RO128629A8 - Procedeu de obţinere a unui inhibitor serin-proteazic din culturi celulare induse de la linum usitatissimum - Google Patents

Abstract

Prezenta invenţie se referă la un procedeu de obţinere a unui inhibitor serin-proteazic din culturi celulare induse de la in (), prin sterilizarea materialului biologic format din culturi celulare utilizând, ca sursă, explantule, după sterilizare, explantulele se plasează în cutii Petri, pe suprafaţa unui mediu de cultură Murashige-Skoog, şi se incubează în camera de creştere. Periodic, la interval de 3 săptămâni, se face transferul pe mediu de cultură proaspăt, cu respectarea măsurilor de asepsie, pentru a preveni contaminarea accidentală cu microorganisme. Explantele somatice obţinute se prelucrează în vederea izolării inhibitorului proteazic, prin delipidizare cu acetonă, extracţie cu soluţie tampon acetat 0,1M,H=5, şi precipitare fracţionată cu etanol, obţinându-se un precipitat proteic cu activitate inhibitoare proteazică specifică de 3129 UI/mg proteină, care se purifică prin aducere, în tampon fosfat 0,05 M,H=7, 5, pe coloană de cromatografie de afinitate, pe tripsină imobilizată, echilibrată cu tampon fosfat. Proteinele nelegate se spală cu acelaşi tampon şi, prin eluare cu tampon fosfatH 7,5, în gradient de concentraţie de la 0 la 0,3 M, în volume egale, rezultă un inhibitor serin-proteazic cu o activitate specifică de 9681 UI/mg proteină.