PT96073A - Processo para a preparacao de uma composicao para cobrir a superficie de feridas compreendendo cologeneo e quitina - Google Patents
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Description
Descrição referente à patente de in venção de HOECHST JAPAN LIMITED, ja ponesa, industrial e comercial, com sede em 10 - 16, 8-chome, Akasaka, Minato-ku, Tokyo,Japão,(inventores: Toshihiko Terão, Hiroshi Nin, Nasas hi Jumonji, Fumika Ooi e Yayoi Ka-jiwara, residentes no Japão), para: "PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE UMA COMPOSIÇÃO PARA COBRIR A SUPERFÍCIE DE FERIDAS COMPREENDENDO COLAGÉNEO E OUITINA11.
DESCRICAO A presente invenção refere-se a novas folhas de revestimento de superfícies com lesões para revestirem superfícies de lesões, particularmente em cirurgia.
As folhas curativas de lesões constituídas por colagéneo têm sido utilizadas, até aqui, com o objectivo de curar lesões e evitar hemorrogias devidas a laparotomia. O colagéneo liga-se com as plaquetas exsudadas dos vasos sanguíneos para promover a reacção de agregação das plaquetas efectuando assim a hemostase. Depois da he-mostase o colagéneo é decomposto em gelatina que é inactiva na agregação das plaquetas. Como o colagéneo possui uma actividade promotora do crescimento de fibroblasto, possui 1
também uma acção promotora da cura da lesão. Recentemente, desenvolveram-se preparações liofilizadas possuindo o colagéneo separado e purificado a partir de placenta humana, na forma de folhas, que é susceptível de uma utilização mais simples e mais conveniente para a hemostase em órgãos, tais como, o fígado e o baço; miringoplastia, protecção de lesões, tais como, ferimentos da coluna vertebral e suturas im perfeitas dos vasos sanguíneos.
Contudo, a secagem em exposição, em operações laparotómicas ou irritações causadas pelo contacto com instrumentos cirúrgicos pode produzir aderências pós-ope rativas entre a superfície da lesão e outros órgãos. Tais aderências são possivelmente desenvolvidas pelo revestimento da superfície da lesão com uma folha de colagéneo. A aderência é acompanhada de dores, tais como, uma sensação de tracção ou sensação de uma perturbação física no abdómen. Sob condições mais graves induz distúrbios do tracto abdominal, íleo e outros sintomas. Estes distúrbios pós-operativos no abdómen ocorrem depois da eliminação cirúrgica da causa da doença que se esperava conseguir com um efeito curativo cirúrgico. Infelizmente, tais distúrbios induzidos por aderências pós-operativas têm aumentado de ano para ano, apesar de um progresso nítido da moderna medicina, e, assim, tornou-se um problema sério em operações cirúrgicas. Têm sido feitas tentativas para evitar aderências, melhorando as técnicas de operação, administrando um fármaco ou utilizando um agente inibidor da aderência. Contudo, presentemente quase nenhumas das medidas preventivas são satisfatoriamente eficazes. Por exemplo,o efeito preventivo de aderências por agentes que se acreditava serem normalmente eficazes, tais como, esterõi-des, polivinil-pirrolidona (PVP), ácido condroi-estanho-sul-fúrico ou uma solução aquosa de alginato de sódio não é cons tante nem perfeito. Com um agente preventivo da aderência solúvel em água o agente pode entrar em regiões normais inteiramente irrelevantes para a operação não evitando assim possivelmente a aderência. É, assim, um objectivo desta in- 2 5 l
venção proporcionar novas folhas de revestimento de superfícies de feridas possuindo funções curativas da ferida e preventivas de hemostase em combinação com uma função de evitar a adesão a regiões normais de outros órgãos.
Com uma consequência de estudos prolongados para se obter o objectivo atrás referido verificou-se que a combinação de colagéneo e quitina proporciona uma folha de revestimento susceptível de evitar a aderência, assim como, efectuar constante e perfeitamente a cura rápida da ferida. Esta invenção completou-se com base nas referidas descobertas.
J
De acordo com a presente invenção proporcionam-se folhas de revestimento de superfícies de lesões constituídas por uma camada de colagéneo e uma camada de quitina que adere à superfície superior da primeira camada. A figura 1 é uma vista esquemática da folha de revestimento da superfície da lesão desta invenção.
Na figura 1, um número 1 mostra uma camada de quitina e um número 2 mostra uma camada de colagéneo.
0 colagéneo que é um dos componentes desta invenção é uma esclero-proteína que é um componente principal dos tecidos conectivos da pele, vasos sanguí neos, estômago, etc. Está também contido na estrutura em forma de foice ligamentos e membrana do tímpano e utiliza-se clinicamente como um material para a hemostáse local e tratamento de lesões (Geka Shinryo (Clinicai Practice in Sur-gery) 31 (2) , 321, 1989) . O colagéneo decompõe-se in vivo em gelatina que é absorvível in vivo.
Por outro lado, demonstrou-se que a quitina é também absorvida e decomposta in vivo (Prudden, J.F. et. al., Am. J. Surg. 119,560, 1970). A camada de quitina desta invenção é uma membrana que contém, como componente principal, (poli--N-acetil-glucosamina) de quitina que é um mucopolissaca-rídeo. A membrana de quitina é activa in vivo por indução da consolidação rápida no local de uma incisão na pele e por inibição concorrente da infiltração de flogocitos nos teci- 3 1 ΐ
dos à volta da lesão. Também, a membrana de quitina incorpora ligeiramente tecidos de granulação e a sua afinidade in vivo é elevada. Esta membrana é eficaz para promover o tratamento rápido da superfície de lesões de tal forma que é reconhecida como sendo adequada como um agente protector do revestimento de lesões em defeitos da pele devidos a queimaduras ou traumas (Takehiko Oura et al., Nishinihon Hifuka (Western Japan Dermatology), 50 (4), 1988).
As folhas de revestimento desta invenção podem ser formadas de camadas integradas, uma constituída principalmente por colagéneo e outra constituída principalmente por quitina. Cada camada pode ser de uma estrutura densa semelhante a papel ou de uma estrutura áspera semelhante a lã. Cada uma das camadas pode também preparar-se por qualquer um dos métodos e não é limitada a um método específico de preparação.
Como a camada de quitina utiliza--se, convenientemente, BeschitinR feita de fibras curtas de quitina na forma de uma estrutura não-tecida para utilização médica que é comercialmente disponível de Unitika. A densidade e a espessura da estrutura não-tecida pode variar, adequadamente, dependendo do sítio a que se vai aplicar e outras condições. A espessura está normalmente compreendida entre 0,1 e 15 mm. 0 colagéneo que é o componente principal da outra camada é extraído de uma fonte tal como a placenta humana, cório de bovino ou tendão de Aquiles de bovino. A de origem humana é mais preferida e utiliza-se de preferência o colagéneo extraído da placenta humana. Estes cologéneos são separados, purificados e moldados numa película de colagéneo ou uma esponja de colagéneo que é processada até uma espessura de aproximadamente 3 a 10 mm. É preferida uma camada de colagéneo de estrutura lanuda devido ao seu elevado efeito de consolidação na superfície da lesão em vez de uma camada de colagéneo de estrutura densa. A estrutura lanuda é formada por liofilização de uma solução de colagéneo. 4
As folhas de revestimento desta invenção preparam-se por aderência de uma camada de cola-géneo e uma camada de quitina utilizando um adesivo bio-compatível. Como adesivo utiliza-se, por exemplo, a pasta de amido, gelatina, adesivos sintéticos químicos e fibro-géneo. As superfícies podem aderir parcialmente e não completamente. As camadas podem também ser ligadas por intermédio de uma sutura cirúrgica. A camada de colagéneo pode também aderir à camada de quitina colocando uma solução de colagéneo num vaso semelhante a um prato de 5 a 15 mm de profundidade, sobrepondo uma folha de quitina na solução, congelando a combinação e removendo do vaso e secando sob pressão reduzida a massa congelada. A folha de revestimento assim formada é depois esterilizada com um meio apropriado. As folhas de revestimento são, frequentemente, utilizadas com um tamanho compreendido entre 5 -10 x 10 cm e uma espessura de aproximadamente 5 a 10 mm, embora o tamanho e a espessura possam ser adequadamente escolhidos.
Os produtos podem manter-se a uma temperatura normal ou utilizados logo,conforme necessário. A utilização pode fazer-se por uma aplicação e não é necessário retirar-se. A folha de revestimento desta invenção pode aplicar-se livremente, seleccionando adequadamente a sua área e espessura de acordo com a área do sítio de operação. A folha de revestimento utiliza-se de tal forma que a camada de colagéneo fica em contacto com a superfície do tecido lesionada e a camada de quitina fica em contacto com a superfície dos outros tecidos. Depois de revestida, a incisão é fechada e os componentes da folha de revestimento são assimilados e absorvidas pelo corpo humano. Além disso, as folhas de revestimento com uma camada de colagéneo mais espessa desta invenção pode também utilizar-se como um agente protector do revestimento de lesões por aplicação externa da camada de quitina à superfície de queimaduras graves.
Os exemplos e o exemplo de ensaio são dados adiante para descrever a invenção com mais por- 5
menor, mas esta invenção não é de qualquer forma limitada por estes exemplos. EXEMPLO 1
Descongelou-se, parcialmente, placenta humana congelada, pulverizou-se,colocou-se numa solução aquosa de cloreto de sódio e etileno-di-amino-tetra-acetato de tetra-sódio, e permitiu-se que repousasse. Removeu-se depois o sobrenadante para se obter o precipitado I. Ao precipitado adicionou-se água e aprotonina, e agitou-se a mistura e depois homogeneizou-se dividindo o tecido finamente. Centrifugou-se a suspensão, e removeu-se o sobrenadante para se obter o precipitado II. Ao precipitado II adicionou-se uma solução de cloreto de sódio fria contendo aprotinina, e agitou-se a mistura. Depois de se permitir que repousasse, removeu--se o sobrenadante. Lavou-se o precipitado assim obtido, duas vezes, com água e, em seguida, adi-cionou-se uma solução de citrato e agitou-se dividindo assim finamente o tecido. Neutralizou-se a suspensão por adição de uma solução de hidróxido de sódio e removeu-se o sobrenadante para se obter o precipitado III. Lavou-se o precipitado III com água e adicionou-se água, ácido acético e pepsina, e, em seguida, agitou-se. Depois de se permitir que repousasse durante 24 horas, adicionou-se mais pepsina, agitou-se e filtrou-se a mistura. Ao filtrado assim obtido adicionou-se água e cloreto de sódio seguido de agitação. Centrifugou-se a mistura e removeu-se o sobrenadante para proporcionar colagéneo como precipitado IV. Ao precipitado IV adicionou-se água, e agitou-se a mistura e homogeneizou-se. Fez-se a diálise da suspensão do colagéneo resultante em água. Depois da diálise, mediu-se o conteúdo em azoto da suspensão e adicionou-se água de forma a ajustar a concentração de azoto a 100 mg/g. Adicionou-se, depois, formaldeído como um agente de reticulação (co lagéneo humano purificado). Efectuaram-se ensaios de 6
medição para o antigéne HBs e pH. Depois, incubou-se a suspensão e deitou-se, sob fluxo laminar, num vaso de plástico de polietileno. Liofilizou-se depois, vedou-se com fibras de polietileno e embalou-se num saco de alumínio revestido com polietileno e poli-ester. Finalmente, fez-se a esterilização por radiação com raios gama a uma dose absorvida de 28 KGY.
Como a porção quitina utilizou-se a do tipo M de Bes-chitinR W (fabricada por Unitika). A Beschitin^ W é feita de pequenas fibras de quitina processadas na forma de uma estrutura não- tecida de 0,08 a 0,5 mm de espessura, que existe comercialmente disponível como um protector de revestimento de lesões.
Curtou-se M (10 cm x 16 cm) BeschitinR W (fabricada por Unitika) nuns rectângulos de 5 cm a 8 cm em tamanho. A uma superfície da folha aplicou-se pasta de amido (fabricado por Yamoto Nori) numa quantidade suficiente para a revestir (não excessivamente). Na outra superfície montou-se uma lanugem de colagéneo rectângular de 5 cm x 8 cm x 0,6 cm em tamanho e espessura numa forma como apresentada na Figura 1. Colocou-se a folha, completamente envolvida num papel fino, numa placa plana, depois do que se lhe sobrepôs uma placa semelhante. Aplicou-se uma pressão de um peso de aproximadamente 200 g à estrutura, durante 10 minutos.
Removeu-se depois o peso, e verificou-se a aderência da lanugem de colagéneo à folha de quitina. Permitiu-se, depois, que a folha repousasse durante a noite à temperatura ambiente e colocou-se numa caixa plástica, que se vedou hermeticamente.
Fez-se a esterificação sob raios gama a partir de cobalto 60 a uma dose absorvida mínima de 25 KGY. A folha de revestimento de superfície de lesões desta invenção pode também produzir-se, em vez de se utilizar um adesivo como no processo anterior, colocando uma solução de colagéneo num vaso semelhante a um 7
prato e sobrepondo-lhe uma folha de quitina depois da solução ser liofilizada.
EXEMPLO DE ENSAIO
Submeteu-se um rato de 8 semanas (macho, pesando 375 g), anestesiado com pentobarbitol, a laparotomia. Depois da laparotomia, curtou-se uma porção de serosa do intestino grosso com um tamanho de 0,5 x 0,5 cm. Revestiu-se a superfície lesionada com uma folha, como preparada no exemplo 1, e com um tamanho de 1 cm x 1 cm, de tal forma que a lanugem de colagéneo estava do lado da superfície lesionada. Embora se tenham administrado 50 mg de uma penicilina sintética, por via interperitoneal, para evitar infecções bacte-rianas na sutura, não se utilizou qualquer agente para evitar a aderência. Observou-se o animal de ensaio pós-operatoriamente, durante 15 dias, para as condições sistémicas do estado da superfície da lesão para verificar qualquer anormalidade. Subsequentemen te, submeteu-se o animal a eutanásia num vaso fechado em atmosfera de éter e em seguida fez-se a laparotomia para se observar a parte afectada.
Ocorreu a cura da parte afectada e não se observou qualquer aderência aos tecidos circundantes. 8
Claims (2)
- — 1- - Processo para a preparação de uma composição, caracterizado por se preparar uma camada de co-lagéneo e uma camada de quitina e por se fixar uma à outra.
- - 2^ - Processo de acordo com a reivindica ção 1, caracterizado por as camadas serem fixadas uma à outra com um adesivo biocompatível. _ 3a _ Processo de acordo com a reivindica ção 1, caracterizado por a camada de quitina ser constituída por camadas de quitina. - 4ã _ Processo de acordo com a reivindica ção 1, caracterizado por o colagéneo ser colagéneo de origem humana. _ 5a _ Processo de acordo com a reivindica ção 1, caracterizado por o colagéneo ser constituído por colagéneo de placenta humana. 9 A requerente reivindica a prioridade do pedido japonês apresentado em 5 de Dezembro de 1989, sob o Nfil-314401. Lisboa, 4 de Dezembro de 1990 % ASSÍIIS ©MffililL 3L ΡΖ0ΡΠΕ515Ξ10
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