RS67017B1 - Inhalaciona tečnost za lečenje respiratornih infekcija kod ljudi izazvanih patogenima otpornim na antibiotike - Google Patents

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Predmetno jedinjenje je novi lek za lečenje respiratornih infekcija kod ljudi.

TEHNIČKI PROBLEM

[0002] Ovaj pronalazak se bavi problemima respiratornih infekcija kod ljudi sa različitim etiologijama patogena. Jedinjenje je antimikrobno jedinjenje širokog spektra u formi tečnosti, namenjeno za inhalaciju radi lečenja respiratornih infekcija. Antimikrobno dejstvo eugenola je dobro poznato. Ovaj pronalazak je potpuno nov jer su eugenol i lidokain, posebnim procesom sinteze, spojeni u jedno stabilno jedinjenje. Dejstvo i jedinstvenost ovog jedinjenja su predmet ovog pronalaska. Aktivni princip jedinjenja je stabilni kvaternarni amonijum kompleks eugenola i lidokaina u formi inhalacione tečnosti. Jedinjenje je efikasnije od standardnih cefalosporinskih antibiotika treće generacije u lečenju pomenutih infekcija. Jedinjenje je stvoreno za borbu protiv otpornosti na antibiotike kod patogenih bakterija, kao što su pasterela (Pasteurella spp.), kriptokoka (Cryptococcus spp,), kampilobakter (Campylobacter spp,), mikrosporidija (Microsporidia spp,), histoplazma kapsulatum (Histoplasma capsulatum), mikrokoka (mikrococcus spp.), kandida (Candida spp), i druge bakterije koje izazivaju respiratorne infekcije kod ljudi. Na osnovu specifičnog mehanizma delovanja, aktivno jedinjenje ovog pronalaska razlikuje se od svih drugih antibiotika trenutno dostupnih na tržištu. U ovom pronalasku postiže se izuzetno snažan efekat sinergije eugenola i lidokaina. Antimikrobna efikasnost ovog novog jedinjenja biće znatno delotvornija od eugenola i lidokaina pojedinačno, i od njihove jednostavne mešavine.

[0003] Patentna prijava US 2003/176364 A1 (NINKOV DUSAN [US]) opisuje potencijal sinteze eugenola i lidokaina, a naš pronalazak detaljno opisuje mnogo složeniji proces sinteze od jednostavne sinteze prokaina i karvakrola. Nova sinteza u našem pronalasku predstavlja potpuno novi tehnološki proces i proizvela je efikasnije i složenije novo jedinjenje između eugenola i lidokaina. Takođe, ovaj proces u našem pronalasku je dokazao da se eugenol i lidokain ne mogu sintetizovati u jedinstveno novo jedinjenje korišćenjem procesa opisanog u patentnoj prijavi US 2003/176364 A1. Pored toga, kod nekih pacijenata je utvrđeno da prokain izaziva više alergija kao neželjeno dejstvo. Primena tog patenta bila je intramuskularna, intravenska itd., ali ne i inhalaciona.

[0004] U patentnoj prijavi WO 2019/028937 A1 (UNIV FOSHAN [CN]), navedeno je da se eugenol može koristiti za kontrolu bakterija pseudomonas aeruginoza (Pseudomonas aeruginosa), stafilokoka aureus (Staphylococcus aureus), stafilokoka albus (Staphylococcus albus), stafilokoka citreus (Staphylococcus citreus), streptokoka grupe A, streptokoka grupe B i kandida albikans (Candida albicans). Za razliku od aktivnog jedinjenja tog patenta koje koristi ulje karanfilića i njegovo aktivno jedinjenje eugenol, u našem patentu imamo jedinstveno razvijenu sintezu eugenola i lidokaina. Ova jedinstvena metoda sinteze proizvela je novo jedinjenje za inhalaciju i lečenje raznih plućnih infekcija. U našem novom procesu sinteze, ulje karanfilića je zamenjeno eugenolom čistoće 99%.

[0005] Za razliku od patentne prijave WO 03/049726 A1 (XIMED GROUP PLC [US]), aktivno jedinjenje ovog pronalaska je proizvedeno kao terpenska smeša lipozomskih terpena ili aktivno jedinjenje predstavlja jedan terpen. Standardna koncentracija kombinacija u patentnoj prijavi WO 03/049726 A1 ne može se kontrolisati niti dosledno replicirati. Iako ovaj pronalazak nije detaljno opisao svoj mehanizam delovanja, primene ove četiri mogućnosti se primenjuju inhalacijom. U tom smislu, naša patentna prijava detaljno se bavi korišćenjem nebulizatora, za razliku od gore pomenutog procesa.

[0006] Članak (Wimberly Neil et al. juli 1979, stranice 37-40) opisuje antimikrobna svojstva lidokaina, i na osnovu toga, naša patentna prijava razrađuje informacije date u članku, pri čemu se koristi jedinstveni proces sinteze da bi se postigla željena dejstva kombinovanja lidokaina i eugenola.

[0007] Članak (Samet Mohammad et al.2017-01-01, stranice 771-774) opisuje pozitivno dejstvo 2% lidokaina na bakterijsku kulturu bronhijalne tečnosti kod lečenih pacijenata.

Iako je pozitivan efekat 2% lidokaina dokazan, naš pronalazak je složeniji. Novi pronalazak detaljnije objašnjava složenost naše patentne prijave. Ovde je lidokain čistoće 99,5% korišćen kao jedno od sintetičkih jedinjenja, i predstavlja približno 44,5% rastvora. Pozitivno dejstvo 2% lidokaina na pacijente sa plućnim infekcijama snažno je sugerisalo korelacioni faktor da će i naš pronalazak imati pozitivno dejstvo.

[0008] Pre rasprostranjene upotrebe penicilina, zarazne bolesti su bile vodeći uzrok smrti među svim starosnim grupama širom sveta. Antibiotici su produžili živote i poboljšali kvalitet života ljudi od početka 20. veka. Mnogi su mislili da čovečanstvo ulazi u postpatogenu eru, gde će zarazne bolesti biti fusnota istorije. Danas su zarazne bolesti i dalje vodeći uzrok smrti i vodeći uzrok invaliditeta.

OPIS PRONALASKA

[0009] Predmetni pronalazak je definisan u nezavisnim zahtevima. Zavisni zahtevi opisuju druga izvođenja ovog pronalaska. Izvođenja koje nisu obuhvaćena obimom priloženih patentnih zahteva ne predstavljaju deo ovog pronalaska. U daljem tekstu biće objašnjena novina i jedinstvenost ovog jedinjenja.

Način proizvodnje

[0010] Novo jedinjenje se sintetiše reakcijom eugenola (Sigma Aldrich) i ekvimolarne mase slobodne baze lidokaina (Sigma Aldrich) u rastvaraču dihlormetanu. Nakon reakcije ove dve hemikalije na sobnoj temperaturi, u trajanju od 30 minuta, koristi se rotacioni vakuumski isparivač za isparavanje dihlormetana iz smeše, tako da nam ostaje čisto novo jedinjenje. Novo jedinjenje je kvaternarna amonijumova kompleksna so prirodno postojećeg fenolnog jedinjenja - eugenola, sa sintetičkim lokalnim anestetičkim jedinjenjem - lidokainom, u formi slobodne baze. Odnos lidokaina i eugenola u ovoj reakciji je u opsegu od 1:1 do 2:1.

Šematski dijagram postupka sinteze

[0011]

Strukturna formula jedinjenja

[0012]

Hemijska formula: C24H34N3O3

[0013] Molekularna masa: 398,54 g mol<-1>

Hemijski naziv jedinjenja:

[0014] N-[N'-(karboksimetilenil-2,6-dimetil-anilin)-N,N-dietilamonijum]-[2'-metoksi-4'-(2'-propenil)]-fenolat.

Karakterizacija

[0015] Za karakterizaciju novog kompleksa mogu se koristiti gasno-masena i HPLC hromatografija. U polarnim rastvaračima, kao što su sistemi voda-metanol, trebalo bi da se dobiju dva odvojena pika sastojaka kompleksa, lidokaina kao katjona i eugenola kao anjona. Polarni rastvarači imaju tendenciju da odvoje anjone od katjona u rastvoru i to je razlog zašto se u takvom sistemu mogu videti dva odvojena pika. Svaki pik je okarakterisan masenim spektrometrom, a dobijene informacije dokazuju njihovo poreklo od eugenola i lidokaina. Novi kompleks se takođe može okarakterisati pomoću 1H-NMR i IC spektra.

Kratak opis slika

[0016]

Slika 1: Analiza 1H NMR spektra eugenola, dobijena iz renomirane hemijske baze podataka (ChemNMR)

Slika 2: Analiza 1H NMR spektra lidokaina, dobijena iz renomirane hemijske baze podataka (ChemNMRI)

Slika 3: Analiza 1H NMR spektra jedinjenja, dobijena nakon sinteze novog jedinjenja.

Slika 4: Analiza IR spektra jedinjenja, dobijena nakon sinteze novog jedinjenja.

Slika 5: Analiza IC spektra lidokaina, dobijena iz renomirane hemijske baze podataka (NIST Chemistry WebBook).

Kontrola kvaliteta

[0017] Za kontrolu kvaliteta mogu se koristiti gasno-masena hromatografija i HPLC. Pikovi eugenola i lidokaina su prihvatljivi jer se novo jedinjenje disocira proizvodeći ih. Svaki drugi pik u hromatogramu može se smatrati nečistoćom. Merenjem površine pikova može se izračunati procenat nečistoća. Korišćenjem masenih spektara ili IC spektara može se utvrditi poreklo nečistoća.

Metod novine

[0018] U 1H-NMR spektrima, upoređena je razlika između karakterističnih položaja H-atoma slobodnog eugenola i istog položaja odgovarajućih H-atoma slobodnog eugenola iz baze podataka. Različiti položaji tih H-atoma ukazivali bi na to da dobijeno jedinjenje predstavlja novo jedinjenje, kombinaciju eugenola i lidokaina. Pored toga, izmereni su i IC spektri novog jedinjenja, dokazujući da je novo jedinjenje zapravo novo jer podaci o spektrima nisu dostupni ni u jednoj renomiranoj bazi podataka.

[0019] Eugenol je bezbojna do bledožuta uljasta tečnost na sobnoj temperaturi. Može se naći u mnogim esencijalnim uljima iz prirodnih proizvoda kao što su ulje karanfilića, muškatnog oraščića, cimeta, bosiljka, ulje lovora i poseduje antiseptička i anestetička svojstva. Takođe je dobro poznato antibakterijsko, antifungalno, antimikrobno i antikoagulantno sredstvo. Upotreba eugenola ima širok spektar i njegov potencijal za medicinsku upotrebu je ogroman.

Proizvodnja jedinjenja

[0020] Ovaj tekst je kratak opis načina na koji će se jedinjenje proizvoditi.

Formula:

[0021]

Voda: 90 ml

Emulgator: 8 ml

Novo aktivno jedinjenje: 2 ml

UKUPNO: 100 ml

[0022] Jedinjenje je dobijeno mešanjem gore navedenih sastojaka u vakuumskom mikseru (Silverson L5M-A Sealed Unit Lab Mixer) na 6.000 o/min u trajanju od 20 minuta.

Lečenje respiratornih infekcija kod ljudi

[0023]

• Slučaj br.1: Y.D., muškarac, 55 godina, SAD, Albukerki Simptomi: Akutni bronhitis • Slučaj br.2: I.M., muškarac, 24 godina, SAD, Medison Simptomi: Akutni bronhitis • Slučaj br.3: F.P., muškarac, 59 godina, SAD, Grinsboro Simptomi: Pneumonija • Slučaj br. 4: A.Y., muškarac, 50 godina, SAD, Bejkersfild Simptomi: Bronhopneumonija

• Slučaj br.5: J.D., muškarac, 38 godina, SAD, Fort Vort Simptomi: Akutni bronhitis • Slučaj br.6: D.P., muškarac, 21 godina, SAD, Tuson Simptomi: Akutni bronhitis • Slučaj br. 7: L.R., muškarac, 26 godina, Francuska, Pariz Simptomi:

Bronhopneumonija

• Slučaj br.8: G.V., muškarac, 43 godina, SAD, Grad Džersi Simptomi: Pneumonija • Slučaj br.9: W.Z. Žena, 21 godina, SAD, Long Bič Simptomi: Pneumonija

• Slučaj br.10: G.J. Žena, 34 godina, SAD, San Hoze Simptomi: Akutni bronhitis • Slučaj br.11: W.B. Žena, 27 godina, Norveška, Oslo Simptomi: Bronhopneumonija • Slučaj br.12: C.R. Žena, 56 godina, SAD, Los Anđeles Simptomi: Pneumonija • Slučaj br.13: O.B. Žena, 34 godina, SAD, Ročester Simptomi: Akutni bronhitis • Slučaj br.14: Z.F. Žena, 50 godina, SAD, Kolumbus Simptomi: Bronhopneumonija • Slučaj br.15: K.U. Žena, 32 godina, Kanada Toronto Simptomi: Akutni bronhitis

Dodatne informacije i rezultati ispitivanja

[0024] Razlog za ovo ispitivanje bio je da se proveri da li novo jedinjenje, nakon dužeg perioda upotrebe, može da izazove eventualna neželjena dejstva.

[0025] Rezultati ispitivanja su generisani i praćeni kako bi se dobile relevantne informacije i činjenice. U ovoj studiji, opšti praćeni parametri bili su puls, disanje, EKG (elektrokardiografija), bilo kakva nelagodnost, neželjeni događaji i/ili praćenje alergija. Ovi parametri su mereni pre tretmana novim jedinjenjem i 15 minuta nakon njegovog unosa. Novo jedinjenje je svaki pacijent tokom terapijskih dana unosio u 06:00, 14:00 i 22:00 časa (tabela 1 i tabela 2). Nakon inhalacije novog jedinjenja, lekar je vršio posmatranja u trajanju od 30 minuta. Osećaj pacijenata tokom i nakon inhalacije novog jedinjenja takođe će biti zabeležen za svakog učesnika.

[0026] Kao deo biohemijske analize krvi pacijenata, provereni su biohemijski parametri u uzorku krvi svakog pacijenta. Uzorci krvi su uzeti od svakog pacijenta pre početka testa, 4. dana od početka testiranja, i 8. dana od početka testiranja. Poslednji uzorci krvi moraju se proveriti 12 sati nakon poslednje inhalacije novog jedinjenja. Biohemijski parametri koji su mereni u uzorcima krvi uključuju:

1. Status jetre

2. C reaktivni protein

3. Status bubrega

[0027] Doza je bila: 10 ml novog jedinjenja 2% / 30 kg telesne težine na svakih 8 sati u trajanju od sedam (7) dana (tabela 1).

[0028] Klinička studija je počela 15. oktobra 2017. godine i završena je 21. novembra 2017. godine.

[0029] Svaki pacijent je primao dozu u 6:00, 14:00 i 22:00 časa svakog dana u trajanju od sedam (7) dana.

[0030] Spisak muških pacijenata koji su učestvovali u istraživanju i odgovarajućih doza novog jedinjenja:

[0031] Spisak pacijentkinja koje su učestvovale u istraživanju i odgovarajućih doza novog jedinjenja:

l)

[0032] Na osnovu rezultata dobijenih tokom ove kliničke pilot studije jedinjenja na 80 ljudi, mogu se izvući sledeći zaključci:

1. Učesnici studije su pokazali toleranciju na novo jedinjenje nakon propisane doze.

2. Nije bilo simptoma alergije zbog propisane doze novog jedinjenja.

3. Tokom inhalacije novog jedinjenja, pulsna frekvencija i krvni pritisak nisu značajno promenjeni.

4. Elektrokardiografska merenja tokom unosa novog jedinjenja bila su redovna, bez ikakvih patoloških i nepravilnih oscilacija.

5. Respiratorna funkcija je takođe praćena tokom kliničke studije. Respiratorna funkcija pacijenata nije bila poremećena, i nijedan od pacijenata nije prijavio nikakve nepravilnosti u respiratornoj funkciji tokom studije.

6. Tokom testa nije zabeležena dispneja.

7. Nisu zabeleženi bronhospazmi.

8. Sporadični kašalj je zabeležen kod nekih učesnika na samom početku testa. 9. Tokom studije nisu prijavljeni nikakvi nepravilni parametri u biohemijskoj analizi funkcije jetre iz uzoraka krvi. Stoga, novo jedinjenje nije imalo nikakve negativne kliničke ili akutne efekte na funkciju jetre učesnika koji su dobrovoljno učestvovali u ovoj studiji.

10. Prilikom testiranja funkcije bubrega tokom perioda testiranja novog jedinjenja nisu prijavljeni nikakvi nepravilni parametri. Rezultati testova parametara urina i krvi koji se odnose na funkciju bubrega ukazuju na to da novo jedinjenje nije imalo nikakve negativne efekte na bubrege pacijenata.

11. Rezultati merenja C-reaktivnog proteina (CRP) tokom studije sa novim jedinjenjem ukazuju na to da nije došlo do upale.

12. Nakon 10 radnih dana od završetka testiranja, nisu primećene nikakve nepravilnosti kod testiranih učesnika.

In Vitro test jedinjenja

[0033] U nastavku su nalazi uporednog ispitivanja odabranih patogena u odnosu na jedinjenje i antibiotike cefalosporin i ampicilin:

[0034] Upotrebljena količina: Novo jedinjenje 0,05 ml; cefalosporin 0,1 ml; ampicilin 0,2 ml.

[0035] Procena rezultata prema prečniku zone:

0 mm - 4 mm: rezistentna: R

5 - 9 mm: umereno osetljiva: MS

10 - 15 mm: osetljiva: S

16 - 20 mm: veoma osetljiva: VS

21 mm i više: izuzetno osetljiva: ES

Ispitivanje toksičnosti novog jedinjenja u formi inhalacione tečnosti

[0036] Cilj ovog ispitivanja bio je da se utvrdi akutna toksičnost - LD50 novog jedinjenja u formi inhalacione tečnosti kod miševa i pacova. I miševi i pacovi su posebno odabrani za ispitivanje toksičnosti jedinjenja, leka i hemikalija. Sprovedeno je samo ispitivanje akutne toksičnosti, jer aktivna terapija novim jedinjenjem traje od jednog (1) do tri (3) dana. Subakutna toksičnost nije bila neophodna i primenljiva, jer produženi tretman novim jedinjenjem neće biti u funkciji i nije planiran. Ispitivanje je sprovedeno u inhalacionoj primeni i kod belih laboratorijskih pacova i kod belih laboratorijskih miševa. Grupe od po 100 laboratorijskih miševa i pacova oba pola smeštene su u staklene odeljke. Redovno su konzumirali hranu proizvedenu za ove laboratorijske životinje. Voda je uvek bila dostupna.

[0037] Za inhalacionu primenu je potrebno više leka nego za druge načine primene.

[0038] U ovom toksikološkom ispitivanju - ispitivana je akutna toksičnost novog jedinjenja:

Oralna LD50 peroralno - miševi

Oralna LD50 peroralno - pacovi

Inhalaciona LD50 - miševi

Inhalaciona LD50 - pacovi

Peroralna primena (p.o.) novog jedinjenja - LD50 - ispitivanje i doze

[0039] Ispitivanje akutne toksičnosti LD50 kod peroralne primene (p.o.) izvršeno je po standardnoj proceduri: peroralna primena pomoću posebne laboratorijske pipete sa kojom se tečni proizvod lako primenjuje: oralno kod laboratorijskih životinja.

[0040] Rezultati ispitivanja LD50 novog jedinjenja kod peroralne primene (p.o.) kod miševa. Ispitivanje LD50 novog jedinjenja kod peroralne primene kod miševa je izvršeno kako sledi: 1 µL/kg, 5 µL/kg, 10 µL/kg, 20 µL/kg, 50 µL/kg, 100 µL/kg, 150 µL/kg, 200 µL/kg, 300 µL/kg, 400 µL/kg, 500 µL/kg, 600 µL/kg, 700 µL/kg, 800 µL/kg, 900 µL/kg, 1.000 µL/kg, 1250 µL/kg, 1.500 µL/kg, 1.750 µL/kg i 2.000 µL/kg. Na nivou oralne doze LD50 od 2.000 µL/kg - dvadeset tri (23) miša od sto (100) promenila su svoje ponašanje i pokazala blagu nelagodnost: trčanje kao i anksioznost. Disanje i srčane funkcije su bili redovni, funkcija grudnog koša je bila redovna i bez vidljivih promena. Simptomi nelagodnosti primećeni nakon primene, nestali su nakon 1-3 minuta, različito od miša do miša. Nijedan miš nije pretrpeo smrtni ishod tokom ovog ispitivanja. Zaključak na osnovu ovih rezultata ispitivanja bio je sledeći: novo jedinjenje ima oralnu LD50 iznad 2.000 µL/kg za miševe (p.o.). Novo jedinjenje je nisko toksično u primenjenim dozama za miševe oralno (p.o.).

Rezultati ispitivanja LD50 novog jedinjenja kod peroralne primene (p.o.) kod pacova

[0041] Ispitivanje LD50 novog jedinjenja kod peroralne primene kod pacova je izvršeno kako sledi: 1 µL/kg, 5 µL/kg, 10 µL/kg, 20 µL/kg, 50 µL/kg, 100 µL/kg, 150 µL/kg, 200 µL/kg, 300 µL/kg, 400 µL/kg, 500 µL/kg, 600 µL/kg, 650 µL/kg, 750 µL/kg, 850 µL/kg, 1.000 µL/kg, 1250 µL/kg, 1.500 µL/kg, 2.000 µL/kg i 2.250 µL/kg. Na nivou oralne doze LD50 od 2.250 µL/kg - trideset sedam (37) pacova od sto (100) promenila su svoje ponašanje i pokazala blagu nelagodnost: trčanje po staklenom odeljku, kao i anksioznost. Disanje i srčane funkcije su bili redovni, funkcija grudnog koša je bila redovna i bez vidljivih promena. Simptomi nelagodnosti primećeni nakon primene, nestali su nakon 1-3 minuta, različito od pacova do pacova. Nijedan pacov nije pretrpeo smrtni ishod tokom ovog ispitivanja. Zaključak na osnovu ovih rezultata ispitivanja bio je sledeći: novo jedinjenje ima oralnu LD50 iznad 2.250 µL/kg za pacove (p.o.). Novo jedinjenje je nisko toksično u primenjenim dozama za pacove oralno (p.o.).

Inhalaciona primena novog jedinjenja - LD50 - ispitivanje i doze

[0042] Inhalaciono ispitivanje LD50 novog jedinjenja izlaganjem samo kroz nos, predviđeno za laku primenu novog jedinjenja na laboratorijskim životinjama putem inhalacije. Proces inhalacije je sproveden pomoću nebulizatora sa cevima koje se direktno uvode u nozdrve životinja. Vreme izlaganja za laboratorijske pacove bilo je 6 sati za svako testiranje, a 4 sata za laboratorijske miševe.

[0043] Rezultati inhalacione primene novog jedinjenja kod miševa

[0044] Ispitivanje LD50 novog jedinjenja kod inhalacione primene kod miševa je izvršeno kako sledi: 1 µL/kg, 5 µL/kg, 10 µL/kg, 20 µL/kg, 50 µL/kg, 100 µL/kg, 150 µL/kg, 200 µL/kg, 300 µL/kg, 400 µL/kg, 500 µL/kg, 600 µL/kg, 700 µL/kg, 800 µL/kg, 900 µL/kg, 1.000 µL/kg, 1250 µL/kg, 1.500 µL/kg, 1.750 µL/kg, 2.000 µL/kg i 2.250 µL/kg. Na nivou inhalacione doze LD50 od 2.250 µL/kg - dvadeset jedan (21) miš od sto (100) promenila su svoje ponašanje i pokazala nelagodnost: trčanje kao i anksioznost. Disanje i srčane funkcije su bili redovni, funkcija grudnog koša je bila redovna i bez vidljivih promena. Simptomi nelagodnosti primećeni nakon primene, nestali su nakon 3-5 minuta, različito od miša do miša. Nijedan miš nije pretrpeo smrtni ishod tokom ovog ispitivanja. Zaključak na osnovu ovih rezultata ispitivanja bio je sledeći: novo jedinjenje inhalacione tečnosti ima LD50 iznad 2.250 µL/kg za miševe. Novo jedinjenje je nisko toksično u primenjenim dozama za miševe. Životinje su ponovo ispitane nakon 14 dana, i nije primećena nijedna nova nepravilnost.

Rezultati inhalacione primene novog jedinjenja kod pacova

[0045] Ispitivanje LD50 novog jedinjenja kod inhalacione primene kod pacova je izvršeno kako sledi: 1 µL/kg, 5 µL/kg, 10 µL/kg, 20 µL/kg, 50 µL/kg, 100 µL/kg, 150 µL/kg, 200 µL/kg, 300 µL/kg, 400 µL/kg, 500 µL/kg, 600 µL/kg, 700 µL/kg, 800 µL/kg, 900 µL/kg, 1.000 µL/kg, 1250 µL/kg, 1.500 µL/kg, 1.750 µL/kg, 2.000 µL/kg, 2.250 µL/kg i 2.500 µL/kg. Na nivou inhalacione doze LD50 od 2.500 µL/kg - dvadeset devet (29) pacova od sto (100) promenila su svoje ponašanje i pokazala nelagodnost: trčanje po staklenom odeljku, kao i anksioznost. Disanje i srčane funkcije su bili redovni, funkcija grudnog koša je bila redovna i bez vidljivih promena. Simptomi nelagodnosti primećeni nakon primene, nestali su nakon 5-6 minuta, različito od pacova do pacova. Nijedan pacov nije pretrpeo smrtni ishod tokom ovog ispitivanja. Zaključak na osnovu ovih rezultata ispitivanja bio je sledeći: novo jedinjenje inhalacione tečnosti ima LD50 iznad 2.500 µL/kg za pacove. Novo jedinjenje je nisko toksično u primenjenim dozama za pacove. Životinje su ponovo ispitane nakon 14 dana, i nije primećena nijedna nova nepravilnost.

Mutageni i kancerogeni testovi novog jedinjenja u formi inhalacione tečnosti

[0046] Predmet ispitivanja bio je utvrđivanje mutagenog i kancerogenog dejstva novog jedinjenja u formi inhalacione tečnosti. Ispitivanje je izvršeno Amesovim testom. Ovaj test, koji je naširoko i prilično često korišćena metoda koristi patogene, u većini slučajeva bakterije, da bi se ispitalo da li data hemikalija, jedinjenje i/ili lek mogu da oštete DNK ispitivanog organizma. Ova metoda se brzo sprovodi i lako se prati radi provere mutagenog ili kancerogenog dejstva ispitivanog jedinjenja. Laboratorijska posuda sa posebno odabranim sojem kandide, koji zahteva histidin, dodata je ekstraktu jetre pacova. Test je urađen kontrolno-eksperimentalnom metodom. U posudi zapremine 20 ml tečnosti koja se smatra kontrolnom nije bilo sadržano novo jedinjenje. U posudi koju smatramo eksperimentalnom, 1 ml novog jedinjenja je dodat u 20 ml tečnosti u posudi. Rezultati mutagenog testa bili su negativni u obe laboratorijske posude - kontrolnoj i eksperimentalnoj. Rezultati su bili identični bez znakova mutacija. Na osnovu ovih preliminarnih rezultata, može se zaključiti da novo jedinjenje nema mutagena i/ili kancerogena dejstva.

Claims (2)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I) koje ima dole prikazanu strukturu:
2. 2. Jedinjenje, prema zahtevu 1, kao aktivno jedinjenje/snažno antimikrobno sredstvo za upotrebu u lečenju respiratornih infekcija kod ljudi izazvanih patogenima otpornim na antibiotike, kao što su Pasteurella spp., Cryptococcus spp., Campylobacter spp., Microsporidia spp., Histoplasma capsulatum, Micrococcus spp., Candida spp. i druge bakterije, u obliku tečnosti za inhalaciju.