RO137149A2 - Pansament hidroactiv pe bază de celuloză bacteriană pentru managementul umed al dermului - Google Patents

Abstract

Invenţia se referă la un procedeu de obţinere a unui pansament hidroactiv pe bază de celuloză bacteriană pentru managementul umed al unor leziuni ale dermului. Procedeul, conform invenţie, constă în etapele: obţinerea suportului nanocelulozic prin bioprocese tehnologice fermentative utilizând tulpina bacteriană Acetobacter xylinum DSMY 2004, purificarea şi sterilizarea umedă a suportului de tip membrană de celuloză bacteriană timp de 45 min, prepararea amestecului bioactiv de funcţionalizare prin adăugarea în apă, în picătură a unui extract de Viţă roşie bio, extract propolis şi acid ascorbic, cu omogenizare, în continuare se adaugă în porţii mici levomenol, cu solubilizare, se adaugă etapizat alantoină, tocoferol, uleiuri esenţiale de eucalipt şi cuişoare,cu omogenizaree la temperatura camerei, imersarea filmului de celuloză steril integral, sau în secţiuni, în amestecul bioactiv de funcţionalizare, la temperatura camerei, timp de 24 h, la întuneric, din care rezultă un pansament hidroactiv/bioactiv cu efect antibacterian şi regenerator.

Description

PANSAMENT HIDRO ACTIV PE BAZA DE CELULOZA BACTERIANA

PENTRU MANAGEMENTUL UMED AL D^ÎUfiW^r pentru invenții și mărci

Cerere de brevet de invenție

Nr.....

Domeniul tehnic in care poate fi folosita invenția:

Invenția se refera la un pansament hidroactiv atraumatic, cu efect calmant, regenerator, antiinflamator, cicatrizant, antibacterian si antifungic, pentru tratamentul local al unor leziuni ale dermului, cu utilizare in domeniul dermatocosmetic.

Managementul si tratamentul leziunilor dermului poate fi uneori dificil si delicat, la pacientii cu o sensibilitate ridicata sau accentuata, la pansamentele aderente clasice, care pot provoca in timp iritatii severe la nivel local dermului, aspecte ce conduc la o ingreunare a managementului de caz si totodată a eficientei tratării leziunilor principale, fiind necesara o atentie sporita si asupra leziunilor secundare aparute in timp. Principiul de tratament topic are la baza capacitatea inteligenta a pielii vatamate de a absorbi acele elemente necesare hidratării si regenerării țesutului.

In mod curent se utilizează administrarea topica a diferite scheme de tratament adjuvant, preventiv sau medicamentos, ce pot fi trumatizante la îndepărtare, fiind utilizate in general suporturi de tesaturi naturale sau sintetice. In acest sens, biomaterialele inteligente, biocompatibile si versatile, împreuna cu produse naturale bioactive, pot completa sau chiar înlocui pe termen lung, un tratament convențional, intr-o maniera blanda, neinvaziva si total netraumatica pentru individ.

Pansamentele clasice pentru tratarea leziunilor de la nivelul dermului sunt utilizate pentu a asigura un mediu local aseptic, antibacterian si regenerator.

Prezenta lucrare se refera la un produs dermatocosmetic, sub forma de pansament hidroactiv atraumatic, antiaderent, destinat tratamentului topic al unor leziuni cutanate, prin susținerea hidratării locale, asigurarea unui mediu local antiseptic si nutitiv, precum si procedeul de obținere al acestuia.

Pentru a imbunatati metodologiile de aplicare si tratament topic cutanat, numeroși cercetători abordeaza diferite combinatii de biomateriale/biopolimeri, cu includerea de compuși naturali biologic activi, precum si diferite compozitii cu înalt grad nutritiv si antibacterian/antifungic, acestea fiind considerate a fi blânde cu dermul uman, capabile de a menține nivelul de hidratare si vindecare, fiind totodată biocompatibile si non-toxice țesutului vatamat.

Datele din literatura de specialitate, privind brevetele din domeniul produselor dermatocosmetice sau biomedicale, pe baza de nanoceluloza ca suport, in sinergie sau asociere, cu diferite forme de functionalizare cu substanțe, complexe sau compuși naturali, agreate din

punct de vedere dermato-medical sau farmaceutic, au prezentat un real interes, pentru a aduce beneficii si pentru a facilita tratarea locala a dermului.

Astfel, brevetul EP 0197969 (Bl) cu titlul “Proces de preparare a filmului de celuloza, producerea filmului de celuloza, grefe artificiale de piele si utilizarea lor”, descrie procesul de obținere a filmului de celuloza bacteriana si beneficiile sale aduse in tratamentul local al dermului. Filmul de celuloza a fost obtinut prin conducerea de procese biotehnologice de fermentație a bacteriei Acetobacter xylinum, in mediu de cultura bogat in nutrienti si surse de carbohidrati (sucroza) si azot. Filmul celulozic obtinut este prezentat si caracterizat ca fiind un film semipermeabil pentru lichid si aer, adaptabil oricărei forme de sterilizare, un film rezistent si elastic, cu o aderenta buna, atraumatica la atașarea de derm, ușor de utilizat, adaptatii ca forma, in funcție de utilizare. Pe de alta parte, sunt precizate si aspecte privind beneficiile utilizării sale in tratamentul local al leziunilor, filmul de celuloza bacteriana avand rol adjuvant la refacerea mai rapida a țesutului afectat, la diminuarea semnificativa a ratei locale de infectare.

Brevetul US 4588400 cu titlul “Pansament impregnat cu lichid pentru aplicatii medicale” descrie un pansament umed cu utilizare medicala. Se descrie un pansament de o grosime intre 0.1-5mm, impregnat cu o soluție lichida apoasa antibacteriana, aplicata pe un suport de film ocluziv, pentru evitarea evaporării. Se pot utiliza diferite forme de film, cum ar fi cel de poliviniden clorid, polietilena, polivinil sau acetat de celuloza, precum si derivatii sai, sau chiar tesaturi textile, cum ar fi nailonul. Aceasta invenție se adreseaza tratamentului umed local, in principal al ulcerelor varicoase.

Brevetul US 2003/0203012 (Al), cu titlul “Pansament de celuloza microbiana pentru tratarea rănilor cronice”, descrie un pansamnet compresiv, biocompatibil si nonpirogenic, din celuloza microbiana/derivati (1.5-9%) pentru tratamentul specific a diferite răni cronice, inclusiv pentru durerile cronice, venoase si ulcere diabetice. Pansamnetul este capabil de a elibera lichidul cu care este impregnat, dar si de a absorbi exudatul la nivelul plăgii. Invenția descrie procesul de obținere a suportului de celuloza bacteriana, in condiții statice de cultura si utilizarea microorganismului Acetobacter xylinum, la o temperatura de 30°C si un pH al mediului de bioproces intre 3-6. Mediul utilizat pentru obținerea celulozei a avut ca sursa de carbon, carhohidrati (sucroza), surse de azot, săruri si minerale, in acord cu formularea de mediu originala Schramm Hestrin. Invenția descrie si posibilitatea ca suportul de pansament sa fie impregnat cu o solultie anestezica, pentru tratamentul local la nivelul fetei (masca facila, 9x12cm ca dimensiune) sau a oricărui tesut deteriorat, suportul pansamentului avand proprietăți absorbante si hidratante, ce conduc la înlesnirea vindecării si refacerii dermului. O alta varianta a pansamentului este descrisa ca o abordare mai complexa si se refera la o impregnare a suportului (ca masca faciala), cu substanțe medicamentoase, inclusiv vitamine, cum ar fi vitamina C, vitamina A, vitamina E sau esteri ai lor, acid oleic, inhibitori ai metaloproteinazelor, factori de creștere epidermali, agenti antibacterieni sau antiseptici.

Brevetul EP 2 390 344 (Bl) “Film de celuloza bacteriana si utilizările sale” descrie un film nanocelulozic cu o grosime de 0.1-0.5mm, asociat cu diferite componente active, inclusiv medicamente, antibiotice, agenti antibacterieni, antivirali, antiinflamatori, homeostatici, substanțe cu efect anestezic, medicamente adjuvante in vindecarea rănilor sau alte combinatii, ce se poate utiliza in domeniul biomedical, in tratamentul topic al rănilor. Invenția descrie si procedeul de obținere a celulozei bacteriene, sub forma fibrilara, ca film, cu o densitate mare si rețea tridimensionala. Aceasta este descrisa a fi obtinuta printr-un proces de fermentație microbiană Glyconacetobacter, in doua trepte de cultura, la o temperatura de 25-28°C si respectiv 29-30°C pentru treapta a doua. Randamentele de producție sunt menționate ca fiind de 5-20g/m² produs deshidratat. Suportul nanocelulozic obtinut, conține in starea hidratata circa 9099% din masa sa. Invenția precizează faptul ca, suportul de celuloza bacterina, se poate impregna sau functionaliza, cu diferite lichide sau substanțe, pentru utilizare in domeniul medical, dar si posibilitatea includerii a diferite forme dermato-cosmetice, cum ar fi umectantii, agenti de albire ai tenului, compuși anti-aging, soluții de îndepărtare a cuticulelor, factori de creștere sau enzime, astfel pansamentul find utilizat in sfera cosmetica sau dermatocosmetica.

Brevetul US9200086 (B2) cu titlul “Celuloza bacteriana acoperita cu nanoargint” descrie un material cu efect antibacterian, din celuloza bacteriana fibrilara incorporata (prin legaturi chimice la biomaterialul celulozic) cu nanoparticule de argint, precum si procedeul de obținere si conversie in forme pretabile aplicațiilor specifice domeniului medical. Invenția descrie obținerea biomaterialului ca suport, precum si procesul etapizat de preparare/obtinere a compozitului de celuloza bacteriana - nanoparticule de argint, proces complex ce presupune prepararea suspensiei de fibre de celuloza, procesul de oxidare a acestora, aditia de grupări tiol si interactia cu nanoparticule de argint, pentru efectul de coating. Suportul fibrilar de celuloza bacteriana a fost descris ca fiind obtinut in urma fermentației bacterei Acetobacter xylinum BPR 2001, in mediu de cultura cu un conținut de 2% fructoza, 8% extract de porumb, ca surse de carbon si azot. Membranele de celuloza obținute au fost tratate cu o soluție de hidroxid de sodiu 1%, pentru 30 de minute la temperatura de 90°C, in scopul purificării. Datorita structurii retelare a biomaterialului celulozic, impregnarea se poate realiza cu diferite dimensiuni de nanoparticule de argint, ce pot varia de la 1 Onm pana la 1 OOnm. Capacitatea de absorbție speciala a celulozei bacteriene favorizează menținerea unui mediu de hidratare optim in cazul aplicării la nivelul plăgilor. In asociere cu un agent antibacterian cum este argintul, performanta biomaterialului este semnificativ crescută, mai ales datorita faptului ca, celuloza este un material mult mai versatil, prietenos si biocompatibil, in comparație cu variantele sintetice. Invenția descrie procesul de

obținere a compozitului de celuloza cu argint, cu o etapa inițiala de obținere a dialdehid-celulozei, pornind de la 0.36wt% celuloza bacteriana inițiala, supusa unui proces de oxidare cu NaIO4 0.16M, pentru un timp intre 15 si 60 de minute, in scopul obținerii fibrelor de celuloza, ce sunt apoi tratate cu etilen glicol si apa distilata. Soluția de nanoparticule de argint, in acord cu invenția, a fost constituita din 1 % proteinat de argint si 2% borat de sodiu; amestecul a fost filtrat si asociat cu celuloza bacteriana cu grupări tiol incorporate, in scopul functionalizarii biomaterialului suport cu nanoparticule de argint, cu o dimensiune aproximativ de 15nm; apoi sa realizat un tratament cu o soluție de azotat de argint (nanoparticule de dimenisune 50-100nm) pentru efectul de coating a celulozei bacteriene. Activitatea antibacteriana a compozitului celuloza bacteriana impregnata cu nanoparticule de argint a fost dovetita fata de agenti patogeni gram-pozitivi ca Staphylococcus aureus, precum si fata de cei gram-negativi cum ar fi Escherichia coli DH5a.

Brevetul WO 2008100163 (Al) descrie un produs similar, respectiv compozit pe baza de celuloza bacteriana nanofibrilara, cu aditie, prin electrofilare, de nanoparticule de argint, cu efect bacteriostatic, bactericid si fungicid. Activitatea eficienta a nanocompozitului celulozananoparticule de argint fata de Staphylococcus aureous a fost descrisa in invenția US 2010233245 Al, iar capacitate de scalare a produsului si eficienta generala si biocompatibilitatea acestuia, precum si tehnologia de preparare facila, au fost descrise in brevetele de invenție WO 2009063508 A2 si US 2010233245 Al.

Brevetul WO 2010042647 A2 descrie metoda de obținere si efectele biologice ale unui produs pe baza de celuloza bacteriana cu grupările carboxil oxidate. Eficienta biologica inpotriva E. coli a fost dovedita si descrisa.

Brevetul intitulat “Masca cosmetica din bio-celuloza si metoda de prelucrare” (US 2013/0244977 Al) descrie un produs cosmetic, sub forma de masca din bio-celuloza, impregnata cu un amestec specific. Invenția prezintă modul de obținere a suportului bio-celulozic, prin proces biotehnologic fermentativ a bacteriei Acetobacter xylinum BRC21, in mediu clasic nutritiv HS, in prezenta extractului de ghimbir (extract etanolic: apa, 1:1), precum si metoda de impregnare/functionalizare a acestuia, prin cufundarea in emulsie cosmetica (de tipul ulei in apa). Este prezentata deasemenea si o varianta facila de ambalare, pentru menținerea optima a compușilor biologic activi. Produsul este destinat aplicării locale la nivelul tenului aducand beneficii si eficacitate la o aplicare ușoara si neinvaziva.

Un hidrogel cu nanoceluloza, sub forma de masca este descris in brevetul cu titlul “Formularea unei masti hidratate de nanoceluloza cu sau fara liant pentru utilizare ca tratament dermatologic” (US 9816230). Invenția descrie obținerea si purificarea nanocelulozei, precum si procedeul de realizare a măștii in diferite forme. Forma măștii se obține prin aplicarea unei

presiuni înalte sau proces de filtrare la vaccum. Nanoceluloza este functionalizata, conform descrierii din brevet, cu ingrediente active dermatologice, precum si cu alti agenti, care conferă stabilitate formei măștii, cum ar fi citrat de calciu, lactat sau stearat. Suportul de nanoceluloza functionalizat este apoi modelat in forme si dimensiuni variate, cum ar fi sub forma de masca faciala, pentru gat sau pentru zona ochilor.

Compania Johnson and Johnson Product Inc. descrie in brevetul US 4588400, WO 86/02095, un pansament sub forma unui film de celuloza bacteriana pentru tratarea rănilor termice. Celuloza bacteriana este descrisa ca fiind obtinuta via procedee biotehnologice de fermentație a A. xylinum, in mediu nutritiv cu adaus de Tea Sinesis, drept sursa de azot si glucoza drept sursa de carbon. Filmul nanocelulozic cu o grosime de 0.2-3mm este comercializat sub brandul BIOFILL® si se utilizează ca substituent artificial de piele, in tratamentul local al injuriilor țesutului agresat termic.

Similar cu acesta, corporația Xylos descrie un produs similar, sub forma de pansament film de celuloza bacteriana pentru tratarea rănilor cronice (brevet de invenție US 2005/0019380 Al) sau altele descriu utilizarea celulozei bacteriene ca material implantabil si benefic pentru regenerarea tisulara (brevet de invenție WO 2005/018435 A2 si US 2007/0286884 Al), precum si ca un foarte eficient vector sau sistem de transmitere transdermala a medicatiei (brevet de invenție EP 1849463 A2).

Brevetul de invenție romanesc RO117898 (Bl) cu titlul “Pansament cu produs medicinal” descrie un pansament cu produs medicinal-naturist, pentru tratarea plăgilor, ce consta in aceea ca este realizat in baza unui suport de natura celulozica, impregnat cu un preparat bogat in compuși naturali, reprezentat de fapt de un decoct de plante (lparte), miere de albine (0.Sparti), ceara de albine (0.2parti) si colofoniu (0.lparte). Decoctul utilizat pentru functionalizarea celulozei bacteriene este un amestec foarte bogat si variat de specii de plante, cu composi naturali cu efecte biologice recunoscute in tratarea testurilor afectate, cu efecte antibacteriene, nuritive, reparatoare, cum ar fi Petasites hybridus, Ocimum basilicum, Hippophae rhamnoides, Ballota nigra, Cichorium inthybus, Thymus vulgaris, Primula veris, Equisetum arvense, Achillea millefolium, Echium altissimum, Stipites cerasorum,Lilium candidum, Cucurbita pepo, Lysimachia mummularia, Phaseolus vulgaris, Lychnis flos-cuculi, Fraxinus excelsior, Calendula officinalis, Humulus lupulus, Linum usitatissimum, Hyssopus officinalis,Artemisia arbrotharum, Lavandula angustifolia, Chamomilla recutita, Malva crispa, Plantago media, Artemisia absinthium, Pulmonaria officinalis, Phyllitis scolopendrium, Citrullus lanatus, Elymus repens, Stigmata maydis, Chelidonium majus, Robinia pseudacacia, Hypericum perforatum, Symmphytum officinale, Tilia platyphylos, Roșa centifolia, Polygonum aviculare, Ulmus minor, Lamium album, Convolvulus arvensis, Epilobium angustifolium.

Brevetul EP 0075791 (Al) cu titlul “Pansament absorbant pentru răni si procedeu de obținere a acestuia” descrie un pansament constituit din material macroporos de natura celulozica (regenerată) si un derivat polizaharidic cu grupări carboxilat. Acest produs este prezentat ca fiind un bun absorbant local plăgii, mai ales pentru cele puternic exudative, atoxic, compatibil cu orice tesut, cu un rol de bariera fata de riscul infecțiilor, cu utilizare generala in tratarea plăgilor.

Prezenta invenție se refera la un pansament hidroactiv, care prezintă avantajul ca are in compoziție extract de viță roșie, extract de propolis, levomenol natural, alantoina, acid ascorbic, tocoferol natural, retinil palmeat natural, ulei esențial de eucalipt citronat si ulei esențial de cuisoare, in rapoarte bine stabilite, ceea ce conferă pansamentului o buna stabilitate fizico-chimica si biologica, cu o capacitate cicatrizanta, reepitalizanta, aport nutritiv, hidratant si calmant local, atat de necesar dermului vartamat. Prin aplicarea topica repetitiva a prezentului pansament bioactiv pentru managementul umed al dermului, se asigura un mediu favorabil antibacterian, aseptic, nutitiv si regenerant, ceea ce va conduce la refacerea si vindecarea rapida a tegumentului iritat.

Problema tehnica

Problema tehnica obiectiva propusa spre rezolvare de prezenta cerere de invenție consta in:

- înlocuirea suportului de pansament aderent cu un suport de pansament dintr-un biomaterial nanocelulozic inteligent si versatil, prietenos si biodegradabil, atraumatic, absorbant, biocompatibil total cu pielea, flexibil si rezistent.

- înlocuirea unor componente de sinteza chimica (medicamentoase sau antibiotice de sinteza) in formulele de produse dermatocosmetice/bio-medicale, cu ingrediente naturale, active majore de origine vegetala.

- stabilirea componentelor si sinergiilor dintre acestea, precum si stabilirea rapoartelor de asociere a acestora, pentru realizarea unui pansament hidroactiv/bioactiv, bogat in agenti antibacterieni naturali, elemente nutritive si vitamine pentru regenerarea, hidratarea si reconstrucția tegumentului.

- realizarea unui produs dermatocosmetic sub forma de pansamant hidroactiv/bioactiv, antibacterian si regenerator ce furnizează si asigura un mediu favorabil vindecării țesutului, dar si elemente nutritive blânde si benefice stimulării matrixului celular tegumentar.

Pansamentul hidroactiv/bioactiv pentru managementul umed al dermului reprezintă o asociere de principii bioactive de origine vegetala, care acționează specific si benefic dovedit, in raportele utilizate in formula propusa, avand acțiune antibacteriana, nutritiva, hidratanta.

Soluția tehnica consta in faptul ca se asociaza filmul de celuloza bacteriana (nanoceluloza) cu un amestec bioactiv cu următoarele ingredinte: extract de viță roșie, extract de propolis, levomenol, alantoina, acid ascorbic, tocoferol natural, retinil palmeat natural, ulei esențial de eucalipt citronat si ulei esențial de cuisoare.

Avantajele invenției in raport cu stadiul tehnicii:

Aplicarea invenției conduce la următoarele avantaje:

- este un produs dermatocosmetic (pansament hidroactiv/bioactiv pentru managementul umed al dermului) destinat pentru toate tipurile de injurii sau leziuni ale tegumentului, pentru îngrijirea temporara sau permanenta a plăgilor, avand capacitate antibacteriana, calmanta, antioxidanta, cicatrizanta, reepitalizanta, nutritiva, hidratanta.

- este un pansament bioactiv si hidroactiv, pentru managementul umed al dermului, pentru toate tipurile de plăgi sau leziuni superficiale sau medii, chiar si pentru cele mai agravante sau cronice.

- este un pansament bioactiv si hidroactiv pentru managementul umed al dermului ce nu induce intoleranta la aplicare locala pe un interval de timp îndelungat.

- este un pansament bioactiv si hidroactiv pentru managementul umed al dermului biocompatibil si atraumatic, adica se poate îndepărtă foarte ușor si fara durere in zona plăgii tratate, fiind totodată foarte flexibil si maleabil.

- este un pansament bioactiv si hidroactiv pentru managementul umed al dermului ce facilitează calmarea locala si scade semnificativ timpul de vindecare, datorita componentelor active naturale antibacteriene, calmante, cicatrizante specifice si dedicate, cum sunt extractul de propolis, levomenol natural din extract de mușețel, alantoinei si extractului de viță roșie.

- este un pansament bioactiv si hidroactiv pentru managementul umed al dermului nutritiv datorita efectului de vitaminizare, antioxidant, regenerator, prin acțiunea acidului ascorbic, tocoferolului si a retinilului palmeat natural.

- este un pansament bioactiv si hidroactiv pentru managementul umed al dermului cu rol de “bariera” antibacteriana datorita densității suportului nanocelulozic.

- este un pansament bioactiv si hidroactiv pentru managementul umed al dermului cu efect antiseptic si antibacterian ceea ce favorizează procesul de reepitelizare, datorita prezentei extractului de viță roșie, extractului de propolis, uleiului esențial de eucalipt citronat si a uleiului esențial de cuisoare.

Avantajele majore ale acestor pansamente „inteligente” constau în flexibilitatea, conformabilitatea și natura umedă, ceea ce le face extrem de biocompatibile si rezistente, functionalizate cu formule/mixuri cu componente biologic active.

Descrierea detaliata a invenției:

In ceea ce privește compoziția amestecului bioactiv de functionalizare a nanocelulozei, precum si procesul de obținere a suportului, se prezintă pe scurt motivarea alegerii acestora, in vederea realizării pansamentului hidroactiv/bioactiv pentru managementul umed al dermului, după cum urmeaza:

Extract de Viță roșie Bio sub forma de extract fluid concentrat din frunze de vita roșie, a fost selectat datorita proprietăților sale recunoscute in tratarea pielii, fiind un activ cosmetic destinat stimulării microcirculatiei cutanate, pentru imbunatatirea circulației periferice, tonifiant venos, antiradicalar, protejează pielea împotriva îmbătrânirii premature, creste tonusul si elasticitatea pielii. Prezenta oligoelementelor si a resveratrolului permite o acțiune antiradicali liberi si de stabilizare a colagenului, protejând astfel pielea de imbatranirea prematura (acțiune anti-aging recunoscuta).

Vita roșie este o planta cunoscuta inca din antichitate, apreciata mai ales pentru fructele utilizate la producerea vinului. Vita este reprezentata de o sumedenie de specii dintre care face parte si vita roșie. Inca din secolul al XVII-lea, frunzele de vita roșie erau utilizate in infuzii sau macerate contra senzației de picioare grele, publicandu-se de atunci o serie de rapoarte despre proprietățile sale circulatorii si antioxidante.

Extractul de propolis a fost selectat datorita multifunctionalitatii biomimetice (titrat în polifenoli, un total de 12-15 mg/ml), fiind recunoscut si apreciat in formulările de produse cosmetice si dermatocosmetice, datorita compoziției ridicate in compuși bioactivi polifenolici (Solange si colab., 2011), glicozilati solubili, acizii fenolici, bioflavonoidele si glicozidele. Efectele la nivelul dermului sunt dovedite, avand acțiune calmanta a iritatiei locale, precum si acțiune antioxidanta si reperatoare datorita celor peste 300 de compuși biologic activi conținuți, printre care acid 3,5-diprenil-4-hidroxi-cinnamic (Solange si colab., 2011), acid p-coumaric acid (1.2-12.2 mg/g) sau acid ferulic (0.3-11.0 mg/g), flavonoide si acizi polifenoli in proporție de pana la 70%, uleiuri esențiale pana la 3%, ceara pana la 35%, precum si alti compuși, cum ar fi minerale, polizaharide si proteine (Oses si colab., 2020). Acest extract natural si bogat in principii active, a fost ales datorita efectului antiseptic, cicatrizant, antiinflamator, fiind utilizat adesea in tratarea tradiționala a rănilor sau plăgilor, precum si datorita efectului puternic antioxidant, avand astfel o contribuție majora in reducerea timpului de vindecare si refacere tegumentara.

Alcool sesquiterpene monociclic natural este un compus natural, predominant si izolat in principal din mușețel, Matricaria chamomilla, unde este prezent in proporție de 91% in uleiul esențial (Nâthia-Neves si colab., 2020) sau din alte plate, cum ar fi Eremanthus erythropappus, Smyrniopsis aucheri, Salvia runcinata si specii de Vanillosmopsis (Kamatou si Viljoen, 2009) este cunoscut si sub numele de levomenol natural sau α-Bisabolol natural. Este utilizat in tratatea afecțiunilor dermului vatamat, datorita proprietăților sale multiple farmacologice si efectului terapeutic, ca antibiotic natural, agent antibacterian natural puternic, antiinflamator (Anii si colab., 2014), dar si totodată pentru efectul reparator, cicatrizant si calmant al pielii sensibile si iritate. Acest compus natural a fost selectat datorita rolului antiinflamator si analgezic, fiind utilizat adesea in tratarea pielii cu probleme si inclus in numeroase produse cu aplicare topica de uz dermatocosmetic.

Fiind un puternic factor de regenerare si reparare tisulara, alantoina a fost inclusa datorita efectului de accelerare a procesului de vindecare a dermului. Acest efect se datoreaza capacitatii sale de stimulare a sintezei de colagen (Bakibaev si colab., 2020), prin creșterea ratei de sinteza a precursorului acestuia, pro-colagenul, la nivelul țesutului vatamat (US20080108681 Al), ceea ce recomanda alantoina ca ingredinet activ important in tratarea diferitelor plăgi, atat superficiale, cat si grave sau chiar cronice.

Acid ascorbic sau vitamina C solubila este un ingredient important, ales in compoziția de mix activator de fiinctionalizare a suportului nanocelulozic ca pansament bioactiv, datorita efectului remarcabil antioxidant, care in sinergie cu alantoina si extractul de propolis, contribuie la stimularea sintezei locale de colagen (Ravetti si colab., 2019), susținând astfel procesul de refacere si reepitalizare tegumentara. Datorita proprietăților de a neutraliza radicalii liberi, acidul ascorbic, interactioneaza cu diferite enzime, ca superoxiddismutaza, prevenind procesele inflamatorii, fiind astfel utilizat ca o noua alternativa in tratamentul afecțiunilor pielii, cum ar fi de pilda dermatita. Formele cele mai utilizate ale vitaminei C incluse in formulările dermatocosmetice sau cosmetice sunt ca ascorbat de sodiu sau ascorbil palmitat, avand efect antioxidant, de fotoprotectie, antiimbatranire sau antipigmentar.

Pentru realizarea unei sinergii antioxidante, tocoferolul natural a fost ales. Acesta, alaiuri de celelalte ingrediente, stimulează sinteza de colagen si elastina, susținând o structura normala a testutului si refacerea acestuia mai rapida. Acest efect este datorat si capacitatii sale de a susține un nivel optim de hidratare locala, fiind emolient (Thiele si colab., 2005). Tocoferolul este utilizat in dermatologie, in formularea de produse cu aplicare locala datorita efectului antioxidant (Fiume si colab., 2018) si calmant pentru tratarea leziunilor dermale si nu numai.

Retinil palmeat natural sau vitamina A, a fost selectat datorita importantei sale in refacerea si dezvoltarea țesutului (regenerator cutanat), prin susținerea integrității structurale, reepitalizarii, fiind un factor de echilibrare a funcționalității pielii, prin reglarea multiplicării celulare la nivel local (Zasada si Buszisz, 2019), prevenind procesul de keratinizare, prin creșterea activitatii enzimelor cutanate si stimularea sintezei de colagen.

Uleiul esențial de eucalipt citronal (Eucalyptus citriodora oii) a fost inclus datorita proprietăților antiinflamatorii, antalgice, calmante si antifungice (Mutlu-Ingok si colab., 2020). Conținutul bogat in peste 22 de compuși biologic activi in uleiul esențial (peste 95.2%), predominant in citronelal (69.77%), citronelol (10.63%) si isopulegol (4.66%) este foarte benefic in tratarea rănilor, precum si pentru calmarea durerilor locale, pentru diminuarea pruritului si a infecțiilor cu diferiti agenti patogeni (Toba si colab., 2015).

Uleiul esențial de cuisoare (Eugenia caryophyllus leaf oii) este bogat in compuși biologic activi, eugenol si eugenol acetat (peste 88.6%), beta-cariofilen (1.4%) si 2-heptanone (0.9%), cu acțiune puternic antibacteriana, antifingica, antiseptica (Chaieb si colab., 2007, Aiemsaard si colab., 2020) si este utlizat in formulările cosmetice sau dermatocosmetice pentru aplicatii topice in tratarea diferitor infectii, micoze, plăgi diverse sau chiar ca ușor anestezic local.

Acesta reprezintă o sursa accesibila ca antioxidant si antibacterian natural in aplicațiile farmaceutice si cosmetice (Aiemsaard si colab., 2020).

Celuloza bacteriana sau nanoceluloza este un biomaterial versatil si inteligent (polimer liniar de glucoza, B-l,4-glicozid legate) a fost ales ca suport pentru realizarea pansamentului bioactiv, tocmai datorita proprietăților sale speciale, respectiv membrana flexibila, rezistenta, absorbanta, cu capacitate mare de înglobare de solutii/lichide, biodegradabila, biocompatibila, non-toxica. Acest material a fost ales ca alternativa atraumatica pentru pansamentele clasice aderente utilizate curent in tratamentul plăgilor. Nanoceluloza este functionalizata prin înglobarea unui amestec de compuși si elemente cu importanta esențiala in tratarea dermului vatamat, reprezentând o alternativa foarte accesibila pentru pansamentele clasice aderente.

Avantajul realizării acestui panasament bioactiv si hidroactiv reprezintă o alternativa eficienta in managementul umed al plăgilor diverse, prin aceea ca este foate maleabil, nu adera la tegument, se muleaza in acord cu forma locala tratata, îndepărtarea este nedureroasa si netraumatizanta. Acest suport are un rol de distribuție eficienta locala a componentelor active biologic conținute după functionalizare, are rol de menținere a hidratării locale si de bariera antibacteriana. Creeaza o perfecta sinergie funcționala cu mixul activator, ajutand la reducerea timpilor de tratament si vindecare.

Suportul nanocelulozic al pansamentului este obtinut prin bioprocese tehnologice fermentative, utilizând tulpina bacterana non-patogena, strict aeroba si gram negativa Acetobacter xylinum DSMZ 2004 (ICCF 398), acesta fiind produsul final al metabolismul de carbon, via ciclul pentoza fosfat sau ciclul Krebs, cuplat cu gluconeogeneza. In timpul procesului de sinteza, protofibrilele nanocelulozice secretate prin peretele celular bacterian, formează agregate de celuloza (microfibrile), ce construiesc structura de rețea tridimensionala, cu o io matrice foarte poroasa, cu o suprafața abundenta de grupări hidroxil, care explica hidrofilicitatea, biodegradabilitata si capacitatea de modificare chimica.

Tulpina bacteriana Acetobacter xylinum DSMZ 2004 (ICCF 398) utilizata in bioprocese, se va dezvolta etapizat in mediu nutritiv specific microorganismelor ce conține glucoza, peptona, extract de drojdie, fosfat disodic si acid citric (Casarica si colab., 2016).

Mediul inocul este alcătuit din: extract de porumb, glucoza, fosfat monopotasic si acid citric.

Mediul de bioproces (pH 5.5) este alcătuit din glucoza, glicerol, sulfat de amoniu, fosfat acid de sodiu, acid citric, extract de drojdie, sulfat de magneziu si microelemente. Incubarea se efectuează in regim static, la o temperatura constanta de 30°C pentru 14 zile. Se formează o pelicula (membrana) nanocelulozica, la interfața aer-lichid, ce este recoltata si tratata pentru purificare. Purificarea nanocelulozei se realizează prin imersare in soluții bazice (hidroxid de sodiu IN), la temperatura camerei, pentru 48 de ore si neuralizare.

Pregătirea suportului de pansament umed nanocelulozic presupune sterilizarea umeda timp de 45 de minute.

Pansamentul hidroactiv pentru managementul umed al dermului se realizează prin imersarea filmului de celuloza bacterana steril, in amestecul bioactiv de functionalizare, bogat in principii active, la temperatura camerei, pentru minim 24 de ore, la întuneric.

Invenția va fi explicata mai in detaliu prin urmatoarul exemplu:

Exemplu: Pentru a obține lOOg compoziție amestec bioactiv de functionalizare se folosesc: Aqua 79 parti, extract de Viță roșie Bio 10 parti, Propolis Extract 5 parti, Tocopherol (Helianthus annuus seed oii) 1 parte, Retinil palmitate 1 parte, Ascorbic acid 1 parte, Eucalyptus citriodora oii 1 parte, Eugenia caryophyllus leaf oii 1 parte, Levomenol natural 0.5 parti, Alantoin 0.5 parti.

______________Compoziție amestec bioactiv de functionalizare INCI-CAS______________

Denumire INCI ingredient	%	FUNCȚIILE ingredientului	CAS
Aqua	79	Solubilizant, umectant	7732-18-5
Extract de Viță roșie Bio	10	tonifiant venos, antiradicalar, protejează pielea împotriva îmbătrânirii premature, creste tonusul si elasticitatea pielii	91082-91-6
Propolis Extract	5	Antibacterian, antiinflamator, antioxidant, calmant cutanat	85665-41-4
Tocopherol {Helianthus annuus seed oii)	1	Antiinflamator, antioxidant, regeneretor, emolient cutanat	8001-21-6
Retinil palmitate	1	Regenerator, reepitelizator, activator, emolient, calmant cutanat	79-81-2
Ascorbic acid	1	Antiinflamator, antioxidant, regeneretor, anti-aging, stimulator al sintezei de colagen si elastina	50-81-7
Eucalyptus citriodora oii	1	Antibacterian, antiinflamator, antialgic, antimicotic, antipruit, antispasmodic, calmant cutanat	8000-48-4
Eugenia caryophyllus leaf oii	1	Antibacterian cu spectru larg, antiinflamator, antialgic, antimicotic, antiseptic, calmant cutanat	8015-97-2
Levomenol	0.5	Antibacterian, antiinflamator, antiiritant, reduce pierderea apei transepidermale, cicatrizant, reparator si calmant cutanat	515-69-5
Alantoin	0.5	Antiiritant, reepitalizant, keratolitic, restructutant, calmant cutanat	97-59-6

Procedeul de preparare a compoziției amestec bioactiv de functionalizare a filmului de nanoceluloza, se desfasoara in modul următor: ingredientele in stare lichida (Aqua, Extract de Viță roșie Bio, Propolis extract) se cântăresc la balanța analitica, intr-un recipient steril din sticla termorezistenta; ingredientele sub forma de pulbere (Ascorbic acid, Levomenol, Alantoin) se cântăresc la balanța analitica in recipiente sterile. In cantitatea de apa pura se adauga in picătură, toata cantitatea de Extract de Viță roșie Bio, cu omogenizare ușoara. Peste acest amestec, se adauga in picătură extractul de propolis si se omogenineaza.

In acest amestec omogen si ușor gălbui, se adauga toata cantitatea de acid ascorbic conform exemplului, se solubilizeaza complet; se adauga in proporții mici cantitatea de Levomenol, se solubilizeaza; se aduga in proporții mici si etapizat cantitatea de alantoina, conform exemplului. Uleiurile esențiale se adauga, in picătură cu omogenizare, la finalul preparării amestecului. Amestecul final se realizează la temperatura camerei si se lașa in repaus, ferit de lumina, circa 15-20 minute, pentru maturare.

Filmul (membrana de celuloza bacteriana) se purifica si se sterilizează.

Realizarea pansamentului hidroactiv/bioactiv pentru managementul umed al dermului se desfasoara in modul următor: membrana de celuloza sterila se secționează cu instrumentar steril, in funcție de dimensiunea si forma sitului de aplicare/tratament. Stabilirea dimensiunilor si secționarea este de preferat sa se realizeze înainte de procesul de sterilizare. Se poate opta pentru utilizarea membranei integrale sau realizarea de secțiuni ale acesteia, funcție de necesitate. Filmul (membrana sterila) integral sau secțiuni sterile ale acestuia, se imerseaza total in amestecul bioactiv de functionalizare, preparat ca in exemplu. Tratamentul de functionalizare se realizează la temperatura camerei, la întuneric, pentru minim 24 de ore.

Teste Relevante Pentru Activitatea Biologica Specifica.

Evaluarea eficientei biologice. Determinarea încărcăturii microbiene.

Determinarea încărcăturii microbiene pentru pansamentul hidroactiv/bioactiv pentru managementul umed al dermului, s-a realizat prin metoda inoculării in profunzime - metoda de testare/evaluare a numărului total de microorganisme aerobe viabile, in condițiile prevăzute de Pharmacopeia europeana IX, Volumul I, Capitolul. 2.6.12.; metoda se aplica in procesul de control al calitatii produselor de cosmetice/dermatocosmetice.

Materiale si echipamente necesare: placi Petri steriele 90 mm, pipete gradate sterile de capacitatelO mL, eprubete 18/180 mm sterile, pahare Erlenmayer sterile; pipetor automat; balanța analitica; boxa microbiologica cu flux de aer laminar (LAF), incubator cu temperatura reglabila, 30-35°C, pentru creșterea optima a bacteriilor, incubator cu temperatura reglabila, 2025°C, pentru creșterea optima a fungilor.

Conform Pharmacopoeia europeana IX in vigoare, se utilizează următoarele medii de cultura si soluții: Mediu Casein Soya-Bean Digest Agar (CaSoA) in forma deshidratata (Merck Romania), Mediu Sabouraud cu Chloramphenicol (SDA) in forma deshidratata (Merck Romania), Soluție Tampon Apa Peptonata - Clorura de Sodiu, pH=7.

Metodologia de testare a numărului total microorganisme aerobe viabile, prin metoda inoculării in profunzime, s-a desfasurat după cum urmeaza: pansamentul hidroactiv/bioactiv pentru managementul umed al dermului se prelucrează in condiții aseptice, in punctul de lucru de clasa A. Se utilizează lOg de produs, se prepara dilutii seriale (1/100, 1/1000), folosind ca solvent Soluție Tampon Apa Peptonata - Clorura de Sodiu, pH=7. Un volum de 1 mL din dilutia probei de analizat, se repartizează in 3 placi Petri sterile cu diametrul de 90 mm, se adauga cate un volum de 15-20 mL mediu de cultura Casein Soya-Bean Digest Agar (CaSoA), topit si răcit la temperatura de 43 °C. Plăcile Petri se acopera cu capacul, se rotesc pe suprafața plana, pentru omogenizarea produsului de testat cu mediul de cultura, se lașa in repaus pentru solidificare, la temperatura camerei, se transfera in incinta de termostatare, cu capacul in jos. In maniera similara se procedează si pentru inocularea in profunzime a probei de analizat cu Mediul Sabouraud cu Chloramphenicol (SDA). Termostatarea se realizează in condiții statice, la o temperatură de 3035°C, 5 zile.

Interpretarea rezultatelor se realizează după cum urmeaza: după expirarea perioadei de incubare (5 zile), se selectează (pentru fiecare dilutie testata) plăcile Petri care prezintă creștere microbiana, se evalueaza prin numărare coloniile microbiene, numaratoarea se efectuează doar pentru plăcile care prezintă creșteri microbiene de maxim 250, pentru numărul total microorganisme aerobe viabile (unitati formatoare de colonii - UFC) si respectiv de maxim 50, pentru numărul total drojdii si mucegaiuri, plăcile ce nu prezintă creștere microbiana sunt eliminate.

Numărul total de microorganisme aerobe viabile este egal cu media aritmetica a numărului de UFC recuperate de pe mediul de cultura Casein Soya-Bean Digest Agar (CaSoA).

Numărul total de drojdii si mucegaiuri este egal cu media aritmetica a numărului de UFC recuperate de pe mediul de cultura Sabouraud cu Chloramphenicol (SDA); daca sunt prezente si alte colonii de fungi, acestea sunt numărate ca parte din număr total microorganisme aerobe viabile sau drojdii si mucegaiuri.

Pentru pansamentul hidroactiv/bioactiv pentru managementul umed al dermului, evaluarea încărcăturii microbiene a fost următoarea: Număr total bacterii aerobe viabile <10 UFC/g si Număr total drojdii si mucegaiuri < 10 UFC/g.

Pansamentul hidroactiv/bioactiv pentru managementul umed al dermului este conform din punct de vedere al încărcăturii microbiene, prezentând valori sub cele maximale impuse de Pharmacopoeia europeana IX.

Evaluarea eficientei biologice. Determinarea activitatii antimicrobiene.

Determinarea activitatii antimicrobiene pentru pansamentul hidroactiv/bioactiv pentru managementul umed al dermului, s-a realizat prin metoda difuziometrica, adaptata pentru extracte vegetale naturale, in condițiile prevăzute de Pharmacopeia europeana X.

Materiale si echipamente necesare: eprubete 18/180 mm sterile, placi Petri 90 mm sterile, pahare Erlenmayer sterile, incubator cu temperatura reglabila, 30-35°C, pentru creșterea optima a bacteriilor, incubator cu temperatura reglabila, 20-25°C, pentru creșterea optima a lungilor, etalon Mc Farland, baie de apa termostata, agitator tip Vortex, monopost, cabinet biologic cu flux de aer laminar. Tulpini microbiene-test standardizate utilizate: microorganism standardizat Gram-pozitiv Staphylococcus aureus ATCC 6538; microorganism standardizat Gram-negativ: Escherichia coli ATCC 8739; o specie de lungi Candida albicans ATCC 10231.

Conform Pharmacopoeia europeana IX in vigoare, se utilieaza următoarele medii de cultura: Mediu Casein Soya-Bean Digest Agar (CaSoA) in forma deshidratata (Merck Romania), Mediu Sabouraud cu Chloramphenicol (SDA) in forma deshidratata (Merck Romania).

Pentru activarea tulpinilor bacteriene standardizate-test, in forma sporulata sau vegetativa, se procedează astfel: activarea tulpinilor bacteriene se realizează pe mediu de cultura adecvat, mediu Casein Soya-Bean Digest Agar (CaSoA) sau pentru lungi mediu Sabouraud cu Chloramphenicol (SDA), se incubeaza timp de 18-24 ore, la temperatura 30-35°C si 20-25°C pentru lungi. Din culturile tinere obținute se executa suspensii stoc, IO⁸ UFC/mL (apreciat prin comparare cu o soluție standard 0,5 Mc Farland)

Metodologia de testare a activitatii antimicrobiene pentru pansamentul hidroactiv/bioactiv pentru managementul umed al dermului, s-a desfasurat după cum urmeaza: mediile de cultura Casein Soya-Bean Digest Agar (CaSoA) si Sabouraud cu Chloramphenicol (SDA) se lichefiază complet la 45°C, se inoculează fiecare mediu de cultura, cu un volum de 1 mL cultura stoc din fiecare microorganism-test standardizat (IO⁵ UFC/mL), se pentru omogenizează, se repartizează in placi Petri sterile, un volum de 15-18 mL de mediu de cultura inoculat, se lașa in repaus pe o suprafața perfect plana, la temperatura camerei pentru solidificare completa, se utilizează tehnica cilindrilor de otel sterili, pentru aplicarea probelor de evaluat, se incubeaza la temperatura de 30-35°C sau 20-25°C pentru lungi, pentru 18-24 ore.

Interpretarea rezultatelor se realizează după cum urmeaza: prin masurarea exacta, cu o precizie de ± 0,1 mm, a diametrului fiecărei zone de inhibiție a creșterii microorganismelor - test se evaluaeza rezultatele: zona de inhibiție 0-10 mm, inactiv (“-”), zona de inhibiție 10-14 mm, activitate slaba (“+”), zona de inhibiție 15-19 mm, activitate moderata (“++”), zona de inhibiție >20 mm, activitate certa (“+++”).

Pentru pansamentul hidroactiv/bioactiv pentru managementul umed al dermului, evaluarea activitatii antimicrobiene a fost următoarea: activitate antimicrobiana fata de Staphylococcus aureus ATCC 6538: zona de inhibiție >30 mm, activitate antimicrobuana certa (“+++”); activitate antimicrobiana fata de Escherichia coli ATCC 6538: zona de inhibiție 18,4 mm, activitate antimicrobiana moderata (“++”); activitate antimicrobiana fata de Candida albicans ATCC 10231: zona de inhibiție >30 mm, activitate antimicrobuana certa (“+++”).

Concluzii si propuneri

Având in vedere interesul actual in plina expansiune, pentru abordări terapeutice netraumatizante si eficiente, neconventionale si inovative, in tratarea unor afecțiuni sau leziuni ale dermului, cu conținut cat mai ridicat in elemente si combinatii naturale, pansamentul hidroactiv/bioactiv pe baza de celuloza bacteriana ca platforma pentru managementul umed al dermului, oferă o compoziție cu efect antimicrobian, antimicotic, calmat, hidratant, regenerant, reparator local cutanat, emolient, nutritiv, pentru vindecarea țesutului agresat, care este flexibil, atraumatic, rezistent, anatomic, bioactiv, stabil, foarte facil si intuitiv de manipulat, administrat, îndepărtat si condiționat, cu costuri modice de realizare, aplicat si utilizat in condiții de siguranța.

Proprietățile terapeutice favorabile rezulta si se cumulează, prin adaugarea efectelor terapeutice ale extractului de viță roșie Bio, extractului de propolis, cu levomenol natural si alantoina, împreuna cu vitamine naturale, constând in Tocopherol (Helianthus annuus seed oii), acid ascorbic si retinil palmitat si extractelor uleioase, dintr-o varietate de plante tradiționale si neconventionale, constând in ulei esențial de cuisoare si ulei esențial de eucalipt citronat, toate prezentând o certa eficienta si valoare, precum si importanta terapeutica, ce au fost confirmate de o multitudine de date raportate in literatura de specialitate in domeniu.

Lucrările efectuate asupra pansamentului hidroactiv/bioactiv pentru managementul umed al dermului au demonstrat următoarele:

- suportul de celuloza bacteriana (nanoceluloza) este ușor de manipulat si prelucrat, este rezistent si cu o capacitate mare de absortie a diferite amestecuri lichide;

- suportul de celuloza bacteriana (nanoceluloza) este un biomaterial biocompatibil, biodegradabil si inert din punct de vedere al acțiunii antibacteriene;

- realizarea amestecului bioactiv pentru activarea suportului nanocelulozic este facil si econom;

- nu s-a evidențiat prezenta de germeni patogeni la analiza produsului;

- încărcătură microbiana este in limitele impuse de Pharmac. europeana pentru preparate topice;

- s-a evidențiat o acțiune antibacteriana certa, manifestata fata de Staphylococcus aureus;

- s-a evidențiat o acțiune antibacteriana moderata, manifestata fata Escherichia coli;

- s-a evidențiat o acțiune antimicotica certa, manifestata fata de Candida albicans.

Pansamentul hidroactiv/bioactiv pentru managementul umed al dermului conform invenției, pe baza de nanoceluloza si extract de viță roșie Bio, extract de propolis si componentele active cu biodisponibilitate ridicata de origine naturala (vegetala), in urma cercetărilor efectuate, s-a constatat ca, prezintă o acțiune antibacteriana, antimicotica evidenta, cu efect calmant, nutritiv si reparator, pentru hidratarea si vindecarea unor leziuni dermale, cu aderenta atraumatica si anatomica; acest pansament isi menține flexibilitatea si stabilitatea, conferind zonei de aplicare, un efect calmat si reconfortant, vindecător si regenerant, împiedicând infectarea si restabilind integritatea cutanata, cu dezinfectarea si hidratarea optima a zonelor pe care este aplicat, cu efect sinergie.

Claims (1)

1. REVENDICARE

   Pansament hidroactiv/bioactiv pentru managementul umed al dermului caracterizat prin aceea ca se obține din nanoceluloza fibrilara naturala si unele resurse naturale ecologice si ecocertificate, acesta conținând un film purificat de nanoceluloza, apa 79 parti in greutate, extract de viță roșie Bio 10 parti in greutate, extract de propolis 5 parti in greutate, tocoferol natural Tocopherol (Helianthus annuus seed oii) 1 parte in greutate, retinil palmitate natural 1 parte in greutate, acid ascorbic 1 parte in greutate, ulei esențial de Eucalipt citronat Eucalyptus citriodora oii 1 parte, ulei esențial de Cuisoare Eugenia caryophyllus leaf oii 1 parte, Levomenol natural 0.5 parti si Alantoin 0.5 parti in greutate.