RU1522485C

RU1522485C - Method of immunostimulating agent preparing

Info

Publication number: RU1522485C
Authority: RU
Inventors: В.Х. Хавинсон; В.Г. Морозов; Н.М. Хмельницкая; С.В. Серый
Original assignee: Хавинсон Владимир Хацкелевич; Морозов Вячеслав Григорьевич; Хмельницкая Наталья Михайловна; Серый Сергей Владимирович
Priority date: 1987-11-23
Filing date: 1987-11-23
Publication date: 1994-11-15

Abstract

FIELD: medicinal industry. SUBSTANCE: method involves raw purification, freezing, grinding, extraction with 3% acetic acid solution with addition of zinc chloride, filtration, treatment of supernatant with acetone, precipitate separation, its redissolving in water and lyophilization of the end product. Human tonsils are the source of raw. Extraction is carried out in 20-25 volumes of acetic acid. Prepared product enhances the tonsil function. EFFECT: increased specific activity of the end product.

Description

Изобретение относится к медицинской промышленности, в частности к выделению биологически активных веществ для повышения функции миндалин. The invention relates to the medical industry, in particular to the allocation of biologically active substances to enhance the function of the tonsils.

Цель изобретения - повышение специфической активности целевого продукта. The purpose of the invention is to increase the specific activity of the target product.

Способ получения биологически активного вещества из миндалин включает очистку сырья, замораживание, измельчение, экстракцию 3%-ным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка, фильтрацию, обработку надосадочной жидкости ацетоном, отделение осадка, перерастворение его в воде и выделение целевого продукта. В качестве сырья используют миндалины человека, экстракцию проводят в 20-25 объемах уксусной кислоты. A method of obtaining a biologically active substance from tonsils includes purification of raw materials, freezing, grinding, extraction with a 3% solution of acetic acid with the addition of zinc chloride, filtration, treatment of the supernatant with acetone, separation of the precipitate, its re-dissolution in water and isolation of the target product. As raw materials, human tonsils are used, extraction is carried out in 20-25 volumes of acetic acid.

П р и м е р 1. Миндалины после тонзиллэктомии очищают от крови, пленок и налета и замораживают при -20^оС. Собранные миндалины в количестве 0,5 кг измельчают и загружают в реактор с мешалкой, заливают 10 л 3%-ного раствора уксусной кислоты. Туда же добавляют 0,01 кг хлористого цинка и экстрагируют 48 ч, перемешивая в течение 1 ч через каждые 8 ч. По окончании экстракции субстрат сливают и центрифугируют 20 мин со скоростью 3000 об/мин, надосадочную жидкость декантируют, к ней добавляют ацетон (1 ч. элюата и 5 ч. ацетона), перемешивают и формируют осадок в течение 20 ч. Выпавший осадок высушивают, измельчают, растворяют 0,01 кг осадка в 0,5 л воды и экстрагируют 4 ч. Удаляют балластные вещества путем фильтрации. В отфильтрованный раствор добавляют уксусную кислоту до рН 4,0 и стерильно фильтруют через пластины ЕКS, разливают во флаконы так, чтобы в каждом содержалось по 10 мг вещества, и лиофилизируют.PRI me R 1. Tonsils after tonsillectomy are cleaned of blood, films and plaque and frozen at -20 ^about C. Collected tonsils in the amount of 0.5 kg are crushed and loaded into a reactor with a stirrer, pour 10 l of a 3% solution acetic acid. 0.01 kg of zinc chloride is added thereto and extracted for 48 hours, stirring for 1 hour every 8 hours. At the end of the extraction, the substrate is drained and centrifuged for 20 minutes at a speed of 3000 rpm, the supernatant is decanted, acetone is added to it (1 parts of the eluate and 5 parts of acetone), mix and form a precipitate for 20 hours. The precipitate is dried, crushed, dissolve 0.01 kg of precipitate in 0.5 l of water and extracted for 4 hours. Remove ballast substances by filtration. Acetic acid is added to the filtered solution to pH 4.0 and sterilely filtered through EKS plates, poured into vials so that 10 mg of substance is contained in each, and lyophilized.

Выход активного вещества из исходного сырья составляет 0,005 кг. The output of the active substance from the feedstock is 0.005 kg.

П р и м е р 2. Миндалины человека после тонзиллэктомии очищают от крови, пленок и налета и замораживают при -20^оС. Собранные миндалины в количестве 1 кг измельчают и загружают в реактор с мешалкой и заливают 25 л 3% -ного раствора уксусной кислоты. Туда же добавляют 0,025 кг хлористого цинка и экстрагируют 56 ч, перемешивая в течение 1 ч каждые 8 ч.EXAMPLE EXAMPLE 2. Human tonsils after tonsillectomy purified from blood films and debris and frozen at -20 ° ^C. The collected almonds in an amount of 1 kg of crushed, and charged into a reactor with stirrer and poured 25 liters of a 3% solution of acetic acids. 0.025 kg of zinc chloride are added thereto and extracted for 56 hours, stirring for 1 hour every 8 hours.

По окончании экстракции субстрат сливают и центрифугируют 20 мин со скоростью 3000 об/мин, надосадочную жидкость декантируют, к ней добавляют ацетон (1 ч. элюата и 5 ч. ацетона), перемешивают и формируют осадок в течение 24 ч. Выпавший осадок высушивают, измельчают, растворяют 0,02 кг осадка в 1 л воды и экстрагируют 5 ч. Удаляют балластные вещества путем фильтрации, а в фильтрат добавляют уксусную кислоту до рН 4,0. At the end of the extraction, the substrate is drained and centrifuged for 20 minutes at a speed of 3000 rpm, the supernatant is decanted, acetone (1 part of the eluate and 5 parts of acetone) is added to it, mixed and a precipitate is formed for 24 hours. The precipitate formed is dried, crushed 0.02 kg of precipitate are dissolved in 1 liter of water and extracted for 5 hours. The ballast substances are removed by filtration, and acetic acid is added to the filtrate to a pH of 4.0.

Раствор стерильно фильтруют через пластины ЕКS, разливают во флаконы так, чтобы в каждом содержалось по 10 мг вещества, и лиофилизируют. The solution is sterilely filtered through ECS plates, poured into vials so that each contains 10 mg of the substance, and lyophilized.

Выход активного вещества из исходного сырья составляет 0,005 кг. Биологическую активность вещества, выделенного из миндалин, оценивали по его влиянию на функцию лимфоидной и состояние эпителиальной тканей миндалин интактных кроликов. Функцию лимфоидной ткани миндалин оценивали в реакции бластной трансформации лимфоцитов миндалин. Реакцию бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ) позволяет выявить способность этих клеток отвечать трансформацией в присутствии митогена: фитогемагглютинина (ФГА), конканавалина (Кон А) и др. The output of the active substance from the feedstock is 0.005 kg. The biological activity of the substance isolated from the tonsils was evaluated by its effect on the function of the lymphoid and the state of the epithelial tissue of the tonsils of intact rabbits. The function of the lymphoid tissue of the tonsils was evaluated in the reaction of blast transformation of tonsils lymphocytes. The reaction of blast transformation of lymphocytes (RBTL) allows us to identify the ability of these cells to respond by transformation in the presence of a mitogen: phytohemagglutinin (PHA), concanavalin (Con A), etc.

Биологически активное вещество, полученное из миндалин, вводили 20 интактным кроликам-самцам по 1 мг на 1 кг массы тела в 1 мл физиологического раствора внутримышечно ежедневно в течение 5 сут. Другой группе животных (20 кроликов) в той же дозе и по аналогичной схеме вводили тималин (как контроль). Контрольной группе животных (20 кроликов) вводили по 1 мл физиологического раствора по аналогичной схеме. A biologically active substance obtained from tonsils was administered to 20 intact male rabbits, 1 mg per 1 kg of body weight in 1 ml of physiological solution intramuscularly daily for 5 days. Another group of animals (20 rabbits) was injected with thymalin in the same dose and in a similar manner (as a control). The control group of animals (20 rabbits) was injected with 1 ml of physiological saline according to a similar scheme.

На 10 сутки от начала эксперимента всех животных забивали, выделяли миндалины и оценивали в них РБТЛ на Кон А и ФГА и гистологические изменения. On the 10th day from the beginning of the experiment, all animals were sacrificed, tonsils were isolated and RBTLs on Con A and PHA and histological changes were evaluated in them.

РБТЛ в миндалинах контрольной и опытной групп животных (М±m) приведена в таблице. RBTL in the tonsils of the control and experimental groups of animals (M ± m) are shown in the table.

Установлено, что введение биологически активного вещества из миндалин увеличивало на 33-78% бласттрансформацию лимфоцитов миндалин по сравнению с контрольной группой животных. У кроликов, получавших тималин, не отмечено достоверных изменений изучаемых показателей. It was found that the administration of a biologically active substance from tonsils increased the blasttransformation of tonsils lymphocytes by 33-78% compared with the control group of animals. In rabbits treated with thymalin, no significant changes in the studied parameters were noted.

При гистологическом исследовании миндалин животных установлено, что введение биологически активного вещества из миндалин уменьшало клеточную инфильтрацию эпителия, что приводило к нормализации его структуры. Тималин не оказывал влияния на морфологическое состояние миндалин. A histological examination of the tonsils of animals found that the introduction of a biologically active substance from the tonsils reduced cell infiltration of the epithelium, which led to the normalization of its structure. Timalin did not affect the morphological state of the tonsils.

Таким образом, вещество, полученное предлагаемым способом, оказывает специфическое стимулирующее влияние на функцию миндалин. Thus, the substance obtained by the proposed method has a specific stimulating effect on the function of the tonsils.

Claims

METHOD FOR PRODUCING AN IMMUNITY MULTIOR by purification of raw materials, freezing, grinding, extraction with a 3% solution of acetic acid with the addition of zinc chloride, filtration, treatment of the supernatant with acetone, separation of the precipitate, dissolution and lyophilization of the target product, characterized in that, in order to increase specific activity of the target product, human tonsils are used as raw material, and extraction is carried out in 20 - 25 volumes of acetic acid.