PT98074A - Processo para a preparacao de analogos de para-herquamida uteis como agentes antiparasiticos - Google Patents

Description

!

Este invento relaciona-se com novos agentes antiparasi... toses e em particular com uma família de novos compostos relacir*-nados com paraherquamida e com um processo para a sua preparaçSo com composições que os contfm, e com a sua utilização em medicin* humana ou veterinária.

A paraherquamida é um composto produzido em csrtaei condições pelo organismo fúngico Penicillium paraherquei» Detalhes das características estruturais e espectroscópicas da paraherquamida são descritos em Yamazafci et. al. T&trahedron Letteres, 22, 135-136 (1981),, Subsequentemente foi descoberto qus a paraherquamida juntamente com alguns compostos a fins sg;CJ produzidos pelo organismo fúngico Penicillium charlesii e além disso estes compostos possuem uma actividade potente contra uma série de endo- e ecto-parasitas tal como é descrita em EP-ft--®3β1742 e ΕΡ-Α-Φ322937.

Descobrimos actualmente uma família de novos compostos produzidos por fermentação em condições controladas do organismo Per.ici 11ium paraherquei qus é um microorganismo conhecido depositado no C,A„B, International Mycological ínstitute, Ferry Lane, Kew, London, sob o número de depósito CMI 6822Θ. Estes novos compostos possuem uma potente actividade contra uma ampla gama de endo- e ecto-parasitas que afligem animais, homens e plantas.

Assim num aspecto o presente invento proporciona compostos da fórmulas-

e seUS sSÍs nâO^tcsM XCOS g

em que (i > ; K è 0 e R è OH, <ii) 3 i è o e R ê h5 ou ( i i i) 1 uma. 1 iq ação directa e R

Os compostos (i)? <ii> a <iii) s-SÉo identificados,, respectivamente, pelas referências da. Pfizer Ui<~ 1 í Θ i 23, > UK-1Θ9692, e UK-105166.

Num outro aspecto o presente invento proporciona um composto da fórmula. < 11 > identificada pela referência Pfizer UK-112847. - 4 ~ \ ϊ Λ

ate pelo T 3L’bD tendendo o sis Journal crf Orq crf Orqanic Chemistrv. 54. iQ&C.

Os compostos (I) distinguem-se das paraherquamidas conhecidas práviamente pelo facto ds lhes faltar um substituinte inet.ilo em Ν-3Θ, estendendo o sistema de numeração descrita em Blizzard et, al, <1989) ,= A estereoquímica dos compostos (I) e (II) não foi comple-tamente determinada mas é inferida por comparação com compostos afins descritos na bihliografia. Contudo aste invento relaciona-“5B com os compostos produzidos pela fermentação e subsequente-mente descritos e definidos pelas suas propriedades específicas espectroscópicas e cromatogrâficas e não pretende ser limitado a compostos apresentando estruturas estereoquímicas particulares indicadas nas fórmulas CIA) e ÍIIA) ma is abaixo embora se prense que estas são correctass-

> é indicado em ΕΡ-Α-63Θ1742 e EP-A-354615 que certos derivados sintéticos do produto natural paraherquamida também possuem actividade antiparasitose» Por exempla* o composto obtido a partir de paraherquamida por hidrogenaçSo catalítica sob as condições descritas por Yamasaki etal.? Tetrahedron Letters. 22* 135-136 (19815 5 isto és 24,25-dih.idraparaherquamida, é um agente antiparasitose activo. Verificámos também que os derivados 2452o-dihidro análogos obtidos corresponderstemente a partir de compostos da fórmula (I) apresentam aetividades antiparasitoses. Assim num outro aspecto α inventa proporciona compostos da fórmula (III)

e seus sais não tóxicos, em que í.i) XéDeRéOH, <ii> XéOeRéH, íiii) X é uma ligação directa s R á H. seguindo-se a adição de um reagente

Ainda num outro aspecto deste invento'verificámos que o átomo de hidrogénio ligado a W-3® nos compostos das fórmulas íl> e (III) pode ser substituído por certos substituint.es alquilo, alcanoilo ou arilsulfonilo para se obter derivadas antiparasito-ses de paraherquamirfa não conhecidos anteriorroente, Isto pode ser realizada tratando uma solução ds um composto da fórmula íl) ou (III) com uma base forte tal como diisopropilamida de 1 .ítio, n-butil litio, hidreto de sódio, hidrato de potássio, hidróxido de potássio ou terc-butóxido de potássio num solvente orgânico apropriado tal como tetrahidrofurano, tolueno, dimetiisuIfóKido, d i me t i 1 f a r ma m i d s ou ou t ro, apropriado de alquilação ou acilação ou sul fonação. Dependendo das condições exactas usadas e da escolha do reagente de alquila— ção ou de acilação pode também ter lugar uma reacção adicional na posição N-I. Se esta não for desejada, esta posição pode ser protegida convencionaImante, por exemplo por reacção prévia com diazometano para dar origem a imidato de 2-Q-metila usando condições descritas em ΕΡ-Α-Φ354615. No final da sequência da reacção, o grupo de protecção pode ser removido convencionalmen-te, por exemplo por tratamento com um ácido mineral tal como ácido clorídrico s num solvente orgânico tal como tetrahidrofura-no. No caso do composto UK—110123, pode ocorrer uma reacção de competição adicional no grupo 14-hidroxi« Se esta reacção não for desejada, o grupo hidroxi pode ser protegido convencionalmente, por exemplo por sililação usando trimetilclorosilano ou triflato de trimetilsililo na presença de uma base tal como trietilamina ou com bisítrimetilsililJacetamida num solvente apropriado. Esse grupo de protecção pode subsequentemente ser removido convencional mente no final da sequência de reacções por tratamento com um ácido mineral diluído (incluindo ácido fluorídrico) num solvente miscível com a água tal como tetrahidrofurano, ou por tratamento com uma solução de fluoreto de tetrabutil amónio em tetrahidrofu-rano» 0 agente de alquilação pode ser um iodeto de alquilo, brometo de alquilo ou um sulfonato de alquilo. 0 agente de acilação pode ser um cloreto de acilo, brometo de acilo, anidrida de acilo, um éster cloroformato ou um isocianato. 0 agente de sul fonação usado pode ser um cloreto de benzenessulfonilo substituído facultativamente ou anidrida„ Assim, neste aspecto, o invento proporciona compostos com a fórmula geral (IV), que também possuem significativa actividade antiparasitose e antihel-míntica, da fórmulas-

J

(IV) não e seus saxs ondí R é H, “OH, -0R' n„n4 ou --0C0NHR4 -U1..0 R'~‘ ê (i) Cj-Cg alquilo substituído facultativamente por halo, hidroxi,, C-C^ alcoKi ou. fenilo,’ í ii) alquenilalquilo tendo 3 a · 8 átomos de carbono na totalidade, (iii) alquinilalquilo tendo 3 a 8 átomos de carbono na totalidade, ou.(iV) henzilo?. 4 k é 0^~Cc_ alquilo suostituido facultatxvamente por halo, alcoKi ou. fenilo? έ ou R4· é <i) H5 (ii) C^-Cg alquilo substituído facultativa-mente por halo, hidroxi, C^-C^ alcoxi ou fenilo» (iii) alquenilalquilo tendo 3 a 8 átomos de carbono na totalidade, Civ) alqui-riilalquilo tendo 3 a S átomos de carbono na totalidade, (v) benzilo (vi) um grupo da formula -COR5 ou --C0NHR5 onde R5 ' ia.) C1~Cg alquilo substituído faci alcoxi ou fenilo, ou (b) fenilo ou.

Itativaroente por halo, ívíi> -S02»fenilo? ' —Γ "1 L‘4 R2 è Ci> 0,-Co alquilo substituído facultativamente por 1 ó __ hidroxi, alcoxi ou fenilo (ii> ^2~u8 al3uen1*0 Cili) alquinilo, íiv) benzilo, (v) um grupo da fórmula -COR ou 6 onde R6 é ou Ca) Cj-Cg alquilo substituído facultativa-por halo, alcoxi ou fenilo ou Cb> fenilo, ou Cvi> -80ο«fenilo?

J halo, c2-c8 -CONHR mente X é 0 ou uma ligação directa desde que Ca) quancio R á diferente de Η, X é O e também <h> quando R é H ou OH, pelo menos um de entre R* e R2 é diferente de H; e a linha tracejada representa uma ligação facultativa? sendo os referidos grupos fenilo, e a porção fenilo dos referidos grupos benzilo, todos substituídos facultativamente por até tr§s substituintes cada um deles seleccionado índependentemente de entre -r^ alquilo, C.-C^ alcoxi, hidroxi e halo»

Quando apropriado, os grupos alquilo, alquenilo e alquinilo podem ter cadeia linear ou ra/nif içada. Halo significa F, Cl, Br ou I»

Nos compostos Clll), os grupos preferidos alquilo, alcoxi, alquenilo e alquinilo t@m até 4 átomos de carbono»

Os sais não uoxicos do-· compostos dos compostos ante— riormente referidos incluem sais de adição de ácido farmacêuticamente aceitáveis tais como sais dorohicírQ^Q^ bromohidreto, sulfato ou bissulfato, fosfato ou fosfato de hidrogénio, acetato, hesiisto, citrato, fumarato, gluconato, lactato, maleato, mesila-to, pamoato, succinato e tartrato. Para uma lista mais completa de sais farmacêuticamente aceitáveis ver, por enemplo, o Journal

J. -í “ in aspo r num de por of Pharmaceutical Sciences-, Vo» 6é, No» 13 Janeiro 1977, pág 1-19« Estes- sais podem ser preparados convencionalmente, exemplo misturando uma solução da base livre ε o ácido solvente apropriado, por exemplo etanol, e recuperando o sal adição de ácido quer sob a forma de um precipitado quer evaporação da solução» epresen·'

Pensa-se também que os- compostos- (111) e (IV) tam a estereoquímica que se segues-

and

<iva).

I

Os compostos da fórmula Cl) podem ser preparados pela fermentação aeróbica de Penicil1ium paraherguei CHI 6822© em

Essas para meios nutritivos aquosos agitados ou sólidos estáticos, condições são semelhantes às convencionalmente utilizadas produzir antibióticos por fermentação. y> . 12 - A cultura pode ter lugar num nteio nutritivo aquoso contendo fontes apropriadas de carbono, azoto e elementos vesti— giais durante um período de tempo de vários dias em condições aeróbicss, tipicamente a uma temperatura variando entre 24 e 36 °C, Tal como com a maior parte das· fermentações antibióticas, a quantidade do composto produzido irá variar de acordo com condições diferentes de fermentação especialmente no que se refere a componentes nutritivos, condições de arejamento e p!~w A evolução da fermentação pode ser monitorizada por uma técnica analítica apropriada tal como cromatografia líquida de elevada pressão (hplcí acoplada a um detector apropriado tal como um espectrofo-tómetro U.V. Quantidades significativas dos compostos desejados são geralmente encontradas nas fases tanto micelial como aquosa da totalidade do caldo embora a proporção em cada fase dependa das condições de fermentação, 0 isolamento dos produtos é facilitado pela maior solubilidade dos compostos UK—110123, UK-109692, UK-105166 e UK-112847 numa gama de solventes orgânicos do que em água contanto que o pH seja ajustado para ser superior a 4, Assim num processo de recuperação o caldo total de fermentação é extraído, de preferencia com um solvente não miscível com a água tal como cloreto de metileno, clorofórmio, hexano, álcool de petróleo, acetato de etilo, hutanol ou meti! isobutil cetona. A recuperação máxima é conseguida repetindo a extracção várias vezes» O extracto solvente ê concentrado até à secura e o produto crú é posteriormente purificado de acordo com as necessidades por c r orna t og r a f i a»

Num processo de recuperação alternativo o caldo total de fermentação pode ser filtrado sendo o micélio e o filtrado extracto extraídos separadamente» Neste caso o micélio pode ser extraído por uma série de solventes miscíveis com a água tais como metanol , etanol, acetona, etc» para além das solventes não miscíveis com a água indicados ariteriormente» Após a filtração o

sal vente é concentrada e ou seca por congelação ou. ainda extraido com um solvente não miscível com a água para dar origem a um material crú apropriado para posterior purificação por cromato-grafia» 0 filtrado derivado da totalidade do caldo pode ser recuperado de um modo exactamente semelhante ao do caldo total tal como foi descrito anteriorsienta ou, alternativamente, pode ser feito passar através de uma coluna contendo uma resina polistireno apropriada tal como "Diaion HP2Ô“ (Marca de Fábrica — fornecido por Mitsubishi Chemical Company) que retem os produtos desejados mas que permite que passem muitas impurezas. Após lavagem da coluna com água, a coluna ê eluida com um solvente orgânico tal como etanol, metanol ou acetona. 0 solvente é então evaporado para dar origem a uma mistura crua contendo os compostos. A mistura crua contenda os compostos UK!-Iiôl23? UK~i05i6è e UK-112847 tal como foi obtida por qualquer um dos processos anteriores é ainda enriquecida usando cromatografia de coluna.

cromatografia de placa delgada ou uma técnica semelhante usando por exemplo gel de sílica como o meio cromatográfico e fazendo-se a eluição com um solvente apropriado ou. uma combinação de solventes tal como é conhecida pelos especialistas nesta técnica. A purificação final dos compostos individuais pode ser conseguida por cromatografia de coluna, hpic ou cromatografia de placa delgada repetidas. AIternativamente, <a cultura de Fenicillium garaherausi CMI 6822Θ pode ter lugar num meio nutritivo estático em condições aeróbicas a uma temperatura variando tipicamente entre 24° e 36 °C durante vários dias» 0 meio juntamente com o crescimento micelial é então extraído com um solvente orgânico tal como metanol ou acetato de etilo, filtrado e concentrado para dar origem a um produto crú que é posteriormente purificado por meios das técnicas descritas anteriormente. 14

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CS. •ST V ·

Assim ο presente invento p-orporciona também um processo parai a produção de compostos UK-1ΪΘ123, UK~1 ©9692« UK-Í05Í66 e UK-112847 tal como foi préviamente definido, que compreende a cultura do microorganismo Fenicli1ium garaherauei CMI 6822Θ, ou um seu mutante, forma genéticamente transformada ou recombinante tendo a capacidade ds produzir os compostos IK-I10123, UK-109692, UK-105166 e UK-i12847 em meios de cultura aquoso agitado ou e sais inorgânicos, sob condições de fermentação aeróbica até se obter uma quantidade recuperâvel do referido composto» A expressão mutante inclui qualquer estirpe mutante que surja SKpontâneamente ou pela aplicação de técnicas conhecidas, tais como exposição a radiação de ionização, luz ultravioleta, e/ou mutagénios químicos,- tais como N-meti 1 -N-nitroso-uretano, nitrosoguanidina e sulfato de etano metano, etc» Formas transformadas genéticamente e recombinantes incluem mutantes e variantes genéticas produzidas por técnicas de engenharia genética, incluindo por exemplo recombinação, transformação, transdução, e fusão protoplástica, etc»

Tal como foi prêviamente mencionado os compostos das fórmulas <I>, (II), <III> e (IV) são agentes antiparasitários altamente activos apresentando particular utilidade como anti--helmínticos, ectoparasiticidas, insecticidas e acaricidas»

Assim os compostos (I), (II), (III) e (IV) são úteis no tratamento de uma série de condições causadas por entíoparasitas incluindo, em particular, helmintíass que é muito frequentemente causada por um grupo ds vermes parasitas descritos como nemátodos e que dão origem a pardas económicas graves no gado suino, cavalos e gado vacum afactanrio também animais domésticos e criação» Os compostos são também eficazes contra outras nemátodos

w

o· que afectam várias espécies de animais incluindo, por exemplo, Dirofilaria em cães e vários parasitas que podem afactar os seres humanos incluindo parasitas gastro—intestinais tais como ftncylostoma» Necator,, Ascaris, Stronqylpides, Trichinella, Capillaria, Trichuris, Enterofaius e parasitas que se encontram no sangue ou noutros tecidos e orgãos tais como vermes fxliariais e os estádios intestinais extra de Stronavloirfes e Triçhinella.

Os compostos são também importantes no tratamento de infecçSes ectoparasitárias incluindo partxcularmente ectoparasi-tas artrópodos de animais e de aves tais como carrapatos, piolhos ? mosca varejeira, insectos que mordem e larvas de dípteros migradores que podem afsctar o gado e cavalos.

Oos compostos são Lambém insectxcidas actxvos contra pragas domésticas tais como baratas, traças da roupa, escaravelho dos tapetes e a mosca doméstica sendo também úteis contra pragas de insectos de cereais armazenados e de plantas agrícolas tais como ácaros, afídeos, lagartas e contra ortópteros migradores tais como gafanhotos.

Os compostos podem ser administrados como uma formulação apropriada para a utilização específica encarada e para as espécies particulares da hospedeiro e de animal a serem tratadas e para o parasita ou insecto envolvido. Para utilização com ant-heimíntico os compostos podem ser administrados oralmente sob a forma de uma cápsula, bolus, comprimido ou poção líquida, ou alternativaments, podem ser administrados para derramar sobre ou sob a forma de uma injecção para administração subcutânea ou. intramuscular. As cápsulas, bolus ou comprimidos podem ser preparados misturando o ingrediente aetivo com um diluente ou veículo aproprxado fxnamente dividido, contendo adicíonalmente um agente de desintegração e/ou um agente de ligação tal como amido. 16 ···· ν λ lactose, talco, ου. estearato de magnésio» Uma formulação para poção pode ser preparada dispersando o ingrediente activo numa solução aquosa juntamente com agentes de dispersão ou de humidi-ficação e as formulações injestáveis podem ser preparadas sob a forma de uma solução ou emulsão estéril»

As formulações para derramar sobre e para injecção são preparadas de um modo convencional de acordo com a técnica veterinária padrão» Estas formulações variarão de acordo com o peso de composto activo dependendo da espécie do animal hospedeiro a ser tratado, da gravidade e do tipo de infecção e do peso corporal do hospedeiro» 9eralmente para administração oral uma dose variando de cerca de la 1ΘΘ mg por kg do peso corporal do animal administrada como uma única dose ou em doses divididas durante um período de tempo variando entre 1 e 5 dias será satisfatória mas evidentemente pode haver casos em que sejam indicadas variações de dosagem superiores ou inferiores e este assunto situa-se no âmbito deste invento.

Como alternativa os compostos podem ser administrados co/?i a ração animal e para este fim pode preparar-se um aditivo alimentar concentrado ou uma prémistura para misturar com a ração animal normal.

Para utilização como insecticida ε para o tratamento de pragas agrícolas os compostos podem ser aplicados sob a forma de sprays, poeiras, formulações para derramar, emulsões, etc„, de acordo com a técnica agrícola padrão. aceitável de

Para utilização humana os compostos são administrados sob a. forma de uma formulação farmacâuticamente acordo com a técnica médica padrão. . 4. * V descreve UK-Í1012: ‘J ,

>

ι / Ο invento é ilustrado pelo Exemplo que a preparação, isolamento e identificação 3, UK-Í09692, UK-105166 e UK-112847:- "Ardamine" U „ S. A« Bac to d-os •egue que compostos foi fornecido por Champlain of Clifton, New Casitone foi fornecida por Difco Corporation of Detroit, Michigan.

Os espectros ultravioletas foram registados usando um espectrofotómetro de matriz de díodo Hewlett Packard ΗΡ1Φ90Α. A espectroscopia de massa foi realizada usando um espectrómetro de massa V8 Trio 3» As amostras foram introduzidas usando um termospray interfacial numa matriz consistindo em água, metanol e acetato de amónio.

Os foram obtidos es pec t r óme t r o a nuclear ΘΝ50Φ, um dados do espectro de ressonância magnétic usando um espectrómetro General Electric SE 30Θ ou um espectrómetro Bruker AC3®0.

EXEMPLO A cultura de Penici11ium paraharguei CMI 68220, fornecida pelo C.A.B. International Mycological Institute, Ferry Lane, Kew5 London, England, foi mantida em planos inclinados de agar a partir de um meio compreendendo glucose <10 g), amido <20 g)? "Bacto-Casitone" (Marca de Fábrica) <5 g)? extracto de levedura <5 g), carbonato de cálcio <1 g) e agar (2Θ g) formando-se um volume até 1 litro com água corrente e ajustando-se o pH para 7,3 antes do autaciave. Foi preparado um inóculo lavando a cultura do plano inclinado com 10 ml de água estéril para um frasco Ferbach Erlenmeyer de 3 litros contendo um meio compreendendo glicsrol <50 g), leite protonisado <5 g), caseina láctica (10 g) e "Ardamine" (1 g) (Marca de Fábrica) até se formar um volume de 1 litro com água corrente e ajustando-se o pH para 7,0. 0 inóculo foi incubado a 28°C num agitador rotativo com um lançamento de 2,5 cm a. 170 r.p.m. durante 144 horas. 0 conteúdo total foi então transferido para um recipiente para agitação mecânica de 100 litros contendo 70 litros do mesmo meio e incubado a 28°C até surgirem os primeiros sinais de formação de pílula. Este segundo estádio de cultura de sementeira (10 litros) foi usado para inocular um fermentador agitado mecãnicaraente de 2««300 litros contendo 1.200 litros do mesmo meio. A fermentação foi mantida a 28°C com arejamento a 1.200 litros por minuto e agitação a 250 r.p.m. e a adição de ácido sulfúrico diluída se necessário a um taxa tal que evitasse a subida da pH acima de 6,4, Após ó dias o caldo de cultura foi filtrado usando uma placa e uma prensa de rede sendo a micélio eliminado. 0 filtrado (1.6Θ0 litros) foi bombeado para acetato de etilo (800 litros) e agitado durante um curto espaço de tempo. Depois de assentar, a camada aquosa foi eliminada e o extracto orgânico foi lavado com solução salina saturada Íó0 litros) antes de evaporação até à secura. 0 resíduo

<125 g) foi suspensa em acetato de etilo <125 ml> e filtrado» 0 filtrado foi adicionado lentamente a éter de petróleo <p»e» 40-60°C? 2 litros) com agitação e o precipitado "f01 recuperado por filtração» 0 precipitado sólido foi então cromatografado sobre uma coluna de gel de sílica <600 g5 Merck "Kieselgel 60“ ilMarca de l~é.faricaj5 malha 230—4€s£i) fazendo—se a eluição com diclorometano contendo uma proporção crescente de acetato de etilo. As fracções ricas em compostos UK-i10123, UK-109692 e UK-Í05Í66 co-eluidas quando a composição solvente era de aproxi-madamente Isl e UK“112847 eluida quando o solvente foi transfor-mado para clorofórmio-metanol 4s1 e foram reconhecidas por cromatografia de placa delgada’de sílica como manchas que absorviam UV com RFS tal como indicado no quadra mais abaixo e dando origem a uma coloração vermelho—púrpura característica ao pulverizar-se com vanilina e ácido sulfúrico em etanol e aquecimento» As fracções contendo os compostos desejados foram combinadas e evaporadas até à secura» Os compostos individuais foram separados por h.p.X.c» preparativa usando um coluna de fase ligada a C-18 e Tasendo-se a eluição com misturas de água-metanol como é conhecido pelos especialistas nesta técnica» A composição das fracções recolhidas foi monitorizada por h.p.l.c» analítica usando um Beckman UItrasphere-ODS (Marca de Fábrica) (5μο»> numa coluna de h.p.l.c» <4?6 x 250 mm) fazendo-se a eluição com um gradiente linear de — Qua—mi= t=nq 1 de Isl a 1 00% de metanol durante 3Θ minutos com uma taxa de fluxo de Θ^Θο ml por minuto e monitorizando por absorção ultravioleta a 23® nm» Usando estas condições os componentes individuais foram eluidos nos tempos que se seguem s- s

Sc UK -112847 a 11 ? 7 minutos uk: -i10123 5 14,3 minutos UK -í09692 3 minutos UK -105166 3 2156 minutos

Composto R_ CHC1 _.-MeOH r o UK -110123 0,25 2*£»1 UK :-109692 0 ? 27 20sl UK i 0w‘ 1 ÒQ Θ 3 27 20 % 1 UK “112847 0,55 4» 1 “T a J.

Os novos componentes 'foram distinguidos e caracteriza· dos pelas suas propriedades sspectroscópicas como se segues-

Cromatografia de placa delgada (Merck

(T.M

Kieselgel 60) *

20a-

J

v'—X

I

Claims (1)

1. *

   REIVINDICAcBESs

   -0C0R4 ou -OCQNHFt4: (a), em que R é H, -OH, -0R'-' 3 a S átomos de carbono na totalidade, .laiquilo tendo 3 a S átomos de carbono na alquilo substituído facultativamente por i : i"rtví ΐ ·“. s i -{ f?í pí 4 1 fn w '

   R'"’ é ( x ) C | ~ halo. hidrO';· quilo tendo (iii) alquir totalidade. -,4 , H e VrC8 halo, uítC4 01 . R e (i) Hs H mente por halo, hidroxi 5 C^—0Δ alcoKi ou fsnilo, (iii) alquenilalquilo tendo 3 a 8 átomo de carbono na totalidade, Civ) alquinilalquilo tendo .3 a 8 átomos de carbono na totalidade, (v) benzi lo (vi> um grupo da fórmula -COR’J ou — CQNHR’J onde R'-3 è ou (a> 0—C„ alquilo i B substituído facultativamente por halo, Cj-C^ alcoKi ou fenilo, ou < b) fen i1o ou (vi i) -S0-„ feni1 a *

   é (i) C.-C alquilo substituído facultativamente por C, -C, alcoKi ou fenilo <ii) C.-i-Cr i halo, hidroKi, aicow ‘i*** »-2 w0 alquenilo (iii) C^CQ alquinilo, <iv> bonzilo, ív> um grupo da fórmula -COR6 ou -CGNHR° onde FC é ou <a) C,alquilo facultativamente substituído por halo, 0,-0- alcoxi ou fenilo ou <h) fenilo? ou (vi) -SCu.fe-n i 1 o 5 J X é 0 ou uma ligação directa com a condição de que quando R é diferente de Η, X é 0; e a linha tracejada representa uma ligação facultativa? ou íb) em que R é -OH, R* é 0, R1, é Η, X é 0 e a linha tracejada representa uma ligação. sendo os grupos fenilo, e a. porção fenilo dos referidos grupos benzilo, todos substituídos facultativamente por até trãs substituintes cada um deles independentemente de entre C1-C4 alquilo, 1 4 hidroxi e halo» seleccionado CrC4 alco>t.i, » caracterizado por compreender a fermentação» num meio contendo fontes assimiláveis de carbono, azoto e elementos vestigiais, do microorganismo CHI 6822® ou de uma sua forma mutante ou recombi— nante tendo a capacidade de produzir o referido composto, e o isolamento do referido composto a partir do meio, e se necessário, a reacção do composto produzido com um agente de alquilação, ila^ao ou sulfonataçao na presença de uma base» 2ã» Processo de acordo com a reivindicação 1, terizatío por a referida fermentação ser realizada em c fterobicas num meio aquoso agitado ou num meio nutritivo carac- ondições sólido estático» 3â» - Processo de acordo com a reivindicação 1 ou 2,, 1 v caracterizado por R‘ e R"~ serem H, a linha tracejada representar uma ligação e ou <i) X ser 0 e R ser OH» ou (ii) X ser 0 e R ser H, ou íiii) X ser uma iiqação directa e R ser H. OU ♦«> = Processo de acordo com a reivindicação 1 alquenilo caracterizado por os referidos grupos alquilo, alcoxi, e/ou alquinilo terem até 4 átomos de carbono» Processo para a produção de um composto tendo uma das características espectroscópicas ii) a (iv) I .yi*^ (iii) Civ): O 1—I in o in o <? •H L Ό 0) H P CÍ o.ιη o CM CO CM CM JSJ3£ OOOOOíS?? S οΓ'ίη υΓοΓ'ίηãããâããáããáSãEãSããSSS^ ^ oaHMíMtoonoonoomiflococoaiMnin cacotar^naioiHmvrníMHr-tncocot^rfrfCNcri OMDioiOcfcfcfnrinnnNNrlrlrlrlHHo CO M* «T oo -=r •=r o 0 H £, Ό 01 Eh •U? P nj -ca ο, ,.6u s-/ W tn tn o c>· σι CM CM CM Ό JJ Ό Ό Ό U β P V V Tf U) UI UI3 5 5 3 5 3 5 5 3 5 3 3 3 3 ncoon-ovco-^cNtnotnocMcri oor^-crnvoirii-HOtncMcor^or^ VOvOvOOlflnnnCMCMi—Irli—IO •H •H M* VO 'T VO •=T O 0 •rl L. Ό 01 EH 4-5 cd α ιη o CM VO CM CM W Ό Ό Ό Ό Ό g -P Tf T3 Ό tn U3 UIg g' g' g* g" g~ s £ gV £ £ £ £ HHnHHHHHrlrlrin CH Π W W >-* *w» V/ S«^ w V w CMvTrlMMCDcronnOinONOV or-vocMcoinHotricMcot^or' n i» ** r“r»r* fs «*v r» rv MOunocrnnniMCMHrlHO I o CO M* ο eo =t O o •H su Ό <D o. tn o CM V0 CM CM tn tn o í—. v—n y-s ^ — -—. >—. jatJííOOOti g+j tn v v xs tn intnuiuig g g g g" 3 3 3' 3' g g g £ £ £ £ £ £ ^ H r·^ ^ ^ r~\ 1—I H ri r-10 0 0 0 0 co^cncMr-ocoinoinovoocoococMO Γ'-Γ'-νονοίΜοοιη.—lovomcMCFvin-vrrooex) ^yno vo ui vr π η n <M oTcm η η'η H r-To'' ra η cfl S ai •o o Ch P 0 01 α οι ω 00 <—1 2 o > £ Q 0 os U *~N 0) 0 0 O P L· £, laj L P P O ai O & O 3 a 01 c 01 r-t O. -— a, O S 01 01 w 0) ω ω '—' s_> caracterizado por compreender a fermentacão, num meio contendo fontes assimiláveis de carbono, azoto e elementos vestiqiais, do micro-organismo CMÍ 6822Θ ou de uma sua forma mutante ou recombi-nante tendo a capacidade de produzir o referido composto, e o isolamento do referido composto a partir do meio, Lisboa, 24 de .Junho de 1991

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