RS67014B1 - Heterotandemski biciklični peptidni kompleksi - Google Patents

Heterotandemski biciklični peptidni kompleksi

Info

Publication number
RS67014B1
RS67014B1 RS20250710A RSP20250710A RS67014B1 RS 67014 B1 RS67014 B1 RS 67014B1 RS 20250710 A RS20250710 A RS 20250710A RS P20250710 A RSP20250710 A RS P20250710A RS 67014 B1 RS67014 B1 RS 67014B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
μmol
peptide
compound
polypeptide
reaction mixture
Prior art date
Application number
RS20250710A
Other languages
English (en)
Inventor
Kevin Mcdonnell
Gemma Mudd
Punit Upadhyaya
Original Assignee
Bicycletx Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bicycletx Ltd filed Critical Bicycletx Ltd
Publication of RS67014B1 publication Critical patent/RS67014B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K11/00—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K11/02—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof cyclic, e.g. valinomycins ; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/543—Lipids, e.g. triglycerides; Polyamines, e.g. spermine or spermidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70532—B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2318/00—Antibody mimetics or scaffolds
    • C07K2318/20—Antigen-binding scaffold molecules wherein the scaffold is not an immunoglobulin variable region or antibody mimetics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na peptidne ligande koji se vezuju za komponentu koja se nalazi na ćeliji kancera. Pronalazak se takođe odnosi na peptidne komplekse koji sadrže peptidni ligand pronalaska koji je konjugovan pomoću linkera za drugi peptid.
STANJE TEHNIKE PRONALASKA
[0002] Ciklični peptidi su sposobni da se vežu sa visokim afinitetom i ciljnom specifičnošću za mete proteine i stoga čine atraktivnu klasu molekula za razvoj terapeutika. U stvari, nekoliko cikličnih peptida se već uspešno koristi u kliničkoj praksi, kao na primer antibakterijski peptid vankomicin, imunosupresivni lek ciklosporin ili lek protiv raka oktreotid (Driggers et al. (2008), Nat Rev Drug Discov 7 (7), 608-24). Dobra svojstva vezivanja rezultat su relativno velike površine interakcije koja se formira između peptida i mete, kao i smanjene konformacione fleksibilnosti cikličnih struktura. Tipično, makrocikli se vezuju za površine od nekoliko stotina kvadratnih angstroma, kao na primer antagonist cikličnog peptida CXCR4 CVX15 (400 Å<2>; Wu et al. (2007), Science 330, 1066-71), ciklični peptid sa motivom Arg-Gly-Asp koji se vezuje za integrin aVb3 (355 Å<2>) (Xiong et al. (2002), Science 296 (5565), 151-5) ili inhibitor cikličnog peptida upain-1 koji se vezuje za aktivator plazminogena urokinaznog tipa (603 Å<2>; Zhao et al. (2007), J Struct Biol 160(1), 1-10).
[0003] Zbog svoje ciklične konfiguracije, peptidni makrocikli su manje fleksibilni od linearnih peptida, što dovodi do manjeg gubitka entropije pri vezivanju za ciljeve i rezultira većim afinitetom vezivanja. Smanjena fleksibilnost takođe dovodi do zaključavanja konformacija specifičnih za cilj, povećavajući specifičnost vezivanja u poređenju sa linearnim peptidima. Ovaj efekat je ilustrovan snažnim i selektivnim inhibitorom matriksne metaloproteinaze8 (MMP-8) koji je izgubio svoju selektivnost u odnosu na druge MMP kada mu je prsten otvoren (Cherney et al. (1998), J Med Chem 41 (11), 1749-51). Povoljna svojstva vezivanja postignuta makrociklizacijom su još izraženija kod multicikličnih peptida koji imaju više od jednog peptidnog prstena, kao na primer kod vankomicina, nizina i aktinomicina.
[0004] Različiti istraživački timovi su prethodno povezali polipeptide sa ostacima cisteina u sintetičku molekularnu strukturu (Kemp and McNamara (1985), J. Org. Chem; Timmerman et al. (2005), ChemBioChem). Meloen i saradnici su koristili tris(bromometil)benzen i srodne molekule za brzu i kvantitativnu ciklizaciju višestrukih peptidnih petlji na sintetičkim skeletima za strukturnu mimikriju proteinskih površina (Timmerman etal. (2005), ChemBioChem). Postupci za generisanje jedinjenja lekova kandidata gde se navedena jedinjenja generišu povezivanjem polipeptida koji sadrže cistein sa molekularnom skelom, kao na primer tris(bromometil)benzen, objavljene su u WO 2004/077062 i WO 2006/078161.
[0005] Kombinatorni pristupi zasnovani na fagnom prikazu razvijeni su za generisanje i skrining velikih biblioteka bicikličnih peptida ka ciljevima od interesa (Heinis et al. (2009), Nat Chem Biol 5 (7), 502-7 i WO 2009/098450). Ukratko, kombinatorne biblioteke linearnih peptida koje sadrže tri ostatka cisteina i dva regiona od šest slučajnih aminokiselina (Cys-(Xaa)6-Cys-(Xaa)6-Cys) su prikazane na fagu i ciklizovane kovalentnim vezivanjem bočnih lanaca cisteina za mali molekul (tris-(bromometil)benzen).
[0006] Dalji prikaz u vezi sa bicikličnim peptidima predstavljen je u: Punit Upadhyaya, "Activation of CD137 using multivalent and tumour targeted bicyclic peptides", 25 april 2019, 6 godišnji kongres peptida (XP055669343); "Constrained peptides Unconstrained Thinking" 1 avgust 2019, stranice 1‑30 (XP055719882); WO2019/162682; WO2010/089115; WO2019/025811; i u Paul Beswick, "Bicycles - An entirely new class of therapeutics", 30th Symposium on Medicinal Chemistry, 2 May 2019 (XP055669342).
SUŠTINA PRONALASKA
[0007] Predmetni pronalazak pruža peptidni ligand koji se vezuje za nektin-4 prisutan na ćeliji kancera, koji obuhvata polipeptid koji sadrži najmanje tri reaktivne grupe, odvojene sa najmanje dve sekvence petlji, i molekularnu skelu koja formira kovalentne veze sa reaktivnim grupama polipeptida tako da se najmanje dve polipeptidne petlje formiraju na molekularnoj skeli, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so; karakteriše se time što je navedeni polipeptid modifikovani derivat CP[1Nal][dD]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC; gde je jedan ili više cisteinskih ostataka zamenjen reaktivnom grupom izabranom iz 3-merkaptopropanske kiseline, cisteamina i penicilamina; gde 1Nal predstavlja 1-naftilalanin, HArg predstavlja homoarginin, a HyP predstavlja hidroksiprolin. U jednom izvođenju peptidnog liganda pronalaska, molekularna skela je 1,1',1"-(1,3,5-triazinan-1,3,5-triil)triprop-2-en-1-on (TATA).
[0008] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje peptidni kompleks, koji sadrži (a) prvi peptidni ligand koji se vezuje za Nektin-4 prisutan na ćeliji kancera; konjugovan preko linkera sa (b) drugim peptidom; gde prvi peptid sadrži polipeptid koji sadrži najmanje tri reaktivne grupe, odvojene sa najmanje dve sekvence petlji, i molekularnu skelu koja formira kovalentne veze sa reaktivnim grupama polipeptida tako da se najmanje dve polipeptidne petlje formiraju na molekularnoj skeli, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so; karakteriše se time što je navedeni polipeptid navedenog prvog peptidnog liganda modifikovani derivat CP[1Nal][dD]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC; gde je jedan ili više cisteinskih ostataka zamenjen reaktivnom grupom izabranom iz 3-merkaptopropanske kiseline, cisteamina i penicilamina; gde 1Nal predstavlja 1-naftilalanin, HArg predstavlja homoarginin, a HyP predstavlja hidroksiprolin. U jednom izvođenju peptidnog kompleksa pronalaska, molekularna skela je 1,1',1"-(1,3,5-triazinan-1,3,5-triil)triprop-2-en-1-on (TATA).
[0009] Radi boljeg razumevanja konteksta ovog pronalaska, ovaj pronalazak takođe uključuje diskusiju o dodatnim temama koje same po sebi nisu deo ovog pronalaska. Na primer, prema prvom aspektu ovog pronalaska (koji nije deo ovog pronalaska), obezbeđen je heterotandemski biciklični peptidni kompleks koji sadrži:
(a) prvi peptidni ligand koji se vezuje za komponentu prisutnu na ćeliji kancera; konjugovan preko linkera sa
(b) drugim peptidnim ligandom koji se vezuje za komponentu prisutnu na imunskoj ćeliji;
pri čemu svaki od navedenih peptidnih liganda sadrži polipeptid koji sadrži najmanje tri reaktivne grupe, odvojene sa najmanje dve sekvence petlji, i molekularnu skelu koja formira kovalentne veze sa reaktivnim grupama polipeptida tako da se najmanje dve polipeptidne petlje formiraju na molekularnoj skeli, karakterišući se time što navedeni heterotandemski biciklični peptidni kompleks sadrži sledeće prve i druge peptidne ligande:
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
gde 1Nal predstavlja 1-naftilalanin, HArg predstavlja homoarginin, HyP predstavlja hidroksiprolin, B-Ala predstavlja beta-alanin, PYA predstavlja 4-pentinoinsku kiselinu, 3,3-DPA predstavlja 3,3-difenilalanin, Cba predstavlja β-ciklobutilalanin, hGlu predstavlja homoglutaminsku kiselinu, Nle
1
predstavlja norleucin, NMeAla predstavlja N-metil-alanin, tBuAla predstavlja t-butil-alanin, Aad predstavlja alfa-L-aminoadipinsku kiselinu, Ac predstavlja acetil grupu, Dap predstavlja diaminopropansku kiselinu, ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0010] Prema daljem aspektu prikaza (ponovo, nije deo predmetnog pronalaska), obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži heterotandemski biciklični peptidni kompleks kao što je ovde definisano u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa.
[0011] Prema daljem aspektu prikaza (ponovo, nije deo predmetnog pronalaska), obezbeđen je heterotandemski biciciklični peptidni kompleks kao što je ovde definisano za upotrebu u prevenciji, suzbijanju ili lečenju kancera.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
Prvi peptidni ligandi
[0012] Reference ovde na izraz „ćelija kancera“ uključuju bilo koju ćeliju za koju se zna da je uključena u kancer. Ćelije kancera nastaju kada su oštećeni geni odgovorni za regulisanje deobe ćelija. Kancerogenezu uzrokuje mutacija i epimutacija genetičkog materijala normalnih ćelija, što remeti normalnu ravnotežu između proliferacije i ćelijske smrti. To rezultira nekontrolisanom deobom ćelija i evolucijom tih ćelija prirodnom selekcijom u telu. Nekontrolisana i često brza proliferacija ćelija može dovesti do benignih ili malignih tumora (kancera). Benigni tumori se ne šire na druge delove tela niti napadaju druga tkiva. Maligni tumori mogu napasti druge organe, proširiti se na udaljene lokacije (metastaze) i postati životno ugrožavajući.
[0013] U jednom slučaju, ćelija kancera se bira od HT1080, A549, SC-OV-3, PC3, H1376, NCI-H292, LnCap, MC38, 4T1-D02 i RKO tumorske ćelije.
[0014] U jednom slučaju opšteg prikaza, komponenta prisutna na ćeliji kancera je nektin-4. Međutim, da bi se izbegla sumnja, u peptidnom ligandu i peptidnom kompleksu ovog pronalaska, komponenta je nektin-4.
[0015] Nektin-4 je površinski molekul koji pripada porodici proteina nektina, koja se sastoji od 4 člana. Nektini su molekuli ćelijske adhezije koji igraju ključnu ulogu u različitim biološkim procesima kao što su polaritet, proliferacija, diferencijacija i migracija, za epitelne, endotelne, imune i neuronske ćelije, tokom razvoja i odraslog života. Uključeni su u nekoliko patoloških procesa kod ljudi. Oni su glavni receptori za poliovirus, virus herpes simpleksa i virus malih boginja. Mutacije u genima koji kodiraju nektin-1 (PVRL1) ili nektin-4 (PVRL4) uzrokuju sindrome ektodermalne displazije povezane sa drugim abnormalitetima. Nektin-4 se eksprimuje tokom fetalnog razvoja. U tkivima odraslih, njegova ekspresija je ograničenija nego kod drugih članova porodice. Nektin-4 je antigen povezan sa tumorom u 50%, 49% i 86% karcinoma dojke, jajnika i pluća, redom, uglavnom kod tumora loše prognoze. Njegova ekspresija se ne detektuje u odgovarajućim normalnim tkivima. Kod tumora dojke, nektin-4 se eksprimuje uglavnom u trostruko negativnim i ERBB2+ karcinomima. U serumu pacijenata sa ovim karcinomima, detekcija rastvorljivih oblika nektina-4 povezana je sa lošom prognozom. Nivoi serumskog nektina-4 povećavaju se tokom metastatske progresije i smanjuju se nakon lečenja. Ovi rezultati ukazuju na to da bi nektin-4 mogao biti pouzdana meta za lečenje kancera. Shodno tome, nekoliko anti-nektin-4 antitela je opisano u prethodnom stanju tehnike. Konkretno, enfortumab vedotin (ASG-22ME) je konjugat antitela i leka (ADC) koji cilja nektin-4 i trenutno se klinički ispituje za lečenje pacijenata koji pate od solidnih tumora.
[0016] U jednom slučaju opšteg izlaganja, prvi peptidni ligand sadrži biciklični peptidni ligand koji vezuje Nektin-4. Pogodni primeri bicikličnih peptidnih liganada koji vezuju Nektin-4 su prikazani u WO 2019/243832. U jednom slučaju, biciklični peptidni ligand koji vezuje Nektin-4 je izabran iz bilo kod od ovde opisanih peptida SEQ ID NOS: 52 do 66. Radi izbegavanja sumnje, međutim, napominje se da su peptidni ligand iz predmetnog pronalaska, i prvi peptidni ligand peptidnog kompleksa predmetnog pronalaska, specifični ligandi koji vezuju Nektin-4 kao što se definiše u priloženim patentnim zahtevima.
[0017] U alternativnom slučaju opšteg izlaganja, komponenta koja se nalazi na ćeliji kancera je EphA2 (ali ovo nije deo predmetnog pronalaska).
[0018] Eph receptor tirozin kinaze (Ephs) pripadaju velikoj grupi receptor tirozin kinaza (RTK), kinaza koje fosforiluju proteine na ostacima tirozina. Eph i njihovi membranski vezani efrinski ligandi (efrini) kontrolišu pozicioniranje ćelija i organizaciju tkiva (Poliakovet al. (2004) DevCell 7,465-80). Funkcionalni i biohemijski Eph odgovori se javljaju u višim stanjima oligomerizacije liganda (Stein et al. (1998) Genes Dev 12, 667-678).
[0019] Između ostalih funkcija oblikovanja obrazaca, pokazano je da različiti Eph i efrini igraju ulogu u razvoju krvnih sudova. Nokaut EphB4 i efrina-B2 dovodi do nedostatka sposobnosti remodelovanja kapilarnih slojeva u krvne sudove (Poliakov et al., supra) i embrionalne smrtnosti. Perzistentna ekspresija nekih Eph receptora i efrina je takođe primećena u novoformiranim, mikrosudovima kod odraslih (Brantley-Sieders et al. (2004) Curr Pharm Des 10, 3431-42; Adams (2003) J Anat 202, 105-12).
[0020] Takođe je primećeno da deregulisana ponovna pojava nekih efrina i njihovih receptora kod odraslih doprinosi invaziji tumora, metastazama i neoangiogenezi Nakamoto et al. (2002) Microsc Res Tech 59, 58-67; Brantley-Sieders et al., supra). Osim toga, utvrđeno je da su neki članovi porodice Eph prekomerno eksprimovani na tumorskim ćelijama iz različitih ljudskih tumora (Brantley-Sieders etal., supra); Marme(2002)Ann Hematol81 Suppl2, S66; Booth et al. (2002) Nat Med 8, 1360-1).
[0021] EPH receptor A2 (efrin tip-A receptor 2) je protein koji je kod ljudi kodiran genom EPHA2.
[0022] EphA2 je pojačano regulisan kod višestrukih karcinoma kod ljudi, često u korelaciji sa progresijom bolesti, metastazama i lošom prognozom, npr.: dojke (Zelinski et al (2001) Cancer Res.
61,2301-2306; Zhuang et al (2010) Cancer Res.70, 299-308; Brantley-Sieders et al (2011) PLoS One 6, e24426), pluća (Brannan et al (2009) Cancer Prev Res (Phila) 2, 1039-1049; Kinch et al (2003) Clin Cancer Res.9, 613-618; Guo et al (2013) J Thorac Oncol.8, 301-308), želuca (Nakamura et al (2005) Cancer Sci.96, 42-47; Yuan et al (2009) Dig Dis Sci 54, 2410-2417), pankreasa (Mudali et al (2006) Clin Exp Metastasis23,357-365), prostate (Walker-Danielsetal(1999)Prostate41,275-280), jetre (Yang etal(2009)Hepatol Res.39, 1169-1177) i glioblastoma (Wykosky et al (2005) Mol Cancer Res.3, 541-551; Li et al (2010) Tumour Biol.31, 477-488).
[0023] Potpuna uloga EphA2 u progresiji kancera još uvek nije definisana, iako postoje dokazi o interakciji u brojnim fazama progresije kancera, uključujući rast tumorskih ćelija, preživljavanje, invaziju i angiogenezu. Smanjenje ekspresije EphA2 suzbija razmnožavanje tumorskih ćelija kancera (Binda et al (2012) Cancer Cell 22, 765-780), dok blokada EphA2 inhibira migraciju ćelija indukovanu VEGF-om (Hess et al (2001) Cancer Res. 61, 3250-3255), nicanje i angiogenezu (Cheng et al (2002) Mol Cancer Res.1, 2-11; Lin et al (2007) Cancer 109, 332-40) i metastatsku progresiju (Brantley-Sieders et al (2005) FASEB J.19, 1884-1886).
[0024] Pokazano je da konjugat antitela i leka sa EphA2 značajno smanjuje rast tumora kod pacova i miševa, kao modela ksenotransplantata (Jackson et al (2008) Cancer Research 68, 9367-9374), a sličan pristup je isproban i kod ljudi, iako se lečenje moralo prekinuti usled neželjenih događaja povezanih sa lečenjem (Annunziata et al (2013) Invest New drugs 31, 77-84).
[0025] U jednom slučaju opšteg prikaza (ne čini deo predmetnog pronalaska), prvi peptidni ligand sadrži biciklični peptidni ligand koji se vezuje za EphA2. Pogodni primeri bicikličnih peptidnih liganda koji se vezuju za EphA2 su otkriveni u WO 2019/122860, WO 2019/122861 i WO 2019/122863. U jednom slučaju, biciklični peptid koji se vezuje za EphA2 je izabran iz bilo kog od peptida SEQ ID NOS: 10 do 51 opisanih ovde.
[0026] U alternativnom slučaju opšteg prikaza, komponenta koja se nalazi na ćeliji kancera je PD-L1 (ponovo, ne čini deo predmentog pronalaska).
[0027] Ligand 1 programirane ćelijske smrti (PD-L1) je transmembranski protein tipa I od 290 aminokiselina koji kodira gen CD274 na mišjem hromozomu 19 i ljudskom hromozomu 9. Ekspresija PD-L1 je uključena u izbegavanje imunih odgovora uključenih u hroničnu infekciju, npr., hroničnu virusnu infekciju (uključujući, na primer, HIV, HBV, HCV i HTLV, između ostalih), hroničnu bakterijsku infekciju (uključujući, na primer, Helicobacter pylori, između ostalih) i hroničnu parazitsku infekciju (uključujući, na primer, Schistosoma mansoni). Ekspresija PD-L1 je otkrivena u brojnim tkivima i tipovima ćelija, uključujući T-ćelije, B-ćelije, makrofage, dendritične ćelije i nehematopoetske ćelije, uključujući endotelne ćelije, hepatocite, mišićne ćelije i placentu.
[0028] Ekspresija PD-L1 je takođe uključena u supresiju antitumorske imunske aktivnosti. Tumori eksprimuju antigene koje mogu prepoznati T-ćelije domaćina, ali je retko imunološko eliminisanje tumora. Deo ovog neuspeha je posledica imunosupresije tumorskim mikrookruženjem. Ekspresija PD-L1 na mnogim tumorima je komponenta ovog supresivnog miljea i deluje zajedno sa drugim imunosupresivnim signalima. Ekspresija PD-L1 je pokazana in situ na širokom spektru solidnih tumora, uključujući tumore dojke, pluća, debelog creva, jajnika, melanoma, bešike, jetre, pljuvačke, želuca, glioma, štitne žlezde, timusnog epitela, glave i vrata (Brown JA et al.2003 Immunol.170:1257-66; Dong H et al. 2002 Nat. Med. 8:793-800; Hamanishi J, et al. 2007 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 104:3360-65; Strome SE et al.2003 Cancer Res.63:6501-5; Inman BAetal.2007 Cancer 109:1499-505; Konishi J et al.2004 Clin. Cancer Res.10:5094-100; Nakanishi J etal.2007 Cancer Immunol. Immunother.56:1173-82; NomiTetal.2007 Clin. Cancer Res.13:2151-57; Thompson RH et al.2004 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101: 17174-79; Wu C et al.2006 Acta Histochem.108:19-24). Dodatno, ekspresija receptora za PD-L1, proteina programirane ćelijske smrti 1 (takođe poznatog kao PD-1 i CD279), je pojačana na limfocitima koji infiltriraju tumor, a to takođe doprinosi imunosupresiji tumora (Blank C et al. 2003 Immunol.
171:4574-81). Najvažnije je da studije koje povezuju ekspresiju PD-L1 na tumorima sa ishodom bolesti pokazuju da ekspresija PD-L1 snažno korelira sa nepovoljnom prognozom kod raka bubrega, jajnika, bešike, dojke, želuca i pankreasa (Hamanishi J et al.2007 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 104:3360-65; Inman BA et al.2007 Cancer 109:1499-505; Konishi J et al.2004 Clin. Cancer Res.10:5094-100; Nakanishi J et al. 2007 Cancer Immunol. Immunother.56:1173-82; Nomi Tet al.2007 Clin. Cancer Res.13:2151 -57; Thompson RH et al.2004 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101:17174-79; Wu C et al.2006 Acta Histochem.
108:19-24). Pored toga, ove studije sugerišu da viši nivoi ekspresije PD-L1 na tumorima mogu olakšati napredovanje stadijuma tumora i invaziju u dublje strukture tkiva.
[0029] PD-1 put takođe može igrati ulogu u hematološkim malignitetima. PD-L1 se eksprimuje na ćelijama multiplog mijeloma, ali ne i na normalnim plazma ćelijama (Liu J et al.2007 Blood 110:296-304). PD-L1 se eksprimuje na nekim primarnim T-ćelijskim limfomima, posebno na anaplastičnim krupnoćelijskim T limfomima (Brown JA et al, 2003 Immunol.170:1257-66). PD-1 se visoko eksprimuje na T-ćelijama angioimunoblastičnih limfoma, a PD-L1 se eksprimuje na pridruženoj folikularno dendritičnoj ćelijskoj mreži (Dorfman DM et al.2006 Am. J. Surg. Pathol.30:802-10). Kod nodularnog
1
limfocit-predominantnog Hodčkinovog limfoma, T-ćelije povezane sa limfocitnim ili histiocitnim (L&H) ćelijama eksprimuju PD-1. Analiza mikročipova korišćenjem očitavanja gena indukovanih ligacijom PD-1 sugeriše da T-ćelije povezane sa tumorom reaguju na PD-1 signale in situ kod Hodčkinovog limfoma (Chemnitz JM et al. 2007 Blood 110:3226-33). PD-1 i PD-L1 su eksprimovani na CD4 T-ćelijama kod HTLV-1-posredovne T-ćelijske leukemije i limfoma kod odraslih (Shimauchi T et al.2007 Int. J. Cancer 121: 2585-90). Ove tumorske ćelije su hiporesponsivne na signale od TCR.
[0030] Studije na životinjskim modelima pokazuju da PD-L1 na tumorima inhibira aktivaciju i lizu T-ćelija i u nekim slučajevima dovodi do povećane tumor-specifične smrti T-ćelija (Dong H et al. 2002 Nat. Med.8:793-800; Hirano F et al.2005 Cancer Res.65:1089-96). APC povezane sa tumorom takođe mogu koristiti PD-1:PD-L1 put za kontrolu antitumorskih T-ćelijskih odgovora. Ekspresija PD-L1 na populaciji mijeloidnih dendritskih ćelija povezanih sa tumorom je pojačana faktorima okoline tumora (Curiel TJ et al.2003 Nat. Med.9:562-67). Plazmacitoidne dendritične ćelije (DC) u limfnom čvoru koji drenira tumor melanoma B16 eksprimuju IDO, što snažno aktivira supresivnu aktivnost regulatornih T-ćelija. Supresivna aktivnost regulatornih T-ćelija tretiranih IDO zahtevala je kontakt ćelija sa dendritičkim ćelijama koje eksprimuju IDO (Sharma MD et al.2007 Clin. Invest.117:2570-82).
[0031] U jednom slučaju opšteg prikaza (ne čini deo ovog pronalaska), prvi peptidni ligand sadrži biciklični peptidni ligand koji se vezuje za PD-L1. U jednom slučaju, biciklični peptid koji se vezuje za PD-L1 je izabran iz bilo kog od ovde opisanih peptida SEQ ID NOS: 1 do 9.
[0032] U alternativnom slučaju opšteg prikaza, komponenta prisutna na ćeliji kancera je prostataspecifični membranski antigen (PSMA) (ponovo, ne čini deo ovog pronalaska).
[0033] Prostata-specifični membranski antigen (PSMA) (takođe poznat kao glutamat karboksipeptidaza II (GCPII), N-acetil-L-aspartil-L-glutamat peptidaza I (NAALAdase I) i NAAG peptidaza) je enzim koji je kod ljudi kodiran genom FOLH1 (folat hidrolaza 1). Ljudski GCPII sadrži 750 aminokiselina i teži približno 84 kDa.
[0034] Ljudski PSMA se visoko eksprimuje u prostati, otprilike sto puta više nego u većini drugih tkiva. Kod nekih karcinoma prostate, PSMA je drugi najregulisaniji genski proizvod, sa povećanjem od 8 do 12 puta u odnosu na nivoe kod nekanceroznih ćelija prostate. Zbog ove visoke ekspresije, PSMA se razvija kao potencijalni biomarker za terapiju i snimanje nekih karcinoma. Kod ljudskog kancera prostate, tumori sa većom ekspresijom povezani su sa bržim vremenom do progresije i većim procentom pacijenata koji pate od recidiva.
[0035] U jednom slučaju opšteg prikaza (nije deo predmetnog pronalaska), prvi peptidni ligand sadrži biciklični peptidni ligand koji se vezuje za PSMA.
Drugi peptidni ligandi
[0036] Reference ovde na izraz "imunska ćelija" uključuju bilo koju ćeliju unutar imunskog sistema. Pogodni primeri uključuju bela krvna zrnca, kao što su limfociti (npr. T-limfociti ili T-ćelije, B-ćelije ili ćelije prirodne ubice). U jednom slučaju, T ćelija je CD8 ili CD4. U daljem slučaju, T ćelija je CD8. Drugi primeri imunih ćelija uključuju dendritične ćelije, folikularne dendritične ćelije i granulocite.
[0037] U jednom slučaju, komponenta prisutna na imunoj ćeliji je CD137.
[0038] CD137 je član porodice receptora faktora nekroze tumora (TNF). Njegovi alternativni nazivi su član superporodice 9 receptora faktora nekroze tumora (TNFRSF9), 4-IBB i indukovan je aktivacijom limfocita (ILA). CD137 može biti eksprimovan aktiviranim T ćelijama, ali u većem obimu na CD8+ nego na CD4+ T ćelijama. Pored toga, ekspresija CD137 se nalazi na dendritičnim ćelijama, folikularnim dendritičnim ćelijama, ćelijama prirodnim ubicama, granulocitima i ćelijama zidova krvnih sudova na mestima upale. Jedna od karakterističnih aktivnosti CD137 je njegova kostimulatorna aktivnost za aktivirane T ćelije. Umrežavanje CD137 poboljšava proliferaciju T ćelija, lučenje IL-2, preživljavanje i citolitičku aktivnost. Dalje, može poboljšati imunsku aktivnost kako bi eliminisao tumore kod miševa.
[0039] CD137 je kostimulatorni receptor T-ćelija indukovan po aktivaciji TCR-a (Nam et al., Curr. Cancer Drug Targets, 5:357-363(2005); Waits etal., Annu. Rev, Immunol., 23:23-68(2005)). Pored ekspresije na aktiviranim CD4+ i CD8+ T ćelijama, CD137 se takođe eksprimuje na CD4+CD25+ regulatornim T ćelijama, ćelijama prirodnim ubicama (NK) i NK-T-ćelijama, monocitima, neutrofilima i dendritičnim ćelijama. Njegov prirodni ligand, CD137L, opisan je na ćelijama koje prezentuju antigen, uključujući B ćelije, monocite/makrofage i dendritične ćelije (Watts et al. Annu. Rev. Immunol, 23:23-68 (2005)). U interakciji sa svojim ligandom, CD137 dovodi do povećane TCR-indukovane proliferacije T-ćelija, proizvodnje citokina, funkcionalnog sazrevanja i produženog preživljavanja CD8+ T-ćelija (Nam et al, Curr. Cancer Drug Targets, 5:357-363 (2005), Watts et d - I., Annu. Rev. Immunol, 23:23-68 (2005)).
[0040] Signalizacija preko CD137 ili putem CD137L ili agonističkim monoklonskim antitelom (mAt-a) protiv CD137 dovodi do povećanja proliferacije T ćelija indukovane TCR-om, proizvodnje citokina i funkcionalnog sazrevanja, i produženog preživljavanja CD8+ T ćelija. Ovi efekti su rezultat: (1) aktivacije signalnih puteva NF-kB, c-Jun NH2-terminalne kinaze/stresom aktivirane protein kinaze (JNK/SAPK) i p38 mitogenom aktivirane protein kinaze (MAPK), i (2) kontrole antiapoptotičke i sa ćelijskim ciklusom povezane ekspresije gena.
[0041] Eksperimenti koji su sprovedeni i kod CD137 i CD137L-deficijentnih miševa dodatno su pokazale značaj kostimulacije CD137 u dobijanju potpuno kompetentnog T ćelijskog odgovora.
[0042] IL-2 i IL-15 aktivirane NK ćelije eksprimuju CD137, i ligacija pomoću agonističkih CD137 mAt-a stimuliše proliferaciju NK ćelija i sekreciju IFN-y, ali ne i njihovu citolitičku aktivnost.
[0043] Dalje, NK ćelije stimulisane CD137 promovišu ekspanziju aktiviranih T ćelija in vitro.
[0044] U skladu sa njihovom kostimulatornom funkcijom, pokazano je da agonist mAt-a protiv CD137 promoviše odbacivanje srčanih i kožnih alografta, eradikaciju već postojećih tumora, proširivanje primarnih antivirusnih CD8+ T-ćelijskih odgovora i povećanje citolitičkog potencijala T-ćelija. Ove studije podržavaju stav da CD137 signalizacija promoviše funkciju T-ćelija što može poboljšati imunitet protiv tumora i infekcija.
[0045] U jednom slučaju, drugi peptidni ligand sadrži biciklični peptidni ligand koji se vezuje za CD137.
[0046] Pogodni primeri biciklični peptidni ligandi koji se vezuju za CD137 su prikazani u WO 2019/025811.
[0047] U jednom slučaju, biciklični peptid koji se vezuje za CD137 je odabran od bilo kojih od ovde opisanih peptida SEQ ID NOS: 67 do 84.
Linkeri
[0048] Treba razumeti da prvi peptidni ligand može biti konjugovan sa drugim peptidnim ligandom preko bilo kog odgovarajućeg linkera. Tipično, dizajn pomenutog linkera će biti takav da se dva biciklična peptida prikazuju na takav način da se mogu neopterećeno vezati za svoje odgovarajuće mete bilo sami ili dok se istovremeno vezuju za oba ciljna receptora. Dodatno, linker treba da omogući istovremeno vezivanje za obe mete, uz održavanje odgovarajuće udaljenosti između ciljnih ćelija što bi dovelo do željenog funkcionalnog ishoda. Osobine linkera mogu biti modulirane da bi se povećala dužina, krutost ili rastvorljivost radi optimizacije željenog funkcionalnog ishoda. Linker takođe može
1
biti dizajniran da omogući vezivanje više od jednog bicikla za istu metu. Povećanje valence bilo kog vezujućeg peptida može poslužiti za povećanje afiniteta heterotandema za ciljne ćelije ili može pomoći u indukovanju oligomerizacije jednog ili oba ciljna receptora.
[0049] U jednom slučaju, linker je odabran iz sledećih sekvenci: -PEG5- i TCA-[PEG10]3.
[0050] Strukturni prikazi ovih linkera prikazani su detaljno u nastavku:
Heterotandemski kompleksi
[0051] U jednom specifičnom slučaju opšteg prikaza (ali nije deo predmetnog pronalaska), prvi peptidni ligand sadrži biciklični peptidni ligand koji se vezuje za PD-L1 vezan za TATA skelu, drugi peptidni ligand sadrži biciklični peptidni ligand koji se vezuje za CD137 vezan za TATA skelu i pomenuti heterotandemski kompleks je izabran iz kompleksa koji su navedeni u Tabeli A:
Tabela A (PD-L1 : CD137; 1:1)
1
[0052] U jednom takvom slučaju, heterotandemski biciklični peptidni kompleks je odabran od: BCY12375 i BCY12021.
[0053] U jednom specifičnom slučaju opšteg prikaza (ponovo, nije deo predmetnog pronalaska), prvi peptidni ligand sadrži biciklični peptidni ligand koji vezuje EphA2 vezan za TATA skelu, drugi peptidni ligand koji sadrži biciklični peptidni ligand koji se vezuje za CD137 vezan za TATA skelu i pomenuti heterotandemski kompleks je odabran iz kompleksa koji su navedeni u Tabeli B:
Tabela B (EphA2 : CD137; 1:1
(nastavak)
1
(nastavak)
1
[0054] U jednom takvom slučaju, heterotandemski biciklični peptidni kompleks je odabran od: BCY13035, BCY13040, BCY13253, BCY13254, BCY13340 i BCY13342.
[0055] U jednom specifičnom slučaju opšteg prikaza (ponovo, nije deo predmetnog pronalaska), prvi peptidni ligand sadrži biciklični peptidni ligand koji se vezuje za Nektin-4 vezan za TATA skelu, drugi peptidni ligand sadrži biciklični peptid koji se vezuje za CD137 vezan za TATA skelu i pomenuti heterotandemski kompleks je odabran od kompleksa koji su navedeni u Tabeli C:
Tabela C (Nektin-4 : CD137; 1:1)
(nastavak)
1
[0056] U jednom takvom slučaju, heterotandemski biciklični peptidni kompleks je odabran od: BCY11468, BCY11618, BCY11776, BCY11860, BCY12020, BCY12661 i BCY12969.
[0057] Osim ukoliko nije drugačije definisano, svi ovde korišćeni tehnički i naučni termini imaju isto značenje kao što sto obično razume osoba koja je uobičajeno verzirana u stanje tehnike, kao što su oblasti peptidne hemije, ćelijske kulture i fagnog prikaza, hemije nukleinskih kiselina i biohemije. Standardne tehnike se koriste za molekularnu biologiju, genetičke i biohemijske postupke (videti Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., 2001, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology (1999) 4. izdanje John Wiley & Sons, Inc.).
Nomenklatura
Molekularni format
[0058] Proširenja N- ili C-kraja sekvence jezgra bicikla dodaju se na levu ili desnu stranu sekvence, odvojene crticom. Na primer, pAla-Sar10-Ala rep N-kraja bi bio označen kao: βAla-Sar10-A-(SEQ ID NO: X).
Invertovane peptidne sekvence
[0059] U svetlu otkrića u Nair et al (2003) J Immunol 170(3), 1362-1373, zamišljeno je da bi peptidne sekvence otkrivene ovde takođe našle primenu u svom retro-invertovanom obliku. Na primer, ove sekvence su obrnute (tj. N-kraj postaje C-kraj i obrnuto) i njihova stereohemija je takođe obrnuta (tj. D-aminokiseline postaju L-aminokiseline i obrnuto). Radi izbegavanja sumnje, reference na aminokiseline, bilo kao njihov puni naziv ili kao njihove jednoslovne ili troslovne šifre, ovde se predstavljaju kao L-aminokiseline, osim ako nije drugačije naznačeno. Ako je takva aminokiselina predstavljena kao D-aminokiselina, onda će aminokiselina biti započeta malim slovom „d“ unutar uglastih zagrada, na primer [dA], [dD], [dE], [dK], [d1Nal], [dNle] itd.
Peptidni ligandi
[0060] Peptidni ligand, kao što se ovde koristi, odnosi se na peptid kovalentno vezan za molekularnu skelu.
Reaktivne grupe
[0061] Molekularna skela može biti vezana za polipeptid putem funkcionalnih ili reaktivnih grupa na polipeptidu. One se tipično formiraju od bočnih lanaca određenih aminokiselina koje se nalaze u polipeptidnom polimeru. Generalno, takve reaktivne grupe mogu biti bočni lanac cisteina, bočni lanac lizina ili N-terminalna aminska grupa ili bilo koja druga pogodna reaktivna grupa, kao što je penicilamin. Detalji o pogodnim reaktivnim grupama mogu se naći u WO 2009/098450. Međutim, napominje se da je u peptidnom ligandu i peptidnom kompleksu ovog pronalaska polipeptid specifično modifikovani derivat specifične sekvence koja sadrži tri cisteinska ostatka, gde je jedan ili više ovih cisteinskih ostataka zamenjen reaktivnom grupom izabranom iz 3-merkaptopropanske kiseline, cisteamina i penicilamina.
[0062] Primeri reaktivnih grupa prirodnih aminokiselina su tiolna grupa cisteina, amino grupa lizina, karboksilna grupa aspartata ili glutamata, gvanidinijumska grupa arginina, fenolna grupa tirozina ili hidroksilna grupa serina. Neprirodne aminokiseline mogu da obezbede širok spektar reaktivnih grupa, uključujući azid, keto-karbonil, alkin, vinil ili aril halidnu grupu. Amino i karboksilna grupa na krajevima polipeptida takođe mogu da služe kao reaktivne grupe za formiranje kovalentnih veza sa molekularnim skelom/molekularnim jezgrom.
2
[0063] Polipeptidi iz ovog prikaza sadrže najmanje tri reaktivne grupe. Navedeni polipeptidi takođe mogu da sadrže četiri ili više reaktivnih grupa. Što se više reaktivnih grupa koristi, više petlji se može formirati u molekularnoj skeli.
[0064] U poželjnom slučaju, generišu se polipeptidi sa tri reaktivne grupe. Reakcija navedenih polipeptida sa molekularnim skelom/molekularnim jezgrom koji ima trostruku rotacionu simetriju generiše jedan izomer proizvoda. Generisanje jednog izomera proizvoda je povoljno iz nekoliko razloga. Nukleinske kiseline biblioteka jedinjenja kodiraju samo primarne sekvence polipeptida, ali ne i izomerno stanje molekula koji se formiraju reakcijom polipeptida sa molekularnim jezgrom. Ako se može formirati samo jedan izomer proizvoda, dodeljivanje nukleinske kiseline izomeru proizvoda je jasno definisano. Ako se formira više izomera proizvoda, nukleinska kiselina ne može dati informacije o prirodi izomera proizvoda koji je izolovan u procesu skrininga ili selekcije. Formiranje jednog izomera proizvoda je takođe povoljno ako se sintetiše određeni član biblioteke iz ovog otkrića. U ovom slučaju, hemijska reakcija polipeptida sa molekularnim skelom daje jedan izomer proizvoda, a ne smešu izomera.
[0065] U drugom slučaju, generišu se polipeptidi sa četiri reaktivne grupe. Reakcija pomenutih polipeptida sa molekularnim skelom/molekularnim jezgrom koje ima tetraedarsku simetriju generiše dva izomera proizvoda. Iako su dva različita izomera proizvoda kodirana jednom istom nukleinskom kiselinom, izomerna priroda izolovanog izomera može se odrediti hemijskom sintezom oba izomera, razdvajanjem dva izomera i testiranjem oba izomera na vezivanje za ciljni ligand.
[0066] U jednom slučaju, najmanje jedna od reaktivnih grupa polipeptida je ortogonalna u odnosu na preostale reaktivne grupe. Upotreba ortogonalnih reaktivnih grupa omogućava usmeravanje pomenutih ortogonalnih reaktivnih grupa na specifična mesta molekularnog jezgra. Strategije povezivanja koje uključuju ortogonalne reaktivne grupe mogu se koristiti za ograničavanje broja formiranih izomera proizvoda. Drugim rečima, izborom različitih reaktivnih grupa za jednu ili više od najmanje tri veze u odnosu na one izabrane za preostale od najmanje tri veze, može se korisno postići određeni redosled vezivanja ili usmeravanja specifičnih reaktivnih grupa polipeptida na specifične pozicije na molekularnoj skeli.
[0067] U drugom slučaju, reaktivne grupe polipeptida reaguju sa molekularnim linkerima, pri čemu su navedeni linkeri sposobni da reaguju sa molekularnom skelom tako da će linker intervenisati između molekularne skele i polipeptida u konačnom vezanom stanju.
[0068] U nekim slučajevima, aminokiseline članova biblioteka ili skupova polipeptida mogu se zameniti bilo kojom prirodnom ili neprirodnom aminokiselinom. Iz ovih zamenljivih aminokiselina su isključene one koje sadrže funkcionalne grupe za umrežavanje polipeptida sa molekularnim jezgrom, tako da su same sekvence petlji zamenljive. Zamenljive polipeptidne sekvence imaju ili slučajne sekvence, konstantne sekvence ili sekvence sa slučajnim i konstantnim aminokiselinama. Aminokiseline sa reaktivnim grupama se nalaze ili na definisanim pozicijama unutar polipeptida, pošto položaj ovih aminokiselina određuje veličinu petlje.
[0069] U jednom slučaju, polipeptid sa tri reaktivne grupe ima sekvencu (X)IY(X)mY(X)nY(X)o, gde Y predstavlja aminokiselinu sa reaktivnom grupom, X predstavlja slučajnu aminokiselinu, m i n su brojevi između 3 i 6 koji definišu dužinu poprečnih polipeptidnih segmenata, koji mogu biti isti ili različiti, a I i o su brojevi između 0 i 20 koji definišu dužinu bočnih polipeptidnih segmenata.
[0070] Alternative tiol-posredovanim spajanjima se mogu koristiti za vezivanje molekularne skele za peptid putem kovalentnih interakcija. Alternativno, ove tehnike se mogu koristiti u modifikaciji ili vezivanju daljih delova (kao što su mali molekuli od interesa koji se razlikuju od molekularne skele) za polipeptid nakon što su odabrani ili izolovani prema ovom otkriću - u ovom slučaju, jasno je da vezivanje ne mora biti kovalentno i može obuhvatiti nekovalentno vezivanje. Ovi postupci se mogu koristiti umesto (ili u kombinaciji sa) tiol-posredovanim postupcima za proizvodnju faga koji prikazuju proteine i peptide koji nose neprirodne aminokiseline sa potrebnim hemijskim reaktivnim grupama, u kombinaciji malih molekula koji nose komplementarnu reaktivnu grupu, ili ugradnjom neprirodnih aminokiselina u hemijski ili rekombinantno sintetizovani polipeptid kada se molekul pravi nakon faze selekcije/izolacije. Više detalja može se naći u WO2009/098450 ili Heinisetal., NatChem Biol2009,5 (7), 502-7. U jednom slučaju, reaktivne grupe su odabrane iz cisteina, 3-merkaptopropanske kiseline i/ili ostataka cisteamina.
[0071] Iako gore navedeno pomaže u razumevanju konteksta ovog pronalaska, ponovo se napominje da je u ovom pronalasku polipeptid koji se sastoji od peptidnog liganda i prvog peptidnog liganda peptidnog kompleksa modifikovani derivat CP[1Nal][dD]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC gde je jedan ili više cisteinskih ostataka zamenjen reaktivnom grupom izabranom iz 3-merkaptopropanske kiseline, cisteamina i penicilamina.
Farmaceutski prihvatljive soli
[0072] Treba razumeti da oblici soli spadaju u obim ovog pronalaska, a reference na peptidne ligande uključuju oblike soli navedenih liganda.
[0073] Soli ovog pronalaska mogu se sintetizovati iz matičnog jedinjenja koje sadrži bazni ili kiseli deo konvencionalnim hemijskim postupcima, kao što su postupci opisani u „Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P Heinrich Stahl (Editor), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3-90639-026-8, Hardcover, 388 stranice, avgust 2002. Generalno, takve soli se mogu pripremiti reakcijom slobodnih kiselinih ili baznih oblika ovih jedinjenja sa odgovarajućom bazom ili kiselinom u vodi ili u organskom rastvaraču, ili u smeši ova dva.
[0074] Soli dobijene adicijom kiselina (mono- ili di-soli) mogu se formirati sa širokim spektrom kiselina, kako neorganskih tako i organskih. Primeri soli dobijenih adicijom kiselina uključuju mono- ili di-soli formirane sa kiselinom izabranom iz grupe koja se sastoji od sirćetne, 2,2-dihlorsirćetne, adipinske, alginske, askorbinske (npr. L-askorbinske), L-asparginske, benzensulfonske, benzojeve, 4-acetamidobenzoeve, butanske, (+) kamforne, kamfor-sulfonske, (+)-(1S)-kampfor-10-sulfonske, kaprinske, kapronske, kaprilne, cimetne, limunske, ciklaminske, dodecilsumporne, etan-1,2-disulfonske, etansulfonske, 2-hidroksietansulfonske, mravlje, fumarne, galaktarne, gentizinske, glukoheptonske, D-glukonske, glukuronske (npr. D-glukuronske), glutaminske (npr. L-glutaminske), αoksoglutarne, glikolne, hipurne, halogenovodonične kiseline (npr. bromovodonična, hlorovodonična, jodidna), izetijske, mlečne (npr. (+)-L-mlečne, (±)-DL-mlečne), laktobionske, maleinske, jabučne, (-)-L-jabučne, malonske, (±)-DL-bademove, metansulfonske, naftalen-2-sulfonske, naftalen-1,5-disulfonske, 1-hidroksi-2-naftojeve, nikotinske, azotne, oleinske, orotične, oksalne, palmitinske, pamoinske, fosforne, propanske, piruvinske, L-piroglutaminske, salicilne, 4-amino-salicilne, sebacinske, stearinske, ćilibarne, sumporne, taninske, (+)-L-vinske, tiocijanske, p-toluensulfonske, undecilenske i valerijanse kiseline, kao i acilovane aminokiseline i katjonske izmenjivačke smole.
[0075] Jedna posebna grupa soli sastoji se od soli formiranih od sirćetne, hlorovodonične, jodidne, fosforne, azotne, sumporne, limunske, mlečne, ćilibarne, maleinske, jabučne, izetionske, fumarne, benzensulfonske, toluensulfonske, sumporne, metansulfonske (mezilatne), etansulfonske, naftalensulfonske, valerinske, propanoinske, butanske, malonske, glukuronske i laktobionske kiseline. Jedna posebna so je hidrohloridna so. Druga posebna so je acetatna so.
[0076] Ako je jedinjenje anjonsko ili ima funkcionalnu grupu koja može biti anjonska (npr., -COOH može biti -COO-), tada se so može formirati sa organskom ili neorganskom bazom, stvarajući odgovarajući katjon. Primeri odgovarajućih neorganskih katjona uključuju, ali nisu ograničeni na, jone alkalnih metala kao što su Li<+>, Na<+>i K<+>, katjone zemnoalkalnih metala kao što su Ca<2+>i Mg<2+>, i druge katjone kao što su Al<3+>ili Zn<+>. Primeri odgovarajućih organskih kationa uključuju, ali nisu ograničeni na, amonijum jon (tj. NH<4+>) i supstituisane amonijum jone (npr. NH3R<+>, NH2R2<+>, NHR3<+>, NR4<+>). Primeri nekih odgovarajućih supstituisanih amonijumovih jona su oni izvedeni iz: metilamina, etilamina, dietilamina, propilamina, dicikloheksilamina, trietilamina, butilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina, benzilamina, fenilbenzilamina, holina, meglumina i trometamina, kao i aminokiseline, kao što su lizin i arginin. Primer uobičajenog kvaternarnog amonijum jona je N(CH3)4<+>.
[0077] Tamo gde jedinjenja opisana ovde sadrže amino funkciju, ona mogu formirati kvaternarne amonijumove soli, na primer reakcijom sa alkilujućim sredstvom prema postupcima koje su dobro poznati stručnjaku u ovoj oblasti.
Modifikovani derivati
[0078] Primeri modifikovanih derivata peptidnih liganda kako je ovde definisano uključuju jednu ili više modifikacija izabranih od: modifikacija N-kraja i/ili C-kraja;
zamena jednog ili više aminokiselinskih ostataka sa jednom ili više neprirodnih aminokiselinskih ostataka (kao što je zamena jednog ili više polarnih aminokiselinskih ostataka sa jednom ili više izosternih ili izoelektronskih aminokiselina; zamena jednog ili više nepolarnih aminokiselinskih ostataka sa drugim neprirodnim izosternim ili izoelektronskim aminokiselinama); dodavanje spejser grupe; zamena jednog ili više aminokiselinskih ostataka osetljivih na oksidaciju sa jednim ili više aminokiselinskih ostataka otpornih na oksidaciju; zamena jednog ili više aminokiselinskih ostataka sa alaninom, zamena jednog ili više L-aminokiselinskih ostataka sa jednim ili više D-aminokiselinskih ostataka; N-alkilacija jedne ili više amidnih veza unutar bicikličnog peptidnog liganda; zamena jedne ili više peptidnih veza surogatnom vezom; modifikacija dužine peptidnog skeleta; zamena vodonika na alfa-ugljeniku jedne ili više aminokiselinskih ostataka drugom hemijskom grupom, modifikacija aminokiselina kao što su cistein, lizin, glutamat/aspartat i tirozin odgovarajućim amino, tiol, karboksilna kiselina i fenol-reaktivni reagensi kako bi se funkcionalizovale pomenute aminokiseline, i uvođenje ili zamena aminokiselina koje uvode ortogonalne reaktivnosti koje su pogodne za funkcionalizaciju, na primer, aminokiseline koje nose azidne ili alkinske grupe i koje omogućavaju funkcionalizaciju sa alkinskim ili azidnim delovima, respektivno. Modifikovani derivati van obima priloženih zahteva nisu deo ovog pronalaska.
[0079] U jednom slučaju, modifikovani derivat sadrži modifikaciju N-kraja i/ili C-kraja. U daljem slučaju, modifikovani derivat sadrži modifikaciju N-kraja korišćenjem odgovarajuće amino-reaktivne hemije i/ili modifikaciju C-kraja korišćenjem odgovarajuće karboksi-reaktivne hemije. U daljem slučaju, pomenuta modifikacija N-kraja ili C-kraja sadrži dodavanje efektorske grupe, uključujući, ali ne ograničavajući se na citotoksični agens, radiohelator ili hromofor.
[0080] U daljem slučaju, modifikovani derivat sadrži modifikaciju N-kraja. U daljem slučaju, modifikacija N-kraja sadrži acetilnu grupu N-kraja. U ovom slučaju, cisteinska grupa N-kraja (grupa koja se ovde naziva Ci) je zatvorena sirćetnim anhidridom ili drugim odgovarajućim reagensima tokom sinteze peptida, što dovodi do molekula koji je acetilovan na N-kraju. Ovaj slučaj pruža prednost uklanjanja potencijalne tačke prepoznavanja za aminopeptidaze i izbegava mogućnost degradacije bicikličnog peptida.
2
[0081] U alternativnom slučaju, modifikacija N-kraja obuhvata dodavanje molekularne spejser grupe koja olakšava konjugaciju efektorskih grupa i zadržavanje potencije bicikličnog peptida u odnosu na njegovu metu.
[0082] U daljem slučaju, modifikovani derivat obuhvata modifikaciju C-kraja. U daljem slučaju, modifikacija C-kraja obuhvata amidnu grupu. U ovom slučaju, cisteinska grupa C-kraja (grupa koja se ovde naziva Ciii) sintetiše se kao amid tokom sinteze peptida, što dovodi do molekula koji amidiran na C-kraju. Ovaj slučaj pruža prednost uklanjanja potencijalne tačke prepoznavanja za karboksipeptidazu i smanjuje potencijal za proteolitičku razgradnju bicikličnog peptida.
[0083] U jednom slučaju, modifikovani derivat obuhvata zamenu jednog ili više aminokiselinskih ostataka sa jednim ili više neprirodnih aminokiselinskih ostataka. U ovom slučaju, neprirodne aminokiseline mogu biti odabrane tako što imaju izosterne/izoelektronske bočne lance koje ne prepoznaju niti degradativne proteaze niti imaju bilo kakav negativan efekat na potenciju mete.
[0084] Alternativno, mogu se koristiti neprirodne aminokiseline koje imaju ograničene bočne lance aminokiselina, tako da je proteolitička hidroliza obližnje peptidne veze konformaciono i sterički otežana. To se posebno odnosi na analoge prolina, glomazne bočne lance, Ca-disupstituisane derivate (na primer, aminoizobuterna kiselina, Aib) i ciklo aminokiseline, pri čemu je jednostavan derivat aminociklopropilkarboksilna kiselina.
[0085] U jednom slučaju, modifikovani derivat obuhvata dodavanje razmakne grupe. U daljem slučaju, modifikovani derivat obuhvata dodavanje spejser grupe na cistein N-kraja (Ci) i/ili cistein C-kraja (Ciii).
[0086] U jednom slučaju, modifikovani derivat obuhvata zamenu jednog ili više ostataka aminokiselina osetljivih na oksidaciju sa jednim ili više ostataka aminokiselina otpornih na oksidaciju. U daljem slučaju, modifikovani derivat obuhvata zamenu ostatka triptofana sa ostatkom naftilalanina ili alanina. Ovaj slučaj pruža prednost poboljšanja profila farmaceutske stabilnosti dobijenog bicikličnog peptidnog liganda.
[0087] U jednom slučaju, modifikovani derivat obuhvata zamenu jednog ili više naelektrisanih ostataka aminokiselina sa jednim ili više hidrofobnih ostataka aminokiselina. U alternativnom slučaju, modifikovani derivat obuhvata zamenu jednog ili više hidrofobnih ostataka aminokiselina sa jednim ili više naelektrisanih ostataka aminokiselina. Ispravan balans naelektrisanih naspram hidrofobnih ostataka aminokiselina je važna karakteristika bicikličnih peptidnih liganda. Na primer, hidrofobni ostaci aminokiselina utiču na stepen vezivanja za proteine plazme i samim tim na koncentraciju slobodne dostupne frakcije u plazmi, dok naelektrisani ostaci aminokiselina (posebno arginin) mogu uticati na interakciju peptida sa fosfolipidnim membranama na ćelijskim površinama. Njih dva u kombinaciji mogu uticati na poluživot, zapreminu distribucije i izloženost peptidnog leka i mogu se prilagoditi prema kliničkom cilju. Pored toga, ispravna kombinacija i broj naelektrisanih naspram hidrofobnih ostataka aminokiselina mogu smanjiti iritaciju na mestu injekcije (ako je peptidni lek primenjen subkutano).
[0088] U jednom slučaju, modifikovani derivat obuhvata zamenu jednog ili više L-aminokiselinskih ostataka sa jednim ili više D-aminokiselinskih ostataka. Veruje se da ovaj slučaj povećava proteolitičku stabilnost steričkim smetnjama i sklonošću D-aminokiselina da stabilizuju konformacije β-okreta (Tugyi et al (2005) PNAS, 102(2), 413-418).
[0089] U jednom slučaju, modifikovani derivat obuhvata uklanjanje bilo kojih aminokiselinskih ostataka i supstituciju alaninima. Ovaj slučaj pruža prednost uklanjanja potencijaln(og)ih mest(o)a proteolitičkog(ih) napad(a).
[0090] Treba napomenuti da svaka od gore pomenutih modifikacija služi za namerno poboljšanje potencije ili stabilnosti peptida. Dalja poboljšanja potencije zasnovana na modifikacijama mogu se postići sledećim mehanizmima:
- Uključivanje hidrofobnih delova koji koriste hidrofobni efekat i dovode do nižih stopa oslobađanja, tako da se postižu veći afiniteti;
-Uključivanje naelektrisanih grupa koje koriste jonske interakcije dugog dometa, što dovodi do većih brzina i većeg afiniteta (videti na primer Schreiber et al, Rapid, electrostatically assisted association of proteins (1996), Nature Struct. Biol.3, 427-31); i
-Uključivanje dodatnog ograničenja u peptid, na primer, pravilnim ograničavanjem bočnih lanaca aminokiselina tako da je gubitak entropije minimalan pri vezivanju za metu, ograničavanjem torzionih uglova okosnice tako da je gubitak entropije minimalan pri vezivanju za metu i uvođenjem dodatnih ciklizacija u molekul radi identičnih razloga. (za preglede videti Gentilucci et al, Curr. Pharmaceutical Design, (2010), 16, 3185-203, and Nestor et al, Curr. Medicinal Chem (2009), 16, 4399-418).
Varijacije izotopa
[0091] Takođe su prikazani farmaceutski prihvatljivi (radio)izotopom obeleženi peptidni ligandi ovog prikaza, gde su jedan ili više atoma zamenjeni atomima koji imaju isti atomski broj, ali atomsku masu ili maseni broj koji se razlikuje od atomske mase ili masenog broja koji se obično nalazi u prirodi, i peptidni ligandi ovog prikaza, gde su helatne grupe metala vezane (nazvane "efektor") koje su sposobne da drže relevantne (radio)izotope, i peptidni ligandi ovog prikaza, gde su određene funkcionalne grupe kovalentno zamenjene relevantnim (radio)izotopima ili izotopski obeleženim funkcionalnim grupama.
[0092] Primeri izotopa pogodnih za uključivanje u peptidne ligande obuhvataju izotope vodonika, kao što su<2>H (D) i<3>H (T), ugljenika, kao što su<11>C,<13>C i<14>C, hlora, kao što je<36>Cl, fluora, kao što je<18>F, joda, kao što su<123>1,<125>I i<131>I, azota, kao što su<13>N i<15>N, kiseonika, kao što su<15>0,<17>O i<18>O, fosfora, kao što je<32>P, sumpora, kao što je<35>S, bakra, kao što je<64>Cu, galijuma, kao što su<67>Ga ili<68>Ga, itrijuma, kao što je<90>Y i lutecijuma, kao što je<177>Lu, i bizmuta, kao što je<213>Bi.
[0093] Određeni izotopski obeleženi peptidni ligandi, na primer, oni koji uključuju radioaktivni izotop, korisni su u studijama distribucije lekova i/ili supstrata u tkivu, i za kliničku procenu prisustva i/ili odsustva mete Nektina-4 na obolelim tkivima. Peptidni ligandi mogu dalje imati vredna dijagnostička svojstva jer se mogu koristiti za detekciju ili identifikaciju formiranja kompleksa između obeleženog jedinjenja i drugih molekula, peptida, proteina, enzima ili receptora. Postupci detekcije ili identifikacije mogu koristiti jedinjenja koja su obeležena sredstvima za obeležavanje kao što su radioizotopi, enzimi, fluorescentne supstance, luminescentne supstance (na primer, luminol, derivati luminola, luciferin, ekvorin i luciferaza), itd. Radioaktivni izotop ticijum, tj.<3>H(T), i ugljenik-14, tj.<14>C, posebno su korisni za ovu svrhu zbog njihove lakoće ugradnje i lakih načina detekcije.
[0094] Supstitucija težim izotopima kao što je deuterijum, tj.<2>H(D), može pružiti određene terapeutske prednosti koje proizilaze iz veće metaboličke stabilnosti, na primer, povećano vreme poluraspada in vivo ili smanjene potrebe za doziranjem, i stoga može biti poželjna u nekim okolnostima.
[0095] Supstitucija izotopima koji emituju pozitrone, kao što su<11>C,<18>F,<15>O i 13N, može biti korisna u studijama pozitronske emisione topografije (PET) za ispitivanje zauzetosti mete.
[0096] Jedinjenja peptidnih liganda obeležna izotopom iz ovog prikaza mogu se generalno pripremiti konvencionalnim postupcima poznatim stručnjacima u ovoj oblasti tehnike ili postupcima analognim
2
onima opisanim u pratećim Primerima koristeći odgovarajući reagens koji je obeležen izotopom umesto prethodno korišćenog neobeleženog reagensa.
Molekularna skela
[0097] Molekularne skele su opisane, na primer, u WO 2009/098450 i referencama navedenim u njemu, posebno WO 2004/077062 i WO 2006/078161.
[0098] Kao što je navedeno u prethodnim dokumentima, molekularna skela može biti mali molekul, kao što je mali organski molekul.
[0099] U jednom slučaju, molekularna skela može biti makromolekul. U jednom slučaju, molekularna skela je makromolekul sastavljen od aminokiselina, nukleotida ili ugljenih hidrata.
[0100] U jednom slučaju, molekularna skela sadrži reaktivne grupe koje su sposobne da reaguju sa funkcionalnom grupom(ama) polipeptida da bi formirale kovalentne veze.
[0101] Molekularna skela može da sadrži hemijske grupe koje formiraju vezu sa peptidom, kao što su amini, tioli, alkoholi, ketoni, aldehidi, nitrili, karboksilne kiseline, estri, alkeni, alkini, azidi, anhidridi, sukcinimidi, maleimidi, alkil halogenidi i acil halogenidi.
[0102] U jednom slučaju, molekularna skela može da sadrži ili se sastoji od heksahidro-1,3,5-triazina, posebno 1,3,5-triakriloilheksahidro-1,3,5-triazina ('TATA'), ili njegovog derivata.
[0103] Molekularna skela predmetnog pronalaska sadrži hemijske grupe koje omogućavaju funkcionalnim grupama polipeptida kodirane biblioteke ovog pronalaska da formiraju kovalentne veze sa molekularnom skelom. Navedene hemijske grupe su odabrane iz širokog spektra funkcionalnosti, uključujući amine, tiole, alkohole, ketone, aldehide, nitrile, karboksilne kiseline, estre, alkene, alkine, anhidride, sukcinimide, maleimide, azide, alkil halogenide i acil halogenide.
[0104] Reaktivne grupe skele koje bi se mogle koristiti na molekularnoj skeli za reakciju sa tiolnim grupama cisteina su alkil halogenidi (ili se takođe nazivaju halogenoalkani ili haloalkani).
[0105] Primeri uključuju bromometilbenzen ili jodoacetamid. Druge reaktivne grupe skela koje se koriste za selektivno spajanje jedinjenja sa cisteinima u proteinima su maleimidi, jedinjenja koja sadrže nezasićeni karbonil i jedinjenja koja sadrže α-halometilkarbonil. Primeri maleimida koji se mogu koristiti kao molekularni skeleti u ovom otkriću uključuju: tris-(2-maleimidoetil)amin, tris-(2-maleimidoetil)benzen, tris-(maleimido)benzen. Primer jedinjenja koje sadrži a-zasićeni karbonil je 1,1',1"-(1,3,5-triazinan-1,3,5-triil)triprop-2-en-1-on (TATA) (Angewandte Chemie, International Edition (2014), 53(6), 1602-1606). Primer jedinjenja koje sadrži α-halometilkarbonil je N,N',N"-(benzen-1,3,5-triil)tris(2-bromoacetamid). Selenocistein je takođe prirodna aminokiselina koja ima sličnu reaktivnost kao cistein i može se koristiti za iste reakcije. Stoga, gde god se pominje cistein, obično je prihvatljivo zameniti ga selenocisteinom osim ako kontekst ne sugeriše drugačije.
Sinteza
[0106] Peptidi iz predmetnog pronlaska mogu se sintetički proizvesti standardnim tehnikama, nakon čega sledi reakcija sa molekularnim skelom in vitro. Kada se ovo izvodi, može se koristiti standardna hemija. Ovo omogućava brzu pripremu rastvorljivog materijala velikih razmera za dalje eksperimente ili validaciju. Takvi postupci bi se mogli postići korišćenjem konvencionalne hemije kao što je ona objavljena u Timmerman et al (supra).
2
[0107] Dakle, prikaz se takođe odnosi na proizvodnju polipeptida ili konjugata odabranih kako je ovde navedeno, pri čemu proizvodnja obuhvata opcione dalje korake kao što je objašnjeno u nastavku. U jednom slučaju, ovi koraci se sprovode na krajnjem proizvodu polipeptida/konjugata napravljenom hemijskom sintezom.
[0108] Po potrebi aminokiselinski ostaci u polipeptidu od interesa mogu se zameniti prilikom proizvodnje konjugata ili kompleksa.
[0109] Peptidi se takođe mogu produžiti, da bi se uključila, na primer, još jedna petlja i time uvele višestruke specifičnosti.
[0110] Da bi se peptid produžio, može se jednostavno hemijski produžiti na svom N-kraju ili C-kraju ili unutar petlji korišćenjem ortogonalno zaštićenih lizina (i analoga) korišćenjem standardne hemije čvrste faze ili faze rastvora. Standardne tehnike (bio)konjugacije mogu se koristiti za uvođenje aktiviranog ili aktivirajućeg N- ili C-kraja. Alternativno adicije se mogu izvršiti kondenzacijom fragmenata ili nativnom hemijskom ligacijom npr. kao što je opisano u (Dawson etal.1994. Synthesis of Proteins by Native Chemical Ligation. Science 266:776-779), ili enzimima, na primer korišćenjem subtiligaze kao što je opisano u (Chang etal. ProcNatl Acad Sci USA.1994 Dec20; 91(26):12544-8 ili u Hikarietal Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters Tom 18, Izdanje 22, 15 novembar 2008, Stranice 6000-6003).
[0111] Alternativno, peptidi se mogu produžiti ili modifikovati daljom konjugacijom putem disulfidnih veza. Ovo ima dodatnu prednost jer omogućava prvom i drugom peptidu da se disociraju jedan od drugog kada se nađu u redukujućem okruženju ćelije. U ovom slučaju, molekularna skela (npr. TATA) može se dodati tokom hemijske sinteze prvog peptida kako bi reagovala sa tri cisteinske grupe; dodatni cistein ortiol bi se zatim mogao dodati na N ili C-kraj prvog peptida, tako da ovaj cistein ortiola reaguje samo sa slobodnim cisteinom ortiola drugog peptida, formirajući disulfidno povezan biciklični peptidpeptidni konjugat.
[0112] Slične tehnike se podjednako primenjuju i na sintezu/spajanje dva biciklična i bispecifična makrocikla, potencijalno stvarajući tetraspecifični molekul.
[0113] Osim toga, dodavanje drugih funkcionalnih grupa ili efektorskih grupa može se postići na isti način, korišćenjem odgovarajuće hemije, spajanja na N- ili C-krajevima ili preko bočnih lanaca. U jednom slučaju prikaza, spajanje se sprovodi na takav način da ne blokira aktivnost bilo kog entiteta.
Farmaceutske kompozicije
[0114] Prema daljem aspektu iz prikaza, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži peptidni ligand kako je ovde definisano u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa.
[0115] Uopšteno, predmetni peptidni ligandi će se koristiti u prečišćenom obliku zajedno sa farmakološki odgovarajućim ekscipijensima ili nosačima. Tipično, ovi ekscipijensi ili nosači uključuju vodene ili alkoholne/vodene rastvore, emulzije ili suspenzije, uključujući fiziološki rastvor i/ili puferovane medijume. Parenteralni nosači uključuju rastvor natrijum hlorida, Ringerov rastvor dekstroze, dekstrozu i natrijum hlorid i Ringerov rastvor sa laktatom. Pogodni fiziološki prihvatljivi adjuvansi, ako je potrebno da se polipeptidni kompleks održi u suspenziji, mogu se izabrati iz zgušnjivača kao što su karboksimetilceluloza, polivinilpirolidon, želatin i alginati.
[0116] Intravenozni nosači uključuju sredstva za nadoknadu tečnosti i hranljivih materija i sredstva za nadoknadu elektrolita, kao što su ona na bazi Ringerove dekstroze. Konzervansi i drugi aditivi, kao što
2
su antimikrobna sredstva, antioksidansi, helatni agensi i inertni gasovi, takođe mogu biti prisutni (Mack (1982) Remington's Pharmaceutical Sciences, 16. izdanje).
[0117] Peptidni ligandi iz predmetnog prikaza mogu se koristiti kao odvojeno primenjene kompozicije ili u kombinaciji sa drugim agensima. To može uključivati antitela, fragmente antitela i različite imunoterapeutske lekove, kao što su ciklosporin, metotreksat, adriamicin ili cisplatin i imunotoksini. Farmaceutske kompozicije mogu uključivati "koktele" različitih citotoksičnih ili drugih agenasa u kombinaciji sa proteinskim ligandima ovog otkrića, ili čak kombinacije odabranih polipeptida prema predmetnom pronalasku koje imaju različite specifičnosti, kao što su polipeptidi odabrani korišćenjem različitih ciljnih liganda, bez obzira da li su objedinjeni pre primene ili ne.
[0118] Predviđeni način primene farmaceutskih kompozicija prema ovom prikazu može biti bilo koji od onih koji su opšte poznati stručnjacima u ovoj oblasti. Za terapiju, peptidni ligandi mogu se primenjivati kod bilo kog pacijenta u skladu sa standardnim tehnikama. Primena može biti na bilo koji odgovarajući način, uključujući parenteralno, intravenozno, intramuskularno, intraperitonealno, transdermalno, putem plućnog puta ili takođe, odgovarajuće, direktnom infuzijom pomoću katetera. Poželjno je da se farmaceutske kompozicije primenjuju inhalacijom. Doziranje i učestalost primene zavise od starosti, pola i stanja pacijenta, istovremene primene drugih lekova, kontraindikacija i drugih parametara koje ordinirajući lekar treba da uzme u obzir.
[0119] Peptidni ligandi iz ovog prikaza mogu se liofilizovati radi skladištenja i rekonstituisati u odgovarajućem nosaču pre upotrebe. Ova tehnika se pokazala efikasnom i mogu se koristiti poznate tehnike liofilizacije i rekonstitucije. Stručnjacima u ovoj oblasti će biti jasno da liofilizacija i rekonstitucija mogu dovesti do različitih stepena gubitka aktivnosti i da će nivoi možda morati biti podešeni naviše da bi se to kompenzovalo.
[0120] Kompozicije koje sadrže predmetne peptidne ligande ili njihov koktel može se primenjivati za profilaktičke i/ili terapijske tretmane. U određenim terapijskim primenama, adekvatna količina za postizanje barem delimične inhibicije, supresije, modulacije, ubijanja ili nekog drugog merljivog parametra populacije odabranih ćelija definiše se kao "terapijski efikasna doza". Količine potrebne za postizanje ove doze zavisiće od težine bolesti i opšteg stanja imunog sistema pacijenta, ali se generalno kreću od 0.005 do 5.0 mg odabranog peptidnog liganda po kilogramu telesne težine, pri čemu se doze od 0.05 do 2.0 mg/kg/dozi češće koriste. Za profilaktičke primene, kompozicije koje sadrže ove peptidne ligande ili njihove koktele takođe se mogu primenjivati u sličnim ili nešto nižim dozama.
[0121] Kompozicija koja sadrži peptidni ligand prema predmetnom prikazu može se koristiti u profilaktičkim i terapeutskim podešavanja za pomoć u promeni, inaktivaciji, ubijanju ili uklanjanju odabrane populacije ciljnih ćelija kod sisara. Pored toga, peptidni ligandi opisani ovde mogu se koristiti ekstrakorporalno ili in vitro selektivno za ubijanje, smanjenje ili na drugi način efikasno uklanjanje populacije ciljnih ćelija iz heterogene kolekcije ćelija. Krv sisara može se ekstrakorporalno kombinovati sa odabranim peptidnim ligandima, čime se neželjene ćelije ubijaju ili na drugi način uklanjaju iz krvi radi vraćanja sisaru u skladu sa standardnim tehnikama.
Terapijske upotrebe
[0122] Prema daljem aspektu opšteg prikaza (ali ne predmetnog pronalaska), obezbeđen je heterotandemski biciklični peptidni kompleks kao što se ovde definiše za upotrebu u prevenciji, supresiji ili lečenju kancera.
[0123] Primeri kancera (i njihovih benignih pandana) koji se mogu lečiti (ili inhibirati) uključuju, ali nisu ograničeni na tumore epitelnog porekla (adenomi i karcinomi različitih tipova, uključujući
2
adenokarcinome, skvamozne karcinome, prelaznoćelijske karcinome i druge karcinome) kao što su karcinomi bešike i urinarnog trakta, dojke, gastrointestinalnog trakta (uključujući jednjak, želudac, tanko crevo, debelo crevo, rektum i anus), jetre (hepatocelularni karcinom), žučne kese i žučnog sistema, egzokrinog pankreasa, bubrega, pluća (na primer, adenokarcinomi, karcinomi pluća malih ćelija, karcinomi pluća nemalih ćelija, bronhoalveolarni karcinomi i mezoteliomi), glave i vrata (na primer, kanceri jezika, bukalne duplje, grkljana, ždrela, nazofarinksa, krajnika, pljuvačnih žlezda, nosne duplje i paranazalnih sinusa), jajnika, jajovoda, peritoneuma, vagine, vulve, penisa, grlića materice, miometrijuma, endometrijuma, štitaste žlezde (na primer, folikularni karcinom štitaste žlezde), nadbubrežne žlezde, prostate, kože i adneksa (na primer melanom, karcinom bazalnih ćelija, skvamoznoćelijski karcinom, keratoakantom, displastični nevus); hematološki maligniteti (npr. leukemije, limfomi) i premaligni hematološki poremećaji i poremećaji graničnog maligniteta, uključujući hematološke malignitete i srodna stanja limfoidne loze (na primer, akutna limfocitna leukemija [ALL], hronična limfocitna leukemija [HLL], B-ćelijski limfomi kao što su difuzni krupnoćelijski B-ćelijski limfom [DLBCL], folikularni limfom, Burkitov limfom, limfom mantle ćelija, T-ćelijski limfomi i leukemije, limfomi prirodnih ćelija ubica [NK], Hodžkinovi limfomi, leukemija vlasastih ćelija (eng. hairy cell leukaemia), monoklonska gamopatija neizvesnog značaja, plazmacitom, multipli mijelom i limfoproliferativni poremećaji nakon transplantacije), i hematološki maligniteti i srodna stanja mijeloidne loze (na primer, akutna mijelocitna leukemija [AML], hronična mijelocitna leukemija [HML], hronična mijelomonocitna leukemija [HMML], hipereozinofilni sindrom, mijeloproliferativni poremećaji kao što su policitemija vera, esencijalna trombocitemija i primarna mijelofibroza, mijeloproliferativni sindrom, mijelodisplastični sindrom i promijelocitna leukemija); tumori mezenhimalnog porekla, na primer sarkomi mekog tkiva, kostiju ili hrskavice kao što su osteosarkomi, fibrosarkomi, hondrosarkomi, rabdomiosarkomi, leiomiosarkomi, liposarkomi, angiosarkomi, Kapošijev sarkom, Juingov sarkom, sinovijalni sarkomi, epitelioidni sarkomi, gastrointestinalni stromalni tumori, benigni i maligni histiocitomi i dermatofibrosarkomprotuberans; tumori centralnog ili perifernog nervnog sistema (na primer astrocitomi, gliomi i glioblastomi, meningiomi, ependimomi, tumori epifize i švanomi); endokrini tumori (na primer tumori hipofize, tumori nadbubrežne žlezde, tumori ostrvaca, tumori paratiroidne žlezde, karcinoidni tumori i medularni karcinom štitne žlezde); očni i adneksalni tumori (na primer retinoblastom); tumori germinativnih ćelija i trofoblastični tumori (na primer, teratomi, seminomi, disgerminomi, hidatidiformne mladeže i horiokarcinomi); i pedijatrijski i embrionalni tumori (na primer, meduloblastom, neuroblastom, Vilmsov tumor i primitivni neuroektodermalni tumori); ili sindromi, kongenitalni ili drugi, koji pacijenta čine podložnim malignitetu (na primer, Xeroderma Pigmentosum).
[0124] U daljem slučaju, kancer se bira od hematopoetskog maligniteta kao što je izabran iz: ne-Hodžkinovog limfoma (NHL), Burkitovog limfoma (BL), multiplog mijeloma (MM), B hronične limfocitne leukemije (B-HLL), B i T akutne limfocitne leukemije (ALL), T-ćelijskog limfoma (TCL), akutne mijeloidne leukemije (AML), leukemije vlasastih ćelija (HCL), Hodžkinovog limfoma (HL) i hronične mijeloidne leukemije (CML).
[0125] Ovde navedene reference na termin "prevencija" podrazumevaju primenu zaštitne kompozicije pre indukcije bolesti. "Supresija" se odnosi na primenu kompozicije nakon induktivnog događaja, ali pre kliničke pojave bolesti. "Lečenje" podrazumeva primenu zaštitne kompozicije nakon pojavljivanja simptoma bolesti.
[0126] Dostupni su sistemi životinjskih modela koji se mogu koristiti za skrining efikasnosti peptidnih liganda u zaštiti od ili lečenju bolesti. Upotreba sistema životinjskih modela je olakšana predmetnim pronalaskom, koja omogućava razvoj polipeptidnih liganda koji mogu unakrsno reagovati sa ljudskim i životinjskim ciljnim metama, kako bi se omogućila upotreba životinjskih modela.
2
PRIMERI (ZA REFERENCU)
[0127] Generalno, heterotandemski biciklični peptidni kompleksi se mogu pripremiti u skladu sa sledećim opštim postupkom:
[0128] Smeša Bicikla 1 (1.0 ekv.) i NHS-PEG5-N3 (1.6 ekv.) je rastvorena u MeCN/H2O (1:1), i pH rastvora je podešena do 8 dodavanjem kapanjem NaHCO3(0.1 M). Reakciona smeša je mešana na 30°C tokom 2 h zatim je koncentrovana pod smanjenim pritiskom da se ukloni rastvarač. Ostatak je nakon toga prečišćen prep-HPLC da se dobije intermedijer 2.
[0129] Smeša intermedijera 2 (1.0 ekv) i Bicikl 2 (1.0 ekv) su rastvoreni u t-BuOH/H2O (1:1), i zatim CuSO4(1.0 ekv), VcNa (2.3 ekv), i THPTA(1.0 ekv) su dodati. Konačno, 0.2 M NH4HCO3je dodato da bi se pH podesila na 8. Reakciona smeša je mešana na 40°C tokom 16 h pod atmosferom koja sadrži N2. Reakciona smeša je direktno prečišćena sa prep-HPLC.
[0130] Detaljniji eksprerimenti za odabrane heterotandemske biciklične peptidne komplekse su ovde obezbeđeni ispod:
Primer 1: Sinteza BCY12375
[0131]
Postupak za dobijanje Palmitinske kiseline--PEG10-N3
[0132]
Palmitinska kiselina <Palmitinska>
kiselina
[0133] Smeša Palmitinske kiseline (100.0 mg, 282.89 μmol, 1.0 eq.), jedinjenja 2 (150.0 mg, 284.84 μmol, 1.0 ekv.), i DIEA(74.5 mg, 574.11 μmol, 100.0 μL, 2.0 ekv.) je rastvorena u DMF-u (2 mL). Reakciona smeša je mešana na 30 °C tokom 2 h. LC-MS pokazala je da je jedinjenje 1 potpuno potrošeno i jedan glavni maksimum sa željenim m/z (MW: 765.03, uočena m/z: 765.22) je detektovana. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da se ukloni rastvarač i proizvede ostatak. Ostatak je zatim prečišćen sa prep-HPLC (neutralni uslov). Palmitinska kiselina--PEG10-N3(79.0 mg, 99.41 μmol, 35.14% prinos, 96.27% čistoća) je dobijena kao bela čvrsta supstanca.
1
Postupak za dobijanje Palmitinske kiseline-PEG10-BCY12023
[0134]
Palmitinska Palmitinska
kiselina kiselina
[0135] Smeša jedinjenja 3 (50.0 mg, 22.07 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 2 (17.0 mg, 22.22 μmol, 1.0 ekv.) i THPTA (10.0 mg, 23.02 μmol, 1.0 ekv.) je rastvorena u t-BuOH/H2O (1:1, 1 mL, prethodno degasirana i pročišćena sa N23 puta), a zatim su dodati CuSO4(0.4 M, 56.0 μL, 1.0 ekv.) i VcNa (10.0 mg, 50.48 μmol, 2.3 ekv.) pod N2. pH vrednost ovog rastvora je podešena na 8 dodavanjem u kapima 0.2 M NH4HCO3(u 1:1 t-BuOH/H2O), i rastvor je postao svetlo žuti. Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 2 h u atmosferi N2. LC-MS je pokazala da je Palmitinska kiselina - PEG10-N3preostala i da je detektovan jedan glavni maksimumom sa željenim m/z (izračunata MW: 3030.60, dobijena m/z: 1010.35 ([M/3+H]<+>)). Reakciona smeša je proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC (TFA uslovi), i dobijena je palmitinska kiselina - PEG10-BCY12023 (43.0 mg, 13.97 μmol, prinos 63,30%, čistoća 98,46%) kao bela čvrsta supstanca.
Postupak za dobijanje Palmitinske kiseline--PEG10-BCY12023-PEG5-N3
[0136]
Palmitinska Palmitinska
kiselina kiselina
[0137] Smeša jedinjenja 5 (43.0 mg, 14.19 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 6 (10.0 mg, 23.13 μmol, 1.6 ekv.) je rastvorena u MeCN/H2O (1:1.1 ml), a zatim je pH vrednost ovog rastvora podešena na 8 dodavanjem NaHCO3 (0.1 M) u kapima. Reakciona smeša je mešana na 30 °C tokom 2 h. LC-MS je pokazala da je jedinjenje 5 potpuno potrošeno i da je detektovan jedan glavni maksimum sa željenim m/z (MW: 3347.94, uočena m/z: 1673.7 ([(M/2+H<+>]), 1115.9 ([(M/3+H<+>])). Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio rastvarač i dobio je ostatak. Ostatak je zatim prečišćen preparativnom HPLC (neutralni uslovi). Palmitinska kiselina--PEG10-BCY12023-PEG5-N3(16,0 mg, 4.43 μmol, prinos 31.25%, čistoća 92.78%) je dobijena kao bela čvrsta supstanca.
Postupak za dobijanje BCY12375
[0138]
Palmitinska
kiselina
[0139] Smeša jedinjenja 7 (8.0 mg, 2,39 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 8 (6.5 mg, 2.39 μmol, 1.0 ekv.) i THPTA (1.1 mg, 2.53 μmol, 1.0 ekv.) je rastvorena u t-BuOH/H2O (1:1.1 ml, prethodno degasirana i pročišćena sa N23 puta), a zatim su dodati CuSO4(0.4 M, 6.0 μL, 1.0 ekv.) i VcNa (1.0 mg, 5.05 μmol, 2.1 ekv.) pod N2. pH vrednost ovog rastvora je podešena na 8 dodavanjem u kapima 0,2 M NH4HCO3(u 1:1 t-BuOH/H2O), i rastvor je postao svetlo žute boje. Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 16 sati pod atmosferom N2. LC-MS je pokazala da je jedinjenje 7 preostalo i da je detektovan jedan glavni maksimum sa željenim m/z (izračunata MW: 6064.08, uočena m/z: 1516.4([M/4+H]<+>), 1212.8([M/5+H]<+>)). Reakciona smeša je proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se
2
dobio ostatak. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC (TFA uslovi), i BCY12375 (6.2 mg, 0,99 μmol, prinos 41.62%, čistoća 97.27%) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.
Primer 2: Sinteza BCY12021
[0140]
Postupak za dobijanje Palmitinske kiseline--PEG10-BCY11144
[0141]
Palmitinska Palmitinska
kiselina kiselina
[0142] Smeša jedinjenja 3 (160.0 mg, 69.45 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 4 (56.0 mg, 72.20 μmol, 1.0 ekv.) i THPTA (35.0 mg, 80.55 μmol, 1.1 ekv.) je rastvorena u t-BuOH/H2O (1:1.2 mL, prethodno degasirana i pročišćena sa N23 puta), a zatim su dodati CuSO4(0.4 M, 56.0 μL, 1.0 ekv.) i VcNa (30.0 mg, 151.43 μmol, 2.2 ekv.) pod N2. pH vrednost ovog rastvora je podešena na 8 dodavanjem u kapima 0.2 M NH4HCO3(u 1:1 t-BuOH/H2O), i rastvor je postao svetlo žuti. Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 16 sati u atmosferi N2. LC-MS je pokazao jedan glavni maksimum sa željenim m/z (izračunata MW: 3068.70, uočena m/z: 1533.81 ([M/2+H]<+>), detektovano je 1023.43 ([M/3+H]<+>)). Reakciona smeša je proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC (TFA uslovi), i dobijena je palmitinska kiselina--PEG10-BCY11144 (150.0 mg, 46.83 μmol, prinos 67.42%, čistoća 95.80%) kao bela čvrsta supstanca.
Postupak za dobijanje Palmitinske kiseline--PEG10-BCY11144-PEG5-N3
[0143]
Palmitinska Palmitinska
kiselina kiselina
[0144] Smeša jedinjenja 5 (47.0 mg, 15.32 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 6 (7.0 mg, 16.19 μmol, 1.0 ekv.) i DIEA (3.0 mg, 22.97 μmol, 4.0 μL, 1.5 ekv.) rastvorena je u DMF-u (1 mL). Reakciona smeša je mešana na 30 °C tokom 2 h. LC-MS je pokazala da je jedinjenje 5 potpuno potrošeno i da je detektovan jedan glavni maksimum sa željenim m/z (MW: 3386.03, uočena m/z: 1693.21 ([M/2+H]<+>), 1129.13 ([M/3+H]<+>)). Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio rastvarač i dobio ostatak. Ostatak je zatim prečišćen preparativnom HPLC (neutralni uslovi). Palmitinska kiselina -- PEG10-BCY11144-PEG5-N3(20.0 mg, 5.72 pmol, prinos 37.33%, čistoća 96.79%) je dobijena kao bela čvrsta supstanca.
Postupak za dobijanje BCY12021
[0145]
Palmitinska
kiselina
[0146] Smeša jedinjenja 7 (10.0 mg, 2.95 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 8 (8.2 mg, 3.02 μmol, 1.0 ekv.) i THPTA (1.5 mg, 3.45 μmol, 1.1 ekv.) je rastvorena u t-BuOH/H2O (1:1, 1 mL, prethodno degasiran i pročišćen sa N23 puta), a zatim su dodati CuSO4(0.4 M, 8.0 μL, 1.0 ekv.) i VcNa (1.5 mg, 7.57 μmol, 2.5 ekv.) pod N2. pH vrednost ovog rastvora je podešena na 8 dodavanjem u kapima 0.2 M NH4HCO3(u 1:1 t-BuOH/H2O), i rastvor je postao svetlo žuti. Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 16 h pod atmosferom N2. LC-MS je pokazao jedan glavni maksimum sa željenim m/z (izračunata MW: 6102.17, uočena m/z: 1525.17([M/4+H]<+>), 1221,3([M/5+H]<+>)). Reakciona smeša je proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC (TFA uslovi), i BCY12021 (6.6 mg, 1.02 μmol, prinos 34.62%, čistoća 94.54%) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.
4
Primer 3: Sinteza BCY11468
[0149] Smeša jedinjenja 1 (50.0 mg, 124.4 μmol, 1.0 ekv), EDCI (95.4 mg, 497.7 μmol, 4.0 ekv), HOBt (55.5 mg, 410.6 μmol, 3.3 ekv) i DMAP (15.2 mg, 124.4 μmol, 1.0 ekv) je rastvorena u 2 ml DMF-a, a zatim je dodat DIEA (134.9 mg, 1.04 μmol, 181.8 μL, 8.4 ekv) da bi se dobio homogeni rastvor. Zatim je u ovaj rastvor u kapima je dodato jedinjenje 2 (200.0 mg, 379.8 μmol, 3.05 ekv) rastvoreno u DMF-u (2 ml). Reakciona smeša je mešana na 30°C tokom 16 h. LC-MS je pokazala da je jedinjenje 1 potpuno potrošeno i da je detektovan jedan glavni maksimum sa željenim m/z (MW: 1891.19, uočena m/z: 945.8600 ([M/2+H<+>]) i 612.4400 ([(M-3H2O)/3+H<+>])). Reakciona smeša je direktno prečišćena preparativnom HPLC (TFA uslovi), što je rezultiralo COM113 (161 mg, 85.67 μmol, prinos 68%) kao žuto ulje nakon liofilizacije.
Postupak za dobijanje COM113-BCY8928
[0150]
[0151] COM113 (50.0 mg, 26.44 μmol, 1.0 ekv.) i BCY8928 (53.0 mg, 23.9 μmol, 0.9 ekv.) su prvo rastvoreni u 2 ml t-BuOH/H2O (1:1), a zatim su dodati CuSO4(0.4 M, 66.1 μL, 1.0 ekv.), VcNa (10.5 mg, 53.0 μmol, 2.0 ekv.) i THPTA (23.0 mg, 52.93 μmol, 2.0 ekv.). Na kraju, dodat je 1 M NH4HCO3da bi se pH podesio na 8. Svi rastvarači su degasirani i produvani sa N23 puta. Reakciona smeša je mešana na 30°C tokom 16 h u atmosferi N2. LC-MS je pokazao jedan glavni maksimum sa željenim m/z (izračunata MW: 4108.77 uočena m/z: 1369.97 ([M/3+H]<+>)). Reakciona smeša je prečišćena preparativnom HPLC (TFA uslovi) i Jedinjenje 2 (14.0 mg, 3.21 µmol, prinos 12.14%, čistoća 94.16%) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca.
Postupak za dobijanje NHS estra Palmitinske kiseline
[0152]
[0153] U rastvor palmitinske kiseline (500 mg, 1.95 μmol, 586.85 μL, 1.0 ekv.), dodat je 1-hidroksipirolidin-2,5-dion (250 mg, 2.17 μmol, 1.11 ekv.) u DCM (5 ml) sa EDCI (747.60 mg, 3.90 μmol, 2.0 ekv.). Smeša je mešana na 30 °C tokom 16 h. TLC je pokazala da je reaktant 1 potpuno potrošen i da se formirala jedna nova tačka. Reakcija je bila čista prema TLC. Reakciona smeša je proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, DCM: MeOH = 0 do 100:1). Željeni proizvod je osušen da bi se dobio NHS estar palmitinske kiseline (0.68 g, 1.92 μmol, prinos 98.65%) kao bela čvrsta supstanca.
Postupak za pripremu Palmitinske kiseline-Propargilalanina
[0154]
[0155] U rastvor jedinjenja 3 (120 mg, 339.47 μmol, 1.0 ekv.) i jedinjenja 4 (57.60 mg, 509.20 μmol, 1.5 ekv.) u DMF-u (6 ml) dodat je DIEA (131.62 mg, 1,02 μmol, 177.39 μL, 3.0 ekv.) i DMAP (41.47 mg, 339.47 μmol, 1.0 ekv.). Smeša je mešana na 40 °C tokom 16 h. LC-MS je pokazala da je reaktant 3 potpuno potrošen i da je detektovan jedan glavni maksimum sa željenim m/z ili željenom masom. Reakciona smeša je proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC (TFA uslovi). Palmitinska kiselina-propargilalanin (90 mg, 256.03 μmol, prinos 75.42%) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.
Postupak za dobijanje COM113-BCY8928-Palmitinske kiseline
[0156]
Palmitinska kiselina- Palmitinska kiselina
propargilalanin
[0157] Jedinjenje 2 (14.0 mg, 3.41 μmol, 1.0 ekv.) i Jedinjenje 3 (1.1 mg, 3.13 μmol, 0.9 ekv.) su prvo rastvoreni u 2 mL t-BuOH/H2O (1:1), a zatim su dodati CuSO4(0.4 M, 10.0 μL, 1.1 ekv.), VcNa (2.0 mg, 10.1 μmol, 2.9 ekv.) i THPTA (2.0 mg, 4.6 μmol, 1.3 ekv.). Na kraju je dodato 0.2 M NH4HCO3da bi se pH podesio na 8. Svi rastvarači su ovde degasirani i produvani sa N23 puta. Reakciona smeša je mešana na 35°C tokom 16 h u atmosferi N2. LC-MS je pokazao jedan glavni maksimum sa željenim m/z (izračunata MW: 4460.29, uočena m/z: 1486.92([M/3+H]<+>), 1115.58([M/4+H]<+>), 895.83 ([M/5+H]<+>)). Reakciona smeša je prečišćena preparativnom HPLC (TFA uslovi) i Jedinjenje 4 (5.9 mg, 1.28 μmol, prinos 37.66%, čistoća 97.0%) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca.
Postupak za dobijanje BCY11468
[0158]
[0159] Jedinjenje 4 (5.9 mg, 1.32 μmol, 1.0 ekv.) i BCY11016 (3.0 mg, 1.29 μmol, 1 ekv.) su prvo rastvoreni u 2 mL t-BuOH/H2O (1:1), a zatim su dodati CuSO4(0.4 M, 8.0 μL, 2.4 ekv.), VcNa 2.0 mg, 7.6 ekv.) i THPTA (2.0 mg, 3.5 ekv.). Konačno, dodat je 1 M NH4HCO3da bi se pH podesio na 8. Svi rastvarači su degasirani i produvani sa N23 puta. Reakciona smeša je mešana na 30°C tokom 16 h u atmosferi N2. LC-MS je pokazao jedan glavni maksimum sa željenim m/z (izračunata MW: 6783.93, uočena m/z: 1131.7([M/6+H]<+>)). Reakciona smeša je prečišćena preparativnom HPLC (TFA uslovi) i BCY11468 (2.2 mg, 0.312 μmol, prinos 23.57%, čistoća 96.16%) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.
Primer 4: Sinteza BCY11618
[0160]
[0162] Smeša BCY8920 (50.0 mg, 23.39 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 2 (10.2 mg, 23.51 μmol, 1.01 ekv.) i NaHCO3(2.0 mg, 24.8 μmol, 1.0 ekv.) rastvorena je u MeCN/H2O (1:1.2 mL). Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 2 h, dok LC-MS nije pokazao da je BCY8920 potpuno potrošen i da je detektovan jedan glavni maksimum sa željenim m/z (izračunata MW: 2454.83, uočena m/z: 1227.67 ([M/2+H]<+>) i 818.74 ([M/3+H]<+>)). Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio rastvarač i dobio ostatak, nakon čega je prečišćena preparativnom HPLC (TFA uslovi).
BCY8920-PEG5-N3 (25 mg, 9.70 μmol, prinos 41,47%, čistoća 95.26%) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.
Postupak za dobijanje BCY11143-dK(palmitinske kiseline)
[0163]
(palmitinska kiselina)
[0164] Smeša BCY11143 (30.0 mg, 12.84 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 5 (5.0 mg, 14.12 μmol, 1.1 ekv.), DIEA (1.7 mg, 12.84 μmol, 2.2 μL, 1.0 ekv.) i DMAP (1.6 mg, 12.84 μmol, 1.0 ekv.) je rastvorena u DMF-u. Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 2 h u atmosferi N2. LC-MS je pokazao jedan glavni maksimum sa željenim m/z (izračunata MW: 2575.14, uočena m/z: 1287.68 ([M/2+H<+>])). Reakciona smeša je proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak, koji je zatim prečišćen preparativnom HPLC (TFA uslovi). BCY11143-dK(palmitinska kiselina) (18.3 mg, 6.95 μmol, prinos 54.17%, čistoća 97.86%) je dobijena kao bela čvrsta supstanca.
Postupak za dobijanje BCY11618
[0165]
[0166] Smeša jedinjenja 3 (5 mg, 2.04 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 6 (5.8 mg, 2.3 μmol, 1.1 ekv.) i THPTA (0.9 mg, 1.7 μmol, 1.0 ekv.) je rastvorena u t-BuOH/H2O (1:1, 1 mL, prethodno degasirana i pročišćena sa N23 puta), a zatim su dodati CuSO4(0.4 M, 5.1 μL, 1.0 ekv.) i VcNa (0.4 M, 5.1 μL, 1.0 ekv.) pod N2. pH vrednost ovog rastvora je podešena na 8 dodavanjem u kapima 0.2 M NH4HCO3(u 1:1 t-BuOH/H2O), i rastvor je postao svetlo žute boje. Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 6 sati pod atmosferom N2. LC-MS je pokazala da je jedinjenje 3 potpuno potrošeno i da je detektovan jedan glavni maksimum sa željenim m/z (izračunata MW: 5029.97, uočena m/z: 1257.8 ([M/4+H]<+>) i 1006.6 ([M/5+H]<+>)). Reakciona smeša je proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC (TFA uslovi), i BCY11618 (5.3 mg, 1.0 μmol, prinos 49.15%, čistoća 95%) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.
Primer 5: Sinteza BCY11776
[0167]
[0169] Smeša BCY8116 (50.0 mg, 23.39 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 2 (10.2 mg, 23.51 μmol, 1.01 ekv.) i NaHCO3(2.0 mg, 24.8 μmol, 1.0 ekv.) je rastvorena u MeCN/H2O (1:1.2 mL). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 1 h dok LC-MS nije pokazao da je BCY8116 potpuno potrošen i da je detektovan jedan glavni maksimum sa željenim m/z (izračunata MW: 2454.83, uočena m/z: 1227.67 ([M/2+H<+>]), 818.74 ([M/3+H<+>])). Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio rastvarač i dobio ostatak, nakon čega je prečišćena preparativnom HPLC (TFA uslovi). Jedinjenje 3 (25.0 mg, 9.70 μmol, prinos 41.47%, čistoća 95.26%) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca.
Postupak za dobijanje Jedinjenja BCY11144-dK(palmitinska kiselina)
[0170]
(palmitinska kiselina)
[0171] Smeša BCY11144 (50.0 mg, 21.7 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 5 (8.5 mg, 23.87 μmol, 1.1 ekv.), DIEA (2.81 mg, 21.7 μmol, 4.0 μL, 1.0 ekv.) i DMAP (2.7 mg, 21.7 μmol, 1.0 ekv.) je rastvorena u DMF-u. Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 2 h u atmosferi N2. LC-MS je pokazala da je jedinjenje 3 potpuno potrošeno i da je detektovan jedan glavni maksimum sa željenim m/z (izračunata MW: 2542.08, uočena m/z: 1271.7 ([M/2+H<+>])). Reakciona smeša je proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak, koji je zatim prečišćen preparativnom HPLC (TFA uslovi).
Jedinjenje 6 (18.3 mg, 6,95 μmol, prinos 54.17%, čistoća 96.68%) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca.
Postupak za dobijanje BCY11776
[0172]
[0173] Smeša jedinjenja 3 (10 mg, 4.0 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 6 (11.2 mg, 4.4 μmol, 1.1 ekv.) i THPTA (1.8 mg, 1.0 ekv.) je rastvorena u t-BuOH/H2O (1:1.1 mL, prethodno desirana i pročišćena sa N23 puta), a zatim su ponovo dodati CuSO4(0.4 M, 5.1 μmol, 1 ekv.) i VcNa (0.4 M, 5.1 μmol, 1 ekv.) pod N2. pH vrednost ovog rastvora je podešena na 8 dodavanjem u kapima 0.2 M NH4HCO3(u 1:1 t-BuOH/H2O), i rastvor je postao svetložut. Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 6 h pod atmosferom N2. LC-MS je pokazala da je jedinjenje 3 potpuno potrošeno i da je detektovan jedan glavni maksimum sa željenim m/z (izračunata MW: 5031.9, uočena m/z: 1258.52([M/4+H<+>]), 1006.7([M/5+H<+>])). Reakciona smeša je proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC (TFA uslovi), i BCY11776 (12.5 mg, 2.4 μmol, prinos 60.11%, čistoća 96.6%) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.
Primer 6: Sinteza BCY11860
[0174]
4
Postupak za dobijanje BCY8920-Peg5-BCY11143
[0175]
[0176] Smeša BCY8920-PEG5-N3(20.0 mg, 8.15 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 2 (21.0 mg, 8.96 μmol, 1.1 ekv.) i THPTA (0.4 M, 21.0 μL, 1.0 ekv.) je rastvorena u t-BuOH/H2O (1:1.1 mL, prethodno degasirano i produvano sa N23 puta), a zatim su dodati CuSO4(0.4 M, 21.0 μL, 1.0 ekv.) i VcNa (0.4 M, 21.0 μL, 1.0 ekv.) pod N2. pH vrednost ovog rastvora je podešena na 8 dodavanjem u kapima 0.2 M NH4HCO3(u 1:1 t-BuOH/H2O), i rastvor je postao svetložut. Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 4 h u atmosferi N2. LC-MS je pokazala da je jedinjenje 1 potpuno potrošeno i da je detektovan jedan glavni vrh sa željenim m/z (izračunata MW: 4791.56, uočena m/z: 1597.28 ([M/3+H]<+>), 1198.18 ([M/4+H]<+>)). Reakciona smeša je proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC (TFA uslovi), i BCY8920-Peg5-BCY11143 (22.5 mg, 4.25 μmol, prinos 52.13%, čistoća 90.44%) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.
Postupak za dobijanje BCY11860
[0177]
[0178] Smeša jedinjenja 3 (5.0 mg, 1,04 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 4 (1.08 mg, 1.15 μmol, 1.1 ekv.) i DIEA (0.4 M, 1.04 μmol, 3.0 μL, 1.0 ekv.) i DMAP (0.2 mg, 1.04 μmol, 1.0 ekv.) rastvorena je u DMF-u (1.0 ml). Reakciona smeša je mešana na 30 °C tokom 2 h. LC-MS je pokazala da je jedinjenje 3 potpuno potrošeno i da je detektovan jedan glavni maksimum sa željenim m/z (MW: 5617.56, uočena m/z: 1404.56 ([(M/4+H<+>])). Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio rastvarač i dobio je ostatak. Ostatak je zatim prečišćen preparativnom HPLC (neutralni uslovi).
BCY11860 (2.9 mg, 0.48 μmol, prinos 45.86%, čistoća 92.70%) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.
Primer 7: Sinteza BCY12020
[0179]
Postupak za dobijanje Palmitinske kiseline-PEG10-N3
[0180]
Palmitinska kiselina-NHS
[0181] Smeša palmitinske kiseline-NHS (100.0 mg, 282.89 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 2 (150.0 mg, 284.84 μmol, 1.0 ekv.) i DIEA (74.5 mg, 574.11 μmol, 100.0 μL, 2.0 ekv.) rastvorena je u DMF-u (2 mL). Reakciona smeša je mešana na 30 °C tokom 2 h. LC-MS je pokazala da je jedinjenje 1 potpuno potrošeno i da je detektovan jedan glavni maksimum sa željenim m/z (MW: 765.03, uočena m/z: 765.22). Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio rastvarač i dobio je ostatak. Ostatak je zatim prečišćen preparativnom HPLC (neutralni uslovi). Palmitinska kiselina-PEG10-N3(79.0 mg, 99.41 μmol, prinos 35.14%, čistoća 96.27%) je dobijena kao bela čvrsta supstanca.
Postupak za dobijanje Palmitinske kiseline-PEG10-BCY11144
[0182]
Palmitinska kiselina-PEG10-Palmitinska
kiselina
[0183] Smeša jedinjenja 3 (160.0 mg, 69.45 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 2 (56.0 mg, 72.20 μmol, 1.0 ekv.) i THPTA (35.0 mg, 80.55 μmol, 1.1 ekv.) je rastvorena u t-BuOH/H2O (1:1, 2 mL, prethodno degasirana i pročišćena sa N23 puta), a zatim su ponovo dodati CuSO4(0.4 M, 56.0 μL, 1.0 ekv.) i VcNa (30.0 mg, 151.43 μmol, 2.2 ekv.) pod N2. pH vrednost ovog rastvora je podešena na 8 dodavanjem u kapima 0.2 M NH4HCO3(u 1:1 t-BuOH/H2O), i rastvor je postao svetlo žuti. Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 16 h u atmosferi N2. LC-MS je pokazao jedan glavni maksimum sa željenim m/z (izračunata MW: 3068.70, uočena m/z: 1533.81 ([M/2+H]<+>), 1023.43 ([M/3+H]<+>)). Reakciona smeša je proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC (TFA uslovi), i dobijena je Palmitinska kiselina-PEG10-BCY11144 (150.0 mg, 46.83 μmol, prinos 67.42%, čistoća 95.80%) kao bela čvrsta supstanca.
Postupak za dobijanje Palmitinske kiseline-PEG10-BCY11144-PEG5-N3
[0184]
Palmitinska Palmitinska
kiselina kiselina
[0185] Smeša jedinjenja 5 (47.0 mg, 15.32 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 6 (7.0 mg, 16.19 μmol, 1.1 ekv.) i DIEA (3.0 mg, 22.97 μmol, 4.0 μL, 1.5 ekv.) rastvorena je u DMF-u (1 mL). Reakciona smeša je mešana na 30 °C tokom 2 h. LC-MS je pokazala da je jedinjenje 5 potpuno potrošeno i da je detektovan jedan glavni maksimum sa željenim m/z (MW: 3386.03, uočena m/z: 1693.21([M/2+H<]+>), 1129.13([M/3+H]<+>)). Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio rastvarač i dobio je ostatak. Ostatak je zatim prečišćen preparativnom HPLC (neutralni uslovi).
Palmitinska kiselina-PEG10-BCY11144-PEG5-N3(20.0 mg, 5.72 μmol, prinos 37.33%, čistoća 96.79%) je dobijena kao bela čvrsta supstanca.
Postupak za dobijanje BCY12020
[0186]
Palmitinska
kiselina
[0187] Smeša jedinjenja 7 (50.0 mg, 14.77 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 8 (35.0 mg, 15.06 μmol, 1.0 ekv.) i THPTA (10.0 mg, 23.02 μmol, 1.5 ekv.) je rastvorena u t-BuOH/H2O (1:1.2 mL, prethodno degasiranom i produvanom sa N23 puta), a zatim su dodati CuSO4(0.4 M, 38.0 μL, 1.0 ekv.) i VcNa (6.5 mg, 32.81 μmol, 2.2 ekv.) pod N2. pH vrednost ovog rastvora je podešena na 8 dodavanjem u kapima 0.2 M NH4HCO3(u 1:1 t-BuOH/H2O), i rastvor je postao svetlo žuti. Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 16 h u atmosferi N2. LC-MS je pokazao jedan glavni maksimum sa željenim m/z (izračunata MW: 5709.68, uočena m/z: 1902.80 ([M/3+H]<+>), 1427.56 ([M/4+H]<+>)). Reakciona smeša je proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC (TFA uslovi), i BCY12020 (54.8 mg, 9.49 μmol, prinos 64.24%, čistoća 98.83%) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.
Primer 8: Sinteza BCY12661
[0188]
Postupak za dobijanje jedinjenja 2
[0189]
[0190] Peptid je sintetisan korišćenjem standardne Fmoc hemije. DCM je dodat u reakcionu posudu koja sadrži hlorotritil smolu (1 mmol, 0.91 g, 1.10 mmol/g) i Fmoc-Lys(N3)-OH (1 ekv, 395.4 mg, 1 mmol) uz propuštanje N2. DIEA (4.0 ekv) je dodat u kapima i mešano 2 h. Zatim je dodat MeOH (2 mL) i mešano 30 minuta. Smola je oceđena i isprana DMF-om 5 puta. Uklanjanje zaštite Fmoc je izvršeno
4
dodavanjem 20% piperidina/DMF-a i mešanjem 30 minuta. Smola je oceđena i isprana DMF-om 5 puta. Za produženje lanca, prvo je dodat rastvor Fmoc-aminokiseline i mešan 30 sekundi, zatim je dodat aktivacioni pufer (koji sadrži HBTU i DIEA u DMF-u) i mešan 1 h uz kontinuirano propuštanje N2. Uklanjanje zaštite i spajanje su ponovljeni dok se peptid nije bio završen.
(nastаvak)
[0191] Nakon poslednjeg spajanja aminokiselina, smola je isprana sa MeOH 3 puta, a zatim osušena pod vakuumom. 10 ml koktela za cepanje (95%TFA/2.5%TIS/2.5%H2O) je dodato u bocu koja sadrži peptid zaštićen bočnim lancem na sobnoj temperaturi i ovo je mešano 1 h. Smola je proceđena, a ostatak od ceđenja je koncentrovan da bi se uklonio rastvarač. Sirovi peptid je liofilizovan da bi se dobio konačni proizvod Jedinjenje 2 (azid palmitinske kiseline) (200 mg, čistoća 97.78%, prinos 37.06%). Izračunata MW: 539,72, uočena m/z: 540.4 ([M+H]<+>).
Postupak za dobijanje azida BCY12023-palmitinske kiseline
[0192]
[0193] Smeša jedinjenja 1 (40.0 mg, 17.66 μmol, 1,0 ekv.), jedinjenja 2 (9.5 mg, 17.66 μmol, 1.0 ekv.) i THPTA (8.0 mg, 17,66 μmol, 1.0 ekv.) je rastvorena u t-BuOH/H2O (1:1,1 mL, prethodno degasiranom i produvanom sa N23 puta), a zatim su dodati CuSO4(0.4 M, 45.0 μL, 1.0 ekv.) i VcNa (8.0 mg, 35.33 μmol, 2.0 ekv.) pod N2. pH vrednost ovog rastvora je podešena na 8 dodavanjem u kapima 0.2 M NH4HCO3(u 1:1 t-BuOH/H2O), i rastvor je postao svetložut. Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 4 h u atmosferi N2. LC-MS je pokazala da je jedinjenje 1 potpuno potrošeno i da je detektovan jedan glavni maksimum sa željenim m/z (izračunata MW: 2804.30, uočena m/z: 1402.8 ([M/2+H]<+>), 935.9 ([M/3+H]<+>)). Reakciona smeša je proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC (TFA uslovi), i BCY12023-palmitinska kiselina azid (35.0 mg, 12.11 μmol, prinos 68.54%, čistoća 97.00%) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.
Postupak za dobijanje BCY12023-palmitinska kiselina-PEG5-N3
[0194]
BCY00012023-palmitinska palmitinska kiselina azid kiselina-PEG5-N3
[0195] Smeša jedinjenja 3 (35.0 mg, 12,48 µmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 4 (5.4 mg, 12,48 µmol, 1.0 ekv.) je rastvorena u MeCN/H2O (1:1, 1 mL), a zatim je pH vrednost ovog rastvora podešena na 8 dodavanjem NaHCO3(0.1 M) u kapima. Reakciona smeša je mešana na 30 °C tokom 2 h. LC-MS je pokazala da je jedinjenje 3 potpuno potrošeno i da je detektovan jedan glavni maksimum sa željenim m/z (MW: 3121.63, uočena m/z: 1561.2 ([(M/2+H<+>])). Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio rastvarač i dobio je ostatak. Ostatak je zatim prečišćen preparativnom HPLC (neutralni uslovi). BCY12023-palmitinska kiselina-PEG5-N3 (11.4 mg, 3.46 µmol, prinos 27.71%, čistoća 94.70%) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.
Postupak za dobijanje BCY12661
[0196]
[0197] Smeša jedinjenja 5 (11.4 mg, 3.65 µmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 6 (8.3 mg, 3.65 µmol, 1.0 ekv.) i THPTA (1.6 mg, 3.65 µmol, 1.0 ekv.) je rastvorena u t-BuOH/H2O (1:1, 1 mL, prethodno degasirana i pročišćena sa N23 puta), a zatim su dodati CuSO4(0.4 M, 10.0 µL, 1.1 ekv.) i VcNa (1.5 mg, 7.30 µmol, 2.0 ekv.) pod N2. pH vrednost ovog rastvora je podešena na 8 dodavanjem u kapima 0.2 M NH4HCO3(u 1:1 t-BuOH/H2O), i rastvor je postao svetlo žuti. Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 4 h u atmosferi N2. LC-MS je pokazala da je jedinjenje 3 potpuno potrošeno i da je detektovan jedan glavni maksimum sa željenim m/z (izračunata MW: 5374.21, uočena m/z: 1344.5 ([M/4+H]<+>)). Reakciona smeša je proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC (TFA uslovi), i BCY12661 (9.8 mg, 19.63 µmol, prinos 48.73%, čistoća 97.60%) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.
Primer 9: Sinteza BCY12969
[0198]
4
Opšta procedura za pripremu jedinjenja 1
[0199]
[0200] Peptid je sintetizovan korišćenjem standardne Fmoc hemije. DCM je dodat u reakcioni sud koji sadrži hlorotritil smolu (1 mmol, 0,91 g, 1,1 mmol/g) i Fmoc-yGlu(OtBu)-OH (0.425 mg, 1 mmol, 1 ekv.) i smeša je mešana uz propuštanje mehurića N2. DIEA (4.0 ekv.) je dodavan u kapima i smeša je mešana 2 sata. Zatim je dodat MeOH (4.6 mL) i mešano 30 minuta. Smola je oceđena i isprana DMF-om 5 puta.
20% piperidin/DMF-u je dodat u smolu i mešano je 30 minuta. Smola je oceđena i isprana DMF-om 5 puta. Rastvor Fmoc-aminokiseline je dodat u smolu i mešano je 30 sekundi, zatim su dodati aktivacioni agens i DIPEA i N2 je propuštan u mehurićima kroz smešu 1 h. Koraci uklanjanja zaštite i spajanja su ponovljeni sa sledećim reagensima:
Napomena:
(nastavak)
[0201] Nakon spajanja palmitinske kiseline, smola je isprana 3 puta sa MeOH, a zatim osušena pod vakuumom. Peptid je odvojen od smole dodatkom 20%HFIP/80%DCM na sobnoj temperaturi i smeša je mešana 1 sat. Ovaj postupak je ponovljen još jednom, zatim je smola proceđena, a ostatak nakon ceđenja koncentrovan da bi se uklonio rastvarač. Sirovi peptid je liofilizovan da bi se dobio konačni proizvod (280 mg, čistoća 84.80%, prinos 44.67%). Izračunata MW: 626.8, uočena m/z: 627,4 ([M+H]+)
Opšta procedura za pripremu jedinjenja 3
[0202]
[0203] U rastvor jedinjenja 2 (15.8 mg, 25.1 µmol, 1.1 ekv.) u DMF-u (0,5 ml) dodat je EDCI (4.4 mg, 22.8 µmol, 1.0 ekv.) i mešano je 10 minuta. Zatim su u smešu dodati HOSu (2.9 mg, 25.1 µmol, 1.1 ekv.) i DIEA (8.8 mg, 68.5 µmol, 11.9 µL, 3 ekv.). Smeša je mešana 16 sati na 25 °C. Zatim je u smešu dodat BCY12358 (50,0 mg, 22.8 µmol, 1.0 ekv.) u DMF-u (0.5 ml) i mešano je na 25 °C još 4 sata. LC-MS je pokazala da je BCY12358 potpuno potrošen i da je detektovan jedan glavni maksimum sa željenim m/z
4
(Izračunata MW: 2798.42, uočena m/z: 1399.6 [M/2+H]+). Reakciona smeša je prečišćena prep-HPLC (A: 0.075% TFA u H2O, B: ACN) da bi se dobilo jedinjenje 3 (21.9 mg, 7.83 µmol, prinos 34.3%) kao bela čvrsta supstanca.
Opšta procedura za pripremu jedinjenja 5
[0204]
[0205] Smeša jedinjenja 4 (20.0 mg, 8.03 μmol, 1.0 ekv), jedinjenja 3 (22.5 mg, 8.03 μmol, 1.0 ekv) i THPTA (4.0 mg, 9.21 μmol, 1.15 ekv) u t-BuOH (0.5 mL) i H2O (0.5 mL) je bila degasirana i prečišćena sa N23 puta, i zatim su CuSO4(0.4 M, 20.1 μL, 1.0 ekv), VcNa (0.4 M, 40.2 μL, 2.0 ekv) i NH4HCO3(0.2 M, 80.4 μL, 2.0 ekv) su dodati u smešu. Smeša je mešana na 30 °C tokom 2h u atmosferi N2. LC-MS je pokazala da je jedinjenje 4 potpuno potrošeno i jedan glavni maksimum sa željenim m/z (Izračunata MW: 5288.25, uočena m/z: 1322.3 [M/4+H]<+>, 1763.8 [M/3+H]<+>) je detektovana. EDTA(0.5M, 20.0 μL) je dodat u reakcionu smešu. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod jedinjenja 5 (42.0 mg, sirovo) kao siva čvrsta supstanca i korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
[0207] U rastvor jedinjenja 5 (42.0 mg, 8.22 μmol, 1.0 ekv) u DCM (0.25 mL) dodat je TFA (3.37 μmol, 0.25 mL, 458.6 ekv) u kapima. Smeša je mešana na 30 °C tokom 1 h. LC-MS je pokazao da je jedinjenje 5 potpuno potrošeno i jedan glavni maksimum sa željenim m/z (Izračunata MW: 5176.04, uočena m/z: 1035.7 [M/5+H]<+>, 1294.9 [M/4+H]<+>, 1726.8 [M/3+H]<+>) je detektovana. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak. Ostatak je prečišćen sa prep-HPLC (A: 0.075% TFA u H2O, B: ACN) da se dobije BCY12969 (2.6 mg, 0.48 mol, 5.85% prinos, 92.4% čistoća) kao bela čvrsta supstanca.
Primer 10: Sinteza BCY13035
[0208]
4
Postupak za dobijanje BCY12860-PEG5-N3
[0209]
[0210] Smeša BCY12860 (40.0 mg, 19.40 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 2 (10.0 mg, 21.34 μmol, 1.1 ekv.) je rastvorena u MeCN/H2O(1:1,1 mL), i nakon toga je pH ovog rastvora bio prilagođen na 8 dodavanjem u kapima NaHCO3(0.1 M). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 1 h. LC-MS je pokazao maksimum sa željenom m/z. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio rastvarač i proizveo ostatak. Ostatak je zatim prečišćen sa prep-HPLC (neutralni uslovi).
BCY12860-PEG5-N3(39.7 mg, 15.02 μmol, 77.41% prinos, 90.0% čistoća) dobiven kao bela čvrsta supstanca. MW: 2378.78, uočeno m/z: 1190.1 ([(M/2+H<+>]), 793.5 ([(M/3+H<+>]).
Postupak za dobijanje BCY13035
[0211]
4
[0212] Smeša jedinjenja 3 (39.7 mg, 16.69 μmol, 1.0 ekv.), BCY8928 (41.0 mg, 18.36 μmol, 1.1 ekv.), i THPTA (0.4 M, 55 μL, 1.3 ekv.) je rastvorena u t-BuOH/H2O (1:1, 1 mL, pre-degasirana i pročišćena sa N23 puta), i zatim sa CuSO4(0.4M, 55 μL, 1.3 ekv.)i VcNa (0.4 M,109 μL, 2.6 ekv.) su dodati pod N2. pH ovog rastvora je bio prilagođen na 8 dodavanjem u kapima 0.2 M NH4HCO3(u 1:1 t-BuOH/H2O), i rastvor je postao svetložut. Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 2 h pod atmosferom N2. LC-MS je pokazala da je jedinjenje 3 potpuno potrošeno i jedan glavni maksimum sa željenim m/z je uočen. Reakciona smeša je proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak. Sirovi proizvod je prečišćen sa prep-HPLC (TFA uslovi), i BCY13035 (42.0 mg, 8.85 μmol, 53.04% prinos, 96.41% čistoća) je dobiven kao bela čvrsta supstanca. Izračunata MW: 4596.37, uočena m/z: 1532.9([M/3+H]<+>), 1149.9 ([M/4+H]<+>).
Primer 11: Sinteza BCY13040
[0213]
Postupak za dobijanje BCY12865-PEG5-N3
[0214]
4
[0215] BCY12865 (30.0 mg, 13.99 μmol, 1.0 ekv) i jedinjenje 1 (6.1 mg, 14.11 μmol, 1.01 ekv), su rastvoreni u 1 mL of MeCN/H2O (1:1), i zatim je 1 M NaHCO3je dodat da se pH prilagodi na 8. Smeša je mešana na 25°C tokom 2 h. LC-MS je pokazala da je BCY12865 potrošena potpuno potrošeno i jedan glavni maksimum sa željenim m/z je detektovan. Reakciona smeša je prečišćena sa prep-HPLC (TFA uslov) i jedinjenje 2 (15.6 mg, 6.32 μmol, 45.19% prinos, 99.76% čistoća) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca. Izračunata MW: 2461.87, uočena m/z: 1231.5 ([M/2+H]<+>) i 821.3 ([M/3+H]<+>).
Postupak za dobijanje BCY13040
[0216]
[0217] Jedinjenje 2 (15.6 mg, 6.34 μmol, 1.0 ekv) i BCY8928 (14.5 mg, 6.54 μmol, 1.03 ekv) su prvo rastvoreni u 2 mL t-BuOH/H2O (1:1), i zatim su dodati CuSO4(0.4 M, 16 μL, 1.01 ekv), VcNa (3.0 mg, 15.14 μmol, 2.39 ekv) i THPTA (3 mg, 6.90 μmol, 1.09 ekv). Konačno, dodat je 1 M NH4HCO3da se pH prilagodi na 8. Svi rastvarači su degasirani i prečišćeni sa N23 puta. Reakciona smeša je mešana na 40°C tokom 16 h pod atmosferom koja sadrži N2. LC-MS je pokazala da je Jedinjenje 2 potrošeno potpuno potrošeno i jedan glavni maksimum sa željenim m/z je detektovan. Reakciona smeša je prečišćena sa prep-HPLC (TFA uslov) i BCY13040 (15.8 mg, 3.31 μmol, 52.27% prinos, 98.1% čistoća) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. Izračunato MW: 4679.45, uočeno m/z: 1560.8 ([M/3+H]<+>), 1170.9 ([M/4+H]<+>), 936.6 ([M/5+H]<+>).
Primer 12: Sinteza BCY13253
[0218]
[0220] Smeša BCY13119 (35.0 mg, 17.20 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenje 2(7.8mg,18.06 μmol, 1.05 ekv.) je rastvorena u MeCN/H2O (1:1,1 mL), i zatim je pH ovog rastvora prilagođena na 8 dodavanjem NaHCO3u kapima (0.1 M). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 1 h. LC-MS je pokazao jedan glavni maksimum sa željenim m/z (MW: 2352.74, uočeno m/z: 1177.4 ([(M/2+H<+>])). Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da se ukloni rastvarač i proizvede ostatak. Ostatak je zatim prečišćen sa prep-HPLC (neutralni uslov). BCY13119-PEG5-N3(25.7 mg, 9.97 μmol, 58.0% prinos, 91.3% čistoća) je dobijen kao bela čvsta supstanca.
Postupak za dobijanje BCY13253
[0221]
[0222] Smeša jedinjenja 3 (25.7mg, 10.92 μmol,1.0 ekv.), jedinjenja 2 (26.6mg, 12.02 μmol,1.1 ekv.), i THPTA (5.7 mg, 13.11 μmol, 1.2 ekv.) je rastvorena u t-BuOH/H2O (1:1,1 mL, pre-degasirana i pročišćena sa N23 puta), i zatim su CuSO4(0.4 M, 33.0 μL, 1.2 ekv.) i VcNa (5.2 mg, 26.21 μmol, 2.4 ekv.) dodati pod N2. pH ovog rastvora je prilagođen na 8 dodavanjem 0.2 M NH4HCO3u kapima (u 1:1 t-BuOH/H2O), i rastvor je postao svetlo žuti. Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 2 h pod atmosferom N2. LC-MS je pokazala da je jedinjenje 3 potrošeno potpuno potrošeno i jedan glavni maksimum sa željenim m/z (izračunata MW: 4570.32, uočena m/z: 1143.4 ([M/4+H]<+>), 914.9 ([M/5+H]<+>)) je detektovan. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak. Sirovi proizvod je prečišćen sa prep-HPLC (TFA uslov), i BCY13253 (17.5 mg, 3.67 μmol, 33.58% prinos, 95.8% čistoća) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.
Primer 13: Sinteza BCY13254
[0223]
1
[0225] Smeša BCY13120 (40.0 mg, 17.92 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 2 (8.5 mg, 19.72 μmol, 1.1 ekv.) je rastvorena u MeCN/H2O (1:1,1 mL), i zatim je pH ovog rastvora prilagođen na 8 dodavanjem NaHCO3(0.1 M) u kapima. Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 1 h. LC-MS je pokazala da je BCY13120 potrošeno potpuno potrošeno i jedan glavni maksimum sa željenim m/z (MW: 2548.99, uočeno m/z: 1275.3 ([(M/2+H<+>])) je detektovan. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da se ukloni rastvarač i proizvede ostatak. Ostatak je zatim prečišćen sa prep-HPLC (neutralan uslov).
BCY13120-PEG5-N3(27.3 mg, 10.46 μmol, 58.38% prinos, 97.7% čistoća) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.
Postupak za dobijanje BCY13254
[0226]
[0227] Smeša jedinjenja 3(27.3mg, 10.71 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 2 (26.1 mg, 11.78 μmol, 1.1 ekv.), i THPTA (5.6 mg, 12.85 μmol, 1.2 eq.) je rastvorena u t-BuOH/H2O (1:1,1 mL, pre-degasirana i pročišćena sa N23 puta). CuSO4(0.4 M, 33.0 μL, 1.2 ekv.) i VcNa (5.2 mg, 26.24 μmol, 2.4 eq.) su dodati pod N2. pH ovog rastvora je prilagođen na 8 dodavanjem 0.2 M NH4HCO3u kapima (u 1:1 t-BuOH/H2O),
2
i rastvor je postao svetlo žuti. Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 2 h pod N2atmosferom. LC-MS je pokazala da je jedinjenje 3 potpuno potrošeno i jedan glavni maksimum sa željenim m/z (izračunato MW: 4766.58, uočeno m/z: 1192.5 ([M/4+H]<+>), 954.1 ([M/5+H]<+>)) je detektovan. Reakciona smeša je proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak. Sirovi proizvod je prečišćen prep-HPLC (TFA uslov), i BCY13254 (36.5 mg, 7.49 μmol, 69.92% prinos, 97.8% čistoća) je dobijen kao bela čvsta supstanca.
Primer 14: Sinteza BCY13340
[0228]
Tačna masa 454805
Molekularna masa 455133
Postupak za dobijanje BCY12865-PEG5-N3
[0229]
[0230] BCY12865 (50 mg, 23.32 μmol, 1.0 ekv) i jedinjenje 1 (10.5 mg, 24.28 μmol, 1.04 ekv), su rastvoreni u 2 mL MeCN/H2O (1:1), 1 M NaHCO3je dodat da se prilagodi pH na 8. I zatim je reakciona smeša mešana na 25°C tokom 2 h. LC-MS je pokazala da je BCY12865 potpuno potrošeno i jedan glavni maksimum sa željenim m/z (izračunato MW: 2461.87, uočeno m/z: 1231.6 ([M/2+H]<+>) i 821.4 ([M/3+H]<+>)) je detektovan. Reakciona smeša je prečišćena sa prep-HPLC (TFA uslov) i jedinjenje 2 (31.5 mg, 12.62 μmol, 54.14% prinos, 98.66% čistoća) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.
Postupak za dobijanje BCY13340
[0231]
[0232] Smeša jedinjenja 2 (31.5 mg, 12.80 μmol, 1.0 ekv.), BCY12353 (27 mg, 12.92 μmol, 1.0 ekv), i THPTA (5.7 mg, 13.12 μmol, 1.0 ekv) je rastvorena u t-BuOH/H2O (1:1,2 mL, pre-degasirana i pročišćena sa N23 puta), i zatim CuSO4(0.4 M, 32 μL, 1.0 ekv) i VcNa (5.1 mg, 25.74 μmol, 2.0 ekv) su dodati pod N2. pH ovog rastvora je prilagođena na 8 dodavanjem 0.2 M NH4HCO3u kapima (u 1:1 t-BuOH/H2O), i rastvor je postao svetlo žut. Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 1 h pod atmosferom N2. LC-MS pokazalo je da jedinjenje 2 je potpuno potrošeno i jedan glavni maksimum sa željenim m/z (izračunato MW: 4551.32, uočeno m/z: 1517.7([M/3+H]<+>) i 1138.6([M/4+H]<+>)) je detektovan. Reakciona smeša je proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak. Sirovi proizvod je prečišćen sa prep-HPLC (TFA uslov), i BCY13340 (34.7 mg, 7.62 μmol, 59.59% prinos, 89.59% čistoća) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.
Primer 15: Sinteza BCY13342
[0233]
[0235] Smeša BCY12860 (28.0 mg, 13.58 μmol, 1.0 ekv.) i jedinjenja 2 (6.5 mg, 14.94 μmol, 1.1 ekv.) je rastvorena u MeCN/H2O(1:1,1 mL), i zatim je pH ovog rastvora prilagođena na 8 dodavanjem NaHCO3(0.1 M) u kapima. Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 1 h. LC-MS pokazala je da je BCY12860 je potpuno potrošeno i jedan glavni maksimum sa željenim m/z (MW: 2378.78, uočeno m/z: 1190.2 ([(M/2+H<+>])) je detektovan. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da se ukloni rastvarač i proizvede ostatak. Ostatak je zatim prečišćen sa prep-HPLC (neutralni uslovi).
BCY12860-PEG5-N3(20.7mg, 8.41 μmol, 61.95% prinos, 96.7% čistoća) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.
4
Postupak za dobijanje BCY13342
[0236]
[0237] Smeša jedinjenja 3(20.7 mg, 8.70 μmol, 1.0 ekv.), jedinjenja 4 (19.0 mg, 9.14 μmol, 1.05 ekv.), i THPTA (5.0 mg, 11.31 μmol, 1.3 ekv.) je rastvorena u t-BuOH/H2O (1:1,1 mL, pre-degasirana i pročišćena sa N2tokom 3 puta), i zatim CuSO4(0.4 M, 28.3 μL, 1.3 ekv.) i VcNa (4.5 mg, 22.62 μmol, 2.6 eq.) su dodati pod N2. pH ovog rastvora je prilagođena na 8 dodavanjem 0.2 M NH4HCO3u kapima (u 1:1 t-BuOH/H2O), rastvor je postao svetlo žut. Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 2 h pod atmosferom N2. LC-MS je pokazala da je jedinjenje 3 potpuno potrošeno i jedan glavni maksimum sa željenim m/z (izračunata MW: 4468.24, uočena m/z: 1118.6 ([M/4+H]<+>)) je detektovano. Reakciona smeša je proceđena i koncentrovana pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak. Sirovi proizvod je prečišćen sa prep-HPLC (TFA uslov), i BCY13342 (21.7 mg, 4.60 μmol, 52.85% prinos, 94.7% čistoća) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.
ANALITIČKI PODACI
[0238] Sledeći heterotandemski biciklični peptidni kompleksi su analizirani korišćenjem masene spektrometrije i HPLC-a. HPLC podešavanje je bilo sledeće:
Mobilna faza: A: 0.1%TFA in H2O B: 0.1%TFA u ACN
Protok: 1.0ml/min
Kolona: Gemini-NX C185um 110A 150*4.6mm ;Instrument: Agilent 1200 HPLC-BE(1-614) ;[0239] Korišćeni gradijenti su opisani u tabeli ispod: ;;; ;;; i podaci su generisani na sledeći način: ;;; ; ; ;; (nastavak) ; ; ;; (nastavak) ; ; ;; (nastavak) ; ; BIOLOŠKI PODACI ;;1. Ko-kultura CD137 reporterskog testa sa tumorskim ćelijama ;;[0240] Medijum za kulturu, koja se naziva R1 medijum, priprema se dodavanjem 1% FBS u RPMI-1640 (komponenta Promega kompleta CS196005). Serijska razblaženja ispitivanih proizvoda u R1 pripremaju se u sterilnoj ploči sa 96 bunarčića. Dodati 25 μL ispitivanih proizvoda po bunarčiću ili R1 (kao kontrola pozadine) u označene bunarčiće na ploči za kulturu belih krvnih zrnaca. Ćelije tumora* se sakupljaju i resuspenduju u koncentraciji od 400.000 ćelija/mL u R1 medijumu. Dvadeset pet (25) μL/bunarčiću ćelija tumora se dodaje na ploču za kulturu belih krvnih zrnaca. Jurkat ćelije (Promega komplet CS196005, 0.5 mL) se odmrzavaju u vodenom kupatilu, a zatim dodaju u 5 ml prethodno zagrejanog R1 medijuma. Dvadeset pet (25) μL/bunarčiću Jurkat ćelija se zatim dodaje na ploču za kulturu belih krvnih zrnaca. Inkubirati ćelije i testne proizvode 6 sati na 37°C, 5% CO2. Na kraju 6 sati, dodajte 75 μL/bunarčiću Bio-Glo™ reagensa (Promega) i inkubirajte 10 minuta pre očitavanja luminescencije u čitaču ploča (Clariostar, BMG). Promena u odnosu na same ćelije (Jurkat ćelije ćelijska linija korišćena u ko-kulturi) je izračunata i prikazana u GraphPad Prism-u kao log(agonist) u odnosu na odgovor da bi se odredila EC50(nM) i indukcija u odnosu na pozadinu (Max).
[0241] Tip tumorskih ćelija koji se koristi u ko-kulturi je NCI-H292, za koji je pokazano da eksprimuje Nektin-4. Tip tumorskih ćelija koji se koristi u ko-kulturi za EphA2 je PC3. Tip tumorskih ćelija koji se koristi u ko-kulturi za PD-L1 je RKO.
[0242] Pregled stepena indukcije izazvanog heterotandemskim peptidima Nektin-4/CD137 u testu kokulture CD137 reportera sa ćelijama NCI-H292 prikazan je u Tabeli 1. Sva jedinjenja su upoređena sa kontrolnom pločom BCY10000 koja ima prosečnu EC50 od 1.1 ± 0.5 nM i Emax 28 ± 11 puta veći od pozadine.
Tabela 1: Stepen indukcije izazvan heterotandemskim bicikličnim peptidnim kompleksima Nektin-4/CD137 u CD137 reporterskom testu
(nastavak)
[0243] Sažetak stepena indukcije izazvane heterotandemskim peptidima EphA2/CD137 u testu kokulture CD137 reportera sa PC3 ćelijama prikazan je u Tabeli 2. Sva jedinjenja su upoređena sa kontrolnom pločom BCY9173 koja ima prosečnu EC50 od 0.54 nM i Emax od 42 puta veću vrednost u odnosu na pozadinu.
Tabela 2: Stepen indukcije izazvan heterotandemskim bicikličnim peptidnim kompleksima EphA2/CD137 u CD137 reporterskom testu
[0244] Sažetak stepena indukcije izazvane heterotandemskim peptidima PD-L1/CD137 u testu kokulture CD137 reportera sa RKO ćelijama prikazan je u Tabeli 3.
Tabela 3: Indukcija pregiba izazvana heterotandemskim bicikličnim peptidnim kompleksima PD-L1/CD137 u CD137 reporterskom testu
1
2. Farmakokinetika CD137 heterotandemskih bicikličnih peptidnih kompleksa kod SD pacova
[0245] Mužjacima SD pacova dato je 2 mg/kg svakog heterotandemskog Bicikl peptidnog kompleksa formulisanog u 25 mM histidin HCl, 10% saharoze pH 7. Serijsko krvarenje (oko 80 μL krvi/vremenskoj tački) vršeno je preko submadibularne ili safenozne vene u svakoj vremenskoj tački. Svi uzorci krvi su odmah prebačeni u prethodno ohlađene mikrocentrifugne epruvete koje sadrže 2 μL K2-EDTA (0.5M) kao antikoagulans i stavljeni na vlažni led. Uzorci krvi su odmah obrađeni za plazmu centrifugiranjem na približno 4°C, 3000 g. Talog, uključujući interni standard, odmah je dodat u plazmu, dobro promešan i centrifugiran na 12.000 o/min, 4°C tokom 10 minuta. Supernatant je prebačen u prethodno obeležene polipropilenske mikrocentifugne epruvete, a zatim brzo zamrznut preko suvog leda. Uzorci su čuvani na 70°C ili niže po potrebi do analize.7.5 μL uzoraka supernatanta je direktno ubrizgano za LC-MS/MS analizu korišćenjem Orbitrap Q Exactive u režimu pozitivnih jona da bi se odredile koncentracije Bicikla. Podaci o koncentraciji u plazmi u odnosu na vreme analizirani su nekomplementarnim pristupima korišćenjem softverskog programa PhoenixWinNonlin6.3. Prikazani su C0, Cl, Vdss, T<1>/2, AUC(0-last), AUC(0-inf), MRT(0-last), MRT(0-inf) i grafikoni profila koncentracije u plazmi u odnosu na vreme. Farmakokinetički parametri iz eksperimenta su prikazani u Tabeli 4:
Tabela 4: Farmakokinetički parametri kod SD pacova
2
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
11
��
�
��
�
�
�
�
�
11

Claims (4)

Patentni zahtevi
1. Peptidni ligand koji se vezuje za Nektin-4 prisutan na ćeliji kancera, koji sadrži polipeptid koji sadrži najmanje tri reaktivne grupe, odvojene sa najmanje dve sekvence petlji, i molekularna skela koja obrazuje kovalentne veze sa reaktivnim grupama polipeptida tako da se najmanje dve polipeptidne petlje formiraju na molekularnoj skeli, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so;
naznačen time što je navedeni polipeptid modifikovani derivat CP[1Nal][dD]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC; pri čemu je jedan ili više cisteinskih ostataka zamenjen reaktivnom grupom izabranom iz 3-merkaptopropanske kiseline, cisteamina i penicilamina;
gde 1Nal predstavlja 1-naftilalanin, HArg predstavlja homoarginin, a HyP predstavlja hidroksiprolin.
2. Peptidni ligand prema patentnom zahtevu 1, gde je molekularna skela 1,1',1"-(1,3,5-triazinan-1,3,5-triil)triprop-2-en-1-on (TATA).
3. Peptidni kompleks, koji sadrži
(a) prvi peptidni ligand koji se vezuje za Nektin-4 prisutan na ćeliji kancera; konjugovan preko linkera sa
(b) drugim peptidom;
pri čemu prvi peptid sadrži polipeptid koji se sastoji od najmanje tri reaktivne grupe, odvojene sa najmanje dve sekvence petlji, i molekularna skela koja obrazuje kovalentne veze sa reaktivnim grupama polipeptida tako da se najmanje dve polipeptidne petlje formiraju na molekularnoj skeli, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so; naznačen time što je navedeni polipeptid navedenog prvog peptidnog liganda modifikovani derivat CP[1Nal][dD]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC;
pri čemu je jedan ili više cisteinskih ostataka zamenjen reaktivnom grupom izabranom iz 3-merkaptopropanske kiseline, cisteamina i penicilamina;
pri čemu 1Nal predstavlja 1-naftilalanin, HArg predstavlja homoarginin i HyP predstavlja hidroksirolin.
4. Peptidni kompleks prema patentnom zahtevu 3, gde je molekularna skela 1,1',1"-(1,3,5-triazinan-1,3,5-triil)triprop-2-en-1-on (TATA).
Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5
RS20250710A 2019-10-03 2020-10-05 Heterotandemski biciklični peptidni kompleksi RS67014B1 (sr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962910129P 2019-10-03 2019-10-03
EP24203287.8A EP4464721B1 (en) 2019-10-03 2020-10-05 Heterotandem bicyclic peptide complexes

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS67014B1 true RS67014B1 (sr) 2025-08-29

Family

ID=72811890

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20250710A RS67014B1 (sr) 2019-10-03 2020-10-05 Heterotandemski biciklični peptidni kompleksi

Country Status (16)

Country Link
US (2) US11332500B2 (sr)
EP (3) EP4592309A3 (sr)
JP (3) JP2022551607A (sr)
CN (2) CN119192401A (sr)
DK (1) DK4464721T3 (sr)
ES (1) ES3033517T3 (sr)
FI (1) FI4464721T3 (sr)
HR (1) HRP20250841T1 (sr)
HU (1) HUE072242T2 (sr)
LT (1) LT4464721T (sr)
PL (1) PL4464721T3 (sr)
PT (1) PT4464721T (sr)
RS (1) RS67014B1 (sr)
SI (1) SI4464721T1 (sr)
SM (1) SMT202500247T1 (sr)
WO (1) WO2021064428A1 (sr)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG11201702845QA (en) 2014-10-29 2017-05-30 Bicycle Therapeutics Ltd Bicyclic peptide ligands specific for mt1-mmp
US10899798B2 (en) 2017-06-26 2021-01-26 Bicyclerd Limited Bicyclic peptide ligands with detectable moieties and uses thereof
JP7670481B2 (ja) 2017-08-04 2025-04-30 バイスクルテクス・リミテッド Ｃｄ１３７に対して特異的な二環式ペプチドリガンド
GB201721265D0 (en) 2017-12-19 2018-01-31 Bicyclerd Ltd Bicyclic peptide ligands specific for EphA2
TWI825046B (zh) 2017-12-19 2023-12-11 英商拜西可泰克斯有限公司 Epha2特用之雙環胜肽配位基
US10875894B2 (en) 2018-02-23 2020-12-29 Bicycletx Limited Multimeric bicyclic peptide ligands
WO2019193328A1 (en) 2018-04-04 2019-10-10 Bicycletx Limited Heterotandem bicyclic peptide complexes
IL279489B2 (en) 2018-06-22 2025-10-01 Bicycletx Ltd Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4, a drug conjugate containing the peptide ligands and a pharmaceutical composition containing the drug conjugate
GB201810316D0 (en) 2018-06-22 2018-08-08 Bicyclerd Ltd Peptide ligands for binding to EphA2
GB201820325D0 (en) 2018-12-13 2019-01-30 Bicyclerd Ltd Bicyclic peptide ligands specific for psma
GB201820295D0 (en) 2018-12-13 2019-01-30 Bicyclerd Ltd Bicyclic peptide ligands specific for MT1-MMP
GB201820288D0 (en) 2018-12-13 2019-01-30 Bicycle Tx Ltd Bicycle peptide ligaands specific for MT1-MMP
CN113474045A (zh) 2018-12-21 2021-10-01 拜斯科技术开发有限公司 Pd-l1特异性的双环肽配体
CN113260420A (zh) 2018-12-21 2021-08-13 拜斯科阿迪有限公司 Pd-l1特异性的双环肽配体
GB201900529D0 (en) 2019-01-15 2019-03-06 Bicycletx Ltd Bicyclic peptide ligands specific for CD38
CA3137095A1 (en) 2019-05-09 2020-11-12 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligands specific for ox40
TWI862640B (zh) 2019-07-30 2024-11-21 英商拜西可泰克斯有限公司 異質雙環肽複合物
PL4464721T3 (pl) 2019-10-03 2025-08-25 Bicycletx Limited Heterotandemowe kompleksy peptydów bicyklicznych
JP2023516946A (ja) 2020-02-27 2023-04-21 ボーンズ、インコーポレイテッド 改良されたエッジを有するｍｏｖに関するデバイス及び方法
CN116348476A (zh) 2020-08-03 2023-06-27 拜斯科技术开发有限公司 基于肽的接头
US20250186539A2 (en) * 2021-01-11 2025-06-12 Bicycletx Limited Methods for treating cancer
WO2022253051A1 (zh) * 2021-06-01 2022-12-08 南京明德新药研发有限公司 多肽偶联药物及其应用
WO2024229427A1 (en) * 2023-05-04 2024-11-07 Tambo, Inc. Tetrazine-based targeting agents for in vivo delivery of a payload
CN121532408A (zh) * 2023-06-23 2026-02-13 拜斯科技术开发有限公司 对nk细胞具有特异性的双环肽配体
WO2025191096A1 (en) * 2024-03-14 2025-09-18 Bicycletx Limited Bicyclic peptide

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4658014A (en) 1985-12-20 1987-04-14 Kempe Tomas G Synthetic peptides with calcitonin-like activity
EP1452868A2 (en) 2003-02-27 2004-09-01 Pepscan Systems B.V. Method for selecting a candidate drug compound
US7863239B2 (en) 2005-01-24 2011-01-04 Pepscan Systems B.V. Binding compounds, immunogenic compounds and peptidomimetics
US8815804B2 (en) * 2006-02-06 2014-08-26 Sanford-Burnham Medical Research Institute Methods and compositions related to targeting tumors and wounds
ES2509959T5 (en) * 2008-02-05 2024-12-19 Bicyclerd Ltd Methods and compositions
GB0913775D0 (en) * 2009-08-06 2009-09-16 Medical Res Council Multispecific peptides
AU2010350241A1 (en) 2010-04-01 2012-10-25 The University Of Queensland Oxytocin peptide analogues
WO2012057624A1 (en) 2010-10-25 2012-05-03 Pepscan Systems B.V. Novel bicyclic peptide mimetics
CN103906865B (zh) 2011-10-07 2017-12-08 拜斯科医疗有限公司 结构化多肽特异性的调控
GB201306623D0 (en) 2013-04-11 2013-05-29 Bicycle Therapeutics Ltd Modulation of structured polypeptide specificity
RU2743781C2 (ru) * 2014-06-10 2021-02-25 3Б Фармасьютикалз Гмбх Конъюгат, содержащий лиганд рецепторов нейротензина, и его применение
SG11201702845QA (en) * 2014-10-29 2017-05-30 Bicycle Therapeutics Ltd Bicyclic peptide ligands specific for mt1-mmp
JP2019513371A (ja) 2016-04-01 2019-05-30 アビディティー バイオサイエンシーズ エルエルシー 核酸ポリペプチド組成物とその使用
US20190169308A1 (en) * 2016-04-22 2019-06-06 Alligator Bioscience Ab Novel bispecific polypeptides against cd137
GB201607827D0 (en) 2016-05-04 2016-06-15 Bicycle Therapeutics Ltd Bicyclic peptide-toxin conjugates specific for MT1-MMP
AU2018224094B2 (en) 2017-02-24 2025-04-17 Macrogenics, Inc. Bispecific binding molecules that are capable of binding CD137 and tumor antigens, and uses thereof
JP7670481B2 (ja) * 2017-08-04 2025-04-30 バイスクルテクス・リミテッド Ｃｄ１３７に対して特異的な二環式ペプチドリガンド
TWI825046B (zh) * 2017-12-19 2023-12-11 英商拜西可泰克斯有限公司 Epha2特用之雙環胜肽配位基
GB201721265D0 (en) 2017-12-19 2018-01-31 Bicyclerd Ltd Bicyclic peptide ligands specific for EphA2
US10875894B2 (en) 2018-02-23 2020-12-29 Bicycletx Limited Multimeric bicyclic peptide ligands
WO2019193328A1 (en) 2018-04-04 2019-10-10 Bicycletx Limited Heterotandem bicyclic peptide complexes
IL279489B2 (en) 2018-06-22 2025-10-01 Bicycletx Ltd Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4, a drug conjugate containing the peptide ligands and a pharmaceutical composition containing the drug conjugate
GB201810316D0 (en) 2018-06-22 2018-08-08 Bicyclerd Ltd Peptide ligands for binding to EphA2
CN112955459A (zh) 2018-10-23 2021-06-11 拜斯科技术开发有限公司 双环肽配体和其用途
CN113474045A (zh) 2018-12-21 2021-10-01 拜斯科技术开发有限公司 Pd-l1特异性的双环肽配体
SG11202110828UA (en) 2019-04-02 2021-10-28 Bicycletx Ltd Bicycle toxin conjugates and uses thereof
CA3137095A1 (en) 2019-05-09 2020-11-12 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligands specific for ox40
TWI862640B (zh) * 2019-07-30 2024-11-21 英商拜西可泰克斯有限公司 異質雙環肽複合物
WO2021028686A1 (en) 2019-08-13 2021-02-18 Bicycletx Limited Modified multimeric bicyclic peptide ligands
PL4464721T3 (pl) 2019-10-03 2025-08-25 Bicycletx Limited Heterotandemowe kompleksy peptydów bicyklicznych

Also Published As

Publication number Publication date
JP2026027327A (ja) 2026-02-18
PT4464721T (pt) 2025-06-24
EP4464721A2 (en) 2024-11-20
HUE072242T2 (hu) 2025-11-28
DK4464721T3 (da) 2025-07-21
WO2021064428A1 (en) 2021-04-08
JP2025134834A (ja) 2025-09-17
ES3033517T3 (en) 2025-08-05
CN119192401A (zh) 2024-12-27
EP4038096A1 (en) 2022-08-10
HRP20250841T1 (hr) 2025-09-12
PL4464721T3 (pl) 2025-08-25
EP4592309A3 (en) 2025-10-22
EP4592309A2 (en) 2025-07-30
SMT202500247T1 (it) 2025-09-12
JP2022551607A (ja) 2022-12-12
EP4464721A3 (en) 2025-03-12
US11332500B2 (en) 2022-05-17
EP4464721B1 (en) 2025-06-11
US20220306694A1 (en) 2022-09-29
US20210101937A1 (en) 2021-04-08
LT4464721T (lt) 2025-08-11
SI4464721T1 (sl) 2025-08-29
CN114867753A (zh) 2022-08-05
JP7770607B2 (ja) 2025-11-14
FI4464721T3 (fi) 2025-07-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RS67014B1 (sr) Heterotandemski biciklični peptidni kompleksi
JP7551500B2 (ja) ヘテロタンデム二環式ペプチド複合体
US20220242911A1 (en) Heterotandem bicyclic peptide complex
CN114787197A (zh) 修饰的多聚双环肽配体
CN113811541A (zh) Ox40特异性的双环肽配体
CN113543813A (zh) Cd38特异性的双环肽配体
WO2024261490A1 (en) Bicyclic peptide ligands specific for nk cells
EP4077349A1 (en) Bicyclic peptide ligands specific for il-17
HK40123165A (en) Heterotandem bicyclic peptide complexes
HK40117689B (en) Heterotandem bicyclic peptide complexes
HK40117689A (en) Heterotandem bicyclic peptide complexes
EA045834B1 (ru) Гетеротандемные бициклические пептидные комплексы
JP2023506874A (ja) Ｉｌ－１７に特異的な二環式ペプチドリガンド
JP2023507134A (ja) Ｉｌ－１７に特異的な二環式ペプチドリガンド
JP2023506270A (ja) Ｉｌ－１７に特異的な二環式ペプチドリガンド