1,2,3/.

Недостатком указанных способов  вл етс  использование СПФ-цыпл т, стоимость которых не менее чем в 10 раз дороже, чем обычных, промышленных.

Целью изобретени   вл етс  упрощение и удешевление способа получени  антигена вируса болезни Гамборо, пригодного дл  постановки серологических реакций при диагностике этого заболевани .

Поставленна  цель достигаетс  тем, что антиген готов т с использованием цыпл т

из промышленных стад 35-40-дневного возраста .

Перед заражением, с целью определени  пригодности данной группы цыпл т дл  получени  антигена, определ ют среднее соотношение массы фабрициевой сумки и общей массы птицы /бурсальный индекс/. Дл  этого из общей группы птиц методом случайной выборки отлавливают 5-10 цыпл т , убивают и индивидуально взвешивают цыпл т и их фабрициевы сумки, а затем определ ют индекс по формуле:

Имс/Мт

Мс

Мт

1000,

О 00

о

СА СЬ

где Мс - масса фабрициевой сумки, г; Мт - масса тела, г.

На основании индивидуальных индексов Мс/Мт высчитывают среднеарифметическое значение индекса. Цыпл та считаютс  пригодными дл  получени  антигена при значении среднеарифметических показателей Имс/Мт не ниже 5,00,,

Цыпл т убивают через 90-96 часов после заражени , отбирают фабрициевы сумки , гомогенизируют их в 0,601М фосфатно-буферном растворе /рН 7,2-7,4/ в соотношении 1:1 /вес объем/, трижды замораживают и оттаивают, обрабатывают ультразвуком с част стой 18000 Гц в течение 1 мин, центрифугируют при 4000 об./мин в течение 30 мин. Собирают надосадочную жидкость и инактивируют ее.

Инактивацию антигена провод т при температуре 37,0±0,5°С в течение б ч при непрерывном помешивании вирусного материала в присутствии димерэтиленимина в конечной концентрации 0.2%.

Полноту инактивации провер ют путем заражени  чувствительных цыпл т или куриных эмбионов.

Полученный антиген  вл етс  универсальным и может быть использован в реакции диффузионной преципитации, встречном мммуноэлектрофорезе, иммуно- ферментном анализе.

Сравнение литературных данных по получению активного антигена вируса болезни Гзмборо на СПФ-птице и по предлагаемому способу, с использованием цыпл т из промышленных стад, свидетельствует о том, что активность получаемого антигена и в том, и в другом случае одинакова. Так, в исследовани х K.HIra et al. /1/, прсведе- ных на СПФ-цыпл тах, максимальна  активность антигена вируса болезни Гамборо в реакции диффузионной преципитации составила 1:16-1:32 и активность полученного предлагаемым способом антигена была на том же уровне.

Пример 1. В таблице приведены данные, характеризующие зависимость активности преципитирующего антигена в фабрициевой сумке больных цыпл т от формы и т жести течени  заболевани . Как следует из приведенных данных, максимальное накопление антигена происходит при остром течении заболевани  в возрасте 35-40 дней на 4 день после заражени .

П р и м е р 2. Как следует из данных таблицы, острое течение болезни с высокой степенью накоплени  антигена в фабрициевой сумке имеет место, если дл  заражени  использовали цыпл т с бурсэльным индексом не ниже 5,0. Тогда как заражение

цыпл т с бурсальным индексом в пределах 0,91-4,57 не сопровождаетс  клиническими про влени ми заболевани  и не позвол ет получить активный антиген.

ПримерЗ. При заражении цыпл т

35-40-дневного возраста с бурсальным индексом не ниже 5,0 наибольша  активность антигена (1:16-1:32) имеет место лишь на 4-й день после заражени , т.е. через 90-96 часов

/см. таблицу/. Тогда как на 3-й день активность антигена составл ет 1:8, а на 5-й - 1:2-1:4, Эти данные указывают на необходимость вз ти  фабрициевых сумок от больных цыпл т через 90-96 ч после заражени .

Использование предложенного в качестве изобретени  способа получени  антигена вируса болезни Гамборо позвол ет по сравнению с существующими способами снизить затраты на цыпл т, из фабрициевых

сумок которых получают антиген, не менее чем в 10 раз, так как выведение и выращивание свободных от патогенной микрофлоры животных требует применени  сложного дорогосто щего оборудовани , необходимого дл  поддержани  строгой изол ции от внешней среды.

При этом активность антигена, полученного за вл емым способом, не ниже, чем у известных,

Антиген, изготовленный по предлагаемому способу, чувствителен, специфичен, прост в получении.

Claims (1)

1. Формула изобретени  Способ получени  антигена вируса болезни Гамборо, включающий отбор попул ции цыпл т, заражение их вирулентным вирусом болезни Гзмборо, вз тие фабрициевых сумок, приготовление гомогената, обработку его ультразвуком с последующей

   инактивацией вируса, отличающийс  тем, что, с целью повышени  выхода целевого продукта, производ т отбор попул ции цыпл т 35...40-дневного возраста с бурсальным индексом, определ емым по формуле:

   БИ -gs. 1000,

   где Мс - масса фабрициевой сумки, г;

   Мт масса тела цыпленка, г, не ниже 5.0, а вз тие фабрициевых сумок осуществл ют спуст  90...96 ч после заражени  вирулентным вирусом болезни Гамборо .

   Активность антигена вируса болезни Гамборо в реак

   диффузионной преципитеции в зависимости от возраста зараженных цыпл т и сроков вз ти  патматериала